实验二 碱性蛋白酶的盐析沉淀
蛋白质的沉淀与变性实验报告
蛋白质的沉淀与变性实验报告一、实验目的1、了解蛋白质沉淀和变性的概念及原理。
2、掌握几种使蛋白质沉淀和变性的方法。
3、观察蛋白质沉淀和变性的现象，比较其异同。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物，其分子表面带有许多可解离的基团，如氨基、羧基等，在一定的溶液 pH 条件下，这些基团会解离而使蛋白质带电。
此外，蛋白质分子还具有特定的空间结构，这是其生物活性的基础。
蛋白质的沉淀是指蛋白质从溶液中析出的现象。
蛋白质沉淀的方法有很多种，如盐析、有机溶剂沉淀、重金属盐沉淀等。
盐析是指在蛋白质溶液中加入大量中性盐，如硫酸铵、氯化钠等，使蛋白质的溶解度降低而析出。
有机溶剂沉淀是指在蛋白质溶液中加入能与水互溶的有机溶剂，如乙醇、丙酮等，降低蛋白质分子周围的水化层，从而使其沉淀。
重金属盐沉淀是指在蛋白质溶液中加入重金属离子，如汞离子、铅离子等，与蛋白质分子中的某些基团结合，导致蛋白质沉淀。
蛋白质的变性是指在某些物理或化学因素的作用下，蛋白质的空间结构被破坏，从而导致其生物活性丧失的现象。
引起蛋白质变性的因素有很多，如加热、强酸、强碱、有机溶剂、紫外线等。
变性后的蛋白质溶解度降低，容易发生沉淀，但沉淀的蛋白质不一定都是变性的。
三、实验材料与仪器1、实验材料鸡蛋清溶液牛奶饱和硫酸铵溶液乙醇硫酸铜溶液氢氧化钠溶液盐酸溶液2、实验仪器试管滴管酒精灯水浴锅四、实验步骤1、盐析沉淀蛋白质取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。
向其中一支试管中逐滴加入饱和硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀。
静置一段时间，观察沉淀现象。
2、有机溶剂沉淀蛋白质取两支试管，分别加入 2ml 牛奶。
向其中一支试管中逐滴加入乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀。
静置一段时间，观察沉淀现象。
3、重金属盐沉淀蛋白质取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。
向其中一支试管中滴加几滴硫酸铜溶液，观察沉淀现象。
4、加热变性蛋白质取一支试管，加入 2ml 鸡蛋清溶液。
盐析法沉淀酶
盐析法沉淀酶1. 引言酶是生物体内一类具有催化作用的蛋白质，可以加速化学反应速率。
它们在生物体内扮演着重要的角色，参与几乎所有生命过程。
酶的提取和纯化对于研究其结构和功能至关重要。
在酶的纯化过程中，盐析法是一种常用的技术，它通过改变溶液中的盐浓度来沉淀酶。
2. 盐析法原理盐析法是一种基于酶与盐之间的相互作用的分离技术。
酶在溶液中的溶解度受到盐浓度的影响，当盐浓度超过酶的溶解度时，酶会发生沉淀。
这是因为盐中的离子与酶分子之间会产生相互作用，改变酶的溶解度。
3. 盐析法步骤3.1 准备工作在进行盐析法沉淀酶之前，需要准备以下实验材料和设备：•目标酶的提取液•盐溶液•混合溶液的离心管•离心机•冷冻离心管•蒸馏水3.2 实验步骤1.将目标酶的提取液与适量的盐溶液混合，使溶液中的盐浓度超过酶的溶解度。
2.将混合溶液转移到离心管中。
3.使用离心机进行离心，离心时间和速度根据酶的特性和实验要求进行设置。
4.离心后，将离心管中的上清液转移到冷冻离心管中。
5.将冷冻离心管中的上清液放入冷冻机中，冷冻一段时间以使酶沉淀。
6.使用离心机进行第二次离心，以沉淀酶。
7.丢弃上清液，将酶沉淀取出并用蒸馏水洗涤。
8.最后得到的酶沉淀即为纯化的酶。
4. 实验注意事项在进行盐析法沉淀酶的实验过程中，需要注意以下事项：•酶的溶解度随盐浓度的改变而改变，因此需要根据目标酶的特性选择合适的盐浓度。
•离心过程中，需要根据酶的特性和实验要求设置合适的离心时间和速度，以确保酶能够沉淀下来。
•在取出酶沉淀时，需要避免将上清液带入，以免影响酶的纯化效果。
•在酶沉淀过程中，可以根据需要进行多次沉淀和洗涤，以提高酶的纯度。
5. 应用领域盐析法沉淀酶是一种常用的酶纯化技术，广泛应用于生物化学、分子生物学和生物工程等领域。
通过盐析法可以将酶从复杂的混合物中分离出来，并得到相对纯度较高的酶样品，为后续的酶活性研究、结构解析和应用研究提供了基础。
6. 结论盐析法是一种常用的酶纯化技术，通过改变溶液中的盐浓度来沉淀酶。
盐析法沉淀酶
盐析法沉淀酶1. 引言盐析法沉淀酶是一种常用的分离和纯化酶的方法。
通过加入适当的盐类，可以改变溶液中酶的活性和溶解度，从而使酶发生沉淀。
本文将详细介绍盐析法沉淀酶的原理、操作步骤以及优缺点。
2. 原理盐析法利用盐对蛋白质和酶的沉淀性质进行分离。
当在适当的条件下添加盐类到含有酶的溶液中时，会导致溶液中蛋白质和酶发生聚集，形成颗粒状沉淀物。
这是因为添加盐类后，溶液中盐离子与蛋白质或酶表面上的电荷相互作用，中和了电荷排斥力，使蛋白质或酶之间发生吸引力增强，从而聚集成大颗粒状。
3. 操作步骤3.1 准备工作•准备含有目标酶的样品溶液。
•准备浓缩盐溶液。
3.2 盐析法操作1.将目标酶样品溶液加入离心管中。
2.缓慢滴加浓缩盐溶液，同时轻轻搅拌。
3.持续添加盐溶液直到达到酶的最低沉淀浓度。
4.将离心管放入离心机中，以适当的速度进行离心分离。
较高的转速可以加快沉淀物的形成。
5.转速降低后，将上清液倒出，留下沉淀物。
6.使用适当的缓冲液洗涤沉淀物，以去除杂质和未结合的盐类。
7.将洗涤后的沉淀物溶解在适当的缓冲液中。
4. 优缺点4.1 优点•简单易行：盐析法操作简单，不需要复杂的设备和试剂。
•高效快速：盐析法可以在较短时间内完成对酶的分离和纯化。
•适用范围广：盐析法适用于各种类型的酶，并且对蛋白质结构没有特殊要求。
4.2 缺点•选择合适的盐类和浓度是关键：不同酶对盐类和浓度有不同的要求，需要进行试验优化。
•产量较低：盐析法分离纯化后的酶产量一般较低，可能需要进一步的纯化步骤。
5. 应用领域盐析法广泛应用于生物化学、分子生物学以及制药工业中。
例如：•生物技术研究中，可以利用盐析法从细胞提取物中分离目标酶。
•制药工业中，可以通过盐析法对药物中的酶进行纯化。
•食品工业中，可以利用盐析法从食品样品中提取和纯化特定酶。
6. 结论盐析法是一种简单有效的酶分离和纯化方法。
通过调节溶液中的盐浓度，可以使目标酶发生沉淀并与其他杂质分离。
蛋白沉淀方法
蛋白沉淀方法蛋白沉淀是蛋白质分离与纯化的一种常用方法，通过加入化学物质使目标蛋白质与其它蛋白质或者杂质分离，并沉淀于溶液底部或者浮于溶液表面。
本文将从蛋白沉淀的原理、化学物质的选择、实验操作、蛋白沉淀后处理等方面进行介绍。
一、蛋白沉淀的原理蛋白质的沉淀是基于化学物质与蛋白质之间的物理或者化学相互作用，包括：1. 盐析沉淀在高浓度盐溶液中，蛋白质远离其同样带电的水分子，而形成大分子团聚，从而沉淀。
在酸性环境下，大多数蛋白质通过质子化而失去电荷，降低了疏水性，从而沉淀。
在碱性环境下，蛋白质通常解离出一个氨基酸残基的羧基，从而带有负电荷，易于被阳离子与之形成沉淀。
4. 有机溶剂沉淀如乙醇、丙酮、甲醇等，可与蛋白质形成复合物，使其聚合而沉淀。
以上几种原理可单独或结合使用，根据情况进行选择。
二、化学物质的选择常用的盐类有氯化铵、硫酸铵、硫酸钠等。
浓度通常在10-60%之间，具体浓度根据具体实验条件进行选择。
2. 酸类常用的酸包括二元酸、有机酸等。
浓度为0.1-1M之间，酸性度通常为pH 4-6。
3. 碱类常用的有机溶剂包括乙醇、丙酮、甲醇等。
浓度通常为50-90%之间，根据实验要求进行选择。
三、实验操作1. 样品制备待分离的蛋白质必须经过预处理，通常包括离心、裂解、过滤等步骤。
裂解方式可以使用生理盐水、水、甲醇等，使蛋白质从细胞中释放出来。
过滤可以使用滤纸、滤膜、分子筛等方式，去除杂质。
2. 化学物质的加入将选择好的化学物质加入样品中，此时需注意化学物质前后也要进行科学操作，如一些电解质类物质可能带有杂质，需要先进行过滤；有机溶剂可能会引起蛋白质的变性，需加入适量的缓冲液进行保护。
将混合物小心地混合均匀后，离心使混合物分层，此时目标蛋白沉在沉淀层，上清液中还有一些蛋白，需要将其过滤或沉淀以去除杂质。
4. 纯化将沉淀分解，得到的产物通过离心、层析等步骤进行纯化，最终得到目标蛋白。
沉淀后需要进行洗涤，以去除杂质，保证目标蛋白的纯度和酶效。
盐析法沉淀酶
盐析法沉淀酶盐析法是一种常用的生物化学实验方法，用于沉淀酶。
这种方法简单易行，成本低廉，因此被广泛应用于酶的纯化与分离。
下面我们就来详细介绍一下盐析法的原理、步骤以及注意事项，希望对大家有所指导意义。
盐析法原理：盐析法是利用不同离子浓度对酶的溶解度差异的一种方法。
在高浓度离子溶液中，由于强离子-离子相互作用，酶呈现沉淀状态。
而在低浓度离子溶液中，酶则溶解在溶液中。
通过调整离子浓度的方法，可以将需要分离和纯化的酶从其他杂质中沉淀出来。
盐析法步骤：1.酶悬浮液制备：首先将所需的酶提取出来，并得到一个酶的悬浮液。
可以通过细胞破碎、离心等方法得到酶的悬浮液。
2.添加盐溶液：将适量的盐溶液缓慢加入到酶悬浮液中，同时用磁力搅拌器辅助混合。
常用的盐溶液有氯化铵、硫酸铵等。
3.观察沉淀形成：当盐溶液的浓度逐渐增加时，酶分子间的相互作用增强，酶开始形成沉淀。
可以根据沉淀的形状、颜色等来判断沉淀的产生。
4.离心沉淀：将悬浮液放入离心机中，以适当的离心力进行离心。
离心后，酶沉淀于离心管底部形成一个沉淀层。
5.取出酶沉淀：将离心管倒置，将上清液轻轻倒去，保留沉淀层。
然后用缓慢流动的冷盐溶液洗涤沉淀层，以去除杂质。
6.酶的溶解与收集：最后用适量的缓冲液将酶沉淀溶解，并将溶解后的酶收集起来。
收集得到的酶液就是酶的纯净溶液了。
盐析法注意事项：1.选择适当的盐溶液：不同的酶对盐溶液的要求有所差异，选择适当的盐溶液能够提高沉淀效果。
2.温度控制：在进行盐析法实验时，应控制好温度，通常选择低温条件（通常为4℃），以避免酶的变性和降解。
3.离心操作：在离心过程中，要选择适当的离心力和离心时间，以确保酶能够充分沉淀在离心管底部。
4.酶的保存：在收集到纯净酶液后，应立即将其保存在低温处，以防止酶的降解和失活。
总结：通过盐析法可以简便地对酶进行分离和纯化。
这种方法不仅操作简单，而且成本低廉，在实验室中得到了广泛应用。
在进行盐析法实验时，我们应注意选择适当的盐溶液、控制好温度和离心操作，并及时保存纯净酶液。
蛋白酶的盐析沉淀实验报告
蛋白酶的盐析沉淀实验报告班级：生工1005 学号：00 姓名：朱同辉实验目的：1.掌握使蛋白质胶体溶液保持稳定的因素；2.了解蛋白质沉淀的几种方法及其意义；3.掌握测定蛋白酶活力的原理和方法；4.学习酶活力的计算方法。
实验原理：盐析法在蛋白质溶液中加入少量中性盐，蛋白质溶解度增加，称为盐溶；而加入大量中性盐达一定浓度，蛋白质就会沉淀，称为盐析。
原理 ： ①大量盐加入后，能与蛋白质争夺水分子，去除水膜；②大量盐能中和蛋白质分子表面电荷，使分子间静电斥力减弱，疏水作用增强，使蛋白质沉淀。
盐析效果： 二价离子 > 一价离子离子半径小 > 离子半径大阳离子∶Mg2+>Ca2+>Ba2+>NH4+>Na+>K+>Pb+>Cs+ 阴离子∶PO43->SO42->Cl->Br->NO3->I->SCN-蛋白质的溶解度与盐离子强度间的关系可以用Cohn 经验式来表示：式中：S —蛋白质的溶解度 I —离子强度β—常数，与温度和pH 有关Ks —盐析常数，与蛋白质和盐的种类有关其中I 根据下式计算：式中：ci —i 离子的浓度（mol/L ） zi —i 离子所带的电荷 蛋白酶活力的测定福林（Folin ）试剂在碱性条件下可被酪氨酸还原成兰色化合物，蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸，将产物中未被水解的酪蛋白除去后与福林试剂作用，根据显兰色的深浅可以计算出酪氨酸的产生量，从而推断酶活力的大小。
蛋白酶液的稀释、酶活测定和计算K —在酪氨酸标准曲线上O.D 值为l 时酪氨酸的微克数（μg ），K 值为108.53680D .O N K 104⨯⨯⨯=酶活力IK S log s -β=2ii z c 21I ∑=N—酶液稀释倍数4—酶反应液为4 ml，取出1 ml测定，故乘以410—反应时间为10 min参考稀释倍数：原酶、饱和度20%，30%，40%，50%，60%，70%的上清液分别为1000，200，150，100，100，100，50倍实验步骤：1）蛋白质盐析分两个大组进行实验，每大组取6只烧杯编号，分别加入50 ml蛋白酶液，分别称量5.70，8.80，12.16，15.66，19.5和23.6固体硫酸铵粉末（对应20%，30%，40%，50%，60%，70%饱和度），在磁力搅拌器不断搅拌下，将其缓慢加入酶液中，加完后再搅拌5 min，使硫酸铵完全溶解。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告一、实验目的1、掌握几种常用的使蛋白质沉淀的方法。
2、理解蛋白质沉淀的原理和应用。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物。
在一定条件下，蛋白质分子会发生沉淀现象。
蛋白质沉淀的原因主要有以下几种：1、盐析：在蛋白质溶液中加入中性盐，如硫酸铵、氯化钠等，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度逐渐降低而沉淀析出。
这是因为中性盐会破坏蛋白质分子表面的水化膜，并中和蛋白质分子所带的电荷，从而使其沉淀。
盐析沉淀的蛋白质一般不变性，经透析或超滤等方法除去盐后，蛋白质仍能恢复其原有的溶解性和生物活性。
2、有机溶剂沉淀：向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂，如乙醇、丙酮等，可使蛋白质沉淀。
这是因为有机溶剂能降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子之间的静电引力，同时还能破坏蛋白质分子的水化膜，导致蛋白质沉淀。
有机溶剂沉淀的蛋白质往往会发生变性，失去其原有的生物活性。
3、重金属盐沉淀：蛋白质在碱性溶液中可与重金属离子，如汞离子、铅离子等结合形成不溶性的盐而沉淀。
这种沉淀反应是由于重金属离子与蛋白质分子中的巯基、羧基等基团结合，从而破坏了蛋白质的结构，导致其沉淀。
重金属盐沉淀的蛋白质通常会发生变性。
4、生物碱试剂沉淀：生物碱试剂，如苦味酸、鞣酸等，能与蛋白质分子中的碱性基团结合而沉淀。
这种沉淀反应常用于定性和定量分析蛋白质。
三、实验材料与仪器1、实验材料蛋白质溶液（鸡蛋清稀释液）饱和硫酸铵溶液乙醇氯化汞溶液苦味酸溶液氢氧化钠溶液醋酸溶液2、实验仪器试管试管架滴管离心机四、实验步骤1、盐析沉淀取 2 支试管，分别加入 2mL 蛋白质溶液。
向其中一支试管中逐滴加入饱和硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀为止。
将另一支试管作为对照，观察现象。
2、有机溶剂沉淀取 2 支试管，分别加入 2mL 蛋白质溶液。
向其中一支试管中逐滴加入乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀为止。
将另一支试管作为对照，观察现象。
蛋白的沉淀实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质的沉淀原理及其应用；2. 掌握常用蛋白质沉淀方法，如盐析、酸沉、有机溶剂沉淀等；3. 学习蛋白质沉淀实验的操作步骤及注意事项。
二、实验原理蛋白质在溶液中处于溶解状态，当受到某些物理或化学因素的影响时，其溶解度会降低，从而导致蛋白质从溶液中析出。
这种现象称为蛋白质的沉淀。
蛋白质沉淀的方法有很多种，常见的有盐析、酸沉、有机溶剂沉淀等。
盐析：在一定浓度的盐溶液中，蛋白质的溶解度降低，从而使蛋白质从溶液中析出。
盐析过程中，盐的浓度越高，蛋白质的沉淀效果越好。
酸沉：在酸性条件下，蛋白质的溶解度降低，从而使蛋白质从溶液中析出。
酸沉过程中，pH值越低，蛋白质的沉淀效果越好。
有机溶剂沉淀：有机溶剂能破坏蛋白质的氢键、疏水作用等，使蛋白质的溶解度降低，从而使其从溶液中析出。
有机溶剂沉淀过程中，溶剂的浓度越高，蛋白质的沉淀效果越好。
三、实验材料1. 蛋白质溶液：牛血清白蛋白（BSA）溶液；2. 盐析试剂：饱和硫酸铵溶液；3. 酸沉试剂：0.1mol/L HCl溶液；4. 有机溶剂沉淀试剂：无水乙醇；5. 实验器材：试管、移液管、量筒、磁力搅拌器、离心机等。
四、实验步骤1. 取5支试管，分别编号为1-5；2. 在1-5号试管中分别加入2ml牛血清白蛋白溶液；3. 在1号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，充分振荡后静置观察；4. 在2号试管中加入2滴0.1mol/L HCl溶液，充分振荡后静置观察；5. 在3号试管中加入1ml无水乙醇，充分振荡后静置观察；6. 在4号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，再加入2滴0.1mol/L HCl溶液，充分振荡后静置观察；7. 在5号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，再加入1ml无水乙醇，充分振荡后静置观察；8. 将所有试管在室温下静置30分钟；9. 观察各试管中蛋白质的沉淀情况，记录实验结果；10. 将沉淀后的溶液进行离心，取上清液进行分析。
五、实验结果与分析1. 盐析：在1号试管中加入饱和硫酸铵溶液后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；2. 酸沉：在2号试管中加入HCl溶液后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；3. 有机溶剂沉淀：在3号试管中加入无水乙醇后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；4. 盐析+酸沉：在4号试管中加入饱和硫酸铵溶液和HCl溶液后，蛋白质的沉淀效果更好；5. 盐析+有机溶剂沉淀：在5号试管中加入饱和硫酸铵溶液和无水乙醇后，蛋白质的沉淀效果更好。
盐析反应实验报告
1. 了解盐析反应的基本原理和过程。
2. 掌握盐析反应在蛋白质分离纯化中的应用。
3. 分析盐析反应的影响因素，如盐的种类、浓度、pH值等。
二、实验原理盐析反应是指在中性或碱性条件下，通过加入一定浓度的盐溶液，使蛋白质溶解度降低，从而实现蛋白质的沉淀分离。
蛋白质在盐溶液中的溶解度与其所带电荷有关，当盐溶液中的离子浓度增大时，蛋白质表面电荷被中和，溶解度降低，导致蛋白质沉淀。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 牛血清白蛋白（BSA）- NaCl溶液（0.1mol/L、0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L）- Tris-HCl缓冲液（pH 7.0）- 磁力搅拌器- 移液器- 离心机- 超净工作台- pH计- 紫外-可见分光光度计2. 实验试剂：- BSA标准品- 标准NaCl溶液- Tris-HCl标准溶液1. 配制不同浓度的NaCl溶液：将NaCl标准品溶解于Tris-HCl缓冲液中，配制0.1mol/L、0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L的NaCl溶液。
2. 准备蛋白质溶液：将BSA标准品溶解于Tris-HCl缓冲液中，配制成一定浓度的蛋白质溶液。
3. 测定蛋白质浓度：使用紫外-可见分光光度计测定蛋白质溶液的吸光度，计算蛋白质浓度。
4. 进行盐析实验：将不同浓度的NaCl溶液分别加入蛋白质溶液中，搅拌混合，观察蛋白质沉淀情况。
5. 离心分离：将混合液离心，收集沉淀，测量沉淀质量。
6. 沉淀复溶实验：将沉淀用Tris-HCl缓冲液洗涤，重新溶解，观察蛋白质是否复溶。
7. 记录实验数据，绘制盐析曲线。
五、实验结果与分析1. 实验结果：- 随着NaCl浓度的增加，蛋白质沉淀量逐渐增多。
- 在NaCl浓度为0.5mol/L时，蛋白质沉淀量最大。
- 在沉淀复溶实验中，蛋白质可以完全复溶。
2. 实验分析：- 盐析反应受盐的种类、浓度、pH值等因素影响。
- NaCl浓度对蛋白质沉淀影响显著，当NaCl浓度达到一定值时，蛋白质溶解度降低，发生沉淀。
蛋白质的沉淀实验报告
蛋白质的沉淀实验报告一、实验目的1、了解蛋白质沉淀的基本原理和方法。
2、掌握几种常见的蛋白质沉淀试剂的作用特点。
3、观察不同条件下蛋白质沉淀的现象，分析影响蛋白质沉淀的因素。
二、实验原理蛋白质是一种生物大分子，其分子表面带有许多可解离的基团，如氨基、羧基等，在一定的溶液 pH 值条件下，这些基团会解离，使蛋白质分子带有电荷。
此外，蛋白质分子还具有亲水性，能与水分子形成氢键，从而在水溶液中形成稳定的胶体溶液。
当溶液的条件发生改变，如加入某些试剂、改变溶液的 pH 值、温度或离子强度等，蛋白质分子表面的电荷分布和水化层会受到影响，导致蛋白质分子之间的相互作用力发生变化，从而使其从溶液中沉淀出来。
常见的蛋白质沉淀方法有盐析法、有机溶剂沉淀法、重金属盐沉淀法、生物碱试剂沉淀法等。
三、实验材料与仪器1、实验材料鸡蛋清：新鲜鸡蛋，打破后取蛋清备用。
牛血清白蛋白溶液。
饱和硫酸铵溶液。
丙酮。
3%硝酸银溶液。
10%三氯乙酸溶液。
5%鞣酸溶液。
01mol/L 氢氧化钠溶液。
01mol/L 盐酸溶液。
2、实验仪器离心机。
恒温水浴锅。
试管、滴管、玻璃棒、量筒等。
四、实验步骤1、盐析沉淀取两支试管，分别加入2ml 鸡蛋清溶液和2ml 牛血清白蛋白溶液。
向两支试管中缓慢逐滴加入饱和硫酸铵溶液，边加边轻轻搅拌，直至出现沉淀。
观察沉淀的生成情况，并记录所加饱和硫酸铵溶液的量。
2、有机溶剂沉淀取两支试管，分别加入2ml 鸡蛋清溶液和2ml 牛血清白蛋白溶液。
向两支试管中分别缓慢加入 4ml 丙酮，边加边轻轻搅拌。
观察沉淀的生成情况。
3、重金属盐沉淀取两支试管，分别加入2ml 鸡蛋清溶液和2ml 牛血清白蛋白溶液。
向两支试管中分别缓慢滴加 3%硝酸银溶液，边加边轻轻搅拌，观察沉淀的生成情况。
4、生物碱试剂沉淀取两支试管，分别加入2ml 鸡蛋清溶液和2ml 牛血清白蛋白溶液。
向两支试管中分别缓慢滴加 5%鞣酸溶液，边加边轻轻搅拌，观察沉淀的生成情况。
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实验二碱性蛋白酶的盐析沉淀一．实验目的和要求
1.了解盐析沉淀法的基本原理和实验方法。
2.以2709碱性蛋白酶为实验对象，建立酶溶解度和盐离子强度之间
的关系式（Cohn 经验式），并作出曲线图。
3.通过对酶活性的测定和收率计算，综合评价盐析沉淀的最适工艺
条件。
二．实验原理
盐析沉淀法是生物大分子物质蛋白质（酶）常用的提取方法。
其原理与蛋白质的表面结构有关，盐析产生沉淀是两种因素共同作用的结果，即蛋白质表面疏水键之间的吸力和带电基团吸附层的静电斥力作用。
在盐析溶液中后者作用大于前者，产生盐析现象，但在高盐溶液中作用相反，故产生盐析沉淀。
对蛋白质（酶）而言，溶解度与盐离子强度之间关系符合Cohn经验式（式1-4-1）:
LgS=β-ksI
式中：S—蛋白质（酶）的溶解度
I—盐离子强度
I= 1/2∑C i Z i2
式中：Ci—i离子的物质的量浓度（mol/L）
Zi—i离子所带电荷
β—常数，与盐的种类无关，而与温度和PH有关
Ks—盐析常数，与温度和PH无关，与蛋白质（酶）和盐种类有关
上式为LgS对I的线性方程，反映了不同蛋白质（酶）的盐析特征。
通过本实验求出一定的条件下（PH和温度）碱性蛋白酶的Ks 和β，建立其盐析方程。
盐析中，常用的盐析剂为硫酸铵。
硫酸铵的加量有不同的表示方法，常用“饱和度”来表征其在溶液中的最终浓度，“饱和度”的定义为在盐析溶液中所含的硫酸铵质量与该溶液达到饱和所溶解的硫酸铵质量之比。
25℃时硫酸铵的饱和浓度为4.1mol/L（即767g/L），定义它为100﹪饱和度，为了达到所需的饱和度，应加入固体硫酸铵的量可由附五查的。
在一定条件下，无机盐的加量对盐析收率和酶的纯度影响很大，适宜的加量应从收率和纯度两方面综合考虑。
三：实验器材与试剂
（一）器材
高速冷冻离心机，电子台秤，真空干燥箱，酸度计，移液吸管（或可调式移液器），烧杯，搅拌棒和量筒等。
（二）试剂
碱性蛋白酶粗淀粉，硫酸铵和NaOH等。
四.操作方法
1.制备酶液
称取一定的量粗淀粉，加入适量40—50℃温水，40℃水浴中侵泡
并搅拌30min,高速冷冻离心机离心:10℃,9000—10000r/min，30min,取出上清液，。