正交设计多糖提取实验方案

多糖正交实验方案

基本提取工艺流程：

黄精、百合干燥粉碎——石油醚脱脂2次——加水热提——提取液过滤——水浴浓缩——离心取上清——加入Sevag试剂脱蛋白操作——取上层水层——加无水乙醇沉淀——收集沉淀——用水溶解——过滤除杂质——重复1次醇沉——收集沉淀——加水溶解定容——成为贮备液。

精密量取贮备液——加水稀释定容——供测多糖含量。

精密量取贮备液——置锥形瓶水浴蒸干——干燥3h——冷却后——称重，计算浸膏得率。

一、提取过程的正交方案：

1、称取黄精、百合各10g干燥至恒重——粉碎成粗粉（过筛）——（置于圆底烧瓶中）加入5倍量（100ml）石油醚——水浴50℃加热回流1h，共2次，进行脱脂及除去小分子糖——弃液留渣，药渣晾干（置于培养皿中于通风处过夜晾干，或置于圆底烧瓶中水浴上加热至能轻松倒出）——（按照正交设计表的要求）加适量蒸馏水，于适宜温度，水浴加热回流提取规定次数——合并提取液—减压抽滤——水浴——浓缩（90℃）——至固定量30ml（浓缩过量时补足体积）——4000r/min离心10min——（注射器抽取）取上清液

2、——置于锥形瓶中——加入Sevag试剂（氯仿：正丁醇=5:1）约等量——置于恒温水浴振荡器50℃振荡15min——改置于分液漏斗中静置20min以上——待其分层后，取最上层（从上口倒出）——重复操作2次——置于广口瓶，加醇处理，加入4倍量的无水乙醇（预冷过）——冰箱冷藏过夜使其沉淀——减压抽滤，收集沉淀——（连同滤纸一起）用20ml蒸馏水溶解——过滤除去水不溶物——重复1次加醇沉淀，减压抽滤——收集沉淀，加少量蒸馏水溶解，加水稀释——定容至50ml容量瓶中，成为贮备液。

3、精密量取1ml贮备液，加至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，定容摇匀。供测定多糖含量。

4、精密量取10ml贮备液，置于（已干燥并精密称重的）小锥形瓶中，水浴蒸干，于105℃烘箱干燥3h，取出迅速置于玻璃干燥器内冷却30min，迅速称重，计算浸膏得率。

浸膏得率=（干浸膏重量/药材质量)×（50/10) x 100%

注意事项：

1、粉碎不用太细，20-40目均可。脱脂时圆底烧瓶可选择500ml或1000ml的。

2、9份水浴浓缩条件应一致，置于水浴锅盖面上，注意不要打翻。

3、离心后取上清液时，用注射器抽吸，每编号用一支。

4、精密量取操作，用移液器或移液管

5、制备浸膏的小锥形瓶，约50ml规格的。应洁净，105℃干燥2-3h至恒重，迅速取出，置于玻璃干燥器内冷却30min后，带手套操作，迅速称量，记录空瓶重量。

6、加醇沉淀时，应置于磁力搅拌器上，在搅拌下缓慢加入无水乙醇。在抽滤时再取回搅拌子。

多糖提取正交因素表

水平温度

（℃）提取时间

h

料液比提取次数

1 70 1 1:8 1

2 80 1.5 1:10 2

3 90 2 1:12 3

三、多糖脱蛋白及醇沉正交试验方案