病毒感染的实验室.
pcr实验室建设要求
pcr实验室建设要求
PCR实验室，又称为临床基因扩增实验室，是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的实验室。
在建设上，需要遵循以下规范：
1. 实验室布局应合理、紧凑，符合实际使用需求。
为避免交叉污染，各区域之间应相互独立。
此外，根据《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》的要求，PCR实验室一般由试剂储备区、标本制备区、扩增区、扩增分析区4个区域组成。
2. 实验室设备的选择十分关键，应优先考虑高品质、高可靠性的品牌和型号，且满足实际使用需求。
3. 考虑到实验室的安全性，建筑结构应稳固，能够承受可能的振动和冲击。
同时，材料选择上，应使用不燃或难燃的材料，并符合相应的防火和防爆要求。
4. 对于实验室的装修，耐腐蚀、易清洁的材料如瓷砖、玻璃等更为合适。
5. 除了上述要素，还需要考虑到环境安全，例如通过独立区域设计和压差控制等方式来保证实验室的安全独立性。
综上所述，PCR实验室的建设不仅需要考虑功能性和实用性，还需兼顾安全和舒适性。
在实际建设过程中，还需要根据具体需求和规范进行细致的规划和设计。
EB病毒感染儿童的临床特征与实验室检查结果分析
EB病毒感染儿童的临床特征与实验室检查结果分析EB病毒是一种常见的病毒，会引起多种疾病，包括传染性单核细胞增多症（IM）和其他一些病毒性疾病，这种病毒在儿童中特别常见。
对于EB病毒感染的儿童，应该综合考虑临床表现和实验室检查结果。
临床表现EB病毒感染的儿童，最常见的表现是喉部痛、发热、全身不适和疲乏，这些症状通常会在一到两周内消失。
另外，也可能会出现扁桃体肿大、喉咙红肿和淋巴结肿大等症状。
在病程中，也有少数病人会出现皮疹、腹痛、呕吐、头痛、肝脾肿大等表现。
在EB病毒感染的过程中，还可能会出现IM，这是一种由EB病毒引起的疾病。
IM的表现类似于喉部炎，但是病程较长，通常持续数周或数月。
IM的表现包括：1. 喉部疼痛2. 高热3. 口干4. 咳嗽5. 扁桃体肿大6. 淋巴结肿大7. 疲倦无力IM的严重程度因个体差异而异，但通常不会危及生命。
在免疫系统出现问题的患者中，IM有时也会出现较为严重的表现，如肝炎、贫血、多发神经炎和血小板减少等。
实验室检查在EB病毒感染的确认诊断中，实验室检查是必不可少的。
目前，PCR检测是最常用的EB病毒检测方法。
PCR检测试剂箱包含了由EB病毒DNA序列特异性引物和探针组成的反应体系，可以快速识别出EB病毒。
此外，PCR还可以用于鉴定EB病毒的血清型别，并确定EB病毒的基因型。
EB病毒感染的典型实验室检查是检测血液中单核细胞数量的变化。
开始时，EB病毒感染的儿童会出现了单核细胞的数量增加，该现象被称为“单核细胞增多”。
该症状在感染的早期阶段出现，并在几周内逐渐消失。
此外，EB病毒感染还可能会引起肝脾肿大，因此在实验室检查中需要注意检查肝功能和血小板计数。
总之，EB病毒感染的儿童在诊断和治疗中需要仔细观察临床表现和实验室检查结果，以确定疾病的类型和严重程度，并及时治疗，以减轻症状并预防并发症的发生。
新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第二版)
附件4新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南（第二版）为指导各级疾控部门和其他相关机构开展新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测工作，特制定本技术指南。
本指南主要介绍目前已经比较成熟、易于实施的核酸检测方法。
一、标本采集（一）采集对象。
新型冠状病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者，其他需要进行新型冠状病毒感染诊断或鉴别诊断者，或其他需要进一步筛查检测的环境或生物材料（如溯源分析）。
(二)标本采集要求。
1.从事新型冠状病毒检测标本采集的技术人员应经过生物安全培训（培训合格）和具备相应的实验技能。
采样人员专业防护装备（personal protective equipment，PPE）要求：N95口罩、护目镜、防护服、乳胶手套、防水靴套；如果接触患者血液、体液、分泌物或排泄物时，戴双层乳胶手套。
2.住院病例的标本由所在医院医护人员在当地疾控机构专业人员指导下采集。
3．密切接触者标本由当地疾控机构负责采集。
4．根据实验室检测工作的需要，可结合病程多次采样。
（三）标本采集种类。
每个病例必须采集急性期呼吸道标本和急性期血液标本；重症病例优先采集下呼吸道标本（如支气管或肺泡灌洗液等），可根据临床表现与采样时间间隔进行采集。
其他研究材料依据设计需求采集。
标本种类：1．上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物。
2．下呼吸道标本：包括深咳痰液、呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、肺组织活检标本。
3．血液标本：尽量釆集发病后7天内的急性期抗凝血。
采集量5ml，以空腹血为佳，建议使用含有抗凝剂的真空釆血管采集血液。
4.血清标本：尽量釆集急性期、恢复期双份血清。
第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）釆集，第二份血清应在发病后第3～4周釆集。
采集量5ml，以空腹血为佳，建议使用真空釆血管。
（四）标本采集方法。
1．咽拭子：用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。
艾滋病实验室安全制度
艾滋病实验室安全制度艾滋病（艾滋病毒感染与免疫缺陷综合征）是当前全球范围内的重大公共卫生问题，其研究对于防治艾滋病具有重要意义。
然而，艾滋病实验室的操作涉及高度危险的病原体，因此，建立严格的实验室安全制度是至关重要的。
本文将介绍一套有效的艾滋病实验室安全制度，以确保实验室的安全性和研究人员的健康。
一、实验室准入管理1. 实验室准入审批：任何进入艾滋病实验室工作的人员必须严格按照规定程序进行准入审批。
包括身体健康检查、培训考核和签订安全承诺书等环节。
2. 实验室准入培训：新进人员必须接受系统的实验室准入培训，包括病毒性疾病的基本知识、安全操作规程、事故应急处理等内容，确保其具备必要的安全意识和技能。
二、实验室操作规范1. 个人防护措施：所有进入实验室的人员必须佩戴个人防护设施，包括实验服、手套、口罩和护目镜。
在操作过程中，要注意防止任何可能导致病毒扩散的行为，如吃喝、抽烟和触摸脸部等。
2. 样品处置：艾滋病实验室的样本物质必须按照指定程序进行处置，不能随意流入环境中，以防止潜在的传染风险。
所有样品都必须储存于专用容器中，并进行严格标识和分类。
3. 操作区域清洁：实验室操作区域要保持整洁干净，经常进行清洁消毒。
用过的实验器材和试剂要及时清理和归置，避免交叉污染和安全隐患。
三、生物安全级别1. 生物安全级别划分：艾滋病实验室按照相关规定划分为不同的生物安全级别（BSL），根据实验所涉及的危险性程度和实验室安全设施的完备性来确定。
2. 设施与设备：艾滋病实验室的安全设施和设备必须符合相应的生物安全级别要求，包括实验室结构、通风系统、排水系统等。
并要定期检查和维护，确保其正常运行。
四、事故应急处理1. 应急预案：艾滋病实验室必须制定详细的事故应急预案，包括事故报告和处理流程、紧急疏散预案、事故样本隔离和销毁等内容，以保障实验室人员和周围环境的安全。
2. 应急演练：定期组织艾滋病实验室的应急演练，以检验应急预案的有效性和实施情况是否符合要求，并及时改进完善。
微生物实验室的分类及要求
▪ 二、设施和设备要求： ▪ 1.实验室应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计
和设施。
▪ 2.实验室的墙壁、天花板和地面应平整、不渗水、 易清洁并耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑， 不得铺设地毯。
▪ 3.实验台面能防水、耐腐蚀、耐热。实验台和橱柜 应牢固稳定，彼此之间保持一定距离，以便于清洁。
这类微生物通常对个体危害中等，群体危害程序较 轻，一般不会导致人和动物死亡，但也存在个例。
第3类病原微生物是最为常见的导致食品中毒的危 害微生物，也是食品实验室重点检测的目标，这类 微生物包括：沙门氏菌、单增李氏菌、空肠弯曲杆 菌、布鲁氏杆菌、葡萄球菌等。
第4类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人 类或者动物疾病的微生物。
微生物实验室的分类及要求
大家好
1
一、微生物实验室的生物安全等级
我国在《病原微生物实验室生物安全管理条例》第七条 中根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害 程度，将病原微生物分为4类：
第1类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾 病，对个体、群体危害严重，无有效的疫苗防治的微生物： 如霍乱、鼠疫、埃博拉病毒等。
BSL-1
BSL-1
▪ 2.细菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次体、螺 旋体、真菌类实验室：
实验活动所需生物安全实验室级别
病原微生物危害程度 大量活菌操 样本检测 非感染性材料的操作
作
第二级
—— BSL-2
BSL-1
第三级
BSL-要求
▪ 一、选址布局：
二、微生物实验室的分类
1.病毒类实验室
实验活动所需生物安全实验室级别
病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断● 考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
一、病毒的基本性状（一）形态结构1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
2.结构（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象。
（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
朊粒个体微小，不含核酸，其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性，是引起传染性海绵状脑病的病原体。
朊粒致中枢神经系统退化性病变，引起牛海绵状脑病（疯牛病）。
克雅病（CJD）和Kuru病被认为与朊粒感染有关。
二、病毒的分类与命名科、属、种3级或科、亚科、属、种4级。
DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。
按传播途径可分为呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。
按感染部位与症状特征可分为肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。
生物安全事故经典案例
生物安全事故经典案例一、实验室感染事件1. 前苏联的斯维尔德洛夫斯克炭疽泄漏事件哇，这可是非常严重的一个生物安全事故呢。
在1979年，前苏联的斯维尔德洛夫斯克的一个军事微生物实验室发生了炭疽杆菌泄漏。
当时呀，实验室的工作人员没有按照严格的操作流程来处理炭疽杆菌。
结果呢，炭疽杆菌就泄漏到了周围的环境当中。
这个城市的很多居民就开始生病，出现了炭疽病的症状，像发热、呼吸困难、皮肤溃烂等。
据统计，有很多人因此丧生，给这个城市带来了巨大的灾难。
这就告诉我们呀，在实验室里处理危险的生物制剂时，一定要严格遵守操作规程，一点都不能马虎呢。
2. 新加坡实验室SARS病毒感染事件2003年到2004年期间，新加坡的一个实验室发生了SARS病毒感染事件。
当时的实验室研究人员在进行SARS病毒相关研究的时候，可能是防护措施没有做到位吧。
有研究人员感染了SARS病毒，而且还把病毒传播了出去。
这可不得了呀，SARS病毒的传染性很强的。
这一事件让人们又一次认识到生物实验室的安全管理是多么的重要。
实验室里的每一个环节，从样本的采集、储存到实验操作，再到废弃物的处理，都必须严格把控，不然就可能引发严重的生物安全事故。
二、动物传播引发的生物安全事故1. 欧洲的疯牛病事件欧洲曾经发生的疯牛病事件也是生物安全事故的典型呢。
这是因为牛吃了含有朊病毒的饲料而引发的。
这些饲料是用动物的肉骨粉制成的，而这些肉骨粉可能来自于感染了朊病毒的动物。
疯牛病一旦爆发，那些牛就变得行为异常，走路不稳，最后死亡。
而且呀，这种病还能传染给人类，导致人类患上克雅氏病。
这可把欧洲的畜牧业和民众的健康都搞得一团糟。
这件事就提醒我们在动物养殖方面，饲料的来源一定要严格把关，不能使用有潜在危险的饲料，同时对于动物疾病的监测也要加强呢。
2. 非洲猪瘟的传播非洲猪瘟在很多国家都造成了严重的影响。
它主要是通过接触感染的猪、猪肉制品以及被污染的环境等途径传播。
一旦一个猪场感染了非洲猪瘟，猪就会出现高热、皮肤发红、呼吸困难等症状，死亡率很高。
艾滋病实验室操作注意事项
艾滋病实验室操作注意事项艾滋病是一种由艾滋病病毒（HIV）引起的免疫系统缺陷病毒感染，因此在艾滋病实验室进行操作时需要采取一系列的注意事项来确保实验室人员的安全，避免病毒泄漏和感染。
下面将详细介绍艾滋病实验室操作的注意事项。
1. 实验室准备：- 实验室必须具备良好的通风系统，确保空气流通并排出潜在的污染物。
- 实验室人员应受过良好的培训，了解实验室流程、应急措施和最新的安全操作规程。
- 实验室必须设备完整，包括个人防护设备、事故处理设备和紧急漏洞封堵设备等。
- 实验室必须保持整洁，定期清理、消毒工作台和仪器设备，以减少污染传播的风险。
2. 人员防护：- 所有实验室人员必须穿戴个人防护设备，包括实验服、安全手套、防护眼镜和口罩。
这些设备必须在操作前进行检查，确保完好无损。
- 实验室人员在操作过程中应保持复检手套的完整性，避免被尖锐物品刺伤并接触到可能被污染的血液或体液。
- 实验室人员应注意洗手卫生，在操作前后充分清洗双手，并佩戴适当的防护手套。
- 实验室应设有适应艾滋病危险等级的安全柜，确保安全处理实验样本和废弃物。
3. 废弃物处理：- 所有与艾滋病样本接触过的材料和废弃物应在遵守严格的操作规程下进行处理和处理。
这些废弃物必须经过消毒、包装并用防护袋密封，然后送交特殊废物处置设施。
- 废弃物处置过程中必须佩戴个人防护设备，避免接触被污染的材料和废弃物。
4. 样本处理：- 接触血液和其他体液的实验室人员必须采取严格的标本处理措施。
确保标本容器密封良好，避免泄漏。
在打开或关闭容器时要小心，以免被划伤或被污染物溅及。
- 实验室人员应遵循正确的标本处理程序，包括在处理前对标本进行有效的消毒和灭活，以减少病毒传播的风险。
5. 实验室安全：- 实验室应做好安全管理工作，规定艾滋病实验室操作的标准操作程序，并定期进行培训和复习。
- 实验室应备有紧急漏洞封堵设备和事故处理设备，以便应对可能的泄漏或事故情况。
- 禁止食品、饮料和个人物品进入实验室，以防止交叉感染和污染。
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病毒感染的实验室 诊断技术
主
要 内
容
第一节 标本的采集、处理与运送 第二节 病毒形态学检查
第三节 病毒的分离与鉴定
第四节 病毒的血清学检测
第五节 病毒的分子生物学检测
第六节 病毒感染的快速诊断
THE2END
第一节 标本的采集、处理与运送
一、标本的采集、处理
（一）采集样本的时间
在发病初期（急性期）采取较易检出病毒，越迟阳性率越低。
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二、病毒大小的测定
（一）电子显微镜直接测量 （二）超过滤法 （三）超速离心法
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第三节
病毒的分离与鉴定
一、病毒分离和鉴定的一般程序
临床标本的收集 标本处理后接种 新生小鼠 观察发病 红 细 胞 吸 附 组织 鸡胚
空 斑 试 验
包 涵 体
收获尿囊液、 羊膜腔液 红细胞凝集试验
CPE
EM
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二、病毒的分离与鉴定
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三、凝胶电泳技术
（一）基本原理
（二）常用方法
1．琼脂糖凝胶电泳 2．聚丙烯酰胺凝胶电泳
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第6节 病毒感染的快速诊断
一、形态学检查
二、病毒抗原的检测 （一）免疫荧光技术
（二）固相放射免疫测定
（三）酶免疫技术 （四）其他技术 三、早期抗体检测 四、病毒核酸检测
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（三）常用技术
巢式（nested）和半巢式（hemi-nested）PCR、原位PCR（site
PCR）、逆转录PCR（revere transcriptive PCR, RT-PCR） 、多重PCR （multiple PCR）、RNA捕获PCR(RNA captured PCR)、免疫PCR
（immune PCR）、定量PCR（ration PCR）
5．分支DNA（branched DNA, bDNA）技术
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二、聚合酶链反应
（一）基本原理 （二）主要步骤
1.模板的制备
（polymerase chain reaction, PCR）
2.反应体系的组成：缓冲液、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶、模板 3．扩增： 变性→复性 →延伸 4．产物分析
2．50%感染量或50%组织感染量（ID50或TCID50）测定
（三）新分离病毒的鉴定
1．病毒核酸类型的测定 2．理化性状的检测：大小及结构、衣壳对称类型、有无包膜等 3．血清学鉴定
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第四节
病毒的血清学检测
一、中和试验
（一）原理 （二）用途
二、补体结合试验
（一）原理 （二）用途
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三、血凝及血凝抑制试验
1．血液标本 2．粪便标本 3．鼻、咽拭子标本 4．尿标本 5．疱疹液 6．脑脊液 7．组织标本
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二、标本的运送和保存
病毒的抵抗力通常较弱，在室温下很快灭活，标本采集后应 立即送到病毒实验室，如实验室距离较远或一时无法立即传送时，
应将标本放入装有冰块的冰壶内尽快送检。
大多数病毒对甘油有抵抗力，送检的组织、粪便标本等可置 于含抗生素的50%甘油缓冲盐水中，低温下保存送检。
（二）标本种类的选择
1.呼吸道感染 2.肠道感染 3.中枢神经系统感染 4.其他感染
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（三）常见标本的采集方法和用途
1．血液
7．脑脊液标本 8．眼拭子标本
2．粪便标本
3．尿道拭子及尿液标本 4．鼻拭子和咽拭子0．疱疹液标本
11．各种活检和尸检标本
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（四）标本的处理
（一）病毒分离培养
1．动物接种 2．鸡胚培养
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3．组织培养
（1）原代和次代细胞培养 （2）二倍体细胞培养
（3）传代细胞培养
（4）病毒在培养细胞中增殖的指标 1）细胞病变 2）红细胞吸附（hemadsorption） 3）干扰现象
4）细胞代谢的改变
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（二）病毒的数量与感染性测定
1．蚀斑（plaque）测定 蚀斑形成单位（plaque forming unit, PFU）
（一）原理
（二）用途
四、凝胶免疫扩散试验
（一）原理
（二）用途
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第五节
病毒的分子生物学检测
一、分子杂交技术
（一）基本原理 （二）主要步骤
样品处理、探针的制备 、预杂交 、杂交 、漂洗、检测
（三）常用的杂交方法
1．斑点杂交(spot b1ot hybridization)
2．固相杂交技术
3．原位分子杂交（in site hybridization） 4．Southern印迹和 Northern印迹法
最好在标本采取后1~2h内送到实验室，立即进行检查或分离
培养。暂时不能检查或分离培养时，应将标本放入冻存液并加入 甘油或二甲基亚砜（DMSO）以防止反复冻溶使病毒灭活，存放 在-70℃低温冰箱内保存。
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第二节 病毒形态学检查
一、形态学检查
（一）光学显微镜
（二）电子显微镜检查法
1、电镜直接检查法 2、免疫电镜检查法 （三）X线晶体衍射法