15病毒感染的实验室诊断
乙肝的实验室诊断标准
乙肝的实验室诊断标准
乙肝的实验室诊断标准主要包括以下几个方面：
1. 乙肝病毒标志物的检测：如乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）、核心抗体（抗-HBc）等。
这些指标的阳性或阴性可以用来判断是否感染了乙肝病毒。
2. 肝功能检查：包括谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、胆红素等指标。
这些指标的异常可以反映肝脏的功能状况，有助于判断病情和治疗效果。
3. 乙肝病毒DNA检测：通过检测乙肝病毒DNA的含量，可以了解病毒复制的程度，有助于判断病情和制定治疗方案。
4. 肝脏病理学检查：对于一些病情较重或需要进一步了解肝脏病变情况的患者，可以进行肝脏病理学检查，通过观察肝脏的组织结构、炎症程度、纤维化程度等指标，对病情进行评估和诊断。
需要注意的是，不同的实验室诊断标准在不同的临床情况下可能有不同的意义和用途，医生会根据具体情况选择合适的检测方法，并结合临床表现和其他检查结果进行综合分析和诊断。
新冠病毒感染实验室检测—广州医科大学附属第一医院
• 新冠病毒感染概况 • 新冠病毒感染实验室检测方法 • 广州医科大学附属第一医院的新冠病
毒感染实验室检测实践 • 新冠病毒感染实验室检测的挑战与展
望
CHAPTER 01
新冠病毒感染概况
病毒特性
新型冠状病毒属于β属的冠状病毒，对紫外线和热敏感，56℃30分钟、 乙醚、75%乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活 病毒。
重症患者通常在发病1周后会出现呼吸 困难或低氧血症，严重者可快速发展为 急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难 以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障
碍等。
老年人和儿童的症状相对较轻，但也有 可能出现病情加重的情况。
CHAPTER 02
新冠病毒感染实验室检测方 法
核酸检测
总结词
核酸检测是检测新冠病毒的最常用和最准确的方法。
详细描述
影像学检查可以发现肺部感染、炎症、病变等异常情况，有助于诊断和评估病情。但需要注意的是， 影像学检查不能直接检测出新冠病毒，而是通过观察病变情况来判断是否可能由新冠病毒感染引起。
CHAPTER 03
广州医科大学附属第一医院 的新冠病毒感染实验室检测 实践
检测流程
采集样本
由专业医护人员采集疑似患者的咽拭子、 痰液等样本。
通过自动化检测设备的研发和应用，提高检测效率，缩短检测时间，满足大规模筛查和快速响应的需求。
优化检测流程
对检测流程进行优化，减少不必要的环节和操作，提高检测效率。
检测成本的降低
降低试剂成本
通过规模化生产和技术创新，降低检 测所需的试剂成本，使更多人能够接 受新冠病毒感染的实验室检测。
优化资源利用
(完整版)感染性疾病实验室诊断
对环境敏感的细菌应保温立即送检,其他所有采集后最好在2小时内送 检,不能及时送检,应注意保存
2. 必须注意安全防护,切勿污染环境 3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接
用抽取标本的注射器运送
二、 检验方法
查病原体：形态与结构检查 分离培养和鉴定
检测病原体成分（抗原和核酸） 检测患者血清中特异性抗体 代谢产物 （生化试验） 毒素：外毒素、内毒素
SARS冠状病毒 新甲型H1N1流感病毒 高致病性禽流感病毒
(二）按疾病特征分类 1. 病原体被清除 2. 隐性感染(covert infection)，亦称亚临床感染
一般占人群的90％或以上 3. 显性感染(overt infection)又称为临床感染
发病快慢和病程长短：急性感染和慢性感染 感染部位及性质：局部感染和全身感染 全身感染： ①菌血症 ②败血症 ③毒血症 ④脓毒血症
革兰阳性
革兰阴性
抗酸染色
培养在McCoy细胞的沙眼衣原体 吉姆萨染 色的McCoy细胞，含大衣原体包涵体，使 部分细胞核不清楚。（吉姆萨染色,放大
1000倍）
狂犬病毒可于细胞浆中 可形成嗜酸性包涵体
新生隐球菌 墨汁负染
假丝酵母菌（白色念珠菌）
革兰染色
2.不染色标本
1) 检查生活状态下细菌的动力及运动状况 2） 螺旋体由于不易着色并有形态特征
对某些病原菌作出初步鉴定，如霍乱弧菌
常用方法 压片法(压滴法)或悬滴法 暗视野显微镜或相差显微镜检查
体癣皮屑可见关节孢子
3. 直接电镜检测EM 免疫电镜技术IEM
HAV形态电镜图 粪便标本负染 X200000
HAV particles found in fecal extracts by immunoelectron microscopy
病毒病的常规实验室诊断
胞现象也可被特异性抗血清所抑制，故在病毒鉴定，特别是对
某些不产生细胞病变的病毒，常用红细胞吸附和吸附抑制试验 进行快速鉴定。
2.4 补体结合试验（CFT）
原理：CFT是根据任何抗原抗体复合物可激活、固定补体的特 性，用一定量的补体与致敏红细胞来检测抗原、抗体间有无特 异性结合的一类实验。 参与本实验的五种成分分为两个系统 ①待检系统：已知抗原（或抗体）和待检 抗体（或抗原细胞代谢的测定
病毒间的干扰现象
抗原的测定
电子显微镜观察
1.5 病毒感染力的测定—半数细胞培养物感染量 （TCID50)
Reed-Muench
内插法
Karber法
细胞病变孔：50%以上细胞发生病变才可算为细胞病变孔。
病毒种类 狂犬病病毒 接种途径 卵黄囊 ++ 绒毛尿囊膜 ++ 尿囊腔 养膜腔 脑内 +++ 病变 特征 鸡胚死亡 备注
流感病毒
新城疫病毒 痘病毒 蓝舍病病毒 传支 法氏囊 鹅细小
++++
++++ +++ +++ +++ ++ +++++ ++ ++++ ++++
2.9 单扩溶血试验
是在琼脂单扩散基础上发展起来的，又称为被动溶血技术，主要用于流感 病毒血凝素和神经氨酸酶抗体的测定。 吸附在红细胞表面上的抗原与同种抗体结合，再加上补体的作用，就会使 红细胞溶血，由于糠油抗体血清的稀释度与溶血圈直径或面积的大小成直 线关系，所以可对血清抗体进行定量测定。
临床医学检验主管技师-微生物学检验-5_真题-无答案(8)
临床医学检验主管技师-微生物学检验-5(总分50,考试时间90分钟)以下每一道考题下面有A、B、C、D、E五个备选答案。
请从中选择一个最佳答案。
1. 牛奶、某些酒类等常用巴氏消毒法，常用的方法是( )A．70.7℃，40～60秒B．71.70℃，15～30秒C．72.7℃，5～10秒D．73.7℃，2～5秒E．74.7℃，1～2秒2. 临床上采集胸水标本时，如果不能及时送检，为防止标本凝固，应在标本中加入何种物质( )A．1N NaOHB．20%HClC．4g/L柠檬酸钠D．0.9%NaClE．灭菌蒸馏水3. 血清中检HBsAg可见于( )A．急性乙型肝炎潜伏期或急性期B．HBsAg携带者C．慢性迁延型肝炎或慢性活动型肝炎D．肝炎后肝硬化或肝癌E．以上均可以4. 乙型肝炎患者血液中有种特有的抗原是( )A．HBcAgB．HBeAgC．HBsAgD．HBCIgE．HBCIgM5. 下列哪种方法是病毒感染的实验室检查中的“金标准”( )A．ELISAB．病毒分离培养C．免疫荧光D．PCRE．核酸分子杂交6. 95%的乙醇溶液为什么比70%～75%的乙醇溶液灭菌效果还差( )A．95%乙醇使菌体表面蛋白迅速变性凝固，妨碍乙醇再渗入B．迅速抑制表面的酶活性而内部酶没失活C．缺少一定比例水分抑制细胞壁合成能力差D．灭活能力差E．妨碍细菌代谢能力差7. 疱疹病毒一个很重要的特征是形成潜伏感染，此时在基因结构上发生了下列哪些变化( )A．疱疹病毒基因缺失B．疱疹病毒基因变异C．疱疹病毒基因杂交D．疱疹病毒基因重组E．疱疹病毒基因整合于细胞基因组内8. 霍乱弧菌经人工培养传代后，显微镜下观察是( )A．杆状B．球形C．椭圆形D．弧形E．纤丝状9. 在固体培养基上生长出现卷发状菌的细菌是( )A．炭疽芽胞杆菌B．肉毒梭菌C．脆弱杆菌D．棒状杆菌E．蜡样芽胞杆菌10. 朊病毒的主要成分是( )A．蛋白质B．壳膜C．包膜D．RNAE．DNA11. 出血热病毒属于下列哪一种基因类型的病毒( )A．负链RNAB．正链RNAC．分节段D．不分节段E．双链RNA12. 痰标本的预处理一般采用下列何种物质( )A．10NNaOHB．20%HClC．14g/L柠檬酸钠D．0.9%NaClE．40g/L NaOH13. 真菌人工培养的条件，正确的是( )A．培养基中必须含有非常丰富的营养物质B．最适pH9.0C．大部分真菌最适温度为25～28℃D．需5%～10%CO2环境E．培养时间为24小时14. 类病毒只是单链共价闭合的．RNA分子，没有外壳蛋白，依据如下哪一个特性可以判断其没有脂外膜( )A．耐酸B．耐碱C．耐腐蚀D．对有机溶剂有抵抗力E．对有RNA酶有抵抗力15. 亚病毒指如下哪种病原体( )A．RNA病毒B．DNA病毒C．包膜病毒D．类病毒E．衣原体16. 真空冻干技术能够保存菌毒种，其主要原理是通过什么手段保持不损伤菌体( )A．缓慢冷冻缓慢干燥B．迅速冷冻后干燥C．缓慢冷冻迅速干燥D．只要冷冻后干燥即可E．不经冷冻而干燥17. 下列何种微生物培养时会产生α溶血环现象( )A．淋病奈瑟菌B．肺炎链球菌C．军团菌D．肺炎支原体E．肺炎衣原体18. 感染志贺菌后，导致早期出现水样腹泻的志贺毒素的活性是( )A．神经毒性B．细胞毒性C．肠毒性D．以上都是E．以上都不是19. 速冻能保持微生物活力的原因( )A．菌体蛋白改变其性状B．菌体内水分形成结晶C．菌体内水分不形成结晶只形成玻璃状D．细胞壁保护E．原生质胶体受到干扰20. 狂犬病毒街毒株经过系列传代适应特定宿主后可称之为( )A．固定株B．野毒株或街毒株C．病毒原型D．减毒株E．强毒株21. 结核分枝杆菌痰抗酸染色阳性的最低浓度为( )A．2条/mlB．5条/mlC．10条/mlD．15条/mlE．20条/ml22. 牛肉膏汤是常用的培养基，它的特点是( )A．可培养需求较高的细菌B．可作有糖基的培养基C．可作无糖基的培养基D．培养要求苛刻的细菌E．可培养难以生长的细菌23. 世界卫生组织(WHO)对DHF/DSS的诊断限定了严格的标准，有4种主要的临床表现：高热、出血、肝肿大和循环衰竭。
传染病的诊断标准(2015)
人感染H7N9禽流感(2014版)
③实验室主要检查1）.血常规。白细胞总数一般不高 或降低。重症患者多有白细胞总数及淋巴细胞减少， 可有血小板降低。2）.血生化检查。多有肌酸激酶、 乳酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转 移酶升高，C反应蛋白升高，肌红蛋白可升高。3）. 病原学及相关检测。核酸检测阳性；甲型流感病毒抗 原检测阳性；病毒分离阳性动态检测急性期和恢复期 双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4倍或以 上升高。
2.2.3.1。 2.2.4.2 临床诊断病例：具备2.2.4.1＋2.2.2
中任何一项。 2.2.4.3 确诊病例：具备2.2.4.2＋2.2.3.2。
猩红热鉴别诊断
麻疹 病初有明显的上呼吸道卡他症状，第3～ 4病日出疹，疹型与猩红热不同，皮疹之间有 正常皮肤，面部发疹。颊内粘膜斑及白细胞计 数减少为重要区别。
流行性感冒的鉴别诊断
钩端螺旋体病：钩端螺旋体病(leptospirosis，简称钩体病)是由
各种不同型别的致病性钩端螺旋体(Leptospira，简称钩体)所引 起的一种急性全身性感染性疾病，属自然疫源性疾病。鼠类和猪 是两大主要传染源。临床特点为起病急骤，早期有高热、全身酸 痛、软弱无力、结膜充血、腓肠肌压痛、表浅淋巴结肿大等钩体 毒血症状;中期可伴有肺出血、肺弥漫性出血、心肌炎、溶血性 贫血、黄疸、全身出血倾向、肾炎、脑膜炎、呼吸功能衰竭、心 力衰竭等靶器官损害表现;晚期多数病例恢复，少数病例可出现 后发热、眼葡萄膜炎以及脑动脉闭塞性炎症等多与感染后的变态 反应有关的后发症。
病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断● 考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
一、病毒的基本性状（一）形态结构1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
2.结构（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象。
（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
朊粒个体微小，不含核酸，其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性，是引起传染性海绵状脑病的病原体。
朊粒致中枢神经系统退化性病变，引起牛海绵状脑病（疯牛病）。
克雅病（CJD）和Kuru病被认为与朊粒感染有关。
二、病毒的分类与命名科、属、种3级或科、亚科、属、种4级。
DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。
按传播途径可分为呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。
按感染部位与症状特征可分为肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。
感染性疾病的实验室诊断
感染性疾病的实验室诊断感染性疾病的实验室诊断介绍实验室检查可直接对微生物进行检测（如：肉眼观察、利用显微镜观察、病原体在培养基上生长）或者间接对微生物进行检测（如抗体检测）。
一般的检测手段包括·显微镜检查( 显微镜检查)·培养(培养)·免疫学试验（凝集反应试验如乳胶凝集试验、酶免疫测定、蛋白质印迹、沉淀试验、补体结合试验）免疫学试验·核酸为基础的鉴定方法( 以核酸为基础的鉴定方法)·非核酸鉴定方法( 以非核酸为基础的鉴定方法)培养通常是明确微生物的金标准，但是结果可能要在数天或数周后才能得到，并且不是所有的病原体都可以通过培养得到，因此可以选择其他有参考价值的试验。
当一种病原体得到培养及鉴定后，实验室就可以评估其对抗微生物药物的敏感性药敏试验。
有时也可以用分子生物学的方法来检测特定的耐药基因。
一些试验（如革兰染色，常规的需氧培养）可以检出多种病原体，并且通常在许多可疑的感染性疾病的诊断中被使用。
然而由于通过这些试验可能使得一些病原体被遗漏，因此临床医生必须知道对每种可疑病原体检测所用的每个试验的局限性。
当出现可能被遗漏的情况时，医生需要对怀疑的病原体进行特异性的检测（如特异染色或特异培养基）或建议实验室选择更多有针对性的试验进行检测。
显微镜检查显微镜检查速度快，但是准确性有赖于检测者的经验以及检测设备的质量。
除标准的实验室外，由于质控方面的不足常常限制了医生选择显微镜检查作为确诊的方法。
组织的显微镜检查可能需要区分病原微生物来自于侵袭性疾病或仅仅为表面定植－这种区分往往难以由培养来判别。
虽然有一些不能被染色的标本要通过水分固定来检出真菌、寄生虫（包括蠕虫的卵和幼虫）、阴道来源细胞和能动的微生物（如毛滴虫属）、梅毒螺旋体（通过暗视野显微镜），但是大多数标本用染剂处理后都能使病原体带有颜色，让它们在背景中突显出来。
为了提高真菌的可分辨度，可用10%氢氧化钾（KOH）溶解周围的组织和非真菌病原体。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
（2）细胞病变效应（cytopathic effect ，CPE）
• 病毒在细胞内增殖后，使宿主的形态发
生不同程度改变，这种由病毒增殖引起
的细胞形态变化，称为细胞病变效应。 • 细胞变圆、融合、肿胀、细胞空泡、核 浓缩、形成嗜酸性或嗜碱性包涵体等。
（5）红细胞吸附及吸附抑制试验
受感染的宿主细胞膜含 病毒抗原（血凝素），可吸附 鸡、豚鼠或猴红细胞 如果在培养瓶中加入相应 的血凝素抗血清，则不出现红 细胞吸附现象，即红细胞吸附 抑制试验阳性
（6）血凝及血凝抑制ห้องสมุดไป่ตู้验
含有血凝素的病毒能吸附一定种类的哺乳动物或禽类的
红细胞，使红细胞凝集。该现象可被相应的血凝素抗体抑制，
中和试验的必要条件： 1. 活病毒 2. 敏感细胞、鸡胚或动物
中和试验的常用方法：
• 固定V.，稀释血清，测定抗体效价 （常用） • 固定血清，稀释V.，求中和指数
中和试验的优缺点
• 特异，敏感，既可检测抗体，也可测定抗原（定属、定型）。 • 既可用细胞培养做，也可用动物或鸡胚接种，以细胞最常用。 • 检测IgG，不能用于早期诊断，常用用于流行病学调查。
小鼠脑内接种
用途
• 分离鉴定病毒，制备疫苗，制备抗血清
（三）病毒的鉴定
病毒的初步鉴定 • 动物感染范围及潜伏期 • 对鸡胚的敏感性 • 在细胞培养中的表现 • 理化性质的测定 最后鉴定 • 血清学鉴定: 中和试验、补体结合试验、血凝抑制 试验等 分离的新病毒，必须进行系统的鉴定
病毒在细胞培养中的表现
• 某些病毒感染细胞后不出现CPE
（3）空斑现象
• 空斑（plaque）是指在单层细胞中，由活细胞包围的由
病毒感染引起的死细胞的区域。一个空斑由一个病毒颗粒 感染 所致，利用空斑可纯化病毒。
• 不同种类病毒形成 的空斑大小和形状不同，可用于鉴定
病毒。
（4） 干扰现象
当两种不同的病毒同时或先后感染同一细胞时，其中一种 病毒可抑制另一种病毒的增殖，称为病毒的干扰现象。
病毒感染的实验室诊断
病毒感染的实验诊断方法
病原学诊断
病毒分离培养 显微镜检查 抗原检测 核酸检测
血清学诊断
抗体检测 IgM、IgG
一、标本采集与运送
（一）标本采集 采集时间：尽早采集（越早越好） 标本种类：根据感染的部位、可能感染的病毒类型选择
（二）标本的运送与保存
1.低温送检
称为血凝抑制试验，可用于分型。
病毒的理化性质测定
主要用于新发现病毒的鉴定 （1）病毒的大小及形态 （2）核酸类型 5-溴-2-脱氧尿苷（BUDR）能抑制DNA复制，而不抑 制RNA病毒。 （3）乙醚敏感试验 有包膜病毒对乙醚敏感，经乙醚作用后，失去感染性 （4）耐酸试验 电镜直接观察
肠道病毒耐酸，在pH3的环境下稳定，鼻病毒不耐酸， 在pH3的环境下被灭活
绒毛尿囊膜接种
绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤
常用动物 小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。不同病对 动物的敏感性不同，根据病毒种类加以选择。 接种途径 按病毒侵袭部位选择相应的接种途径：
3. 动物接种
• • • •
乙型脑炎病毒及狂犬病毒 柯萨奇病毒 乳鼠腹腔接种 乙肝病毒 流感病毒 黑猩猩静脉注射 鼻腔滴种
• 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 • 抑制真菌生长 2.5μ g/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉菌素
二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒分离和鉴定的一般程序
标本采集 标本处理后接种
动物接种 观察发病 抗原检测 抗体检测 病理检查
组织培养 CPE EM
包涵体 空斑试验 红细胞吸附 中和试验
鸡胚接种 卵黄囊膜 尿囊液 羊膜腔液 绒毛尿囊膜 观察囊膜病变 血凝试验 血凝抑制试验
（二）病毒的分离
• 组织培养 • 鸡胚培养 • 动物接种
1.组织培养
将人或动物离体的活组织或分散的活细胞在体外人工控制的 条件下使其生长繁殖的一种技术。 组织培养的类型 （1）组织块培养 （2）器官培养 毒 人胚气管－呼吸道病毒；人胚肠－肠道病
• 4℃可保存数小时 • -70℃可长期保存 • -10 ～ -20℃下病毒易灭活，不可用于保存病毒标本 • 对冷冻标本应避免反复冻融
2.保湿送检
• 50%甘油盐水保存送检 • 病毒转运培养基（virus transport medium ，VTM）含0.5%明 胶或牛血清白蛋白的Hank’s液
3.无菌送检
（二）补体结合试验
• 检测IgM，常用于早期诊断。 • 不需活细胞，比中和试验简单，省时。
（三）IF及ELISA
• 方法简单、快速、敏感性高。
四、病毒感染的快速诊断
（一）病毒的形态学检查
1.光学显微镜检查 病变组织中找包涵体。 简便、快速，但敏感性低，有些病毒感染细胞后不形 成包涵体
狂犬病毒胞浆内包 涵体（内基小提）
快速。适用于多种病毒性疾病的早期快速诊断。
Influenzavirus A培养 物DFA染色阳性
Influenzavirus B培养 DFA染色阳性
生殖道HSV-2涂片 DFA染色阳性
（三）病毒核酸检测
多种分子生物学方法。检测以不同形式存在的病毒基因片 断。敏感、特异、简便、快速，标本用量少。
• • • •
巨细胞病毒胞核内 包涵体
2. 电镜及免疫电镜检查
直接检查标本中的病毒颗粒，快速，
可确诊。但敏感性低（＞106/ml）
免疫电镜敏感性高，但只能用于已知 病毒的检测）
乙型肝炎病毒电镜图
轮状病毒电镜图
（二）病毒抗原检查
用免疫标记技术检测： DFA、IFA、IEA等
可检测细胞内、外的游离病毒抗原。敏感、特异，简便、
• 传代细胞系 来源于肿瘤细胞或突变的二倍体细胞，能在 体外无限增殖。增殖快，不易衰老，易于传代保存。常用 于病毒的分离鉴定，但不能用于制备疫苗。
2. 鸡胚培养
常用于粘病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养 接种途径及方法 新鲜受精卵
38～39℃ 7～13d
卵黄囊接种 羊膜腔接种 接种病毒 尿囊腔接种
病毒的血清学鉴定
• 中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验等
三、病毒的血清学诊断
单份血清IgM测定 早期诊断
双份血清IgG测定 4倍以上增长，有诊断意义
病毒血清学试验常用方法
（一）中和试验
原理 抗体与相应病毒结合后，能够使病毒失去感染性。 V.＋Ab → 失去感染易感细胞的能力
一定量抗体可中和一定量病毒。
（3）细胞培养 最常用
– 原代和次代细胞培养 – 二倍体细胞培养 – 传代细胞培养
原代和次代培养细胞
动物新鲜组织（人胚肾等）→胰酶消化→营养液培养→ 单层细胞（原代细胞） 原代细胞→胰酶消化→转种培养（次代培养细胞） 对病毒敏感，但制备费时费力，只能传2～3代。
• 二倍体细胞株 原代细胞反复传代（50～70代）仍保持二 倍体染色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。
核酸电泳技术 核酸杂交技术
PCR
基因芯片技术
（四）早期抗体检测
检测特异性IgM。
IFA检测血清SARS-CoV IgM抗体阳性