从牛奶中提取酪蛋白
牛奶中酪蛋白含量的测定
牛奶中酪蛋白含量的测定牛奶是一种营养丰富的饮品，其中富含多种蛋白质，而酪蛋白是牛奶蛋白质中的主要成分之一。
准确测定牛奶中酪蛋白的含量对于评估牛奶的质量、了解其营养价值以及在相关的食品加工和研究中都具有重要意义。
酪蛋白是一种磷蛋白，在牛奶中以胶束的形式存在。
它的性质相对稳定，在一定的条件下可以从牛奶中沉淀分离出来。
目前，测定牛奶中酪蛋白含量的方法主要有以下几种：一、等电点沉淀法酪蛋白在其等电点（pH 46 48）时溶解度最低，容易沉淀析出。
实验操作时，首先将新鲜牛奶用脱脂棉过滤，以去除其中的杂质。
然后将牛奶缓慢加入到预先调节好 pH 值至 46 48 的醋酸醋酸钠缓冲溶液中，并不断搅拌。
搅拌均匀后静置一段时间，使酪蛋白充分沉淀。
接着通过离心分离的方式将沉淀的酪蛋白收集起来，用蒸馏水多次洗涤，以去除残留的乳清蛋白和其他杂质。
最后将沉淀烘干至恒重，通过称重计算出酪蛋白的含量。
这种方法的优点是操作相对简单，成本较低。
但缺点是沉淀过程中可能会有少量的乳清蛋白一同沉淀下来，导致测定结果偏高。
二、盐析法盐析是指在蛋白质溶液中加入大量的中性盐，以破坏蛋白质的水化膜并中和其电荷，从而使蛋白质沉淀析出。
对于牛奶中酪蛋白的测定，可以使用硫酸铵等盐类进行盐析。
实验时，将牛奶与一定浓度的硫酸铵溶液混合，搅拌均匀后静置一段时间，使酪蛋白沉淀。
同样通过离心、洗涤、烘干等步骤，最终得到酪蛋白的质量并计算其含量。
盐析法的优点是沉淀效果较好，能够较为有效地分离酪蛋白。
但需要注意的是，盐的浓度和使用量需要严格控制，否则可能会影响测定结果的准确性。
三、电泳法电泳是指带电粒子在电场中向着与其所带电荷相反的电极移动的现象。
利用电泳技术可以分离和测定牛奶中的酪蛋白。
首先，对牛奶样品进行预处理，使其中的蛋白质溶解并带电。
然后将处理后的样品加入到电泳槽中，施加电场。
由于酪蛋白和其他蛋白质的带电性质、分子量等不同，它们在电场中的迁移速度也不同，从而实现分离。
酪蛋白的制备实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除酪蛋白的制备实验报告篇一：酪蛋白的制备----生化实验酪蛋白的制备一、目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
二、原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的ph调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜牛奶（一）试剂1、95%乙醇1200mL2、无水乙醚1200mL3、0.2mol/Lph4.7醋酸——醋酸钠缓冲液300ml先配A液与b液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称naAc·3h2o54.44g，定容至2000ml。
b液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。
取A液1770ml，b液1230ml混合即得ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（V/V）（二）器具1、离心机2、抽滤装置3、精密ph试纸或酸度计4、电炉5、烧杯6、温度计四、操作步骤（一）酪蛋白的粗提100mL牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、ph4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密ph试纸或酸度计调ph至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心15分钟（3000r/min）。
弃去清液，得酪蛋白粗制品。
（二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。
2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。
（三）准确称重，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
五、注意事项1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。
生物分离实验案例
氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为 35g/L，比较稳定，利 水中。两液混匀后，在搅拌下加入 10%NaOH300mL，后用水稀释至 1000mL，
用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。
贮存于塑料瓶中。此液可长期保存，若瓶底出现黑色沉淀则需重新配制。
酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消逝，
弃上清液，收集沉淀。一份沉淀用于“除杂〞步骤，另一份沉淀用 0.1MNaOH 温下反应 30min，测定 540nm 波
溶液溶解并定容至 100mL，用于“酪蛋白含量测定〞步骤。
长处吸光度，查标准曲线，求得酪蛋白质量。平行测定 3 次，求其平
2、除杂
均值，并计算 25mL 牛乳中酪蛋白的质量〔m2〕。
试验一：牛乳中酪蛋白的提取
液中可与铜离子形成紫红色化合物，在 540nm 波长处有最大汲取，其颜色
一、试验目的
深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸组成无关。
1、把握等电点法提取蛋白的基本原理及基本操作；2、把握双缩脲法
三、材料与试剂
测定蛋白含量的基本原理及基本操作。
市售牛奶
二、试验原理
10mg/mL 酪蛋白标准溶液〔用 0.1MNaOH 配制〕0.1MNaOH 溶液、
本文格式为 Word 版，下载可任意编辑，页眉双击删除即可。
然后在 5000r/min 下，离心 15min，收集上清液得提取液。
自氧化过程中产生有色中间物和 O2-自由基，反应开始后溶液渐渐变成黄
留出 1mL 备用，剩余提取液精确量取体积后进行下步试验。3、除杂 色，在有超氧化物歧化酶存在时，由于它能催化 O2-自由基与+H 结合生成
2、酪蛋白提取得率的计算
酪蛋白提取实验报告
酪蛋白提取实验报告酪蛋白提取实验报告引言：酪蛋白是一种重要的蛋白质成分，存在于牛奶等乳制品中。
本实验旨在通过提取酪蛋白，探索其在食品工业和医药领域的应用潜力。
通过实验过程的详细描述和结果的分析，我们将深入了解酪蛋白提取的方法和效果。
实验材料与方法：1. 材料：牛奶、氯化钙、硫酸、酒精、磷酸盐缓冲液等。
2. 方法：a. 酪蛋白的沉淀：将牛奶加热至80°C，加入少量氯化钙搅拌，冷却后加入硫酸沉淀酪蛋白。
b. 酪蛋白的溶解：将酪蛋白沉淀加入磷酸盐缓冲液，搅拌溶解。
c. 酪蛋白的纯化：将溶解的酪蛋白加入酒精，离心沉淀，去除杂质。
实验过程：1. 酪蛋白的沉淀：将适量牛奶加热至80°C，加入少量氯化钙搅拌，冷却后加入硫酸，酪蛋白逐渐沉淀。
2. 酪蛋白的溶解：将沉淀后的酪蛋白加入磷酸盐缓冲液，搅拌溶解，形成均匀的溶液。
3. 酪蛋白的纯化：将溶解的酪蛋白加入酒精，离心沉淀，去除杂质，得到纯净的酪蛋白。
实验结果与讨论：通过实验，我们成功地提取到了酪蛋白，并进行了初步的纯化。
在实验过程中，我们观察到牛奶在加热后出现了沉淀，这是因为加热使酪蛋白发生凝聚而形成的。
随后，我们通过加入磷酸盐缓冲液将酪蛋白溶解，得到了均匀的溶液。
最后，通过加入酒精并进行离心，我们成功地去除了酪蛋白溶液中的杂质，得到了纯净的酪蛋白。
酪蛋白作为一种重要的蛋白质成分，具有广泛的应用潜力。
在食品工业中，酪蛋白可用于制作奶酪、酸奶等乳制品，增加其营养价值和口感。
此外，酪蛋白还可以作为食品添加剂，提高食品的稳定性和质感。
在医药领域，酪蛋白具有抗菌、抗病毒等生物活性，可以应用于药物的载体材料和生物医学领域。
然而，本实验中的提取方法仅是初步的纯化过程，酪蛋白的纯度还有待进一步提高。
在实际应用中，需要根据具体需求选择更加精细的提取和纯化方法，以获得更高纯度的酪蛋白。
此外，酪蛋白的稳定性也需要进一步研究，以确保其在不同环境条件下的应用效果。
牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和鉴定
牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和鉴定肖丽王进（武汉大学化学与分子科学学院，2001级化学基地班）摘要：本文用实验的方法分离出牛奶的主要组成物质酪蛋白和乳糖，并用其特征反应和化学特性定性定量地检验了所分离的产物。
关键词：酪蛋白，乳糖，等电点，纸电泳，分离。
1 引言牛奶是一种营养价值丰富且易被人体吸收的物质。
现代研究表明，牛奶中所含的水，蛋白质，脂肪，糖，无机盐，维生素等都容易被人体吸收利用，除具有较高的营养价值外，对一些疾病还有一定治疗作用和保健养老作用。
酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋白质的复杂混合物，在牛奶中以钙盐存在。
酪蛋白是两性化合物，当调节牛奶的pH值到酪蛋白的等电点（pH=4.8）时，酪蛋白呈电中性，这时酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出来。
本实验利用酪蛋白的这种性质对其进行分离。
酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，因此分离后用乙醇和乙醚洗去其中残留的脂肪。
牛奶中的糖主要是乳糖。
乳糖是一种还原性二糖，是目前唯一由哺乳动物合成的糖，以α-乳糖和β－乳糖两种同分异构体存在，在水溶液中两种乳糖可以相互转化，故水溶液有变旋光现象。
乳糖不溶于乙醇，本实验使用乙醇使它结晶，达到分离目的。
2 实验部分2.1 原料和仪器50 ml烧杯, 100 ml量筒，数字旋光异仪，蒸发皿，水浴锅，电泳仪，精密PH 试纸，简单抽滤装置。
冰HAc，95%乙醇，新鲜牛奶（伊利牌），碳酸钙，乙醚，考马斯亮蓝试剂，硫酸铜，氢氧化钠。
2.2 分离实验（1）酪蛋白的分离：步骤：取20ml新鲜牛奶于50ml烧杯中，在恒温水浴中加热到50ºC，不断搅拌下滴加10%HAc,用精密PH试纸调节牛奶的PH值至4.6~4.8（理论等电点pH=4.8，此步操作见后讨论），空气中放置一段时间冷却，之后过滤出其中的酪蛋白（滤液中加少量碳酸钙，留做下部实验用），依次用乙醇，乙醇和乙醚等体积混合液，乙醚洗涤酪蛋白，除去其中的脂肪，将其转入到表面皿上，在空气中风干后称重，得酪蛋白1.4218 g。
实验三 牛乳中酪蛋白的制备与鉴定
（6）准确称重，计算牛乳中酪蛋白含量（g/100mL）, 并与理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。
8
四、实验步骤
2、酪蛋白的溶解度鉴定： 取6支试管，分别加入蒸馏水、10%氯化钠、0.5%碳 酸钠、0.1mol/L氢氧化钠、0.2%盐酸及饱和氢氧化钙各 1mL。于每管中加入少量酪蛋白，不断摇荡，观察并记录
10
五、实验结果、计算与分析
1、酪蛋白含量（g/mL）=酪蛋白g/10mL ×100%
2、酪蛋白得率=测定含量/理论含量×100%
3、酪蛋白溶于哪些溶液？ 4、酪蛋白的双缩脲反应分析。11 Nhomakorabea12
六、思考题
1、为什么调整溶液的pH值可以将酪蛋白沉淀 出来？
2、氨基酸是否能发生双缩脲反应？为什么？
13
各管中酪蛋白的溶解度。
9
四、实验步骤
3、酪蛋白的颜色反应（双缩脲反应）： 取少量尿素结晶，放入干燥的试管，微火加热使尿素熔
化，熔化的尿素开始硬化时停止加热，尿素放出氮，形成双 缩脲。冷却后，加入1mL 10％NaOH溶液，振荡混匀，再加 入数滴 1％CuSO4溶液，振荡，观察实验现象。（此步骤由 教师演示。） 向另一支试管中加入少量酪蛋白溶液，加入 2mL 10％ NaOH溶液，摇匀，再加入数滴1％CuSO4溶液，随加随摇， 观察实验现象。
6
四、实验步骤
1、酪蛋白的制备： （1）量取10mL牛奶置于25mL刻度试管中，水浴中加 热至40℃。在搅拌下慢慢加入10mL预热至40℃的乙酸-乙 酸钠缓冲液（pH4.6）。用精密试纸调pH值至4.8（可选择 1%氢氧化钠或10%乙酸溶液进行调整）。40℃保温10min， 使沉淀完全。 （ 2）将上述悬浮液冷却至室温。 2000r/min离心 5min ，
酪蛋白检测实验报告
一、实验目的1. 掌握酪蛋白的提取方法。
2. 学习利用等电点沉淀法检测酪蛋白的含量。
3. 了解蛋白质的沉淀、溶解等性质。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，含量约为35g/L。
酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物，其等电点为4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，会以沉淀形式从牛奶中析出。
本实验通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点，使酪蛋白沉淀，然后通过离心、洗涤等步骤提取酪蛋白，并利用沉淀重量法检测酪蛋白的含量。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶2. 试剂：- 95%乙醇- 无水乙醚- 0.2mol/L pH 4.7醋酸-醋酸钠缓冲液- 0.2mol/L氢氧化钠溶液- 0.1mol/L盐酸溶液- 精密pH试纸或酸度计- 离心机- 烧杯- 温度计- 研钵- 天平四、实验步骤1. 酪蛋白提取- 取50mL新鲜牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌边加入稀醋酸溶液约2mL，观察白色沉淀析出。
- 继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心15min。
- 离心完毕后，弃去上清液，得到酪蛋白沉淀。
2. 酪蛋白洗涤- 将酪蛋白沉淀用少量去离子水洗涤2次，弃去上清液。
- 用95%乙醇洗涤沉淀2次，弃去上清液。
- 用无水乙醚洗涤沉淀2次，弃去上清液。
3. 酪蛋白干燥- 将洗涤后的酪蛋白沉淀置于研钵中，用研棒轻轻研磨，使酪蛋白沉淀充分干燥。
- 将干燥后的酪蛋白沉淀转移到称量瓶中，于105℃烘干2小时，取出，置于干燥器中冷却至室温，称量。
4. 酪蛋白含量测定- 取一定量的酪蛋白沉淀，加入0.1mol/L盐酸溶液，使酪蛋白溶解。
- 将溶液转移至容量瓶中，定容至刻度线，摇匀。
- 取一定量的溶液，加入0.2mol/L氢氧化钠溶液，使溶液pH值调至4.7，观察酪蛋白沉淀析出。
- 将沉淀转移至离心杯中，于3000r/min离心15min。
- 弃去上清液，称量沉淀重量，计算酪蛋白含量。
牛乳中酪蛋白的制备
思考题
1．制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
ห้องสมุดไป่ตู้
牛乳中酪蛋白的制备
操作方法
1．将25mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、 pH4.7醋酸缓冲液25mL。用精密试纸调pH值至4.7。
2. 将上述悬浮液冷却至室温。离心10min(3000r/min)弃 去上清液，得酪蛋白粗制品。
3．用水洗沉淀两次，离心5min(3000r/min)，弃去上清液。
3．用乙醇洗沉淀1次，离心5min(3000r/min)，弃去上清 液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。最后用乙醚洗沉淀1次， 各离心5min(3000r/min) 。
4．将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。
5．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和 理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验二从牛奶中提取酪蛋白
一、实验目的要求
1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。
2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。
二、实验原理
牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。
酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、原料与器材
鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。
四、试剂
1.95%乙醇
2.无水乙醚
3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液
A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。
B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。
取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。
4.乙醇-乙醚混合液
乙醇：乙醚=1：1（体积比）。
五、操作步骤
1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。
观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。
2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。
3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。
4.将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白精制品。
5.称取所获酪蛋白的质量（g）。
六、计算含量和得率：
酪蛋白含量（g/ml）=酪蛋白（g）/50m l×100%；
得率=测得含量/理论含量×100%。
七、实验注意事项：
1.离心管中装入样品后必须严格配平，否则对离心机损坏严重；
2.离心管装入样品后必须盖严，并擦干表面的水分和污物后方可放入离心机。
3.离心机用完后应拔下电源，然后检查离心腔中有无水迹和污物，擦除干净后才能盖上盖子放好保存，以免生锈和损坏。
八、思考题：
1.为什么调整溶液的pH可以将酪蛋白沉淀出来？
2.试设计一个利用蛋白质其他性质提取蛋白质的实验。
实验准备（每小组用量）
1.试剂：
（1）鲜牛奶10ml；
（2）0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液10ml；
（3）95%的乙醇6ml；
（4）乙醇-乙醚混合液（乙醇：乙醚=1：1<体积比>）6ml；
（5）乙醚4ml；
（6）蒸馏水若干。
2.器材：
（1）恒温水浴锅；
（2）台式离心机；
（3）抽滤装置（循环水抽滤泵）；
（4）精密pH试纸（2条）或酸度计；
（5）表面皿；
（6）纱布或滤纸；
（7）剪刀；
（8）毛细管或细口吸管；
（9）离心管（1.5ml，或与离心机配套）若干，总容积应大于10ml，本实验中用1.5ml离心管约10个/小组。