酶联免疫检测法测定水产品中残留氯霉素的研究
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留的测定是一项重要的检测工作，这些药物残留的存在可能对人体健康产生一定的危害。
准确、快速地检测这些残留物的含量是非常必要的。
氯霉素类药物是一种广谱抗生素，常用于预防和治疗动物的感染病。
如果动物在屠宰前一段时间内使用了这些药物，残留物可能会在食品中存在。
对于人类来说，摄入这些残留物可能会引起过敏反应、中毒甚至诱发耐药菌株。
第一种是高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）。
该方法具有快速、准确、灵敏、选择性高等特点。
将样品进行提取，利用有机溶剂将残留物从食品中分离出来。
然后，使用HPLC将残留物进行分离，并通过串联质谱进行定性和定量分析。
该方法可以同时测定多种氯霉素类药物的残留，且可以达到非常低的检测限。
第二种是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
该方法是通过抗体与药物残留物结合来进行检测的。
将样品中的残留物与标记有酶的抗体结合，在搅拌的条件下进行反应。
然后，通过酶标仪检测残留物与酶的结合程度，从而确定残留物的含量。
由于该方法操作简便、快速，且具有较高的灵敏度和选择性，因此广泛应用于动物源性食品中氯霉素类药物残留的测定中。
测定动物源性食品中氯霉素类药物残留的方法有很多种，每种方法都有其优缺点。
在具体实验中，需要根据实际需要选择合适的方法进行测定，以确保结果的准确性和可靠性。
酶联免疫分析法
酶联免疫分析法生工121 徐娜酶联免疫分析法是目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术，特别是在食品和饲料中有毒有害物质的检测应用极为广泛。
酶联免疫分析法是把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种检测技术。
该技术的原理主要有三点：第一、抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍具有其免役活性；第二、抗体或抗原与酶结合所形成的结合物仍保持免疫活性和酶的活性；第三，结合物与相应的抗原或抗体反应后，结合的酶仍能催化底物生成有色物质，而颜色的深浅可定量抗体或抗原的含量。
酶联免疫法在医药、食品加工业、农牧渔业等领域有着广泛的应用：如乙型肝炎、莱姆病，急性心肌梗死的早期诊断，定量检测内毒素，HIV抗体初筛，SARS 病毒的快速检测；检测食品中的病毒，残留农药，微生物及其其它成分；检测香蕉有关病毒，小麦黄花叶病毒，检测水产品中氯霉素的残留量，禽脑脊髓抗体等。
一、医学临床中的应用医学中，检测各种抗原和抗体，为临床疾病的辅助诊断和早期诊断提供了特异性、敏感性强的试验基础。
1、乙型肝炎、原发性肝癌的血清学检测：用血清学方法检测肝炎病毒的抗原或抗体，一直受到各级医疗卫生机构检验科室的高度重视。
尤其是对乙型肝炎，甲型肝炎，丙型肝炎的血清学检测，更因为试剂盒的推出而得到广泛开展。
上述各种肝炎病毒抗原或抗体的检测方法，绝大部分都是酶联免疫分析法。
2、简化莱姆病的诊断：由于在作出博氏疏螺旋体感染诊断前要进行双重测试，因此莱姆病的测试可能花费很长时间。
采用由关键的疏螺旋体抗原决定簇构成的重组蛋白开发出一种新的酶联免疫测定方法。
该测试比最常用的商业全细胞酶联免疫测定法特异，而敏感性相同，并且在20分钟就会产生结果。
3、急性心肌梗死的早期诊断：急性心肌梗死为一多发病，病情严重。
目前对此病的策略是尽早的确诊并迅速积极的治疗。
约有四分之一或更多的患者，在初诊时心电图并不显示典型心肌梗死心电图异常，无Q波。
水产品中氯霉素残留的ELISA检测法
周
昱
（ 门出入境检验检疫 局 厦
３１ １） ６ ０ ２
摘
要
本 文研究建 立 了水 产 品 中的氯霉 素 （ Ａ ）残 留 的酶联 免 疫 （ Ｌ Ｓ Ｃ Ｐ Ｅ ＩＡ）检测 方 法 。氯霉 素标 准在 ０ ０ ．５
ｎ ／ －４．５ｎ ／ ｇｍＬ－ ０ ｇｍＬ范 围内具有 良好 的线性 。方法 的检测限 、定量检 测限 、精密度 和 回收率 等技术 指标 符合 国外
本 文应 用 ＥＬ Ｓ 方 法 ，选 择 虾 、蟹 肉 和 鱼 肉 ＩＡ
等样 品为 研究 对 象 ，建 立 稳定 可靠 的检 测方 法 ，可 以对水 产 品 中氯 霉 素残 留进行 定 量检 测 。
２ 实 验 部 分
２ １ 仪 器和 试 剂 ．
１０ Ｌ 异 辛 烷／ 氯 甲 烷 （ ：３ 混 合 溶 液 ， ．ｍ － ２ ） １０ ．ｍＬ酶联 反 应 缓 冲溶 液 ，充 分 振 荡 混 匀 ，转 移
对氯霉 素残 留的最 大允许限 量 （ Ｌ ＭＲ ）要求 。本方法 适合于虾 、蟹 肉和鱼 肉等样 品的检测 。 关键词 氯霉素 酶联 免疫 水产 品。
１ 前 言
动 物源 产 品 中氯霉 素 残 留的检 测方 法 ，主要见 有 液 相 色谱 法 （ Ｃ），气 相 色 谱 法 （ Ｃ） Ｌ Ｇ ，酶 联 免疫 方法 （ ＩＡ） ＥＬＳ 和放 射 免疫 方 法 （ Ａ）。近 ＲＩ
以氯 霉 素 标 准 值 浓 度 的对 数 值 为 Ｙ 轴 ，测 得
２ ２ １ 乙腈 一水 提取 方法 ．．
的吸光值除 以 ０标准吸光值 的百分 比为 Ｘ轴 ，绘 制标准曲线 ，得到一个线性 回归方程 。图 １ 为一次 测 定 的氯 霉 素标 准 校 正 曲线 ：
水产品中氯霉素残留检测方法
水产品中氯霉素残留检测方法氯霉素（Chloramphenicol，简称CAP）是一种广谱抗菌药物，在水产品中的残留对人体健康具有潜在风险。
因此，准确快速地检测水产品中的氯霉素残留是非常重要的。
目前，常用的氯霉素残留检测方法包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、酶联免疫吸附测定法等。
高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的氯霉素残留检测方法之一、它利用色谱柱进行分离，通过比色法或荧光法进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品进行提取，常用的提取剂包括乙腈、甲醇等。
然后，将提取液通过色谱柱进行分离，同时通过流动相的携带进行样品的洗脱。
最后，通过比色法或荧光法对洗脱液进行检测和定量。
HPLC方法具有准确、灵敏、高效的优点，但是需要较昂贵的设备和试剂，并且操作复杂，对操作人员的技术要求较高。
液相色谱-质谱法（LC-MS）是一种结合了液相色谱和质谱的分析技术，可以实现对氯霉素残留的准确定量和结构鉴定。
与HPLC相比，LC-MS具有更高的灵敏度和特异性。
它可以通过质谱仪对分离出的化合物进行分析，从而实现对氯霉素残留的快速检测。
然而，LC-MS方法需要昂贵的设备和试剂，并且需要经验丰富的操作人员进行操作。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于免疫学原理的检测方法，可以实现对氯霉素残留的高效筛查。
ELISA方法的原理是将待检样品与特异性抗体结合，然后通过酶标记二抗进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品和抗体溶液进行孵育，使得残留的氯霉素与抗体结合。
然后，通过酶标记的二抗与结合的复合物发生反应，产生可观测的信号。
最后，通过比色法或发光法对信号进行检测和定量。
ELISA方法具有灵敏度高、操作简便、成本低等优点，但是其结果可能受到其他因素的干扰，需要进一步的确认。
综上所述，水产品中氯霉素残留的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱-质谱法和酶联免疫吸附测定法。
这些方法各有优缺点，选择适合的检测方法需要根据实际情况进行评估和决策。
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定氯霉素是一种广泛使用的广谱抗菌药物，被用于治疗多种细菌感染症。
然而，由于氯霉素残留可能对人体健康造成潜在危害，因此在食品中残留的限制值被严格规定。
本文介绍了动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定方法。
1. 氯霉素残留的危害氯霉素对人体健康的潜在危害主要表现在以下几个方面：（1）引起过敏反应。
氯霉素过敏反应的发生率较高，可能表现为皮疹、荨麻疹等过敏症状，严重者可发生过敏性休克。
（2）影响肝、肾功能。
氯霉素在人体内主要经肝脏和肾脏代谢，残留较高可导致肝、肾功能受损。
（3）导致骨髓抑制。
氯霉素可以抑制人体骨髓造血功能，导致贫血、白细胞减少等症状。
（4）产生耐药菌株。
过度使用氯霉素会导致细菌产生抗药性，从而增加人类感染疾病的难度。
2. 氯霉素类药物的种类（1）氯霉素（2）磺胺甲噁唑（5）酰胺类药物，如阿莫西林、青霉素等。
为了保证动物源性食品中氯霉素类药物残留不超过规定的限制值，需要对食品样品进行残留的测定。
下面介绍几种常见的测定方法。
（1）高效液相色谱法。
该方法具有灵敏度高、分离能力强等优势，是目前最常用的氯霉素类药物残留测定方法之一。
（2）液相色谱-质谱联用法。
该方法可以实现极低浓度的氯霉素类药物残留的灵敏检测，但设备价格较高，操作相对复杂。
（3）比色法。
该方法通过化学反应分析药物残留，具有快速简便的优势。
但由于其灵敏度较低，检测结果精确度较差。
（4）酶联免疫吸附法。
该方法基于药物与相关抗体的特异性结合，具有灵敏度高、快速等优点。
其缺点是对样品质量要求较高，且价格相对较贵。
4. 结论。
酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展
Lüs e n o n g c h a n p i n本文介绍酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究情况。
对酶联免疫法的原理，以及在兽药残留、农药残留、生物毒素检测中的应用作了具体的介绍。
并阐述了酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用前景。
农产品质量安全的保障，一方面靠农业生产者的自律，另一方面更需要检测技术发展的支撑。
目前农产品质量安全检测技术主要有快速检测和定量检测。
快速检测技术更适宜于基层监管机构、检测机构和农产品生产者使用，它具有相对简单的操作流程和技术要求。
一、酶联免疫法的原理酶联免疫法简称酶标法（英文简称ELISA），是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术，自70年代初问世以来，迅速发展，现在已广泛用于生物学和医学科学等多个方面。
酶联免疫法的原理是：抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，利用产物的量与标本中受检物质的量直接相关，从而进行定性或者定量分析。
酶联免疫法常用的检测仪器是酶标仪，主要有两种常见类型手动型和全自动型。
手动型靠手动移动微孔板来进行检测，一般为单通道型，仪器小巧，结构简单。
全自动型酶标仪，一般采用多通道，是在手动单通道的基础上发展而来，运用微机处理系统，检测精度高、重复性好、速度快。
二、酶联免疫法在兽药残留检测中的应用随着规模化养殖的逐渐扩大，养殖生产中兽药的使用会越来越多。
不规范使用兽药和违规使用兽药的现象日益突出。
特别是一些违禁兽药的使用会对人体造成极大的伤害，轻者出现过敏、恶心、呕吐，重者甚至出现中毒，引发生命危险。
常规实验中畜禽水产品中检测兽药残留的方法一般是采用液相色谱法、液相色谱串联质谱法，这两类方法都需要昂贵的仪器设备，相对复杂的前处理过程，需要较多的时间，较高的实验技术水平。
而酶联免疫法与其相比具有仪器设备简单、前处理过程少、时间短，适合基层人员在日常工作开展中应用。
畜禽产品检测中酶联免疫法的应用情况。
水产品中氯霉素药物残留检测技术研究进展
。 张 颖
检 测 技 术研 究进 展
氯霉素作为一 种高效广谱抗 生素 ，
广泛应用于水产动物疾病 的防治 ，但残 留的氯霉 素药 物会 对人体 健康 造成 威
般采用正 己烷进行脱脂 ，氯化钠 去除蛋 白质 。氯霉 素净化常用小柱有 Ｃ １ ８柱 、
Ｓ Ｐ Ｅ柱 、纳 米纤 维 固相 萃 取 柱 、氧 化 铝
一
２ ０ 一
案致富指南 ２ ０ １ ３ — ２ ４
Ｉ 口圜
ｕ ｍ ｌ ｅ ｉ ｏ ｇ ｎ ａ ｔ ｈ ｉ Ｙ Ｌ 。通 过பைடு நூலகம்控 制 菌 体 起 始 发
ｌ
在 ０ ． ６ ｔ ｘ ｇ ／ ｋ ｇ的 添 加 水 平 下 ， 回收率可达
光强度 、 菌液 与氯霉素作用时间 ， 该 发光
２ ． ３ 色 谱 分 析 法
免疫分析法是依 据抗原抗体特异性 结合为基础的分析方 法。该方法将氯霉 素＿ 的二氯酰胺醇和硝 基苯结构及大分子 蛋 白质就结合后 均可作 为安全抗原有效 制备相应的抗体 。主要包 括酶联免疫法 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ ） 、 放射 性免疫法 （ Ｒ Ｉ Ａ） 、 固相 免疫 传感器 、 免疫胶体金法 、 化学发光酶免疫 法（ Ｃ Ｌ Ｅ Ｉ Ａ） 等 。 目前广泛使用 的是前两
菌 株 对 氯 霉 素 的 检 测 灵 敏 度 可 以 到
９ ０ ％～ １ ０ ８ ％， 重 复性好 ， 回收率高 。该方 法易受干扰 、 假阳性高 ， 因此适合大批量
的定 性 及 现 场 监控 。 ２ ． ２ ． ２放 射 免 疫 法 （ Ｒ Ｉ Ａ） ： 放 射 免 疫
０ ． １ ｎ ｇ ／ ｍＬ ， 鱼肉中添加氯霉素浓度为 ０ ． １ — １ ． ０ ｎ ｇ ， ｇ时， 回收率在 ４ ０ ． ３ ４ ％一 １ １ ４ ． ２ ６ ％ 之
DcELISA检测泥鳅、鲫鱼中氯霉素残留方法的应用
１ ． ４分析程序
将所需的的微孔条插入微孔架 ，每个标 准品和样品做２ 个平行 ，记录标准品和样 品的位置。加入 １０ ｌ ０ 标 准品或处理好的样品到各 自的微孔 中，再加入 ５ １ ０ 稀释了的抗氯霉素抗体酶标 记物于微孔内 。充分混合 ，覆
霉素 、氟甲砜霉素 、氟苯尼考等标准品 ，北京兽药监察所 ；氯霉￣Ｅ ＩＡ 速检测试剂盒 ，北京 中检维康技术 ＬＳ 快
有限公司 ；生物样品来源 ，市售 Nhomakorabea １ ． 品的前处理 ２样
实验所采用样品为泥鳅 、鲫鱼 ，分别取肌肉充分剪切 、混匀，用高速组织匀浆器破碎 ，密封袋密封 ，标
３ 《 京水产 》２０ 第１ 总第１０ ４ 北 ０８ 期 １期
氯霉 素 （ ｈ ｒ ｈｎｃｌ Ａ Ｃ ｌ ａ ｅｉ ，Ｃ Ｐ）最 初是从 委 内瑞拉 链丝 菌 （ｔｐｏ ｙ ｅ ｅｅｕｌ） 养 液 中提 取制 ｏ ｍｐ ｏ Ｓｒ ｔ ｃｓＶｎｚｅ 的培 ｅ ｍ ａ
得 ，是一类 广谱抗生素 。氯霉素对革兰氏阴性菌和 革兰 氏阳性菌具有明显的抑制作用 ，氯霉素 由于其优 良的 抗菌 性 、稳定 的药性和廉价 ，曾是我国水产 养殖 中常用 的抗菌药之一 ，长期作为饲料 添加剂和细菌性疾病 的 治疗用药 。近年来 ，研究发现氯霉素存在着严重的毒副作用 ，易引发再生障碍性贫血 、粒状 白细胞缺乏症 以
冲液振荡混合 １ｍ ｎ ０ ｉ，室温３０ ｇ ￣ｌｍｎ ００ 离 Ｏ ｉ；去上清液 （ 己烷 ），取１０ ｌ 正 ０ 下层水相用于检测 。 １ ． ３抗体交叉反应的测 定
抗 ｃ 抗体抑制物分别采用倍 比稀释的氯霉素碱 、甲砜霉素 、氟 甲砜霉素 、氟苯尼考 ，计算各竞争物的 ，
水产品中氯霉素残留检测方法
FOOD INDUSTRY ·127水产品中氯霉素残留检测方法 李梓建 广东省汕头市食品检验检测中心 广东省汕头市质量计量监督检测所氯霉素是一种广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
近年来，在水产品养殖和运输过程中违规使用氯霉素的现象屡见不鲜，问题日益突出，严重威胁到了人民群众的健康。
本文简述了水产品中氯霉素残留的多种检测方法，包括色谱分析法、微生物法、免疫分析法以及生物传感器、生物芯片等新型检测技术，并对其优缺点进行了比较分析，以期为水产品中氯霉素残留检测提供参考。
最后本文还对氯霉素残留检测方法的发展趋势进行了展望。
氯霉素（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，ｃｈｌｏｒｏｍｙｃｅｔｉｎ）是白色或无色的针状或片状结晶，由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素。
大卫·戈特利布于１９４７年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌成功分离，并于１９４９年合成并引入临床试验。
它属于抑菌性广谱抗生素，也是世界上首种完全由合成方法大量制造的广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
但是，由于它对造血系统有严重不良反应，需要慎重使用。
检测方法分析的必要性水产品营养丰富，品种繁多且风味各异，深受老百姓的喜爱，需求量也是与日俱增，这在很大程度上促进了我国水产品养殖业规模的发展。
然而，伴随着发展而来的是越来越多的抗生素类药物被应用其中，由于部分养殖户和商家不遵守国家有关规定及未合理使用药物，造成抗生素在水产品中残留居高不下。
其中，氯霉素药物的违规使用更是屡见不鲜，甚至让水产品成为食品安全的重灾区之一。
由于氯霉素药物存在严重的毒副作用，能够抑制骨髓造血功能、引发再生障碍贫血、粒状白细缺乏症和新生儿、早产儿灰色综合症等，美国、欧盟、日本等很多国家都禁止其在动物源性食品中检出。
依据中华人民共和国农业部公告第２３５号中《动物性食品中兽药最高残留限量》（发布日期：２００２年１２月２４日）的规定，氯霉素为禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。
水产品中氯霉素的残留状况
Ａ ｓ ａｔ Ｔ ｅｒｓ ｕｓｏ ｈｏａ ｐ ｅ ｉ ｌ ｎａｕｔ ｒｄ ｃ ｆ ｉａ ｗ ｓｄｔ ｔ ｙｅ ｚｍ — ｎ ｅ ｂｔ ｃ： ｈ ｅｉ ｅ ｆＣ ｌｒ ｈｎ ｏ ｉ ｑ ａ ｃｐｏｕｔ ｏ Ｗｅ ｉ ａ ｅ ｃ ｄｂ ｎｙ ｅ ｌ ｋｄ ｒ ｄ ｍ ｅ ｉ ｓ ｈ ｅｅ ｉ
生物。
４２ 准确度 ．
参考文献 ：
… ＡＯ ＣＯ ｆｉｌ ｔｏ ７ ８Ｆｕｔｎ ｏ ｒｄ ｃ ｎ ｘｈ ｎｅ １ Ａ ｆｃａＭｅｈｄ９ ． ．ｒｃａｓｎｏｄｐｏ ｕｔｉ ｃａ ｇ ｉ ９０ ｉｆ ｓｏ ｅ
准确称取０１０ 聚果 糖 口服液３ ， 别加入 ． ｇ ００低 份 分
Ｏ
浓度对数值
图 １ 氯霉素标准半对数 曲线
Ｆｉ． Ｔｈ ｔ ｄａ ｄ ｃ ｖ ｆＣＡＰ ｇ１ ｅｓａｎ ｒ ｕｒ ｅｏ
吹干 。 于玻璃 管中加 入正己烷２ Ｌ 先将残余物完 全溶 ， ｍ 解后 ， 再加入 １ Ｌ 取稀 释液 ， 萃 ｍ 振荡约３ ｏ ０ ０ ／ ｉ， ０ ３ ０ ｍ ｎ Ｓ ｒ 离 ，Ｏ ｉ ， 吸管吸去上层 液及 中间乳 化层部分 ， ｔｌ ｎ 用 ￣ ｍ 弃
和确证方 法主要是 Ｅ ＩＡ和Ｈ Ｌ — — 。酶联 免疫 ＬＳ Ｐ Ｃ ＭＳ ＭＳ 法 （ ＬＳ 具有简单 、 Ｅ ＩＡ） 快速 、 理样 品大 、 处 灵敏度 高 、分混合 ， 室温（ ５ ２ ℃）
下避光 温育２ ｎ ０ 。向每 一微孔 中加入 １０Ｉ 反 应终 ｍｉ ０ Ｌ ｘ 止液 。 用酶标仪于４ ０ ｍ 长下读 取数据 。 ５ 波 ｎ 用样品或标 准液 吸光度值 （ ） 以０ Ｂ除 标准溶液 吸光度 值 （ 。， Ｂ ）得到
摘 要： 用酶联免 疫试剂盒检测水产品 中氟霉素的残 留， 试验 结果表 明， 氯霉素标 准半对数 曲线为ｙ ３ ． Ｘ ３ ． ， 一 ００ ＋ ７３ ５ ５
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!< ?EF 缓冲液作空白对照 $ 重复进行 G 次实验 #
根据方程 !4"8!6(H&3 !"" I(56JJ 计算得到试样溶 液和原样品中氯霉素含量 # 结果见表 G $
品提取液各 "9 !< 做同步实验 # 各孔中均依次加
表(
!5"5#
$$% 型酶标分析仪 # 北京利康达圣 科 技 发 展 有 限 公 司 (!$&$ 型 洗 板 机 # 东 南 科 仪
仪器
万方数据
5AD
中 国 食 品 学 报
测定 #
!""! 年第 " 期
#$%%&’()*+ ! 匀浆机 " 江苏金坛市亿通电子有限公 司 !,-./ 型离心机 " 鄄城现代实验仪器厂 !0.1# 234 555 型氮吹仪 " 美国 6$789%:8;(%9 公司 !333
倍的标准偏差作为测定检出限 " 结果见表 5#
检出限的结果
I8R*) 5
! 测定值 C97 :<P5
I)S; $)ST*; %’ +);)U;(%9 *(:(;
! 标准偏差 C97 :<P5 相对标准偏差 CQ ! 检测限 C97 :<.5
! 平均值 C97 :<P5
-B-N!A5 -B-NO"-B-ND"" -B-NO"-
第;卷 第$期 ( ) ) ; 年 !% 月
中 国 食 品 学 报
*$+,-.% $/ 012-343 5-4626+63 $/ 7$$8 9:23-:3 .-8 ;3:1-$%$<=
#$%& ; ’$& $ P=T& ( ) ) ;
酶联免疫检测法测定水产品中残留氯霉素的研究
张胜帮 !
"
董士华 "
刘继东 "
-",$2!!%",%2# 在 %,%"$!",%% ./61( 测定范围内呈良好的线性关系 % 相关系数 7 8 %5---## 用 ’()*+ 测定水产
品中氯霉素残留量 % 实验结果令人满意 # 关键词 文章编号 酶联免疫检测法 残留 氯霉素 水产品
!%%-9&:4:!"%%;"%$<%!##<%4
/-B- :< 的 乙 酸 乙 酯 " 在 通 风 橱 内 混 合 %5- $5 & :(9" 过滤后取 5-B- :< 滤液于带刻度离心管中用
氮吹仪蒸干 # 每只管中各加入 /B- :< 的正己烷 " 在震荡器 上溶解均匀 " 加入 5B- :< 的稀释缓冲液 " 静置分 层 # 吸取下层水相溶液到另一离心管中 " 加入 5B-
型刻度移液管 " 广东新中纬仪器设备有限公司 !
$
$"!
结果
标准曲线的制作 以上体系用酶联分析仪测定吸光度 " 测定结
4</-/.= 型分析天平 " 上海优浦科学仪器有限公 司 !>?.3 型微量振荡器 "金坛市科兴仪器厂 # !"# 实验步骤 5@AB5 样品前处理 将冻黄鱼解冻 " 剪碎 ! 将盐水
:< 正己烷 " 置于离心机中 " 在 /--- $C:(9 下离心 5- :(9" 静置分层 "然后吸取下层水相溶液 "- !< "
进行酶联免疫检测法测定 #
$"$
检出限 取 包 被 的 5- 个 孔 " 在 每 个 孔 中 加 入 -@5--
5BAB/
测定
在包被 %, %! & 的孔中加入试剂或 样
样品测定结果
#$%&’ G
样号 品名
O’,’/M23$,2-3 /’*+&,* -. *$MP&’
! 测定结果 K3L M<@8
8 8 ( G ;
小红虾干 安康鱼 冻黄鱼 带鱼段ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
( 968HJH 969(JH8 9698H85 969("H;
G 9685;8 969G9G8 969858( 969G9"9
96GJ8 96GH8 96GJ! 96GHG 96GHJ 96G59
5(6" 5J6" 5"69 5H6" 8996" 89(69
从 表 ( 可 见 # 氯 霉 素 的 回 收 率 为 5(6"7 !
入 (" !<=>?@A)?B 和 (" !< >C#D@=>?# 以 899
89(697#平均值 5!697 $ %&’
线性方程为 !4"8!6(H&3!R "I(56JJ# 因此可以认为
Q<DF> 是 测 定 水 产 品 中 氯 霉 素 含 量 的 一 种 好 方
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讨论
Q<DF> 是酶联记的抗原与 抗 体 进 行 的 抗 原 @
97C:<&":<" 用 /-B-:< 乙酸乙酯在通风橱内混合 %5-$5& :(9" 过滤后取 5-B- :< 滤液 " 然后按照 5BAB/ 节进行检测 # 计算回收率 " 实验结果如表 /
所示 #
万方数据
第!卷 第"期
酶联免疫检测法测定水产品中残留氯霉素的研究
8G"
表!
回收率实验结果 !"#$ "
!"# !5"5!
材料与仪器 样品及其编号
!N 样品 ) 小红虾干 ( "N 样 品 ) 安康鱼 (#N 样品 ) 冻黄鱼 (4N 样品 )带鱼段 $ 以上
%5! 1/6J/# 比原标准提高了 !%% 倍 ( 美国食品药品 监督管理局 !KL+ " 也有类似的检出限规定 $ 水产
品中氯霉素残留检测方法的检出限已经在国际贸 易合作中成为新的技术性壁垒 $ 加快氯霉素残留 检测方法研究 #具有重要的意义 $ 酶联免疫检测法 !’()*+ "又称酶标法 $ 本实验 采用 ’()*+ 法对鱼 % 虾类水产品中的残留氯霉素 进行了研究 $
氯霉素 !=>?@AB1C>D.E=@? # 简称 F+G " 又称氯胺 苯醇 # 是一种广谱抗菌素 H!I$ 氯霉素对骨髓造血机 能有抑制作用 # 可引起血小板减少性紫癜 % 粒细胞 缺乏症 % 再生障碍性贫血 # 腹胀 % 腹泻 % 食欲减退 # 口腔粘膜充血 %疼痛 %糜烂 %口角炎和舌炎等 $ 另外 还可引起视神经炎 % 视力障碍 % 多发性神经炎 % 神 经性耳聋以及严重失眠 $ 氯霉素残留问题已引起国际组织和许多国家 和地区的高度重视 $ 欧盟的进口食品卫生标准规 定 & 氯霉素含量标准为不得检出 ’# 其 & 不得检出 ’ 的含义是指氯霉素含量在 ! 1/6J/ 以下 $ 德国部分 州的特殊检测标准为 %5" 1/6J/ $ 对于氯霉素残留 # 由于存在多种检测方法 H"!4I# 因此各种方法的检出 限问题已成为关注的焦点 $ 发达国家对检出限的 要 求 越 来 越 严 格 $ 欧 盟 由 原 来 的 !% 1/6J/ 降 至
虾用匀浆机匀浆 ! 将小红虾干 $ 带鱼段和安康鱼剪 碎# 准确称取 "B--7 已经匀浆的样品 " 分别加入
果是 D"- 9: 处吸光度最大 # 以标准溶液 -B--- %零 标 准 &$-B-/"$-B-"- $-B5-- $-B/--$-B"--$/B--- 97C
:< 各 "- !< " 标样的孔中均依次加入 /" !< 的过 氧 化 物 酶 联 记 的 氯 霉 素 浓 缩 液 %3F4.GH46 & 和 /"!< 氯霉素抗体浓缩液 %30IJ.F34&" 以 5-- !< 4#= 缓冲液作为空白试样进行对照实验 # 重复测
)/M 的羊抗体 %; 瓶氯霉素标准浓缩液 ! 质量浓度 分 别 为 %5%"$%%5%$%%5! %%5" %%5$ 和 " ./61( "% 过 氧 化 物 酶 联 记 的 氯 霉 素 浓 缩 液 !+FG9O7GP "% 氯 霉 素抗体浓缩液 !+QR)9F+G"% 四甲基联苯胺 ! 酶 结
合物 "%反应终止液 !! 1@?6( 硫酸 "%GS* 缓冲液等 $
定 A 次 # 以标准溶液 %包括零标准 !-& 扣除空白后 的吸光度 ! 为测定结果 # 以氯霉素平均浓度的对数值为横坐标 %"&" 标 准溶液吸光度与零标准溶液吸光度的百分比值 %!#!-& 为纵坐标 %$&" 由计算机系统回归统计得到 在 -B-/"’/B--- 97C:< 范围内 " 样品中氯霉素含量 %" "97C:<& 与吸光度之比 %$%!#!-"K & 的 关 系 曲 线 为 ’$L(5!@/, *9 %" &M/N@OO" 相关系数 HL-@NNNA#
表!
97C:< 的标准溶液 "- !<" 盖 上 薄 膜 " 用 微 量 震 荡 器震荡 5 :(9" 放入冰箱 %D& & 暗处培养 5 E" 然后 取 出 " 倒 尽 孔 中 液 体 " 冲 洗 干 净 " 再 加 5-- !< 底 物 " 置于暗处 %/" & &A- :(9" 加入 5-- !< 反应 终 止液 " 用酶联分析仪在 D"- 9: 下测吸光度 # 以 A