免疫细胞功能检测技术PPT课件
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在我们的身体中，免疫细胞就像是一支训练有素的“军队”，时刻守护着我们的健康，抵御着外界病原体的入侵。
为了更好地了解这支“军队”的战斗力，免疫细胞功能检测技术应运而生。
免疫细胞功能检测技术是一类用于评估免疫细胞在免疫反应中的活性、数量、表型以及功能状态的方法。
这些技术对于诊断免疫相关疾病、监测治疗效果、评估个体的免疫状态以及研究免疫系统的机制都具有重要意义。
其中，流式细胞术是一种常见且强大的免疫细胞检测技术。
它通过让单个细胞依次通过激光束，根据细胞所发出的荧光信号来分析细胞的表面标志物、细胞内的蛋白质以及细胞的大小和粒度等特征。
比如说，我们可以利用特定的荧光标记抗体来识别 T 细胞、B 细胞、NK 细胞等不同类型的免疫细胞，并进一步了解它们的活化状态。
通过流式细胞术，医生能够快速准确地判断患者的免疫细胞是否存在异常，为疾病的诊断和治疗提供重要依据。
酶联免疫斑点法（ELISPOT）也是一项常用的技术。
它主要用于检测免疫细胞分泌细胞因子的能力。
想象一下，细胞因子就像是免疫细胞之间传递信息的“信使”，通过检测这些“信使”的分泌情况，我们就能了解免疫细胞的功能状态。
比如，在检测T 细胞对特定抗原的反应时，ELISPOT 可以准确地显示出分泌特定细胞因子（如干扰素γ）的 T 细胞的数量，从而反映出 T 细胞的免疫活性。
细胞增殖实验则能够评估免疫细胞的增殖能力。
当免疫细胞受到刺激时，它们会进行分裂和增殖以增强免疫反应。
通过使用特定的标记物或者检测细胞的代谢活性，我们可以确定免疫细胞是否能够有效地增殖。
这对于研究免疫细胞的活化和免疫应答的强度非常有帮助。
细胞毒性实验则用于检测免疫细胞杀伤靶细胞的能力。
比如，NK细胞和细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）能够识别并杀伤被感染或恶变的细胞。
在实验中，我们可以将靶细胞与免疫细胞共同培养，然后通过检测靶细胞的存活情况来评估免疫细胞的杀伤功能。
除了上述这些技术，还有一些其他的方法也在免疫细胞功能检测中发挥着重要作用。
免疫细胞标志与功能检测技术优秀课件
泛影葡胺生理盐水溶液。 比重：1.077±0.001(最佳)
齐齐哈尔医学院免疫
1.077±0.001的分层液可将细胞分离
红细胞：1.093 粒细胞：1.092 单个核细胞1.0齐7齐6哈—尔医1.学0院9免0疫
齐齐哈尔医学院免疫
免疫细胞标志与功 能检测技术
掌握：免疫细胞的分离; 淋巴细胞功能检测 熟悉：免疫细胞表面标志和功能检测的临床
应用;淋巴细胞表面标志及亚群分类； 了解：其他免疫细胞功能检测技术；检测的
临床应用。
齐齐哈尔医学院免疫
一、免疫细胞的分离
二、淋巴细胞标志及亚群分类
三、抗原提呈细胞的表面标志
四、淋巴细胞的功能检测
密度梯度离心(Ficoll)离心
细胞纯度95%；细胞收率80%；淋巴细胞90%--95%
齐齐哈尔医学院免疫
二 、淋巴细胞分离
掌握
目的--去除单核细胞
1.贴壁粘附法 2.吸附柱过滤法: 将PBMC加入葡聚糖
凝胶SephadexG-10中，从柱上洗脱下 来的主要是淋巴细胞。 3.Percoll分离液法：经聚乙烯吡咯烷 酮（PVP)处理的硅胶颗粒。
用分层液是（ C）
A 明胶
B 右旋糖酐
C Ficoll分层液 D Percoll分层液 E 葡聚糖
2.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下
依次为（ C）
A 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞
B 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞
C 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞
D 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术嘿，咱今儿就来说说这免疫细胞功能检测技术。
你知道吗，咱身体里的免疫细胞那可真是一群了不起的“小战士”呀！它们时刻准备着和各种病菌、有害物质作战，保卫着咱们的身体。
那这免疫细胞功能检测技术呢，就像是给这些“小战士”来个大体检。
就好比咱去医院体检，能知道自己身体哪儿好哪儿不好，这检测技术也能让咱清楚免疫细胞的状态咋样。
你想想看，要是咱能清楚地知道这些“小战士”的战斗力强不强，是不是就能更好地了解自己的身体状况啦？要是检测出来它们有点弱，那咱就得想办法给它们加加油、鼓鼓劲呀！不然，敌人来了可咋办呢？这检测技术有很多种方法呢。
比如说，有一种可以检测免疫细胞的增殖能力。
你就理解成看看这些“小战士”能不能快速地增加数量，人多力量大嘛！要是它们增殖得快，那说明它们很有活力呀，咱就放心不少。
还有检测它们杀伤能力的。
这就好比看这些“小战士”能不能一下子就把敌人给消灭掉，要是它们的杀伤能力强，那咱身体里的那些坏家伙就不敢随便捣乱啦。
再比如说，检测免疫细胞分泌细胞因子的能力。
细胞因子就像是“小战士”们的秘密武器，能帮助它们更好地作战。
要是分泌得多，那它们打起仗来肯定更厉害呀！那这检测技术重要不？那可太重要啦！就好像你要去打仗，总得先知道自己手里的武器好不好使，自己的士兵厉不厉害吧？这检测技术就是帮咱了解免疫细胞这个“军队”的情况呀。
要是没有这个技术，咱就像蒙着眼睛走路一样，都不知道自己身体的免疫防线到底咋样。
万一有点啥问题，咱都不知道该怎么应对呢。
你说，这免疫细胞功能检测技术是不是很神奇？它就像是给咱身体里的免疫系统开了一扇窗，让咱能看到里面的情况。
而且，随着科技的不断进步，这检测技术肯定也会越来越先进，能检测的东西也会越来越多。
咱可得好好重视这个技术呀，毕竟身体是自己的，咱得对自己负责呀！别觉得这事儿离你很远，说不定哪天你就需要它来帮你了解自己的身体呢。
免疫细胞功能检测技术，真的是咱身体健康的好帮手呀！你说是不是呢？。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫系统是人体的重要防御机制之一，能够识别病原体并消灭它们，维护身体的健康。
免疫细胞功能检测技术是一种用于评估免疫系统功能的测试方法，可以帮助人们更好地了解自身的免疫状况和疾病风险。
本文将介绍免疫细胞功能检测技术的原理、应用和未来发展趋势。
一、免疫细胞功能检测技术原理免疫细胞功能检测技术通过测定机体内免疫细胞的功能状态，评估免疫系统的健康状况。
其中，常见的技术包括流式细胞术、酶联免疫吸附法（ELISA）、细胞因子检测等。
1. 流式细胞术流式细胞术是一种通过流式细胞仪检测细胞表面标记物的技术，常用于检测免疫细胞的表型和活性。
通过标记细胞表面的特定抗原和荧光染料，流式细胞术可以定量测定细胞表面标记物，并进行多参数分析。
2. 酶联免疫吸附法（ELISA）ELISA是一种常用的免疫细胞功能检测技术，可用于定量测定体液中特定抗原或抗体的浓度。
通过将待测样品与特定抗原或抗体反应，并加入酶标记的二抗，在底物作用下形成可见的颜色反应，从而定量测定抗原或抗体的浓度。
3. 细胞因子检测细胞因子是一类在免疫反应中发挥重要调控作用的分子信号物质，如干扰素、白细胞介素等。
细胞因子检测技术可以通过ELISA等方法测定体液或细胞培养上清中细胞因子的浓度，为炎症反应的评估和免疫状态的监测提供重要信息。
二、免疫细胞功能检测技术应用免疫细胞功能检测技术在免疫学研究和临床医学中有着广泛的应用。
以下是该技术在不同领域的应用举例：1. 免疫系统疾病诊断免疫细胞功能检测技术可以帮助医生诊断免疫系统疾病，如自身免疫性疾病、免疫缺陷病等。
通过评估免疫细胞的数量、活性和功能状态，可以辅助医生制定治疗方案和判断治疗效果。
2. 肿瘤免疫治疗肿瘤免疫治疗是一种利用机体免疫系统增强对肿瘤细胞的攻击能力的治疗方法。
免疫细胞功能检测技术可以评估患者体内免疫细胞的活力和功能状态，为肿瘤免疫治疗方案的制定和疗效监测提供依据。
3. 个体化医疗免疫细胞功能检测技术还可以用于个体化医疗，根据不同个体的免疫细胞功能状况，制定相应的健康管理方案。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，免疫细胞功能检测技术正发挥着日益重要的作用。
免疫细胞如同人体的“卫士”，它们时刻监控并抵御着外界病原体的入侵，维持着身体的健康平衡。
而了解这些“卫士”的功能状态，对于疾病的诊断、治疗以及预防都具有关键意义。
免疫细胞主要包括淋巴细胞（如 T 细胞、B 细胞和自然杀伤细胞）、单核细胞、巨噬细胞等。
不同类型的免疫细胞在免疫反应中承担着不同的角色，因此检测它们的功能也就需要采用多样化的技术手段。
其中，流式细胞术是一种应用广泛的免疫细胞功能检测技术。
它通过让细胞单个地通过激光束，同时结合荧光标记的抗体，能够快速、准确地检测免疫细胞表面标志物的表达情况。
例如，通过特定的抗体标记，可以区分出不同亚型的 T 细胞，如辅助性 T 细胞（CD4+ T 细胞）和细胞毒性 T 细胞（CD8+ T 细胞），进而了解它们的比例和功能状态。
此外，还能检测免疫细胞表面活化分子的表达，如 CD69、CD25 等，以此来反映免疫细胞的活化程度。
细胞增殖实验也是常见的检测方法之一。
免疫细胞在受到刺激后会发生增殖，通过检测细胞的增殖情况，可以间接评估免疫细胞的功能。
常用的方法有 3H胸腺嘧啶掺入法和羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色法。
3H胸腺嘧啶掺入法是将放射性标记的胸腺嘧啶掺入到正在分裂的细胞中，通过检测放射性强度来反映细胞的增殖情况。
CFSE 染色法则是利用一种可穿透细胞膜的荧光染料对细胞进行标记，随着细胞的分裂，荧光强度会逐渐减半，从而可以通过流式细胞术检测细胞的分裂代数来评估增殖能力。
细胞毒性检测对于评估免疫细胞的杀伤功能至关重要。
比如，自然杀伤细胞（NK 细胞）和细胞毒性 T 细胞（CTL 细胞）能够直接杀伤肿瘤细胞或被病毒感染的细胞。
检测细胞毒性的方法包括铬释放法和乳酸脱氢酶（LDH）释放法。
铬释放法是将靶细胞用放射性铬标记，当免疫细胞杀伤靶细胞后，铬会释放到上清液中，通过检测上清液中的放射性强度来判断细胞毒性。
免疫细胞功能检测技术(最新)
免疫细胞功能检测技术一、前言免疫细胞功能检测技术是指通过检测免疫系统中不同类型的细胞及其功能状态来评估患者免疫系统的状态，以帮助医生诊断和治疗各种免疫性疾病。
随着免疫学研究的深入和免疫细胞功能检测技术的不断更新，现在已经出现了多种免疫细胞功能检测技术，包括流式细胞术、蛋白芯片技术、基于DNA分子杂交的检测方法等。
本文将介绍流式细胞术作为一种常用的免疫细胞功能检测技术，并详细讨论其原理、方法和应用。
二、原理流式细胞术是一种基于细胞单元分析的技术，其核心是流式细胞仪。
细胞单元分析是指将细胞单元通过高速液流分散后，在一个单元一个单元地、连续稀释、分离、悬浮状态下进行检测，获得各单元的信息。
每个单元被封装在流动液滴中，以便实现快速、准确和高通量的细胞计数和分析。
流式细胞仪通过衍射光、荧光信号及其它物理或化学性质将细胞单元分析并定量化。
流式细胞术技术可以用于对细胞表面标记、胞质内染色质、分泌物等各种指标的分析，因此适用于多种免疫细胞功能检测。
三、方法样本准备：样本的来源包括血液、脑脊液、淋巴结、脾等组织。
样本应避免受到污染和过多的处理，避免对细胞造成影响。
例如，在采血时，采用无菌针头和管道，减少离心时间，保持细胞完整。
细胞分离和染色：首先，需要将细胞从样本中分离出来，可采用离心、红细胞裂解等方法。
然后，在合适的荧光标记物和染色剂的作用下，标记或染色目标细胞。
流式细胞仪检测：样本标记后由流式细胞仪自动进样，并通过荧光激发和检测模块进行检测。
最终，获得含有多个参数的细胞单元分析结果。
四、应用免疫学研究：流式细胞术可以用于评估免疫系统中不同类型细胞及其数量、表面标记、功能状态等。
免疫性疾病诊断：如艾滋病、类风湿关节炎、自身免疫性疾病等免疫性疾病，流式细胞术可协助医生快速、准确地诊断和监测疾病的处理效果。
肿瘤治疗：流式细胞术可用于检测肿瘤患者血液中的免疫细胞浸润情况，判断肿瘤对免疫系统的影响，从而指导肿瘤治疗。
五、总结流式细胞术作为一种常见的免疫细胞功能检测技术，具有高通量、多参数、准确度高等优点，在免疫学研究和临床应用中发挥着重要作用。
医学免疫学实验 免疫细胞及其功能检测技术
细胞免疫的体外检测
•大、小吞噬细胞 •大吞噬细胞－单核巨噬细胞 •小吞噬细胞－中性粒细胞
血涂片大吞噬细胞
大吞噬细胞吞噬实验（示教）
※ 观察示教，并作图
巨噬细胞吞噬作用
2、淋巴细胞的测定
（一）T细胞总数及亚群的测定 （二）T细胞功能的测定
1.淋巴细胞增殖试验 形态学方法、3H-TdR掺入法等。
2.细胞毒试验 3.细胞因子测定
T
+
T
T T
1）T细胞花环形成试验 T细胞表面有绵羊红细胞受体，形成花环。
计数200个淋巴细胞，结合3个SRBC或以上者的E 花环 阳性细胞数。
玫瑰花环试验
E-rosette formation test
正常范围：50%-80%
2. T细胞增殖试验（淋巴细胞转化试验）
医学免疫学实验
细胞免疫的体外检测
1.小吞噬细胞的吞噬作用（操作） 2.E-花环试验、淋巴细胞转化试验、大、
小吞噬细胞的吞噬现象（示教）
小吞噬细胞的吞噬作用
1. 抽取2ml血到抗凝管 2. 加入等量菌液，混匀 3. 37ºC反应30min 4. 加1小滴推片（制作血涂片） 5. 自然干燥 6. 加瑞氏染液以及等量蒸馏水反应10sec 7. 细水流冲洗 8. 吸干后油镜检查
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域中，免疫细胞功能检测技术扮演着至关重要的角色。
这些技术不仅有助于我们深入了解免疫系统的运作机制，还能为疾病的诊断、治疗和预防提供关键的依据。
免疫系统就像是我们身体的“保卫部队”，而免疫细胞则是其中的“士兵”。
它们时刻警惕着外来病原体的入侵，并迅速做出反应来保护我们的身体。
然而，要想知道这些“士兵”的战斗力如何，就需要依靠免疫细胞功能检测技术。
其中一种常见的检测技术是淋巴细胞增殖试验。
淋巴细胞在受到特定刺激后会发生增殖反应。
通过在体外培养淋巴细胞，并加入刺激物，如植物血凝素、刀豆蛋白 A 等，然后观察细胞的增殖情况，就可以了解淋巴细胞的功能状态。
这种方法简单直观，但也存在一定的局限性，比如无法准确区分不同亚型淋巴细胞的反应。
细胞毒性 T 细胞杀伤试验也是重要的检测手段之一。
细胞毒性 T 细胞能够特异性地识别并杀伤被病原体感染的细胞或肿瘤细胞。
在检测中，通常会用放射性同位素标记靶细胞，然后与细胞毒性 T 细胞共同培养，通过检测放射性物质的释放来判断杀伤效果。
这一技术对于评估机体的细胞免疫功能具有重要意义，但操作较为复杂，对实验条件要求较高。
免疫细胞分泌细胞因子的检测也是必不可少的。
细胞因子是免疫细胞之间相互交流的“语言”，通过检测它们的分泌水平，可以了解免疫细胞的活化状态。
常用的方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和流式细胞术。
ELISA 具有操作简便、成本较低的优点，但灵敏度相对较低。
流式细胞术则能够同时检测多种细胞因子，并对细胞进行分类分析，但设备昂贵，技术要求高。
此外，还有免疫细胞表面标志物的检测。
通过使用特异性抗体来识别免疫细胞表面的标志物，如 CD3、CD4、CD8 等，可以对不同类型的免疫细胞进行定量和定性分析。
这有助于了解免疫细胞的亚群分布和功能状态。
在实际应用中，免疫细胞功能检测技术为疾病的诊断和治疗提供了有力的支持。
例如，在免疫缺陷病患者中，通过检测免疫细胞的数量和功能，可以明确病因，制定个性化的治疗方案。
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（2）3H-TdR掺入法
培养 液 PHA
3H-TdR
淋巴细胞
全
血
离
心
分层 液
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过滤
测 量 放 射 性
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试验孔A均值
SI对照
570nm
孔A均值
570nm
➢优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观
性强，重复性好。
➢缺点：但需一定设备条件，同时还存在
放射性核素污染问题。
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(三) B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法ELISPOT
1.原理：
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2．应用与方法学评价：
➢该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检
测抗体分泌量。
➢优点：
稳定、特异、抗原用量少；
可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定
量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
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抗IgM 细菌脂多糖 SAC的SPA
B细胞增殖
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形态学
3H－TdR掺入 法
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(二) 溶血空斑试验
1. 原理：
精品Байду номын сангаасpt
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2. 方法学：
➢ 经典溶血空斑形成试验 ➢ 被动溶血空斑试验
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3．临床应用与评价
➢溶血空斑试验主要用于测定药物和 手术等因素对体液免疫功能的影响
➢评价免疫治疗或免疫重建后机体产 生抗体的能力。
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(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
1.原理：
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2. 方法： 滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
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(二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法：
吞噬率 (%)
吞噬细菌的白细胞数 100
计数的白细胞数
杀菌率 (%)
胞内含着染菌体数 的细胞 100
计数的白细胞数
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(3) MTT 比色法
培养 液
PHA
3H-MTTdTR
淋巴细胞
全
血
离
心
分层 液
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过滤
测 量测 放射性吸光度
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(二) T细胞分泌功能测定
体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激
后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生
物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、
生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功
染色计数 靶 离心取上清 细 测LDH或AKP 胞 离心取沉淀 溶 测活细胞荧光 解
测CPM值
测发光强度
常用靶细胞: K562细胞株
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二 吞噬细胞功能检测技术
按其形态大小分为两类： 大吞噬细胞—单核-吞噬细胞系统 小吞噬细胞—中性粒细胞
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一、中性粒细胞功能的检测
➢ 细胞趋化功能的检测 ➢ 吞噬和杀菌功能的检测
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(四) 体内试验
➢体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 ➢将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
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三、NK细胞活性测定
➢形态法 ➢酶释法 ➢荧光法 ➢同位素法 ➢化学发光法
收集细胞
检测β射线
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测定细胞内的3H－TdR 8
（1）形态学检查法
转化率
转化的淋巴细胞数 10% 0
转化和未转化的胞淋数巴细
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方法学评价：
➢优点：形态学方法简便易行，普通光 学显微镜便能观察结果，适于基层实验 室应用。 ➢缺点：是依靠肉眼观察形态学变化， 判断结果易受主观因素影响，重复性和 准确性较差。
能。
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（三）T细胞介导的细胞毒试验
1.原理：
靶细胞抗原
T细胞 靶细胞
致敏CTL
精品p观pt 察杀伤活力
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2.方法
➢形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残 留肿瘤细胞
意义： 肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力
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图15-精2品pTp细t 胞细胞毒试验示意图
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51Cr释放法
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2. 溶菌法
杀菌 (% （ 1 率 )作 3、 用 6 0或 0 9m 0菌 in 落 ） 10 数 0 0m菌 in 落数
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3．NBT还原试 验
NBT还原试验
原理：
N-N-
C
+ H+
N=N-R-
四氮唑基（淡黄色）
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N-NH2 C N=NH
甲臜（紫黑色）
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中性粒细胞 NBT 甲臜颗粒沉积于胞质中
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二、巨噬细胞功能检测
(一)炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%
炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据
此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，
细胞大小(直径μm) 12～20
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4个 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
有或无
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有或无
未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
6
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物：
免疫细胞功能检测技术
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1
一 淋巴细胞的功能检测
淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外
实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对
抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体
外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂
原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴
细胞分泌产物的测定
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2
淋巴细胞
➢T细胞（负责细胞免疫功能） ➢B细胞（执行体液免疫功能） ➢NK细胞（非特异性免疫作用）
靶细胞 51Cr
效应细胞
测量上清液中 释放的51Cr
洗 涤
去除游离
的51Cr
混合培养4-6小时
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(四) 体内试验
➢特异性抗原皮肤试验 ➢PHA皮肤试验
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二、B细胞功能检测
➢B细胞增殖能力的试验 ➢溶血空斑试验 ➢B细胞抗体形成功能的检测 ➢体内试验
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(一)B细胞增殖能力的试验
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一、T细胞功能的检测
➢T细胞增殖试验 ➢T细胞分泌功能测定 ➢T细胞介导的细胞毒试验 ➢体内试验
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（一）T淋巴细胞增殖试验
1. 原理：
淋巴细胞
刺激物
DNA合成
母细胞
精品ppt
分化
细胞变大
细胞浆扩大 空泡 核仁明显
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核染色质疏松
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞
淋巴母细胞 过渡型
PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞 特异性刺激物：
异种抗原
同种组织抗原
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3. 检测方法
形态法：刺激物 淋巴细胞（4-6天） 母细胞化 同位素法：PHA 淋巴细胞（54h）
DNA合成期 + 3HTdR掺入