临床免疫学检验-课件-第8章-荧光免疫技术
二、荧光物质
(一)荧光色素：具有光致荧光的特性。
1、荧光色素应具备的条件 P87
①能与蛋白质共价结合，结合蛋白质后不易解离，而未 与蛋白质结合的色素及其降解产物容易被清除
②荧光效率高 ③荧光的颜色与背景组织的颜色对比鲜明 ④结合蛋白质后，不影响蛋白质的生化性质及免疫
离心
抗体溶液
②透析法：蛋白质含量低，样品体积小。
优点：标记均匀，非特异性荧光低。 缺点：时间长，荧光素用量多
TITC 抗体溶液 反应过夜
PBS
FITC标记 的抗体溶液
③ 影响因素
温度和时间： pH：8.8～9.5 蛋白含量：20 ～25mg/mL蛋白为宜 荧光素的纯度：不应低于75%
四、 荧光标记抗体的纯化
常用于双重标记或对比染色；
激发峰和荧光距离较大，易于选择滤光系统。
(4)藻红蛋白（ PE） 最大吸收光谱: 565nm 。 最大发射光谱: 575nm 。 荧光颜色: 橙色。 应用：
常可作为FITC的补充。
(二)其他荧光物质 1、镧系螯合物 铕(Eu3+)（应用最广）、 铽(Tb3+) 、铈(Ce3+)的螯合物 应用：荧光衰变时间长，用于时间分辨荧光免疫测定 2、酶作用后产生荧光的物质(荧光底物) 如碱性磷酸酶（4-甲基伞酮磷酸盐）、辣根过氧化物酶
学活性，而且标记方法简单、快速，结合物稳 定，易于保存。 ⑤安全无毒，不具有附加的抗原性。
2、常用的荧光色素： (1)异硫氰酸荧光素(FITC） 最大吸收光谱: 490-495nm 。 最大发射光谱: 520-530nm 。 荧光颜色: 黄绿色。 应用最广：
①人眼对黄绿色较橘色更为敏感。 ② 一般切片等标本中绿色的自发荧光少于红 色的，本底低 。 缺点：易猝灭
2）滤片系统： ①激光滤片（exciter filter）： 位置：光源和物镜之间 作用：使短波长的光通过、吸收长波长的光
紫外光滤片： UG 通过275nm～400nm 阻挡400nm以上的可见光
组织的自发荧光弱,呈灰蓝色 蓝紫外光滤片： BG 通过325nm～500nm
荧光强度大,适于观察细菌标本; 不适于观察有自发荧光的组织标本
①除去未结合的游离荧光素及其降解产物:减少非特 异性染色的来源 透析法、凝胶过滤色谱法
②去除过度标记和未结合荧光素的抗体： 离子交换层析（搅拌）
③非特异反应物质的去除：以同一正常组织／同种 动物其它组织的组织粉预先吸收，使非特异荧光 大为减弱。
五、 标记抗体的鉴定
抗体效价(高者特异荧光强，非特异荧光相对减弱) 双扩抗体效价：1：16～1:32比较理想。
第二节 荧光抗体的制备
一、抗体要求
纯度高、特异性强、亲和力高、效价高（双 扩效价≥1：32）
二、荧光素要求 三、荧光素标记抗体的方法
①搅拌法: 用于标记体积大, Pr含量高的Ab溶液。 优点：标记时间短、荧光素用量少（10μg FITC/1mg Ig） 缺点：非特异性荧光高
逐滴加入FITC溶液 搅拌4～6h
第八章 荧光免疫技术
Fluoroimmunoassay, FIA
荧光免疫技术
概念：是将免疫学反应的特异性与荧光 技术的敏感性结合起来的一种方法。
方法： 荧光抗体技术(FAT): 用荧光素标记抗 体进行抗原定位、定量检测等。
第一节 荧光免疫试验的组成要素
一、荧光的基本知识
1.荧光：某些物质受到一定波长光的激发后，在极短时间内发 射出的波长大于激发光波长的光。
(2)四乙基罗丹明 (RB200) 最大吸收光谱: 570nm 。 最大发射光谱: 595-600nm 。 荧光颜色: 亮橙、橘红色。 应用：
常用于双重标记或对比染色。可作为FITC 的补充，但其荧光效率较低。
(3)四甲基异硫氰酸罗丹明 (TRITC) 最大吸收光谱: 550nm 。 最大发射光谱: 620nm 。 荧光颜色: 橘红色。 应用：
②阻挡滤片（barrier filter）：吸收滤片或抑制滤片 位置：物镜和目镜之间 作用使荧光通过(410～650nm) 阻断荧光以外的其它光。保护眼睛。
OG(橙黄色)：
GG(淡绿色)：
③隔热滤片 位置：灯室聚光器前 作用：阻拦红外线
3）镜头: 需消色差、无荧光
4）光路: 透射式：适于观察对光可通透的标本 落射式：适于观察透明度不好及各种活性组织
2.产生机制：
基态---能量(波长短的光)----激发态---荧光(波长长的光，光
致发光)---基态 化学物质 基态
吸收能量
激发态
释放能量：发光
3.特点： 即时性(停止供能，荧光现象即止10-7～
10-8s） 4.能量来源：光、化学物质、射线。
有关参数
1.发射光谱：固定激发波长，在不同波长下所记
Cy5的缺点是不能用表面荧光显微镜观察，因此通常 用具有远红外检测器的共聚焦显微镜观察。
荧光显微镜观察
1、荧光显微镜
1）光源：（供能作用）用短波长的光源 提供很强的激发光源
高压汞灯：波长不连续：365nm～435nm (紫外光或蓝紫光)
只能用作荧光激发光源 氙灯 卤素灯 光源有一定寿命：标本要集中观察
（对羟基苯乙酸）的底物。 应用：酶免疫荧光分析
3、花菁染料 (Cyanine Dyes，Cy2，Cy3，Cy5） 荧光特性与传统荧光素类似，但水溶性和对光稳定
性较强，荧光量子产率较高，对pH等环境不敏感。常 用于多重染色。
Cy2比FITC更稳定，荧光强度更大，光稳定性和抗 淬灭性更好。
Cy3和Cy5比大多数荧光基团更亮，更稳定，背景更 弱。
录到的样品发射荧光的相对强度。
2.激发光谱：固定发射波长，用不同波长的激发光
激发样品,所记录到的相应的荧光发射强度。
3.荧光效率：是指荧光物质将吸收的光能转变成
为荧光的百分率。 荧光效率＝发射荧光的光量子数(荧光强度)/
吸收光的光量子数(激发光强度)
取决于荧光色素本身的物理特性
4.荧光的淬灭：
指荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱 甚至消退的现象。 原因： (1)紫外光照射长； (2)苯胺、酚、ＫＩ、铁、汞、镍等。 有利：猝灭剂消除不需要的荧光,如硝基苯
绪论思考题
思考题绪论1. 免疫应答主要分为哪几个阶段？2.中枢免疫器官对免疫细胞的发育起什么作用？3.外周免疫器官主要由哪些组织与器官组成？在免疫应答中发挥什么作用？淋巴细胞、B淋巴细胞与NK细胞的主要功能分别是什么？5.补体系统的主要激活途径有何不同6.免疫辅助细胞在特异性免疫应答中发挥什么作用？7.7.临床免疫学主要的研究方向是什么？8.8.免疫学检验可分为几个部分？9.9.临床免疫学及免疫检验在移植免疫、肿瘤免疫中的意义。
10.10.现代免疫学技术包括了哪些方法？第二章抗原抗体反应1．什么是抗原抗体反应？抗原抗体反应的原理是什么？2．抗原抗体的结合力有哪些？3．抗原抗体反应有哪些特点？4．如何理解抗原抗体反应的特异性和交叉反应？5．什么是抗原抗体反应的可逆性？有何应用？6．如何理解抗原抗体反应的亲和力和亲合力？7．抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例？8．抗原抗体反应有哪些影响因素？9．基于抗原抗体反应的免疫学检测技术有哪些？10．什么是标记免疫技术？标记免疫技术有哪些类型？第三章免疫原和抗血清的制备1．什么是免疫原？2．如何制备可溶性抗原？3．常用的细胞破碎方法有哪些？4．连接半抗原的载体有哪些？制备半抗原性免疫原的方法有哪些？5．纯化抗原的鉴定包括有哪些内容？6．什么是免疫佐剂？免疫佐剂有哪些种类？免疫佐剂的作用机制有哪些？7．什么是抗血清？什么是多克隆抗体？8．如何制备抗血清？9．动物采血有哪些方法？10．抗血清的鉴定包括哪些内容？第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备1．杂交瘤技术是如何问世的？其基本原理是什么？2．什么是单克隆抗体？其特性和局限性如何？与多克隆抗体有何异同？3．杂交瘤细胞的克隆方法有哪些？4．细胞株冻融的原则是什么？5．大量制备单克隆抗体的方法有哪些，各有哪些优缺点？6．单克隆抗体的性质鉴定的方法有哪些？7．叙述单克隆抗体的制备流程和应用。
8．叙述基因工程抗体的概念和优点。
临床免疫学检验技术-01-第一章 概论
第三节 免疫学技术的发展与临床免疫检验
一、免疫学技术的发展历程
经典免疫学技术
• 免疫凝集试验 • 免疫沉淀试验 • 补体结合试验
现代免疫学技术
• 标记免疫学技 术（特异性及 敏感性提高）
自动化免疫学技术
• 自动化免疫分 析仪（反应进 行加快）
（一）经典免疫学技术
1. 免疫凝集试验 （1）直接凝集试验： 1）肥达试验 2）外斐试验 3）交叉配血凝集试验 （2）间接凝集试验： 1）间接血凝试验 2）胶乳凝集试验 3）自身红细胞凝集试验
总结
免疫器官
中枢免疫器官：骨髓、胸腺 外周免疫器官：淋巴结、脾脏、粘膜伴随淋巴组织
免
淋巴细胞：T细胞、B细胞、NK细胞
疫
系 统
免疫细胞
免疫辅助细胞：单核巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细 胞、肥大细胞等
免疫分子
免疫球蛋白 补体系统 细胞因子 黏附分子 人类白细胞分化抗原
四、免疫与免疫应答
免疫（immunity）是机体识别和排斥抗原性异物的一 种生理功能。
重点提示
1、免疫系统组成及功能 2、免疫学检验技术的的发展
第一节 免疫学基础简介
免疫学（immunology）
免疫学是研究免疫系统的结构与功能，并通过对其在免 疫应答过程中所产生的免疫保护与免疫损伤机制的研究，探 讨有效的免疫措施，实现以防病、治病为目的的一门现代医 学学科
免疫系统（immune system）
1960
学者
贡献
J.Bordet
补体与溶菌活性
H.Durham，M.von Gruber
特异凝集反应
G.Widal，A．Sicad
肥达试验
R.Kraus
临床免疫学检验 名词解释
抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。
抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。
亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。
亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。
抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。
带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。
在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。
抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。
免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。
免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。
半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。
当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。
载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。
载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。
单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。
多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。
临床检验主管检验师临床免疫学和免疫检验-荧光免疫技术 复习资料汇编
临床检验主管检验师临床免疫学和免疫检验-荧光免疫技术复习资料汇编一、概述荧光物质在吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为荧光。
（一）荧光荧光物质在吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为荧光。
荧光物质（二）其他荧光物质铕（Eu3＋）为三价稀土镧系元素，其螯合物经激发后也可发射特征性的荧光，激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于时间分辨荧光免疫测定。
二、荧光抗体技术荧光抗体技术是以荧光素标记抗体，与切片中组织或细胞抗原反应，经洗涤分离后，在荧光显微镜下观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其部位。
荧光抗体技术包括荧光抗体制备、标本制作、荧光抗体染色和荧光显微镜检查等内容。
（一）荧光抗体的制备1.抗体要求：用于标记的抗体应该具有高特异性和高亲和力。
2.荧光素要求：①与蛋白质结合后不易解离，而未结合者易于清除；②荧光效率高；③荧光色泽与背景组织对比鲜明；④不影响蛋白质原有的生化与免疫性质；⑤标记方法简单、安全无毒；⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。
3.抗体的荧光素标记：搅拌法和透析法。
4.荧光素标记抗体的纯化：去除未结合的游离的荧光素。
可采用透析法或层析分离法。
5.荧光抗体的鉴定：荧光素与蛋白质的结合比率（组织切片的荧光抗体染色以F/P＝1.5为宜，用于活细胞染色以F/P＝2.4为宜）、抗体效价、抗体特异性。
6.荧光抗体的保存：小量分装，-20℃冻存可保存1～2年。
真空干燥后可长期保存。
稀释后的抗体不宜长时间保存，在4℃可保存1～3天。
（二）标本的制作临床标本主要有组织、细胞和细菌三大类。
制作标本要力求保持抗原的完整性、切片要求尽量薄、干扰物质要充分洗去、安全。
（三）荧光抗体染色与结果判断1.直接法用特异荧光抗体直接滴加于标本上，使之与抗原发生特异性结合。
临床免疫学检验
一、名解带现象（前带、后带）：在等价带的前后，由于抗体和抗原过量，形成的沉淀物少，上清液中可测出游离的抗体或抗原，这种现象称为带现象。
当抗体过量时称为前带，抗原过量时称为后带。
凝集反应：是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。
直接凝集反应：在适当电解质参与下，细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应。
间接凝集反应：将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体（如正常人O型红细胞、细菌、胶乳颗粒等）的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适当电解质存在条件下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应或被动凝集反应。
Coombs试验：又称抗球蛋白试验，是抗球蛋白参与的间接血凝试验，用于检测抗红细胞不完全抗体。
不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但因其分子量较小，体积小，不能起到桥联作用，在一般条件下不出现可见反应。
利用抗球蛋白抗体作为第二抗体起桥联作用，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞凝集。
沉淀反应：是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。
高剂量钩状效应：抗原过量可引起高剂量钩状效应，即抗原过量致形成的IC分子小，发生再解离，浊度下降，光散射减少。
海德堡曲线理论：当抗体过量时，IC的形成随着抗原递增至抗原、抗体比例最适处达最高峰，沉淀反应最明显，称等价带，高峰区域左侧，抗体浓度过高，沉淀反应不明显，称前带；高峰区域右侧，抗原浓度过高，沉淀反应也不明显，称后带，这就是海德堡曲线理论。
包被：将抗体或抗原结合在固相载体上的过程称为包被。
封闭：由于包被过程中固相载体表面不能被抗体或抗原蛋白质完全覆盖，实验操作过程中加入的血清标本以及酶结合物中的蛋白质也会部分地非特异性吸附于固相载体表面，最终产生非特异性显色导致测定本底偏高，在这种情况下，需用1%-5%的牛血清白蛋白或5%-20%小牛血清再包被一次，消除此干扰，此过程称为封闭。
临床免疫学检验重点
一：名词解释1免疫学（immunology）：是研究免疫系统的结构与功能，并通过对其在免疫应答过程中所产生的免疫保护与免疫损伤机制的研究，探讨有效的免疫措施，实现以防病，治病为目的的一门现代医学科学。
2免疫球蛋白（immunoglobulin）：是B细胞经抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的一种蛋白质，主要存在于血清等液体中，约占血浆蛋白总量的20%，IgG能与相应抗原特异性结合，执行体液免疫功能。
3补体（complement）：是存在于人和脊椎动物血清与组织液中一组经活代后有酶活性的蛋白质，包括30余种可溶性蛋白和膜结合蛋白，故称为补体系统。
4细胞因子（cytokine）：是由细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物质的总称。
大多数细胞因子是低分子量的蛋白或糖蛋白。
5临床免疫学（clinical immunology）：是将免疫学基础理论，临床疾病与免疫学技术相结合，用于研究疾病的免疫病理机制，诊断与鉴别诊断，评价治疗效果和判断预后的多个分支学科的总称。
6亲和性（affinity）：是指抗体分子上的一个抗原结合点与一个相应抗原表位之间的结合强度，抗原抗体的亲和性取决于两者空间构型的互补的程度。
7亲和力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，亲和力与亲和性，抗体的结合价，抗原的有效抗原表位数目有关。
8免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。
9半抗原（hapten）：是指仅有抗原性而无免疫原性的物质。
10免疫佐剂（immunoadjuvant）：预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型，简称佐剂。
11凝集反应（agglutination reaction）：是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原的颗粒性载机与相应抗体特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。
免疫检测技术
基本步骤
原理
1
包被
洗涤
3 使结合在固相
上
的抗原抗体复 合物
2
反应
加入待测抗
体或
抗原和酶标 抗原
4
或抗体
底物显色
定性或定量的分 析
五种常见的检测方法
1 双抗夹心法（测定抗原） 2 测定抗体的间接法 3 竞争法（测定抗原） 4 捕获包被法测IgM抗体 5 ABS-ELISA法
1 双抗夹心法测抗原
适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗 原及低于二价的小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心
3.免疫电泳技术
免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物。 这种技术有两大优点：一是加快了沉淀反应的速度， 二是将某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分 开，再分别与抗体反应，以此作更细微的分析。
免疫电泳包括:血清免疫电泳、对流免疫电泳、 火箭电泳、免疫印迹等
血清免疫电泳
将抗原混合物（病人血清）在凝胶中用电泳 分离后，沿电泳方向挖一平行的小槽，加入 抗血清，进行双向扩散。沉淀线的特点显示 病人血清与正常人血清存在的差异，即血清 蛋白组分的缺少或增加。
2 间接法测抗体
几种标记/检测技术灵敏度的比较
灵敏度(mol/L)
10-18 10-15 10-12 10-9
酶标
荧光
放免
发光
几种标记/检测试剂的有效期比较
有效期（月）
18
15
12
9
6
3
酶标
荧光
放免
发光
人人民民币币
100,000 80,000 60,000 40,000 20,000 0
放免
三、补体结合实验 （2个系统，5种成分）
《临床免疫学检验技术》复习笔记
《临床免疫学检验技术》复习笔记一、绪论临床免疫学检验技术作为医学检验技术专业的核心课程，在医学领域中占据着至关重要的地位。
它主要阐述了基础免疫学和临床免疫学的基本理论、技术，以及常见免疫相关性疾病的免疫学特征和诊断方法。
二、抗原与抗体1. 抗原（Ag）是指能启动、激发和诱导免疫应答的物质，可被T、B 细胞表面特异性抗原受体识别及结合，激活细胞产生应答产物。
抗原是所有能启动、激发和诱导免疫应答的物质，其可被T、B 细胞表面特异性抗原受体（TCR 或BCR）识别并结合，激活T/B 细胞产生免疫应答，并与之发生特异性反应。
抗原可来自外界或自身，机体免疫细胞通常识别的抗原多数是蛋白质，少数是多糖、脂类和核酸等。
例如，2018 年长春长生疫苗事件中提到的疫苗就属于免疫学上所说的抗原范畴。
抗原的特性包括免疫原性、免疫反应性和特异性。
免疫原性是指抗原被T、B 细胞表面特异性抗原受体（TCR 或BCR）识别及结合，诱导机体产生适应性免疫应答的能力；免疫反应性，又称抗原性，是指抗原与其所诱导产生的免疫应答效应物质特异性结合的能力。
所有的抗原都有免疫反应性，但不一定有免疫原性。
同时具有免疫原性和免疫反应性的物质称为完全抗原；只有免疫反应性而无免疫原性的物质称为半抗原。
抗原的免疫原性主要取决于抗原的异物性和理化特性，也与机体的遗传、性别、生理状态以及抗原进入机体的途径和方式有关。
抗原通常为非己物质，抗原与抗体之间的亲缘关系越远，免疫原性越强。
天然抗原多为大分子有机物，蛋白质免疫原性较强；抗原分子量越大，则免疫原性越强；多支链或含环状结构基团的抗原较直链抗原免疫原性强；聚合状态蛋白较单体的免疫原性强；颗粒性抗原较可溶性抗原的免疫原性强。
此外，机体对抗原的免疫应答受多种遗传基因特别是主要组织相容性复合体基因的控制，还受年龄、性别与健康状态的影响。
在应用抗原免疫动物制备抗体时，选择合适的动物种类非常重要，应该选用发育成熟且健康的动物。
2024临床免疫学检验名词解释(第二部分)
2024临床免疫学检验名词解释（第二部分）49、荧光：荧光物质在吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为荧光。
so、荧光免疫试验：是以荧光物质标记抗体或抗原，通过与相应抗原或抗体发生特异也绪合反应，以此对待测物进行定位、定性和定量分析的检测技术，具有高度特异性、敏感性和直观性。
51、时间分辨荧光免疫试验：以系元素标记杭原或抗体，并与时间分辨测定技术相结合而建立起来的一种新型非放射性微量分析技术。
52、Stokes位移：选择荧光物质作为标记物时，必须考虑激发光谱和发射光谱的波长差，即Stokes位移。
53、荧光偏振免疫试验：是利用抗原抗体竞争反应原理，根据荧光素标记抗原与荧光素抗原－抗体复合物之间荧光偏振程度的差异测定体液中小分子抗原物质的含量。
54、荧光效率：荧光物质分子将吸收的光能转变成荧光的百分率称为荧光效率。
55、荧光滓灭：荧光物质在某些理化因素（如紫外线照射、高温、苯胺、硝基苯、酚、I－等）作用下，发射荧光减弱甚至消退的现象称为荧光滓灭。
56、酶免疫试验：是继荧光免疫试验和放射免疫试验之后的三大经典免疫标记技术之一，它以酶标记抗体（抗原）作为主要试剂，将酶高效催化反应的专一性和抗原－抗体反应的特异性相结合的免疫检测技术。
57、包被：将抗原或抗体结合在固相载体上的过程称为包被。
58、封闭：由千包被液蛋臼浓度很低，造成包被后固相载体表面会剩余少量未结合位寺，可非特异性吸附标本中的蛋白质和酶结合物，形成非特异性结合导致本底增高。
为消除干扰，包被后的微孔板或膜等还需用1%~5％牛血清白蛋白(BSA),5% ~ 20％小牛血清或2％脱脂乳等再包被一次，此过程称为封闭。
59、均相酶免疫试验：是利用酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变的原理，可以在不将结合酶标记物和游离酶标记物分离的清况下，通过测定标记酶活性的改变（酶活性增强或减弱），从而确定待测物的含量。
电化学发光免疫检测项目临床应用PPT课件
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游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）
【指标简介】FT3是血中以游离状态存在的，可 直接与T3受体结合而具有生理作用的三碘甲状 腺原氨酸，约占TT3的0.3%。其测定不受含碘 杂质和TBG浓度的影响，因而比TT3更为灵敏。 正常参考值：3.95-6.8pmol/L或2.574.43pg/ml
25
常见甲状腺疾病及相应激素变化
甲状腺疾病
新生儿甲低 重度甲状腺功能减退症 轻度甲状腺功能减退症 下丘脑－垂体性甲状腺功能减低症 正常人 T3型甲亢 服用外源性T3过多 甲亢复发前驱 Graves病甲亢 代偿性T3升高 1 亚临床型甲低 2 耳聋甲状腺综合症 3 地方性甲状腺肿 TBG结合量增加 服用过多外源性T4
12
【临床意义及鉴别诊断】
（3）慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者可出现血清TSH升高， 是因为甲状腺滤泡破坏，甲状腺激素分泌减少，对TSH的 负反馈调节作用减弱的结果。其血中甲状腺激素可正常， 而TSH较前升高。
（4）血清TSH升高尚可见于地方性甲状腺肿、垂体分泌促 甲状腺激素腺瘤、甲状腺激素应用过量等情况；降低尚可 见于肢端肥大症、柯兴氏综合症以及应用多巴胺、糖皮质 激素的患者。
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总三碘甲状腺原氨酸（TT3）
【指标简介】3-5-3′-三碘甲状腺原氨酸（triiodothyronine，T3） 是含碘的酪氨酸衍生物，体内的T3 65%由甲状腺合成分泌， 35%由T4在肝肾等外周组织经5′-脱碘酶作用下脱碘后形成。T3 与甲状腺结合球蛋白（TBG）结合的亲和力比T4小，且其游离度 约比T4大10倍左右，故其生物活性大于T4。T3具有广泛和重要 的生物效应，与机体碳水化合物、脂肪、蛋白质、维生素、水和 电解质等物质的代谢，以及全身多系统的功能密切相关。甲状腺 激素是中枢神经系统的发育所必需，儿童缺乏甲状腺激素可影响 生长发育，以至形成克汀病。 正常参考值：1.3-3.1nmol/l或0.8-2.0ng/ml(2.5-97.5%;n=514)