蛋白纯化AKTA操作说明
AKTAexplorer标准操作及维护保养规程
1 目的阐明和规范运用AKTAexplorer蛋白纯化系统。
2 范围本操作规程适用于AKTAexplorer蛋白纯化系统的操作使用及维护保养。
3 职责仪器操作人员负责仪器的正确使用，清洁及基本维护。
仪器负责人负责监督和培训其他人员对仪器的正确使用，同时仪器负责人对仪器进行定期维护和保养。
4 引用4.1 AKTA_Purifier操作手册4.2 AKTA_explorer 英文操作手册5 内容5.1 准备工作5.1.1 将预先配置好的缓冲液，用0.45微米滤膜过滤，然后进行超声脱气。
5.1.2 将待分离样品用0.45微米滤膜进行过滤。
5.1.3 将对应的管路放入对应的缓冲液。
5.2 启动层析系统5.2.1 连接好电源打开AKTAexplorer蛋白纯化系统电源，打开电脑点击操作软件。
5. 2.2 排出缓冲液管路气泡检查进液管路有无气泡，少量气泡可进行泵洗排气，首先将管路滤头放入超纯水中，点击操作软件“system control”中“manual”操作菜单，然后在“pump”中点击“pump wash explorer”同时选择待要排气的管路，选择完成点击“execute”，泵洗结束点击“end”。
当管路中气泡仍未排除时，“manual”操作菜单中点击“flowpath”选择未排尽气泡管路，点击“execute”，用注射器在对应的泵头上方阀门处抽出气泡，点击“end”。
5. 2.3 排除样品泵管路气泡将进样管路放进超纯水中，“manual”操作菜单中点击“sample flow”设定流速10-20mL/min，“flowpath”中选择管路，“Alarms”设定样品泵压力0.3MPa，点击“execute”排气结束后点击“end”。
当管路中气泡仍未排除时，用注射器连接在injection valve V1的2号位抽气。
“direct load”设定流速样品才过柱子，在“sample flow”改变流速样品不过柱子。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高.AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备.以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍A KTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA.AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统.该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起(Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump—900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100,流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa(泵名为P—901）.在AKTA explore10,流速范围0。
001-10 ml/min，压力高达25 Mpa(泵名为P—903）。
• Monitor UV-900,同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外—可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长,安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）• Monitor pH/C-900,在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2)。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源.待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。
蛋白纯化AKTA操作说明(二)
蛋白纯化AKTA操作说明（二）引言概述：本文档旨在提供关于蛋白纯化AKTA操作的详细说明。
蛋白纯化是生物化学和生物技术中常用的实验技术之一，能够用于从复杂的生物样品中纯化目标蛋白质。
AKTA操作是常用的蛋白纯化系统，本文将介绍该系统的操作步骤和注意事项，帮助用户顺利进行蛋白纯化实验。
正文：一、AKTA操作之仪器准备1. 确保AKTA蛋白纯化系统已经连接好电源，并打开主机电源开关。
2. 检查液氮罐中的液氮是否充足，并确保液位高于所需运行温度。
3. 打开冰盒，准备好所需的离心管、移液器和其他实验器材。
二、AKTA操作之列柱装配1. 按照实验要求选择合适的色谱柱和填料，并正确装配到AKTA系统中。
2. 使用力学手套松开色谱柱底部的螺丝，将填料注入色谱柱中，确保填料均匀。
3. 同时，注意将填料与色谱柱的连接口处用黑色硅胶密封，以免液体泄漏。
三、AKTA操作之流程设置1. 打开AKTA系统的软件界面，并选择“新建方法”。
2. 在方法设置界面中，设定蛋白纯化的各个步骤，如进样、洗脱等流程参数。
3. 根据实验需求，选择合适的梯度洗脱方案，并输入相应的洗脱液体浓度。
四、AKTA操作之样品处理1. 将待纯化的生物样品进行预处理，如离心、过滤等，以去除杂质。
2. 根据纯化需求，可进行某些特定试剂的添加，如酶切剂、亲和标记剂等。
3. 根据方法设置，将样品装入进样器中，并调整进样量和进样流速。
五、AKTA操作之运行实验1. 保存并加载所设置的方法，确保参数设定正确。
2. 启动AKTA系统，开始实验运行，并监控过程中的各项参数指标。
3. 及时记录实验数据，并根据需要进行样品采样、保存等操作。
总结：通过本文所述的蛋白纯化AKTA操作说明，用户可以了解到系统准备、列柱装配、流程设置、样品处理和运行实验等关键步骤。
合理而正确的操作，将帮助用户获得高质量的蛋白纯化结果。
同时，用户还需根据实际操作中的具体情况，进一步优化实验参数，以满足各自的研究需求。
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程一、目的：为了确保蛋白纯化层析系统操作的准确性、稳定性和安全性，保证实验结果的可靠性，制定本操作规程。
二、适用范围：本操作规程适用于实验室内的AKTA蛋白纯化层析系统操作。
三、操作流程：1.准备工作：(1)预热：打开系统电源，预热至设定温度（一般为室温）。
(2)洗涤缓冲液：根据实验要求，制备所需的洗涤缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(3)净化缓冲液：根据实验要求，制备所需的净化缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(4)样品：根据实验要求，制备所需的样品。
2.系统配置：(1)连接仪器：将系统中的各个模块连接好，包括色谱柱、注射器、检测器等。
(2)配置方法参数：根据实验要求，在系统内设置合适的流速、梯度洗脱条件等相关参数。
3.样品处理：(1)样品加载：将样品注入到加载注射器中，通过样品加载阀注入到色谱柱中。
(2)洗脱：根据实验要求，设置梯度洗脱条件，将混合物中的目标蛋白纯化。
4.系统清洗：(1)注射器清洗：每次实验结束后，将注射器从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
(2)色谱柱清洗：每次实验结束后，将色谱柱从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
5.系统关闭：(1)关闭电源：关闭系统电源，断开电源线连接。
(2)清洗系统：将系统中的各个模块用水冲洗干净，保持干燥。
(3)整理工作台：将使用过的耗材整理归位，清理工作台。
四、操作注意事项：1.操作前应仔细阅读操作手册，了解仪器的基本原理和操作要点。
2.操作时要穿戴实验室个人防护用品，避免吸入或接触有害物质。
3.在操作过程中，要严格按照实验要求进行，避免操作失误。
4.定期检查系统的运行状态，保证系统正常工作。
5.操作完成后，要及时清洗和整理仪器，保持仪器的干净和完好。
五、风险控制与安全措施：1.使用过程中，注意避免溶液飞溅引起的伤害，避免溶剂和化学品的吸入或接触。
2.避免电源短路或其他电气故障引起的意外事故。
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击 Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control 界面， Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......； Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
AKTA 简要操作说明
AKTApurifier简要操作说明打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
Unicorn Manager文件管理、Method Edit方法编辑、System Control系统控制、Evalution结果处理，4个窗口同时打开，同时关闭。
Unicorn Manager中Manual运行的结果自动保存在Manualruns的文件夹中，文件名从Manualrun1~Manualrun10，第11个结果会覆盖第1个文件（最多保存10个默认的文件名）。
如果手动结果需要长期保存，可以remove到指定文件夹或者rename。
可以利用Manual-other-record-on（off）来选择文件夹，制定文件名保存手动结果。
手动命令(Manual)见《ÄKTA系统手动命令指南》利用脱盐实验熟悉手动操作(System Control→Manual)脱盐试验原理：凝胶过滤 (或称分子筛) 层析是一种由限制分子通过多孔基质，按分子大小分离混合分子的技术。
蛋白质是生物大分子，分子量比盐等小分子大许多倍，用凝胶过滤方法为生物产品脱盐十分简单、可靠。
由于层析方法可透过紫外和电导检测器监控整个层析脱盐的过程。
Sephadex G-25 介质用带3- 氯-1 ，2- 环氧丙烷(epichlorohydrin) 交联葡聚糖加工成珠状的介质。
适合分子量在5000 以下的生物分子的脱盐及缓冲液置换工作。
在该实验中，蛋白质是大分子，盐离子是小分子，因此蛋白质先出来（280nm有特征吸收），盐离子后出来（电导值显示）o 样品：5mg/mLBSA，0.5M NaCl溶液 10mLo binding buffer缓冲液：去离子水o 层析柱：HiTrap Desalting 5 mLo 流速：5mL/min,o 样品体积：200ul/0.5mL/1mL。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完成（CU950上面3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品全部工作溶液和样品必需经过0.45µm滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
待InjectionValve1号位管道流出水后接入柱子柱头，稍微拧紧后将柱下端堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1）等候柱子平衡好了（观察电导COND，pH数值和改变趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve3号位推入（进样量不得低于样品环体积2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一个方法4）洗脱：上样后用缓冲液尽可能将穿透峰洗回基线。
AK蛋白纯化系统操作
A K蛋白纯化系统操作 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。
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AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
6.平衡柱子：分子筛buffer平衡柱子，一般要两个小时左右，盐离子浓度达到5.5%左右。
7.设置系统及收集参数：命名：先end---Manual instructions，点击browse，弹出select result name&location 界面，点开文件夹“defaultHome”，找到文件夹“labdata”，点开，选择自己名字首字母缩写文件夹(已创建)，在界面下方“name”指令框进行命名。
注意：命名时要标明日期，柱子型号，样品名称。
设流速：Pumps---System flow---设流速（1 mL/min）---Execute；设柱压：Alams--- alam systerm pressure---high alam---设置柱压---点击Execute；洗A泵：Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse；紫外调零：Monitors---Auto zero UV---Execute；设置收集体积：Fracton collection---peak fractionation---fraction size---设置收集体积---Execute；一般设为1 mL(可根据实际情况调整)。
设置收集水平：Fracton collection---peak fractionation parameters---Start level---设置起始收集水平--- Execute。
注意：对于初次纯化的蛋白，由于蛋白含量未知，起始水平可设低些，如10 mAU,避免损失蛋白。
8.上样：冲洗Loop环：取5mL注射器，吸取5 mL分子筛（不能有气泡），从进样口注射2倍Loop体积的分子筛来清洗Loop环；蛋白样品处理：取出蛋白样品（< 2 mL），12000 rpm离心3 min，把上清转移至新的离心管管，重复一次，以去除沉淀，避免堵塞系统；手动蛋白上样：把蛋白样品转移至注射器内，从进样口把样品注射入Loop环内；注意：上样时应小心操作，首先弹出注射器内的气泡，随后稍推注射器，使注射器出口处悬挂一样品液滴（别太用力，导致液滴滴落），然后把注射器插入进样口，把蛋白样品推入Loop环中。
Inject:点击Flow path---injection valve---点开position选项---inject---Execute---走2倍Loop 体积的分子筛缓冲液；Load:点击Flow path---injection valve---点开position选项---manual load---Execute，调回Load状态。
9.收集目标蛋白：参照标准蛋白曲线，估计样品出峰位置，收集蛋白样品，做好标记，过完后，peak fracstop 900 停止收集。
10. 20%乙醇平衡柱子：等精氨酸峰出来，离子浓度平衡后，点击pause，进分子筛的buffer的泵头用去离子水洗，放入20%的乙醇中，continue---洗泵（A1泵），平衡柱子。
20%的乙醇平衡柱子，一般要两小时左右，盐离子浓度达到0%。
11.收柱子（先下后上）：调节流速至0.5 mL/min，拧下柱下面的接头，连上注射器，再调流速至1 mL/min，注射器内吸入3-5 mL 20%乙醇，取下柱上面的接头看是不是往外流液体，因为注射器内有压力，液体会倒流，盖子内滴满液体，立即拧上盖子，防止进气泡，将进样阀的线接到检测器上。
12.关闭系统：点击End 关闭系统界面，关闭AKTA pure电源，关电脑。
2018-09-01AKTA pure操作说明离子交换蛋白纯化步骤（RESOURCE Q/S）1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统,进入log on 界面，用户名默认为Default,输入密码：default,点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面, Evaluation界面和Administration 界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：点击pause暂停系统---去离子水冲洗A1,B1进液泵头---分别放入A，B液中；洗B泵：选择System Control界面manual---Execute Manual instructions---Pumps---PumpA wash---点开inlet，选择B1---Excuse；洗A泵：选择System Control界面manual---Execute Manual instructions---Pumps---PumpA wash---点开inlet,选择A1---Excuse,洗泵结束后调B至100%，0min---Execute。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置最高柱压---Execute。
设流速：Pumps---System flow---设置system flow（1 mL/min）---execute；注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 安装RESOURCE柱（先上后下）：装离子柱时先拧开离子柱上面，连上来自进样阀的线，边拧紧上面边拧松柱下面，在离子柱子下端出口连上转接头，接上一根较短的先并连到检测器上（流出液体，滴满检测器上的连接口的洞里，再拧紧）。
6. 平衡RESOURCE 柱：等B液平衡后，点击Pumps---gradient---Target---调B至0%，0min---Execute。
等平衡后，记录最高和最低盐离子浓度：离子交换B液盐离子浓度约为84%，离子交换A液盐离子浓度约为1.7%。
7.设置系统及收集参数：命名：先end---Manual instructions，点击browse，弹出select result name&location界面，点开文件夹“defaultHome”，找到文件夹“labdata”，点开，选择自己名字首字母缩写文件夹(已创建)，在界面下方“name”指令框进行命名。
注意：命名时要标明日期，柱子型号，样品名称。
设流速：Pumps---System flow---设流速（1 mL/min）---Execute;设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---点击Execute；紫外调零：Monitors---Auto zero UV---Execute；设置收集体积：Fracton collection---peak fractionation-fraction size---设置收集体积---Execute；一般设为1 mL (可根据实际情况调整) 。
设置收集水平：Fracton collection---peak fractionation parameters---Start level---设置起始收集水平--- Execute。
注意：对于初次纯化的蛋白，由于蛋白含量未知，起始水平可设低些，如10 mAU，避免损失蛋白。
8.上样：冲洗Loop环：取5 mL注射器，吸取5 mL分子筛（不能有气泡），从进样口注射2倍Loop体积的分子筛来清洗Loop环；蛋白样品处理：取出蛋白样品（< 2 mL），12000 rpm离心3 min，把上清转移至新的离心管管，重复一次，以去除沉淀，避免堵塞系统；手动蛋白上样：把蛋白样品转移至注射器内，从进样口把样品注射入Loop环内；注意：上样时应小心操作，首先弹出注射器内的气泡，随后稍推注射器，使注射器出口处悬挂一样品液滴（别太用力，导致液滴滴落），然后把注射器插入进样口，把蛋白样品推入Loop环中。
Inject: 点击Flow path---injection valve---点开position选项---inject---execute---走2倍Loop体积的分子筛缓冲液；Load: 等流穿峰出来后，点击Flow path---injection valve---点开position选项---manual load---Execute，调回Load状态。