药物分析-芳胺类药物鉴别
芳香胺类药物分析-精品文档
芳伯氨基——有重氮化-偶合反应 酯键——易水解 侧链烃胺——具碱性
代表性药物
H N 2 C O O C H C H N ( C H ) 2 2 2 5 2 H C l 盐酸普鲁卡因
Procaine hydrochloride
H N 2
C O O C H 2 5
苯佐卡因
benzocaine
C 2H 5 C 2H 5
C 2H 5 C 2H 5
N C O C H 2N CH3
与其他有关药物的
区别
在同样条件下，盐酸普鲁卡因、丁卡
因、苯佐卡因等不显Cu2+反应。
对氨基苯甲酸酯类药物在同样条件下
与Hg2+反应显红色或橙黄色（盐酸利 多卡因显黄色）。
羟肟酸铁盐反应
盐酸普鲁卡因胺具芳酰胺结构，可被H2O2 氧化，生成羟肟酸，再与FeCl3反应生成 羟肟酸铁而显紫红色→暗棕色至棕黑色。
羟肟酸铁
4. 水解产物反应
具有酯键结构的药物易在碱性溶液中 水解，可利用其水解产物进行鉴别。 苯佐卡因
NH2 + COOC2H5 NaOH NH2 + C2H5OH COONa
C2H5OH + I2 + NaOH
CHI3
黄色
盐酸普鲁卡因
N H 2 N a O H N H 2
白色
C O O C H C H N ( C H ) 2 2 2 5 2
铜反应生成蓝紫色配位化合物，转溶 入氯仿，显黄色。
盐酸利多卡因在酸性溶液中与氯化钴
反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。
盐酸利多卡因在硝酸性溶液中与硝酸
汞反应，显黄色。
CH3
C 2H 5 + C 2H 5 CuSO4
芳胺类药物分析
第六章 芳胺类药物分析练习思考题1.根据胺类药物的结构，可把该类药物分为几类？各类药物的结构特征是什么？2.试述重氮化反应原理及影响重氮化反应的主要因素。
3.用亚硝酸钠法测定芳胺类药物时，为什么要加溴化钾？解析其作用原理。
4.亚硝酸钠滴定法中为什么要加过量盐酸？5.重氮化法指示终点的方法有哪些？6.试述永停滴定法指示终点的原理。
7.具有怎样结构的药物有重氮化-偶合反应？8.如何用化学方法区别普鲁卡因和丁卡因？9.苯乙胺类药物具有怎样的结构和理化性质？10.对乙酰氨基酚中对氨基酚是如何产生的？中国药典采用什么方法检查？11.盐酸丁卡因和盐酸利多卡因的含量测定为什么不用亚硝酸钠法？12.紫外分光光度法测定药物含量的方法主要有哪两种？各有何优缺点？13.怎样检查肾上腺素中的酮体杂质？14.有三瓶药物，它们是对乙酰氨基酚、肾上腺素和盐酸苯海拉明，因标签掉了，请区别之。
15.试述溴量法测定盐酸去氧肾上腺素的原理，滴定当量和含量计算。
16.什么叫阴离子表面活性剂滴定法？17.解释盐酸普鲁卡因水解产物反应鉴别原理。
P测定对乙酰氨基酚的含量：取本品120mg置500mL量瓶中，加甲醇100mL溶解，加水至刻度，取此液5mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，作为供试液。
另用相同溶剂配成12μg/mL的标准溶液，于244nm处，以水为空白测定吸收度，按10C（A样/A标）计算供试品中对乙酰氨基酚的含量（mg）。
式中C为标准液浓度（μg/mL），10是如何得来的？19.非水碱量法测定重酒石酸去甲肾上腺素含量，测定时室温20℃。
精密称取本品0.2160g，加冰醋酸10mL溶解后，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝绿色，并将滴定结果用空白试验校正。
已知：高氯酸滴定液（0.1mol/L）的F=1.027（23℃），冰醋酸体积膨胀系数为1.1×10-3/℃，每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于31.93mg的C8H11N3O·C4H4O6，样品消耗高氯酸滴定液体积为6.50 mL，空白消耗0.02mL。
药物分析笔记：胺类药物的分析
药物分析笔记：胺类药物的分析芳胺类药物的分析1、基本结构与化学性质：（一）盐酸普鲁卡因：1、芳伯氨基特征：重氮化偶合反应2、酯键易水解：光、热、碱，3、产物为对氨基苯甲酸（paba）。
4、游离碱难溶水且碱性弱：非水滴定法，5、亚硝酸钠法测定含量。
（二）对乙酰氨基酚：1、水解产物呈芳伯氨基特性：酸性中易水解2、水解产物易酯化：水解后产生醋酸3、与三氯化铁呈色：紫外、红外、均可2、鉴别试验：1、重氮化偶合反应：盐酸普鲁卡因、对乙酰氨基酚（水解成对氨基酚）2、三氯化铁反应：对乙酰氨基酚水液加三氯化铁显蓝紫色。
3、水解产物的反应：4、红外吸收光谱3、对乙酰氨基酚的杂质检查：1、乙醇溶液的澄清度与颜色：检查中间体对氨基酚的有色氧化产物。
2、有关物质：药典用薄层色谱法检查对氯乙酰苯胺。
3、对氨基酚：中间体或水解产物，4、毒性大。
有芳胺反应，而5、对乙酰氨基酚没有。
4、盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查：药典规定检查水解产物对氨基苯甲酸小于1.2%.5、含量测定：（一）亚硝酸钠滴定法：有芳伯氨基的药物（普）以及水解后有芳伯氨基的药物（对）均可测定。
测定条件：1、加入溴化钾（2g）：加速反应。
2、加入强酸加速反应：反应加快、重氮盐酸性中稳定、防偶氮氨基化合物生成。
3、室温10——30 c 温度太高，亚硝酸逸出4、滴定管尖端插入液面下滴定：避免滴定过程中亚硝酸挥发和分解。
（二）紫外分分光度法：对乙酰氨基酚苯乙胺类药物的分析1、基本结构与典型药物：肾上腺素2、鉴别试验：1、三氯化铁反应：2、氧化反应：盐酸异丙肾上腺素偏酸性下与碘迅速氧化。
3、甲醛——硫酸反应：4、紫外特征吸收与红外吸收谱：3、酮体检查：四种都需检查酮体，4、酮体在310nm处有吸收，5、小于0.06% .6、含量测定：（一）非水溶液滴定法：冰醋酸为溶剂，醋酸汞消除氢卤酸干扰，结晶紫指示终点。
三种（6）溴量法：盐酸去氧肾上腺素及注射液用此法。
要点：防游离溴及碘逸出，溴过量2%，空白试验。
第7章 芳胺及芳烃胺类药物的分析
37
H+ Ar − NHCOR + H 2O → Ar − NH2 + RCOOH
∆
Ar − NO 2 + 6[ H ] Zn + → Ar − NH 2 + 2 H 2 O HCl
Ar − NH2 + NaNO2 + 2HCl → [Ar − N 2 ]Cl + NaCl + 2H 2O
A r
N 2 H
H Cl N O aN 2
O H β− 酚 萘
重 盐 氮
橙 ～ 红 黄 猩 色
11
直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、 直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、 盐酸普 鲁卡因胺 间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜 间接反应：对乙酰氨基酚、 利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发 生此反应。 生此反应。
H 利多卡因 + CoCl 2 → 细小的亮绿色 ↓
17
+
CH3
+ Cu
CH 3 2 NHCOCH 2H5)2 2N(C CH 3
2+
NCOCH 2N(C 2H5)2 CH3 Cu CH3
(C 2H5)2NCH 2CON CH3 蓝紫色
+Co2+
CH3
CH3
NCOCHN(C H5)2 (C2H5)2NCHCON 2 2 2 CH3 Co 亮绿色
18
CH3
（3）羟肟酸铁的反应
具有芳酰胺结构，被H2O2氧化成羟肟酸，羟肟酸与 FeCl3反应生成紫红色羟肟酸铁，随即变为暗棕色至棕 黑色。如盐酸普鲁卡因胺。
NH2 H2O2 NH2 FeCl3 NH2 Fe
CONHCH2CH2N(C2H5)2
芳香胺类药物分析
HCl
盐酸利多卡因
CH3 NHCO CH3
C4H9 N HCl
盐酸布比卡因
一、结构与性质
（一） 具有芳伯氨基或潜在的芳 伯氨基，可用重氮化—偶合反应鉴 别或亚硝酸钠滴定法测定含量。 （二） 酯键或酰胺键易水解
（三）具脂烃胺侧链，弱碱性， 可与生物碱沉淀试剂发生沉淀 反应进行鉴别或非水碱量法测 定含量。
2. 硫氰酸盐衍生物
盐酸丁卡因 Ch.P（2005） （ ） 鉴别】 【鉴别】 （1）取本品约 ）取本品约0.1g，加5% ， 醋酸钠溶液10ml溶解后 ， 加 25%硫氰 溶解后， 醋酸钠溶液 溶解后 硫氰 酸铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤过， 酸铵溶液 ，即析出白色结晶；滤过， 结晶用水洗涤， 结晶用水洗涤 ， 在 80℃ 干燥 ， 依法测 ℃ 干燥， 附录Ⅵ ） 熔点约为131℃。 定（附录ⅥC），熔点约为 ℃
N N Cl + H2N
+
-
N N NH
+ HCl
（3）室温条件下滴定 ）
10～30℃ ～ ℃
（4）滴定速度：先快后慢 ）滴定速度： 滴定管尖端插入液面下2/3处 滴定管尖端插入液面下 处， 滴定液一次大部分放下， 滴定液一次大部分放下，近终点 时方改为慢速滴定
3. 指示终点的方法 （1）永停滴定法 ） Ch.P（2005） BP（2004） Ch.P（2005）、BP（2004）
HNO3 + 3 2 −
2. 氧化还原反应
Cl + MnO2 →Cl2 使湿润的淀粉碘化钾试纸显蓝色
− H2SO4、∆
（六）制备衍生物测熔点
1．三硝基苯酚衍生物 ．
Ch.P（2005） 盐酸利多卡因 （ ） 鉴别】 取本品0.2g，加水 溶解。 【鉴别】 取本品 ，加水20ml溶解。 溶解 （ 1 ） 取 溶 液 10ml ， 加 三 硝 基 苯 酚 试 液 10ml，即生成沉淀 ； 滤过 ，沉淀用水洗涤 ， 即生成沉淀；滤过， 干燥， 依法测定（ 附录Ⅵ ） 后 ， 干燥 ， 依法测定 （ 附录 ⅥC） ， 熔点 为228～232℃，熔融时同时分解。 ～ ℃ 熔融时同时分解。 盐酸布比卡因 Ch.P（2005） （ ）
芳香胺类药物的分析主要内容芳胺类药物分析苯
→按外标法以峰面积计算
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马来酸依那普利
（4）羟胺-三氯化铁反应
本品30mg，盐酸羟胺甲醇液0.5ml，氢 氧化钾乙醇液1.0ml，加热至沸，冷却，稀盐 酸酸化，滴加三氯化铁试液0.2ml，显棕红色。 马来酸依那普利
2. 旋光法 马来酸依那普利 10mg/ml甲醇溶液
比旋度-41.0° ~ -43.5°
3.光谱法与色谱法 马来酸依那普利 ChP(2005年版)：IR USP30-NF25：IR、HPLC
二、鉴别试验
1、物理与化学法 （1）熔点测定 马来酸依那普利：熔点143~145℃
雷米普利：熔距105~112℃
（2）高锰酸钾反应： 取本品20mg，加稀硫酸1ml，滴加高锰酸 钾试液，红色即消失。
马来酸依那普利及片剂、胶囊剂
（3）溴-间苯二酚反应 取本品30mg溶于3ml水中，加溴水1ml， 水浴至溴完全消失，取溴代液0.2ml，加间苯 二酚硫酸液(3g/L)3ml，水浴15min，显红棕 色。
2. 水中滴定
马来酸依那普利 本品→新沸过冷水→溶解电位法指示终点 →氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)
16.42mg/ml(1:3)
3. 醇-水中滴定 雷米普利 本品→甲醇、水→溶解电位法指示终点→ 氢氧化钠滴定液(0.1mol/L) 同时做空白。40.55mg/ml(1:1)
（二）高效液相色谱法 马来酸依那普利片剂、胶囊剂 色谱条件 色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶 柱温：50℃ 流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（25：75） 检测波长：215nm
三、特殊杂质检查
1. 马来酸依那普利 马来酸依那普利在一定酸度和湿度 下，产生两个主要降解产物依那普利拉 和依那普利双酮。 各国药典均采用HPLC。
第六章 芳胺及芳烃胺类药物分析
第六章芳胺及芳烃胺类药物分析第一节概述本类药物具有芳胺或芳烃胺结构1、酰苯胺类，如对乙酰氨基酚2、对氨基苯甲酸酯类，如盐酸普鲁卡因3、苯乙胺类，如盐酸去氧肾上腺素1、鉴别（1）、药物中含有酚羟基或水解后能产生酚羟基者，可与三氯化铁作用呈现特殊颜色反应。
紫堇色→褐色如：对乙酰氨基酚→蓝紫色（2）、芳伯胺基的药物可用芳伯胺的颜色反应进行鉴别芳伯胺 + 亚硝酸钠→重氮盐→碱性B-萘酚→显色（红色→紫红色）（3）、苯乙胺类拟肾上腺素药物容易被氧化而呈色因此可用碘、过氧化氢等氧化显色。
（4）紫外分光光度法、红外分光光度法2、含量测定（1）含有氨基呈碱性，因此可用非水滴定法测定含量，如：利多卡因、肾上腺素（2）含有芳伯胺基，可用永停滴定法（亚硝酸钠滴定法）（3）有些药物有紫外吸收，可用紫外分光光度法。
第二节酰苯胺类药物的分析主要药物：对乙酰氨基酚，贝诺酯，利多卡因，布比卡因基本结构R1R4NHR3CO R2贝诺酯：对乙酰氨基酚+ 乙酰水杨酸一、对乙酰氨基酚1、结构OHNHCOCH3N-（4-羟基苯基）乙酰胺MF C8H9NO2151.162、鉴别（1）含酚羟基+ FeCl3→呈现蓝紫色生成络离子OCH3CONH（（Fe[]3-（2） + 稀HCl 水解→流离芳伯胺基结构→加亚硝酸钠、盐酸→生成重氮盐→加碱性B-萘酚→红色偶氮化合物OHNHCOCH3HClOHNH2NaNOHClOHN+N.Cl OHNaOHOHNNHO（3）紫外吸收酸性甲醇溶液249nm波长处，有最大吸收，E1%=8803、检查主要检查酸度、溶液澄清度、氯化物、硫酸盐等（1）酸度A、生产过程中可能引进酸性杂质B、也可能在贮存过程中水解产生醋酸中国药典规定：1%水溶液，PH应控制在5.5~6.5（2）对氨基酚A、原料中带入B、水解产生对氨基酚有毒（粒细胞障碍）、并且使产品颜色加深（对氨基酚不稳定，易变色），应严格控制检查原理：OHNH 2][NO Fe(CN)5Na 2Na 2Fe(CN)5[]HONH 2+OH -蓝绿色络合物（（（1.0g （（（（50ug（（（20ml（（（（（（（（（（1ml（30min（（（（限量500.005%1.0ugg== （3）有关杂质 对氯乙酰苯胺（（（1.0g （（（（（（50ug/ml（（5ml 200ul40ul（（（（（（（（（（（（（（（（（（限量50/400.005%1.0/5200ug ml ulg ml ul⨯==⨯4、含量测定紫外分光光度法 P120取本品约40mg →0.4% NaOH 50ml 溶解→ 稀释至250ml →取5ml →加0.4% NaOH 10ml → 稀释至100ml → 257nm 波长测定吸收度A 。
药物分析_10芳胺类药物
2. 有关物质检查：杂质来源：对氯苯乙酰胺、偶氮苯、 氧化偶氮苯、苯醌、醌亚胺等 检查方法：以对氯苯乙酰胺为对照 品，采用TLC 法中的杂质（参比杂 质）对照品法。 3. 对氨基酚检查：利用对氨基酚在碱性条件下可与
亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化
合物，采用比色法。
(二)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查
2
. HCl
盐酸普鲁卡因
H2N
CONHCH2CH2N(C2H5)2 HCl
盐酸普鲁卡因胺
主要理化性质
1.芳伯氨基特性：重氮化－偶合反应；易氧化变色等。盐 酸丁卡因无此特性。
2. 水解特性：分子结构中的酯键或酰胺键易水解，除盐酸 丁卡因外水解产物为对丁氨基苯甲酸（BABA） 外，上述均为对氨基苯甲酸（PABA）。
R3 R1 NH C R2 O
R4
典型药物
HO
NHCOCH3
解热镇痛药
对乙酰氨基酚（扑热息痛）
O S O
CH3CONH
NHCOCH3
抗麻风药
醋氨苯砜
典型药物
CH3 NHCO CH3 C4H9 N HCl
盐酸布比卡因
局部麻醉药
CH3
NHCOCH2N(C2H5)2 CH3
盐酸利多卡因
HCl
局部麻醉药 抗心律失常药
温度高反应速度快，但过高，促使重氮盐分解。
每升高10℃，重氮化加快2.5倍，分解加快2倍。
Ar-N2+Cl- + H2O
(4) 滴定方法与速度
Ar-OH + N2 + HCl
将滴定管尖端插入液面下，一次将大部分滴 定液在搅拌下加入，然后提出液面，缓缓滴定 至终点。
3. 指示终点的方法
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在近终点时， 剩余的芳伯氨基的浓度极 稀，需在最后一滴加入后，搅拌1～5min，再 确定终点是否真正到达
3、终点指示方法 永停滴定法 电位法 外指示剂法 内指示剂法
（1）永停滴定法——中国药典收载
终点前：电极不起 氧化-还原反应， 电流计的指针指零
第四节 含量的测定
一、亚硝酸钠滴定法 1、原理
终点指示：永停法 （外指示剂法）
例：中国药典收载有
☆具有芳伯氨基的药物——盐酸普鲁卡因及其注射 剂、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺及其片剂与注射 剂、注射用盐酸普鲁卡因
☆具有潜在芳伯氨基的药物－醋氨苯砜及其注射液
具酰胺,经水解
NHCOR + H2O
H+ △
NH2 + RCOOH
2、主要测定条件 （1）加入适量KBr加速反应: KBr为催化剂 不同的酸影响反应速度：HBr > HCl > HNO3、H2SO4
在盐酸存在下重氮化反应
NaNO2+HCl→HNO2+NaCl
NO+ ClNH2 慢
H N
NO HNO2 HBr
K1
HNO2 HCl K2
NOBr H2O NOCl H2O
二、非水溶液滴定法
盐酸丁卡因、盐酸利多卡因等结构中含有 弱碱性氮原子，药典收载方法采用非水溶液滴 定法测定含量
滴定方法：大多以冰醋酸为溶剂，高氯酸 为滴定液，针对不同药物采用不同的指示剂指 示终点
三、紫外分光光度法－－分子结构中都有苯环 对照品比较法
四、高效液相色谱法（HPLC） 同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的盐酸普
终点：电极起氧化-还原 反应，电流计指针偏转
（2）外指示剂法： KI—淀粉糊剂或试纸
碘化钾被氧化
2NaNO2+2KI+4HCl→ 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O
遇淀粉，显蓝色
操作要点： ①显色要立即
原因：指示剂在酸性条件下置于空气中一段时间 后，空气将指示剂中KI氧化为I2而使淀粉变蓝色 ②样品易损失 弥补方法： 通过滴定度计算，得大概的用量 预先做一份求得大概用量，然后再准确测定， 蘸取试验时取量一定要少
快
N N OH
K1≈300 K2
加入KBr，可增大被
快
N N+Cl-来自测溶液中NO+的浓度
与芳伯氨基的游离程度有关 ★若芳伯氨基的碱性较弱，则成盐的比例较小，
即游离芳伯氨基较多，反应速度就快 ★若芳伯氨基碱性较强，则成盐比例较大，游
离芳伯氨基较少，则反应速度就慢
NH2
NO+ Cl慢
H N NO
快 快
N N OH N N+Cl-
（2）加过量盐酸的作用：
胺类药物的盐酸盐比硫酸盐的溶解度大
可以加快重氮化反应速度
增加重氮盐在酸性溶液中的稳定性
防止偶氮氨基化合物的生成 结论：加速反应 注意事项：酸度不能过大
会阻碍芳伯氨基 的游离，影响反应 速度 可使亚硝酸分解
芳胺类药物:酸的摩尔比= 1:2.5～6
（3）控制温度：在10～30℃条件下滴定 温度每升高lO℃，重氮化反应则加快2.5倍，
但重氮盐分解速度亦相应地加速2倍 若温度过低，反应又太慢
（4）滴定管尖端插入液面下滴定
滴定速度：先快后慢 滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/3处，
一次把大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌下迅速加 入，使其尽快反应
鲁卡因和它的降解产物对氨基苯甲酸， 色谱条件：反相C18柱 内 标：苯甲酸 流 动 相：甲醇:1%醋酸=40 : 60，pH=4.7 流 速：1.1ml/min 检测波长：250 nm