大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色
病理性实验报告
实验名称：大鼠肝脏病理学观察实验目的：1. 了解大鼠肝脏的组织结构及其功能。
2. 观察肝脏在病理状态下的形态学变化。
3. 掌握病理切片的制作和观察方法。
实验材料：1. 大鼠肝脏标本2. 石蜡3. 刀片4. 剪刀5. 水浴锅6. 洗片机7. 显微镜8. 病理切片染色剂（苏木素、伊红）实验方法：1. 将大鼠肝脏标本放入10%福尔马林溶液中固定24小时。
2. 将固定好的肝脏组织取出，进行常规石蜡包埋。
3. 切片：将石蜡块放入切片机中，制成5微米厚的切片。
4. 染色：将切片放入苏木素溶液中染色5分钟，水洗；再放入伊红溶液中染色2分钟，水洗。
5. 干燥：将染色后的切片放入干燥箱中干燥。
6. 脱蜡：将干燥后的切片放入二甲苯中脱蜡，重复三次。
7.复水：将脱蜡后的切片放入梯度酒精中复水，重复三次。
8. 观察显微镜下形态学变化。
实验结果：1. 正常大鼠肝脏组织结构：- 肝小叶：由中央静脉周围的肝细胞构成，呈放射状排列。
- 肝细胞：呈多边形，细胞核位于细胞中央，细胞质富含线粒体、内质网等细胞器。
- 肝窦：位于肝细胞之间，为血液与肝细胞进行物质交换的场所。
2. 病理性变化：- 肝细胞变性：肝细胞肿胀，细胞质内出现空泡，细胞核位置偏移。
- 肝细胞坏死：肝细胞出现溶解、破碎，细胞核消失。
- 肝细胞再生：部分肝细胞出现核分裂象，提示肝细胞再生。
- 肝炎细胞浸润：在肝细胞周围可见淋巴细胞、巨噬细胞等炎症细胞浸润。
- 肝纤维化：肝细胞周围出现胶原纤维沉积，肝小叶结构紊乱。
实验讨论：本次实验通过观察大鼠肝脏病理切片，了解了大鼠肝脏在正常状态下的组织结构及其功能。
在病理状态下，肝脏出现了一系列形态学变化，如肝细胞变性、坏死、再生、肝炎细胞浸润以及肝纤维化等。
这些变化可能是由于多种原因引起的，如病毒感染、药物中毒、代谢性疾病等。
通过本次实验，我们掌握了病理切片的制作和观察方法，为今后的病理学学习和研究奠定了基础。
同时，对肝脏疾病的诊断和治疗提供了有益的参考。
HE染色实验步骤
HE染色实验步骤染色实验是生物学中常用的染色技术，用于观察细胞结构、细胞器和染色体等生物学特征。
在这个实验中，我们将使用HE染色法来染色细胞和组织切片。
HE染色法是最常用的组织染色方法之一，用于观察组织结构和组织细胞的形态。
以下是HE染色实验的步骤：1.准备组织标本在进行染色实验之前，首先需要准备好需要染色的组织标本。
组织标本可以是新鲜的组织样本，也可以是已固定和包埋的组织切片。
在准备组织标本时，需要确保组织标本的质量和完整性，以保证染色结果的准确性。
2.制备切片将组织标本切割成薄片，通常厚度在5-10微米之间。
为了获得更好的染色效果，切片应该尽可能薄且均匀。
切片可以使用切片刀或者切片机进行切割。
切片完成后，将切片放在载玻片上，待干燥。
3.脱脂和脱水将切片放入甲醇中脱脂，去除切片中的脂肪物质。
脱脂时间一般为1-2分钟。
脱脂完成后，将切片依次浸入95%乙醇、70%乙醇和蒸馏水中进行脱水处理，时间每次均为1-2分钟。
脱水处理的目的是去除切片中的水分，以便后续染色。
4.染色处理将脱水后的切片依次浸入hematoxylin染料、蒸馏水、酸性洗涤剂和eosin染料中进行染色处理。
hematoxylin染料用于染色细胞核，eosin染料用于染色胞质。
染色时间根据实验需要，通常为1-10分钟。
染色完成后，将切片洗净并进行脱水处理。
5.脱水和封片将染色后的切片依次浸入70%乙醇、95%乙醇和透明剂中进行脱水处理。
脱水完成后，将切片放入透明剂中进行透明化处理，以使组织切片更加透明。
最后，将切片放入显微镜载玻片上，加入透明胶封片，并静置干燥。
6.观察和记录将封片好的切片放入显微镜中，用适当的倍数镜头观察组织结构和细胞形态。
观察时，可以记录下细胞核的形态、胞质的颜色和组织结构等信息。
通过观察和记录，可以得到关于组织和细胞的详细信息，为后续研究和分析提供参考。
7.结果分析根据观察和记录的结果，对染色切片进行分析和比较。
组织切片PT和HE、PAS、PASH、PAST染色方法比较
组织切片PT和HE、PAS、PASH、PAST染色方法比较张祥令;陈腾祥;臧贵勇;胡蓉【摘要】目的:比较组织切片HE、PAS及PT染色方法及镜下特点.方法:取大鼠肝脏,Camoy氏固定液固定,对肝组织HE、PAS及PT染色,光学显微镜下观察染色效果.结果:PT染色法能清晰显示肝组织的细胞及细胞核轮廓,效果优于HE、PAS法.结论:PT染色方法简单,成本低,细胞及细胞核轮廓更能清楚显示.【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2011(036)003【总页数】2页(P319-320)【关键词】高碘酸-雪夫染色反应;显微镜检查;肝细胞【作者】张祥令;陈腾祥;臧贵勇;胡蓉【作者单位】贵阳医学院组织与胚胎学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院生理学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院解剖学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织与胚胎学教研室,贵州贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R329-33组织切片的化学染色有多种方法，其中苏木精-伊红染色(hematoxylin eosin，HE)是国内最常用的方法之一，但是HE染色试剂组成成分较多，配制相对复杂，更主要的是刚配制的HE试剂不能立即使用，需要至少1个月以上的成熟时间［1］，不太适于现配现用。
在实际工作中，往往需要现配现用的试剂。
资料显示，副品红-甲苯胺蓝染色(PT)方法在国外用于组织染色［2］，但在国内报道较少。
本研究对PT染色方法进行了摸索，并将其与HE、过碘酸-雪夫(Periodic Acid Schiff Reaction，PAS)染色进行比较。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 动物SD大鼠，体重220～250 g，雌雄不限，贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK(黔)2002-0001。
1.1.2 主要仪器和试剂切片机、贴片机和显微镜均为Leica公司产品，苏木素、伊红、甲苯胺蓝、副品红、碱性品红、高碘酸、盐酸等试剂均为国产分析纯。
大鼠前列腺病理切片制作与HE染色
实验名称：大鼠前列腺病理切片制作与HE染色一、实验操作取前列腺右侧叶，4%中性多聚甲醛溶液固定，24h后常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋，用组织切片机将组织块切为5μm厚的切片，60℃恒温箱中烤片6h后，二甲苯脱蜡，逐级酒精脱蜡，苏木精染色，流水冲洗，盐酸、酒精分化，流水冲洗15min，逐级酒精脱水至95%酒精，酚红染色，流水冲洗，95%酒精，逐级酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察一般的病理组织学变化并摄影。
二、病理结果评分标准HE染色光镜观察前列腺组织：病理观察项目为前列腺组织腺体管腔、腺体分泌物、前列腺间质炎症细胞浸润、纤维组织增生和总得分等5项。
病理结果评分标准光镜检查，病理观察项目为前列腺组织腺体管腔、腺体分泌物、前列腺间质炎细胞浸润、纤维组织增生和总分等5项，其分级及评分标准如下：①腺体管腔正常：腺上皮为单层柱状或立方状，腺体管腔扩大，皱襞较多(0分)。
轻度缩小：腺体管腔稍变小，皱襞稍减小(2分)。
明显缩小：腺泡萎缩，腺体管腔变小，甚至闭塞，皱襞明显减少或消失(4分)。
②腺腔分泌物多(正常)：腺体管腔内有大量深粉红染分泌物，有的形成前列腺凝结物(0分)。
减少(轻度)：腺体管腔内粉红染色分泌物稍有减少(2分)。
明显减少(重度)：管腔分泌物减少，分泌物淡红色，甚至有的无分泌物(4分)。
③炎细胞浸润基本正常：炎细胞偶见或无(0分)。
轻度：少量炎细胞散在浸润(3分)。
重度：大量炎细胞浸润，有的可见多核巨噬细胞形成炎性肉芽肿性病变(6分)。
④纤维组织增生基本正常：偶见极少量纤维组织增生或无(0分)。
轻度：少量纤维组织增生(3分)。
重度：大量纤维组织增生(6分)。
⑤总分是上述4项得分之和。
四、实验数据。
组织病理切片以及HE染色说课讲解
组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。
组织切片操作流程(肝脏切片)
组织切片操作流程(肝脏切片)---本文旨在介绍肝脏切片的操作流程，为科研人员提供参考。
肝脏切片是一种常见的组织切片技术，在研究肝脏病变、疾病机制等方面具有重要意义。
以下是肝脏切片的操作流程。
准备工作1. 样本采集：从实验动物或患者中获得肝脏样本。
确保样本新鲜且符合研究要求。
2. 样本固定：将肝脏样本放入10%中性缓冲福尔马林中进行固定。
固定时间一般为24小时，可根据需求适当延长。
3. 脱水：将固定的肝脏样本进行脱水处理，依次放入浓度递增的乙醇中（例如70%、80%、90%、95%、100%），每次脱水时间约为1小时。
切片操作1. 组织包埋：将脱水的肝脏样本置于熔点为60摄氏度左右的石蜡中，温度控制在55-60摄氏度，使其充分浸渍石蜡。
2. 石蜡固化：将包埋的肝脏样本在冷却台上冷却，使石蜡固化。
3. 切片：使用旋转式切片机将石蜡固化的肝脏样本切割成薄片，常见厚度为3-5微米。
4. 切片传送：用切片刷将切好的肝脏切片均匀地传送到预涂玻片上。
5. 干燥：将玻片置于60摄氏度的烤箱中进行干燥，通常需要2-3小时，直至切片完全贴附于玻片上。
6. 染色：根据需要进行染色处理，在肝脏切片上滴加适当染色剂，如血液学染色剂、免疫组织化学染色剂等。
7. 盖片：将已染色的肝脏切片背面朝上覆盖玻片盖片，确保切片封装完整。
8. 固定：使用适当的固定剂（如蜡胶）将玻片和盖片固定在一起。
存储和保存1. 标记：在玻片上标记样本信息，如标本编号、日期等。
2. 包装：使用专用的玻片包装袋将肝脏切片包装好，避免切片受损。
3. 存储：将包装好的肝脏切片存放在冷藏箱中，温度控制在4摄氏度左右，确保切片的保存时间。
4. 归档：按照项目或实验的顺序对肝脏切片进行归档，便于后续查找和分析。
以上是组织切片操作流程(肝脏切片)的详细步骤。
在进行实际操作时，请严格按照实验室的安全规范操作，并根据具体实验要求适当调整流程。
希望本文对您的科研工作有所帮助。
肝纤维组织切片及H.E染色详细操作步骤
肝纤维组织切片及H.E染色详细操作步骤（一）取样断头处死大鼠，解剖、取肝、称重；（二）固定将肝组织立即放入10％福尔马林固定液中。
（三）脱水脱水的程序为70％一80％一95％一100％。
各级酒精2—4小时，视材料的大小、厚薄而定。
100％酒精有硬化组织的作用，时间不宜太长，一般不超过3小时。
脑组织、脂肪组织或疏松结缔组织，脱水时间要适当延长。
（四）透明脱水后的肝组织放在专用二甲苯皿器中，透明10分钟(有的文献是30-60min，哪个合理？)；更换二甲苯后再浸泡10分钟。
（五）浸蜡（透蜡）依据石蜡熔点不同，设置熔点50—52℃为第一缸蜡，52—54℃为第二缸蜡，54—56℃为第三缸蜡。
依次浸蜡2—3小时(具体多长时间合适？)。
温箱内的温度调节至略高于石蜡熔点2—3℃，与石蜡的熔点相配合。
（六）包埋将液态的石蜡倒入金属包埋框或包埋的纸盒中，再将浸好蜡的组织块平放底部，注意切面方向朝下放置，待石蜡凝固后去掉包埋框，完全冷却变硬后再修整蜡块，要求组织外围的石蜡保留适中以便切片。
（七）切片前的准备工作1．修整蜡块将包埋的每块组织周围过多的石蜡切去，四周留约2mm的石蜡边。
蜡块两边要切成平行的直线，否则切下的蜡条弯曲，也不可修成圆角，致蜡带容易分开不能成条。
2．玻片处理玻片用76X26mm载片，厚度l-1.5mm。
新的玻片也必须擦洗干净，否则染色时引起切片脱落，方法有①煮沸洗涤法、②洗液浸泡法。
最后经95％酒精浸泡脱脂、烘干。
将洗净的载玻片上均匀涂抹薄薄的一层蛋白甘油(防止组织脱片){蛋白甘油如何配置？}，放置冰箱备用。
（八）切片制作过程1．将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上，使蜡块的切面与刀口成平行方向，刀的倾斜度通常为15°，转动轮转推进器，调节切片厚度为6μm，切成厚度均匀的切片。
2．左手持毛笔，右手旋动切片机转把，切片带出来之后，用毛笔轻轻托起，再用眼科镊轻镊蜡片，以正面放入展片箱中，其水温40—43℃左右。
正常肝脏切片实验报告
实验日期：2023年4月10日实验目的：通过观察正常肝脏切片，了解肝脏的解剖结构、组织学特征以及肝小叶的组成，并学习肝脏的基本功能。
实验材料：1. 正常肝脏组织样本2. 切片机3. HE染色试剂盒4. 显微镜5. 图像采集系统实验方法：1. 样本处理：取新鲜正常肝脏组织样本，去除脂肪和结缔组织，用生理盐水清洗，并用刀片切成约2mm厚的组织块。
2. 切片制作：将组织块固定于切片机上，使用切片机将组织块切成连续切片，厚度约为5μm。
3. 染色：将切片放入染色缸中，按照HE染色试剂盒说明书进行染色，包括苏木精染色、盐酸酒精分化、伊红染色和酒精脱水等步骤。
4. 显微镜观察：将染色后的切片用显微镜观察，使用10倍和40倍物镜观察肝小叶的组成、肝细胞的结构和肝内胆管等。
实验结果：1. 肝小叶结构：正常肝脏切片显示肝小叶呈多角棱柱体，由中央静脉、肝索和肝窦组成。
肝索由肝细胞构成，呈放射状排列，中央静脉位于肝小叶中央。
2. 肝细胞结构：肝细胞呈多边形，具有明显的细胞核和丰富的细胞质。
细胞质中可见丰富的线粒体、内质网和高尔基体等细胞器。
3. 肝内胆管：肝内胆管呈细长的管状结构，与肝细胞相连，负责分泌胆汁。
4. 肝血窦：肝血窦是肝细胞与血液之间的通道，血液中的氧气、营养物质和代谢废物通过肝血窦与肝细胞进行交换。
讨论：1. 正常肝脏切片显示的肝小叶结构是肝脏的基本功能单位，由肝细胞、肝血窦和中央静脉组成。
肝细胞是肝脏的主要细胞类型，具有代谢、解毒、储存和分泌等功能。
2. 肝细胞内的细胞器，如线粒体、内质网和高尔基体，对于肝细胞的代谢和功能至关重要。
线粒体是细胞的能量工厂，内质网负责蛋白质的合成和修饰，高尔基体则参与蛋白质的分泌和转运。
3. 肝内胆管在肝脏的胆汁分泌和排泄中起着重要作用。
胆汁是肝脏分泌的一种消化液，含有胆盐、胆固醇、胆色素等成分，有助于脂肪的消化和吸收。
4. 肝血窦是肝细胞与血液之间的界面，负责物质交换。
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大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色
步骤如下：
（一）固定与修块
取组织块放入Bouin 氏液中，组织块的直径应小于7mm。
6 小时左右后用双面刀片将组织块修剪成3-5mm3 大小。
（二）脱水与透明
1．75%乙醇50 分钟
2．85%乙醇50 分钟
3．95%乙醇（I）30 分钟
4．95%乙醇（II）30 分钟
5. 100%乙醇（I）30分钟
6．100%乙醇（II）30分钟
7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟
8. 二甲苯（I）20分钟
9. 二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定）
若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。
在每一步骤之后，要充分滤干组织
块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。
全过程约需要5h。
（三）浸蜡、包埋与修蜡块
1 .浸蜡：
将60C恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将
组织块转入石蜡里，放置于60C恒温箱120分钟。
2．包埋：
将60C的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺
序排列好，使切面朝下。
不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。
为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90 C左右热水上，包埋时蜡盒底部
要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。
3．修蜡块：
待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘
之间的距离不得小于2mm。
（四）切片
在载玻片上擦少量甘油蛋白。
可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分
抹
匀，呈半干状为佳。
切片厚约4-8 am,将切片在55C左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。
用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37C烘箱中过夜。
每个组织块捞片2张。
过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。
（五）脱蜡、染色与脱水
倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓
度的影响。
全过程约需要60分钟。
1．脱蜡
(1) 二甲苯(I) 15分钟
(2) 二甲苯( II) 15分钟 ( 3) 100%乙醇2 分钟
( 4) 95%乙醇( I) 1 分钟
( 5) 95%乙醇( II) 1 分钟
( 6)蒸馏水浸洗1 分钟
2．染色
( 7) xx 精30 秒钟
( 8)自来水冲洗60 秒。
(显微镜下观察效果)
( 9)伊红(着色即可) 10 秒钟
( 10)蒸馏水浸洗1 分钟
3．脱水
( 10) 95%乙醇( I) 1 分钟
( 11) 95%乙醇( II) 1 分钟
( 12) 100%乙醇2 分钟
(13)二甲苯( I) 2 分钟
(14)二甲苯( II) 3-5分钟
(六)封片将载玻片取下，滴加1~2 滴中性树胶，用镊子夹住盖玻片的一角，盖
上盖玻
片，之后倾斜载玻片，多余的中性树胶用筒纸吸干，室温下保存。
2．简要版：
肝组织HE染色切片制作过程
(1)取材与固定：
取大鼠肝右叶固定部位组织块，立即投入10％甲醛中，固
定48h 。
(2)脱水透明：
组织修片，梯度酒精脱水，后二甲苯中透明。
动物组织切成0．2-
0. 5cm的薄片，依次经过70%酒精2h--*80%酒精2h 一95%酒精(I、II各2h)和无水酒精(I、II各1h)脱水，二甲苯透明(I、II各lh)，以置换组织内的酒
精溶液。
(3) 浸蜡包埋：
将脱水透明好的组织块置入融化的石蜡内，使石蜡浸入组
织并置换出其中的二甲苯。
将浸蜡的组织置于包埋器内，并滴入液化蜡进行组织包埋，后置于冰面上待其凝固。
(4) 切片与贴片：
将蜡块固定于切片机上，切成5 u m厚的切片，在45"C
的水面上展平后铺在涂有防脱剂的载玻片上，置于65 C烤箱烤3h。
(5) 脱蜡：
切片置入二甲苯I、H各15分钟，不同浓度酒精(100%5min
一95%5s一80%5s一70% 5s)置换出其中的二甲苯，最后用PBS液洗净。
(6) HE染色：
将石蜡切片放入苏木精中染色5min 一蒸馏水洗净一1％稀盐酸
分化一流水中充分冲洗返蓝，约20min;伊红染色5min,流水冲洗干净。
(7) 脱水、透明：
染好的切片经梯度酒精脱水(70%、80%、95%、100%各5min),二甲苯透明(I、II 各5min)。
(8) 封固：
在载玻片上加一滴中性树胶,然后覆盖一片清洁的盖玻片封片。
光学显微镜下观察组织病理变化,以i00 倍放大率观察切片。