乳腺癌细胞培养电子版本
人乳腺癌细胞MDA-MB-231三维培养模型的构建
人乳腺癌细胞MDA-MB-231三维培养模型的构建彭雪梅;刘永文;张海燕【期刊名称】《山西大同大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(034)004【摘要】本研究旨在摸索一种体外构建人乳腺癌细胞MDA-MB-231三维(3D)培养的新方法,以期建立一种能够模拟体内肿瘤细胞真实形态的理想模型.利用该培养模型比较分析MDA-MB-231与正常乳腺上皮细胞MCF-10A 3D形态发生过程中极性形成的差异,主要是采用3D腺泡免疫荧光染色技术对顶部极性标记GM130和底部极性标记Laminin-5的定位进行比较研究,结果发现在3D培养10 d,MDA-MB-231形成了一种近似体内的球形结构,confocol层切MDA-MB-231球体的赤道轴发现,相对于MCF-10A形态发生形成的极性空腔腺泡,MDA-MB-231形成的是一种极性紊乱的实心球结构,其顶部极性标记GM130呈无规则分布、底部极性标记Laminin-5向球体中心内渗,这些结果与体内乳腺癌细胞去极性的特征相吻合,表明该3D培养模型可为深入阐明乳腺癌细胞MDA-MB-231恶化转移及抗癌药物作用机制等研究提供可靠的实验模型.【总页数】5页(P34-38)【作者】彭雪梅;刘永文;张海燕【作者单位】山西大同大学医学院,山西大同037009;山西大同大学化学与环境工程学院,山西大同037009;山西大同大学医学院,山西大同037009【正文语种】中文【中图分类】R73-35+1【相关文献】1.重组质粒pDNR-Dual-Rab25的构建及其在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达 [J], 吴非;张海添;陆云飞2.稳定表达HMGA2的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231构建 [J], 刘娇娇;张慧变;于林3.心房利钠肽对人乳腺癌细胞MDA-MB-231周期分布的影响 [J], 张弛;陆俊铭;周炳刚;曹相玫4.雷公藤红素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的抑制作用研究 [J], 史晓娜;徐霞;谢闺娥5.抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移能力的影响 [J], 徐凯;金延玲;刘伟;罗晶;武雯程;李敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
MAD-MB-231细胞培养
1.2 方法
1.2.1 细胞培养
人乳腺癌MDA-MB-231细胞在含有10%太牛血清的RPMI-1640培养液中，于37℃
、5%CO2培养箱中常规培养，用含0.02%EDTA的胰酶消化传代。
实验分组如下：
对照组：细胞中加入含有0.1%DMSO培养液
实验组：细胞用不同浓度芹菜素（20、40、80、160µmol/L及半数IC5038.1µmol/L）处理。
1.2.2芹菜素对MDA-MB-231细胞增殖的影响
1.取处于对数期生长期的MDA-MB-231细胞常规消化，用含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养基配置成5.0×104个/mL细胞悬液。
2.每孔接种100℃µL细胞悬液，每浓度设6个平行样，在37、5%CO2培养箱中培养过夜。
3.吸出培养液，每孔加入含有0、20、4、80、160µmol/L的芹菜素RPMI 1640培养液200µL，在37、5%培养箱个、分别培养24h，48h、72h后加入MTT（5g L-1）20µL，继续培养4H 后吸出上清，每孔加入DMSO150微升，震荡溶解10分，待结晶完全溶解后，在酶联免疫测定仪上选择波长570nm处，以试剂对照组调零，测定各孔吸收值OD
4.细胞存活率=实验组OD/对照组OD×100%
生长抑制率=（1-实验组OD/对照组OD）×100%
IC50值用Logit法计算：
IgIC50=xm*I（p-pm-pn）/4)，设xm=ig最大剂量，I=IG(最大剂量/相邻剂量)，P：阳性反应率之和，pm：最大阳性反应率，pn:最小阳性反应率。
1.2.3光镜形态学观察
1.。
乳腺癌细胞
形态生长方式类型培养条件人乳腺癌细胞MCF7 上皮样贴壁生长常规该细胞是从一名69岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。
该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构( domes );该细胞表达WNT7B癌基因；TNF- a可以抑制MCF-7细胞的生长；抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)的分泌。
ER(+),PR(+),Her-2(-)人乳腺癌细胞MDA-MB-231 上皮样贴壁生长三阴MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。
该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-a受体和WNT7B癌基因。
属于高转移性恶性乳腺癌细胞系，易成瘤，且常用于肿瘤转移研究人乳腺导管癌细胞MDA-MB-435S 上皮样贴壁生长三阴，转移性乳腺导管腺癌MDA-MB-435S 是一种纺锤形的细胞，1976年由其亲本(MDA-MB-435)中筛选得到。
MDA-MB-435是从一名31岁的转移性乳腺导管腺癌女性患者胸水中分离得到的。
但近来证明MDA-MB-435细胞被M14黑色素瘤细胞污染。
人乳腺癌细胞MDA-MB-453 上皮样；多角形贴壁生长三阴，转移性乳腺癌该细胞系由Cailleau R在1976年从一名48岁的患有转移性乳腺癌的白人女性的心包渗出液中分离建立的。
该细胞表达FGF的受体。
人乳腺癌细胞MDA-MB-157 上皮样贴壁生长髓样癌该细胞源自一位患有乳腺髓样癌的44岁黑人女性，表达WNT7B癌基因，细胞与细胞边界处有细胞桥粒、微绒毛、张力细丝。
人乳腺癌细胞SK-BR-3 上皮样贴壁生长这株细胞是1970年由Trempe G和Old LJ从一位43岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离得到的。
该细胞亚显微结构特征包括微丝和桥粒、肝糖原颗粒、大溶酶体、成束的细胞质纤丝；过表达 ______________HER2/c-erb-2 基因产物。
乳腺癌细胞系
乳腺癌细胞系
1、概述
1.1 乳腺癌细胞系的定义
1.2 乳腺癌细胞系的重要性和应用领域
2、乳腺癌细胞系的建立方法
2.1 组织来源与采集方法
2.2 细胞培养条件和培养基配方
2.3 细胞系的建立和传代方法
3、乳腺癌细胞系的分类与特点
3.1 根据分子分型进行分类
3.2 分析乳腺癌细胞系的表型特点
3.3 分析乳腺癌细胞系的基因表达差异
4、乳腺癌细胞系的应用
4.1 药物筛选与研发
4.2 免疫疗法研究
4.3 癌症研究和治疗机制的探索
5、乳腺癌细胞系的挑战与前景展望
5.1 乳腺癌细胞系的同质性问题
5.2 乳腺癌细胞系的分子异质性问题
5.3 基于乳腺癌细胞系的个性化治疗的发展前景
6、附件
本文档附带以下附件供参考：
6.1 乳腺癌细胞系建立的详细方法和步骤
6.2 乳腺癌细胞系的特性表格
6.3 乳腺癌细胞系的药物敏感性测试结果表
7、法律名词及注释
在本文档中涉及的法律名词和相关注释如下： - 乳腺癌：指乳房组织中发生的恶性肿瘤。
- 细胞系：是从原发肿瘤或转移灶中分离出来、不断传代培养的细胞群。
- 分子分型：根据基因表达谱的不同将乳腺癌分为不同的亚型，如Luminal A、Luminal B、HER2+和三阴性等。
- 药物筛选：通过对乳腺癌细胞系在不同药物作用下的反
应进行评估，筛选出对特定药物敏感的细胞系。
- 同质性问题：指乳腺癌细胞系中细胞间的基因差异较小，导致对某些治疗方法的反应相对一致。
- 异质性问题：指乳腺癌细胞系中不同细胞之间的基因表
达和代谢差异较大，从而导致对某些治疗方法的反应差异较大。
MCF-7ADR培养1
1、MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可， 10－15％的小牛血清就能长得很好。
一般两到三天传一代。
传代也很常规。
吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。
再加入2ml胰酶（25ml 培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。
我一般都不用缓冲液冲洗，而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用，感觉效果还不错。
因为MCF-7消化较快，一般不放到培养箱中消化，以免消化太过。
需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起，一般都来不及抢救。
2、MCF-7/ Adr 耐药细胞在培养时逐步加入至终浓度为8µmol/ L的阿霉素以维持抗药性, 实验前2周无药培养。
乳腺癌细胞株整理docx(一)2024
乳腺癌细胞株整理docx（一）引言概述：乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，其治疗涉及到研究和使用乳腺癌细胞株。
乳腺癌细胞株整理是为了系统化地研究乳腺癌的发生机制以及开发治疗方法的重要工作。
本文档将从以下五个大点出发，对乳腺癌细胞株整理进行详细阐述。
一、乳腺癌细胞株的来源和筛选方法1.常见的乳腺癌细胞株来源2.乳腺癌细胞株的特点和分类3.乳腺癌细胞株筛选方法的原则和步骤4.细胞株的基本鉴定和验证方法5.常用的乳腺癌细胞株库介绍二、乳腺癌细胞株的培养和传代方法1.培养基的选择和制备2.细胞的传代和细胞密度控制方法3.细胞培养的注意事项和问题解决方案4.细胞冻存和解冻方法5.乳腺癌细胞株的病毒污染检测和预防三、乳腺癌细胞株在药物筛选中的应用1.药物筛选的原理和方法2.乳腺癌细胞株的药物敏感性评估指标3.药物筛选实验的步骤和操作要点4.影响细胞药物反应的因素和解决方法5.常用的药物筛选平台和技术进展四、乳腺癌细胞株在基因表达和调控研究中的应用1.基因表达分析的原理和方法2.乳腺癌细胞株的转染和过表达方法3.基因沉默和干扰技术的应用4.表达谱分析和差异基因筛选方法5.研究乳腺癌细胞株基因调控网络的新进展五、乳腺癌细胞株在动物模型研究中的应用1.动物模型构建的原理和方法2.乳腺癌细胞株在裸鼠模型中的应用3.乳腺癌细胞株在转基因小鼠模型中的应用4.评估乳腺癌细胞株在动物模型中的肿瘤形成能力5.乳腺癌细胞株在治疗有效性评估中的作用总结：乳腺癌细胞株整理在乳腺癌研究和治疗中具有重要的意义。
通过筛选、培养和应用乳腺癌细胞株，可以深入研究乳腺癌的发生、发展机制，开展药物筛选和基因调控的研究，以及评估治疗方法的有效性。
随着技术的不断进步，乳腺癌细胞株整理将在乳腺癌领域发挥越来越重要的作用。
SKBR3人乳腺癌细胞
三、细胞简介:
Growth Properties:
adherent
Organism:
Homo sapiens(human)
Source:
Organ:mammary gland; breast
Cell type:epithelial
2.Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin -0.53 mMEDTA solution to remove all traces of serum which contains trypsin inhibitor.
3.Add 2.0 to 3.0 ml of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed.
DoubliLeabharlann g Time:29 hrs
客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项，确保细胞的培养条件一致，如果由于培养条件不一致导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。由于运输的情况，所以极个别细胞会出现不稳定，客户收到细胞后务必第一时间和我们联系，告知细胞具体情况，以便我们技术人员能及时有效的和老师沟通，不胜感谢！
Disease:adenocarcinoma
Derived from metastatic site:pleural effusion
Age:
43years
Gender:
female
Ethnicity:
Caucasian
肿瘤细胞培养(完整版)
第6章肿瘤细胞的培养肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药的敏感性、肿瘤细胞和癌分子生物学特性的重要手段。
癌细胞是比较容易培养的细胞，当前所建立的细胞系中癌细胞是最多的。
应用体外细胞培养技术进行肿瘤研究具有许多优点：(1)可免受机体内环境因素的影响，避免了个体差异性，便于探索各种物理、化和生物因素对肿瘤细胞生命活动的影响。
(2)既便于从细胞水平上研究肿瘤细胞的结构与功能，又便于从基因及分子水平上研究癌变的发生机理；(3)可长期传代、保存，便于观察肿瘤细胞生物学特性和遗传行为的改变。
(4)可用于快速筛选抗癌药物和研究耐药机理。
(5)研究周期短，比较经济。
但是它也有缺点，如长期培养可使细胞生物学特性发生改变；体外实验所得的结果不能完全代表体内的情况，应与体内试验结合研究更为合理等。
一、肿瘤细胞培养的生物学特性1、形态和性状形态不规则，细胞界限清晰，伸展较差，核膜、核仁轮廓明显，核仁多、核浆丰富。
折光性强，电镜观察细胞表面微绒毛多而细密，与肿瘤细胞具不定向运动和铺着不依赖性有关。
2、生物特性癌细胞在无血清或低血清(2%～5%)时仍能生长，营养要求不高，因能自分泌促增殖因子，在软琼脂培养时单个细胞能形成集落，生长方向性消失，再加上失去了接触抑制，癌细胞数量增多时可呈多层重叠生长，细胞饱和密度大，有丰富的三极有丝分裂，分裂指数高，细胞倍增周期短。
3、永生性永生性也称不死性，在体外培养中表现为可无限制传代而不凋亡(Apoptosis)，体外培养的肿瘤细胞系(株)都表现有这种特性。
但体外培养的永生性和体内肿瘤的恶性(包括侵润性)是两种性状，受不同基因调控的，因恶性肿瘤多数在体外培养时并不那么容易获得成功，生长增殖能力并不旺盛，有时只能传若干代，说明体外培养的永生性可在体外培养后获得的。
另外，体外培养的许多细胞系，如NIH3T3、Rat-1 10T1/2等均具有永生性而无恶性。
但两者有相关性，永生性可能是细胞恶性变的某一阶段。
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乳腺癌细胞培养MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可，10－15％的小牛血清就能长得很好。
一般两到三天传一代。
传代也很常规。
吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。
再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。
我一般都不用缓冲液冲洗，而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用，感觉效果还不错。
因为MCF-7消化较快，一般不放到培养箱中消化，以免消化太过。
需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起，一般都来不及抢救。
MDA-MB-231人乳腺癌细胞细胞中文名称人乳腺癌细胞细胞英文名称 MDA-MB-231物种人细胞形态特征上皮样细胞生长特性贴壁生长细胞特种特性 MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。
该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体和WNT7B癌基因培养基 L15: Leibovitz Medium血清 10%FBS细胞传代方法 1:2~1:4传代；每周2~3次细胞传代情况 C5细胞冻存条件MDA-MB-231 人乳腺癌细胞基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性说明培养基：DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10%培养条件：37℃ 5% CO2消化条件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA溶液，消化5-10min传代的比例：1：2~1：4换液时间：2~3天换液一次冻存液比例：85%培养基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO冻存密度：1-2 ×10 6/管，液氮保存MDA-MB-231 人乳腺癌细胞复苏方法：取出冻存管后，投入37 ℃水浴中，震荡解冻2 min，酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入5 ml 37 ℃预热的培养基，并清洗冻存管一次，将离心管离心（1000 rpm，5 min），弃去上清液，再加入2 ml培养基，转入培养瓶中培养。
产品名称：人正常乳腺细胞 Hs 578Bst规格：70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶特点：细胞代数为4-5代左右包装：内层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书细胞来源：ATCC、sciencell、ICLC货期：1-2周运输方式：快递运输售后：收到细胞后7天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题报告并及时传真或E-mail致销售人员，我们将尽快为您解决。
细胞培养常见问题分析细胞培养1、冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37 ℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。
另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
2、细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
3、可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。
每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5、何谓FBS, FCS, CS, HS ?FBS （fetal bovine serum）和FCS （fetal calf serum）是相同的意思，两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。
CS （calf serum）则是指小牛血清。
HS （horseserum）则是指马血清。
6、培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。
当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时，则应使用5 % CO2 培养细胞。
7、何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
8、培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。
9、附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。
次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20 ℃，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低，并可减少污染之机会。
10、悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。
分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。
11、欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg （约1,000rpm），5 - 10 分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。
12、细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。
细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。
13、细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxide）和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。
注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO 直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。
14、DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO 等级，必须为Tissue culture grade之DMSO （如SigmaD2650），其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。
若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。
15、冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→（-20 ℃30 分钟*）→ -80 ℃16~18 小时（或隔夜）→ 液氮槽vaporphase长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃至–80 ℃以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。
*-20 ℃不可超过1 小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
15、细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。
16、应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。
主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。
严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法。
17、如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？加入相应抗生素。
直接灭菌后丢弃之。
18、支原体（mycoplasma）污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？不能。
除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。
19、支原体污染会对细胞培养有何影响？支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究之任一数据。
故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。
20、CO2 培养箱之水盘如何保持清洁？定期（至少每两周一次）以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。
21、为何培养基保存于4 ℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值会越来越偏碱性？培养基保存于4 ℃冰箱中，培养基内之CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。
而培养基中之酸碱指示剂（通常为phenol red）的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。
培养基偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。
若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO2，以调整pH 值。
22、各种细胞培养用的dish，flask是否均相同？不同厂牌的dish 或flask，其所coating 的polymer 不同，制造程序亦不同，虽对大部分细胞没有太大之影响，惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish 或flask 而有显著之生长差异。
23、购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。
血清使用错误或血清的品质不佳。
解冻过程错误。
冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。
悬浮细胞误认为死细胞。
培养温度使用错误。
细胞置于–80℃太久。
24、收到之冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。
另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。
25、如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。
在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。
总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始，各种目的无血清培养首选AIM V（12005）培养基（SFM）。
26、L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。
脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。
L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。
L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
27、GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。