龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松模型大鼠血清Ⅰ型胶原氨基端延长肽影
龟鹿二仙汤含药血清对大鼠成骨细胞细胞周期调控的研究
１ ． ２ 龟鹿 二仙 汤含 药血 清 的 制备
根据文献 ［ １ ］ 方
法， 取Ｓ Ｄ雄性 大 鼠 ２ ０只 ， 随 机分 为 ２组 ， 每组 ｌ ０只 。 龟鹿 二仙 汤药 物组 ， 给 药量按 成人 日临床 剂量 ， 经 人 鼠 体表 面积 换算 为成 人剂 量 ， 再 以 ６倍量 灌 胃给药 ， 每日 ２次 ， 每次 ３ ． ５ ｍＬ （ 含 生药 量为 ２ ． ６ ４ ｇ ／ ｍ Ｌ ） ， 连续 ３ ｄ ， 于 末 次给药 后 １ ｈ采 血 ， 分 离血 清 ， ５ ６℃水浴 灭活 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ， 过滤分 装 。 置低 温冰 箱备 用 。 按 以上 方法 用 同体积 生理
孔培 养板 ， 待 细胞 贴壁后 ， 换 含药 血清 和对 照血 清培 养 液。 按 培养 液所 含血 清浓 度 ， ３个浓 度组 ， １ ４孑 Ｌ 重复 ， 分
别培 养 ２ ４ 、 ４ ８ 、 ７ ２ ｈ 。在 培 养结束 前 ４ ｈ ， 每 孔各 加 Ｍｒ 兀１ （ ５ ｍｇ ／ ｍＬ ） ２ ０ Ｉ ｘ Ｌ ， ３ ７℃温 育 ４ ｈ后 弃 培 养液 ， 加Ｄ ＭＳ ０ ２ ０ ０ ｔ ｘ Ｌ。 用 微量 振 荡 器振 荡 １ ０ ｍ ｉ ｎ ， 在 酶 标仪 上 测 Ｏ Ｄ
磷 酸对 硝基 苯酯 （ Ｐ Ｎ Ｐ Ｐ ） ￣ －钠 盐 法 ， 用酶 标 仪 于 ４ ０ ５波 长处 ， 测Ｏ Ｄ值 （ 参见 碱性磷 酸 酶试剂 盒 ） 。 １ ． ５ 成 骨细 胞增 殖 测定 （ ＭＴ ｒ法 ） 取第 ３代 传代 细 胞， 按 ４ ｘ ｌ ０ ４ 个／ ｍ Ｌ细 胞 密 度 ， 每孔 ２ ０ ０ Ｌ接 种 于 ９ ６
龟鹿二仙胶源流考辨与研究进展
龟鹿二仙胶源流考辨与研究进展
沈童;刘芬芬;周亚博;杨俊红
【期刊名称】《世界中医药》
【年(卷),期】2022(17)17
【摘要】龟鹿二仙胶始载于《医便》,为阴阳气血交补之剂。
由龟甲、鹿角、人参、枸杞子组成,主要含有胶原蛋白、脂肪酸、人参皂苷、枸杞多糖、氨基酸等成分。
实验研究发现龟鹿二仙胶通过多种作用机制发挥抗炎镇痛、调节免疫、抑制肿瘤等作用,临床广泛应用于治疗骨骼、血液、生殖、神经系统疾病以及辅助治疗肿瘤。
现围绕龟鹿二仙胶的源流与研究进展梳理相关文献,以期为后续深入研究提供参考。
【总页数】7页(P2517-2523)
【作者】沈童;刘芬芬;周亚博;杨俊红
【作者单位】河南中医药大学;河南中医药大学第一附属医院
【正文语种】中文
【中图分类】R289.5
【相关文献】
1.龟鹿二仙胶抗肿瘤机制研究进展
2.龟鹿二仙胶在骨质疏松症领域研究进展及其现代应用迷思
3.龟鹿二仙胶及其拆方对去势骨关节炎大鼠血清雌二醇浓度及膝关节
软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响4.基于网络药理学探讨龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症
的作用机制5.龟鹿二仙胶加味方联合泼尼松片治疗Duchenne型肌营养不良的疗
效观察
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血清总I型胶原氨基端延长肽和I型胶原羧基端肽在骨质疏松症并发骨折检测的临床意义
血清总I型胶原氨基端延长肽和I型胶原羧基端肽在骨质疏松症并发骨折检测的临床意义李丽【期刊名称】《黑龙江医药》【年(卷),期】2014(000)006【摘要】Objective: To investigate the clinical significance of TPINP and CTX in osteoporosis and its complications such as tractures. Methods:A retrospective analysis was conducted on the petients who were initially diagnosed as osteoporosis. A total of 57 patients were inclued for analysis between January 2013 and July 2014. And TPINP and CTX of these patients were detected by Cobas e411. The results were analysis by T test. Results:Compared with controls, the patients of osteoporosis and its complications such as Tractures expressed higher levels of TPINP(94.9±5.49ng/ml and 35.06±2.74ng/m) and CTX (0.89±0.05 ng/ml and0.36±0.02 ng/ml) (p<0.01). Conclusion:TPINP and CTX may be a no val biomarker for auxiliary diagnosis of osteoporosis and its complications such as tractures and could be useful to understand state of illness.%目的：探讨骨形成标志物血清总I型胶原氨基端延长肽（TPINP）和骨重吸收标志物I型胶原羧基端肽（CTX）在骨质疏松症并发骨折患者中临床检测的意义。
左、右归丸及其拆方对去卵巢骨质疏松模型大鼠的比较研究
左、右归丸及其拆方对去卵巢骨质疏松模型大鼠的比较研究孙月娇;任艳玲;曲宁宁;孟玥;李书娟【期刊名称】《中国骨质疏松杂志》【年(卷),期】2015(021)008【摘要】Objective To observe the effect of Zuogui pill, Yougui pill, and their disassembled prescriptions on ovariectomized osteoporotic rats, and to compare their preventive and treatment effect on postmenopausal osteoporosis.Methods Ninety rats were randomly divided into blank control group, sham operation group, model group, estradiol valerate group, Zuogui pill group, Yougui pill group, drug combination group, nourishing Yin pill group, and tonifying Yang pill group, with 10 rats in each group. Ovariectomy was performed to create the rat osteoporosis model.After 12-week treatment, BMD of the lumbar vertebrae 3, 4, and 5 was detected using dual energy X-ray bone densitometry.Wet weight of the rat uterine was weighed, and uterine index was calculated.Serum alkaline phosphatase (ALP), osteocalcin (OC), and procollagen type I carboxy-terminal propeptide (PICP) expression were determined using enzyme linked immunosorbent assay.Results Compared to those in the blank group, ALP, BGP, and PICP increased in model group( P<0.05) .Compared to those in the model group, the uterus index and BMD increased in each treatment group, and ALP, BGP, and PICP decreased in different extent (P<0.05).The best effect was achieved inZuogui pill group.Conclusion The Chinese medicine of tonifying kidney recipe has the prevention and treatment effect on osteoporosis in ovariectomized rats.It inhibits bone resorption in a certain extent and promotes bone formation.The effect of Zuogui pill is more obvious on nourishing kidney Yin and essencing replenishments.%目的观察左、右归丸及其拆方对去卵巢骨质疏松模型大鼠的影响,比较并探讨其对绝经后骨质疏松症的防治作用.方法将90只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、补佳乐组、左归丸组、右归丸组、共同药组、滋阴药组、补阳药组,每组10只. 通过去卵巢制备绝经后骨质疏松症大鼠模型,经12周药物治疗,取大鼠3、4、5节腰椎进行双能X 线骨密度检测;称取大鼠子宫湿重,计算子宫指数;通过酶联免疫法检测血清碱性磷酸酶( Alkaline phosphatase,ALP)、骨钙蛋白( Osteocalcin,OC)、Ⅰ型前胶原羟基端前肽( Procollagen typeⅠcarboxy-terminal propeplide,PICP)表达. 结果与对照组比较,模型组子宫指数、骨密度均有下降,ALP、OC、PICP水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组子宫指数、骨密度有所提高,ALP、BGP、PICP水平有不同程度降低( P<0.05) ,其中左归丸效果较好. 结论中医补肾方药对去卵巢骨质疏松大鼠具有防治效果,并在一定程度上可能起到抑制骨吸收,促进骨形成的作用;其中以滋阴补肾,填精益髓的代表方剂左归丸作用更加显著.【总页数】5页(P910-913,921)【作者】孙月娇;任艳玲;曲宁宁;孟玥;李书娟【作者单位】辽宁中医药大学,沈阳 110847;辽宁中医药大学,沈阳 110847;辽宁中医药大学,沈阳 110847;辽宁中医药大学,沈阳 110847;辽宁中医药大学,沈阳110847【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs成骨、成脂分化后Caspase-3/Bcl-2的影响[J], 孙千惠;任艳玲;吴琼;葛心慈2.左、右归丸及其拆方对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 [J], 宋囡;何文智;王智民;任艳玲3.左归丸、右归丸对去卵巢骨质疏松大鼠神经肽CGRP、SP、VIP、NPY的影响[J], 杨锋;杨利学;李小群;李彦民4.左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响 [J], 葛心慈;徐岩;吴琼;孙千惠;任艳玲5.基于OPG/RANKL/RANK轴观察加味阳和汤及其拆方对去卵巢骨质疏松大鼠的影响 [J], 曹端广;杨文龙;夏汉庭;吴凡;许权;杨凤云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
龟鹿二仙胶含药血清诱导大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的作用及机制
【 中图分类 号】 Ｒ ２ ８ ５ ． ５
【 文献 标识码 】 Ａ
【 文章 编号】 １ ６ ７ ３ — ７ ２ １ ０ （ ２ ０ １ ５ ） １ １ （ ａ ） 一 ０ ０ ０ ８ — ０ ５
Ｅｆ ｆｅ ｃ ｔ ｓ ａ ｎｄ ｍｅ ｃ ｈａ ｎ ｉ ｓ ｍｓ ｆ ｏ ｒ Ｇｕｉ ｌ ｕ Ｅｒ ｘ ‘ ｌ ａ ｎ Ｇｌ ｕｅ— ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎｇ ｓ ｅ ｒ ｕｍ Ｏ ｉ ｌ ｔ ｈｅ
ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｏ ｒ ｔ ｈ ｏ ｐ ｅ ｄ ｉ ｃ ｓ ，ｔ ｈ ｅ Ｆ ｉ ｒ ｓ ｔ Ａ ｆ ｆ ｉ ｌ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ，Ｆ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ ３ ５ ０ ０ ０ ５ ，
为Ｉ Ｏ ％Ｆ Ｂ Ｓ 组、 １ ０ ％Ｋ Ｂ组 、 １ ０ ％Ｇ Ｌ Ｅ Ｘ Ｊ 组和 Ｃ ｌ ａ ｓ ｓ ｉ ｃ ａ ｌ 组， 检 测碱 性 磷酸 酶 （ Ａ ｌ ｋ ａ ｌ ｉ ｎ ｅ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ａ ｓ ｅ ， Ａ Ｌ Ｐ ） 比活性 ， 茜
素红染色方法观察对 Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ 成骨分化的作用 ， Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ方法和 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 检测 Ｆ ｚ ｄ 一 ２ 、 Ａ ｘ ｉ ｎ 一 ２ 基因和蛋白表达
０ ． ０ １ ） ， 茜素 红染色 见橘 红色钙 结节 着 色 ； Ｉ Ｏ ％Ｇ Ｌ Ｅ Ｘ Ｊ 组Ｆ ｚ ｄ 一 ２ ｍ Ｒ Ｎ Ａ和蛋 白表 达 水平 显著 高于其 余各 组 ， 差 异均 有 统计 学意 义 （ Ｐ＜０ ． ０ ５ 或 Ｐ＜０ ． Ｏ １ ） ； Ｉ Ｏ ％Ｇ Ｌ Ｅ Ｘ Ｊ 组Ａ ｘ ｉ ｎ 一 ２ ｍ Ｒ Ｎ Ａ和蛋 白表 达水 平显 著低 于 １ ０ ％Ｆ Ｂ Ｓ 组和 １ ０ ％ Ｋ Ｂ组 ， 差异 均有统计 学意 义 （ Ｐ＜０ ． ０ ５ 或 Ｐ＜０ ． ０ １ ） 。 结论 龟 鹿二仙 胶含 药 血清 能促 进 Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ 增 殖 并诱 导 其 向 成 骨 细胞 分化 ， 其机 制 可 能与增 强 Ｆ ｚ ｄ 一 ２ 表达 、 抑制 Ａ ｘ ｉ ｎ 一 ２ 表 达 和激 活 Ｗｎ ｔ ／ １ ３ 一 ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ 通 路密切 相关 。
仙鹿壮骨方对骨质疏松大鼠I型胶原基因表达的影响
仙鹿壮骨方对骨质疏松大鼠I型胶原基因表达的影响韩丽萍;魏敏惠;刘实;张恩户;史亚军;赵锦荣;郭洁;王成【期刊名称】《陕西中医》【年(卷),期】2006(027)009【摘要】目的:研究补肾中药仙鹿壮骨方对骨质疏松症大鼠骨组织I型胶原基因mRNA表达的影响.方法:用地塞米松制造骨质疏松症大鼠模型,给予不同剂量的仙鹿壮骨方药,并与西药补钙剂对照观察.测定大鼠骨密度,以荧光定量PCR检测I型胶原基因表达水平.结果:模型组骨密度明显下降,治疗各组骨密度均有提高.模型组I型胶原基因表达显著下降,治疗各组I型胶原基因表达明显上升,上升幅度以中药大剂量组最高,西药组次之,中药小剂量较差.结论:补肾中药仙鹿壮骨方能促进地塞米松型骨质疏松症大鼠I型胶原的合成,其防治骨质疏松症可能是通过促进骨组织中I型胶原基因的表达,提高骨密度而实现的.【总页数】2页(P1151-1152)【作者】韩丽萍;魏敏惠;刘实;张恩户;史亚军;赵锦荣;郭洁;王成【作者单位】陕西中医学院,712046;陕西中医学院,712046;陕西中医学院,712046;陕西中医学院,712046;陕西中医学院,712046;第四军医大学基因研究所;陕西中医学院,712046;陕西中医学院,712046【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.仙鹿壮骨方对大鼠骨钙素及骨密度影响的拆方研究 [J], 韩丽萍;王相东;魏敏惠;刘实;王小宁;史亚军;于克慧2.壮骨止痛方对骨质疏松大鼠核因子κB受体活化因子配体和骨保护素的影响 [J], 杨军;曲璇;莫新民;张博涵3.基于转录组测序分析壮骨止痛方治疗去势大鼠骨质疏松症的基因表达差异 [J], 陈红琼;杨珊珊;陈瑶;郁洁;雷晓明4.仙鹿壮骨方对骨质疏松大鼠骨密度及其形态结构的影响 [J], 韩丽萍;魏敏惠;张恩户;史亚军;刘实;方改英;李涛;张小琴5.仙鹿壮骨方对去卵巢大鼠骨质疏松症骨密度和血清降钙素的影响 [J], 李环;韩丽萍;梁芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
龟鹿二仙胶含药血清对顺铂培养大鼠T淋巴细胞影响的实验研究
龟鹿二仙胶含药血清对顺铂培养大鼠T淋巴细胞影响的实验研究陆金华;钟亚珍;林胜友【期刊名称】《中国中医药科技》【年(卷),期】2018(025)003【摘要】目的:体外观察龟鹿二仙胶合药血清对顺铂培养T淋巴细胞活力、凋亡及自噬的影响,探讨其对T淋巴细胞的保护机制.方法:大鼠T淋巴细胞分别使用顺铂、中药血清、顺铂+中药血清培养干预,并设立空白对照组.CCK法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,电镜技术观测细胞自噬情况自噬体.结果:干预12 h后,顺铂组细胞活力明显下降(P＜0.01),凋亡明显增多(P＜0.01),细胞内可见明显的自噬体、溶酶体;顺铂+中药血清组细胞活力较顺铂组明显上升(P＜0.01),凋亡明显减少(P＜0.01),细胞内自噬体、溶酶体减少.干预24 h后,上述结果倾向性更明显.结论:龟鹿二仙胶能够减少化疗药物作用后大鼠T淋巴细胞的凋亡,增强其活力;其作用机制可能与抑制细胞自噬过程有关.【总页数】4页(P328-331)【作者】陆金华;钟亚珍;林胜友【作者单位】浙江省杭州市肿瘤医院浙江杭州310000;浙江省杭州市肿瘤医院浙江杭州310000;浙江省杭州市肿瘤医院浙江杭州310000【正文语种】中文【相关文献】1.龟鹿二仙胶醇提物含药血清对体外培养破骨细胞骨吸收功能的影响 [J], 杨树华;邱慈鑫;陈泽荣;陈泽华;林海英;李楠;王和鸣2.龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松模型大鼠血清Ⅰ型胶原氨基端延长肽影响的实验研究 [J], 张瑶;朱旭;刘菊;马威3.龟鹿二仙胶含药血清干预大鼠T细胞化疗后自噬的初步研究 [J], 陆金华;钟亚珍;王珏;林胜友4.龟鹿二仙胶含药血清诱导大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的作用及机制 [J], 牛素生;李楠;张燕;刘俊宁;林建华5.龟鹿二仙胶抵抗化疗小鼠脾T淋巴细胞凋亡的实验研究 [J], 林胜友;沈敏鹤;陈健;徐莉;刘振东;蒋福升;丁志山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
二仙汤对去势后大鼠骨质疏松的影响研究
二仙汤对去势后大鼠骨质疏松的影响研究目的：研究二仙汤对去势大鼠骨质疏松的影响及机制。
方法：将50只SD 雌性大鼠随机分为5组，连续给药12周。
第6周测尿脱氧吡啶酚（DPD），尿肌酐（U-Cr），U-DPD/Cr。
第12周取血清测血钙（S-Ca）、血磷（S-P）、骨钙素（BGP）、I型前胶后羧基端前肽（PICP）、I型胶原交联N末端肽；取股骨测量骨密度（BMD）并行股骨形态学分析。
结果：各组S-P无统计学意义。
模型组与假手术组比较，DPD，U-Cr，U-DPD/Cr，NTX显著升高，S-Ca，BGP，PICP显著降低，BMD 降低；与模型组比较，二仙汤各组和雌激素组DPD，U-Cr，U-DPD/Cr，NTX显著降低，S-Ca，BGP，PICP显著升高，BMD升高。
结论：二仙汤可以促进骨形成，抑制骨吸收，维持骨再建过程中骨代谢平衡，提高骨密度，从而起到抗骨质疏松的疗效和骨保护作用。
标签：二仙汤；骨质疏松；骨密度；脱氧吡啶酚；I型前胶后羧基端前肽；I胶交联N末端肽随着全球人口老龄化，骨质疏松在全世界发病率逐年上升，绝经后妇女发病率更高，其特征是骨量减少，骨组织的显微结构改变，骨折的危险性增大。
临床治疗药物主要包括：激素调节药物（雌激素等）、促进骨形成药物（甲状旁腺激素）、促进骨矿化药物（维生素D、钙剂）等。
这些药物对治疗OP有效，但伴随有严重副作用，如激素长期治疗出现的血凝状态、高血压、水肿[2]、子宫内膜癌、乳腺癌等[3]。
中医药治疗原发性骨质疏松注重于整体调节，调动内因，作用于多个环节，在治疗上有较大优势[4-7]。
二仙汤是张伯纳教授20世纪50年代经过反复筛选验证而研制出的一剂名方，该方临床应用几十年，疗效确实，现代研究证明二仙汤可以增加雌激素分泌，增加骨形成和降低骨吸收，从而起到抗骨质疏松的疗效和骨保护作用。
本文通过建立去势后大鼠骨质疏松模型，检测生化指标及骨密度等变化，研究二仙汤对去势后大鼠骨质疏松的影响，探讨可能存在的作用机制，为临床治疗绝经后骨质疏松寻求理论依据。
龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨强度的影响及机制
龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨强度的影响及机制牛素生;林建华;李楠;张燕;刘俊宁【期刊名称】《福建中医药大学学报》【年(卷),期】2014(000)003【摘要】目的观察龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨强度的影响及机制。
方法 72只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(OVX组)、雷奈酸锶组(SrR 组)、龟鹿二仙胶低剂量组(GL组)、中剂量组(GM组)和高剂量组(GH组),除S组外,其余各组切除卵巢,给药6、12周检测大鼠腰椎骨强度、骨密度、骨小梁面积、平均骨小梁宽度、血清骨钙素、尿脱氧吡啶酚的变化。
结果①6周时OVX组腰椎承受最大载荷低于其余各组,12周时GM组明显高于其它2个剂量组(P<0.01)。
②12周时龟鹿二仙胶3个剂量组骨密度高于OVX组(P<0.05),低于S组、SrR 组(P<0.05);GM组骨小梁面积、平均骨小梁宽度高于其余2个剂量组(P<0.05)。
结论龟鹿二仙胶能显著提高去卵巢大鼠腰椎骨强度,以GM组最明显,其作用机制为早期提高骨小梁宽度和骨小梁面积,后期提高骨密度和改善骨显微结构。
【总页数】3页(P5-7)【作者】牛素生;林建华;李楠;张燕;刘俊宁【作者单位】福建中医药大学骨伤学院;福建医科大学附属第一医院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松模型大鼠血清Ⅰ型胶原氨基端延长肽影响的实验研究 [J], 张瑶;朱旭;刘菊;马威2.龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨强度的影响及机制 [J], 牛素生;林建华;李楠;张燕;刘俊宁3.龟鹿二仙胶含药血清诱导大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的作用及机制 [J], 牛素生;李楠;张燕;刘俊宁;林建华4.龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏氨基酸类成分比较分析及对大鼠血清免疫球蛋白的影响 [J], 余娜;唐林;廖嘉宝;陈鸣;杨雄江;孙贵香;何清湖;刘子毓5.龟鹿二仙胶及其拆方对去势骨关节炎大鼠血清雌二醇浓度及膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响 [J], 杜江;黄远鹏;李奕修;余添赐;魏迎辰;王和鸣;李楠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
龟鹿二仙胶含药血清干预大鼠T细胞化疗后自噬的初步研究
龟鹿二仙胶含药血清干预大鼠T细胞化疗后自噬的初步研究陆金华;钟亚珍;王珏;林胜友【摘要】[Objective] To investigate the effects of Guiluerxianjiao decoction drug serum on the autophagy associated proteins of T cell(rat),discuss the internal mechansim of Guiluerxianjiao decoction drug serum on autophagy related signaling pathway in T cell after chemotherapy.[Method] The T cells were divided into 4 groups,i.e.,the blank control group,the DDP group,the Guiluerxianjiao decoction drug serum group,the DDP+Guiluerxianjiao decoction drug serum group.The autophagy associated proteins were detected by RT-PCR and Western Blot after 12h and 24h.[Results] After12h,RT-PCR showed that compared with the blank control group,the expression of ATG5,ClassⅢ PI3K,ClassⅠ PI3K,mTOR mRNA was increased(P ＜0.01) after int ervention of Cisplatin;and the expression of ATG5,ClassⅢ PI3K,mTOR mRNA was decreased(P＜0.01) after intervention of Guiluerxianjiao decoction drug pared with the DDP group,and the expression of ATG5,ClassⅢ PI3K,ClassⅠ PI3K and mTOR mRNA was decreased in the DDP+Guiluerxianjiao decoction drug serum group(P＜0.01).Western Blot showed that only the expression of mTOR protein was increased in the DDP group compared with the blank control group(P＜0.05).The proteins in other groups had no significant change(P＞0.05).After 24h,RT-PCR showed that compared with the blank control group,the expression of ATG5,ClassⅢ PI3K,ClassⅠ PI3K,mTOR mRNA was increased(P ＜0.0l) after intervention of Cisplatin;and the expression of ATG5 wasdecreased(P＜0.01),ClassⅢ PI3K,mTOR m RNA was incressed(P＜0.05) after intervention of Guiluerxianjiao decotion drug pared with the DDP group,and the expression of ATG5,ClassⅢ PI3K,ClassⅠ PI3K and mTOR mRNA was decreased in the DDP+Guiluerxianjiao decoction drug serum group(P＜O.01).Western Blot showed that the expression of ATG5 and ClassⅢ PI3K protein was decreased in the DDP +Guiluerxianjiao decoction drug serum group compared with the DDP group(P＜0.05).The Class Ⅰ PI3K and mTOR proteins had no significant change(P＞0.05).[Conclusion] Guiluerxdanjiao Decoction drug serum can regulate the expression of ATG5,ClassⅢ PI3K,ClassⅠ PI3K,mTOR.%[目的]初步研究龟鹿二仙胶含药血清干预大鼠T细胞化疗后自噬的机制.[方法]将大鼠T细胞分为空白对照组、顺铂组、中药血清组、顺铂+中药血清组,干预12h、24h后使用RT-PCR、Western Blot技术检测各组细胞ATG5、ClassⅢ PI3K、ClassⅠ PI3K、mTOR mRNA及蛋白的表达情况.[结果]干预12h后,RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,顺铂组ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠ PI3K、mTOR mRNA表达上升,差异有统计学意义(P＜0.01).中药血清组ATG5、ClassⅢ PI3K、mTOR mRNA表达下调,差异有统计学意义(P＜0.01).与顺铂组比较,顺铂+中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K、Class Ⅰ PI3K、mTOR mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P＜0.01).Western Blot结果显示,顺铂组mTOR蛋白表达较空白对照组上升(P＜0.05),其余组别各蛋白变化不明显(P＞0.05).干预24h后,RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,顺铂组ATG5、ClassⅢ PI3K、ClassⅠ PI3K、mTORmRNA表达上升,差异有统计学意义(P＜0.01);中药血清组ATG5 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P＜0.01),ClassⅢPI3K、mTOR mRNA表达上升,差异有统计学意义(P＜0.05);与顺铂组比较,顺铂+中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠ PI3K、mTOR mRNA表达下降,差异有统计学意义(P＜0.01).Western Blot结果显示,顺铂+中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K蛋白表达较顺铂组下降(P＜0.05),ClassⅠ PI3K、mTOR蛋白变化不明显(P＞0.05).[结论]龟鹿二仙胶含药血清对大鼠T细胞化疗后自噬蛋白ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠ PI3K、mTOR的表达具有一定的调节作用.【期刊名称】《浙江中医药大学学报》【年(卷),期】2017(041)007【总页数】6页(P612-616,623)【关键词】龟鹿二仙胶;T细胞;ATG5;ClassⅢ PI3K;ClassⅠ PI3K;mTOR;自噬;化疗【作者】陆金华;钟亚珍;王珏;林胜友【作者单位】杭州市第一人民医院集团杭州市肿瘤医院杭州310002;杭州市第一人民医院集团杭州市肿瘤医院杭州310002;浙江中医药大学附属中山医院;杭州市第一人民医院集团杭州市肿瘤医院杭州310002【正文语种】中文【中图分类】R331T细胞介导的细胞免疫是肿瘤免疫的重要方式之一[1]，化疗后T细胞介导的细胞免疫功能受损是影响肿瘤患者预后的重要原因之一，故保护化疗后患者的T细胞数量及功能是肿瘤治疗和改善预后研究的重要任务之一。
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Ｎ Ｏ Ｓ 基因的表达 ） 。丹皮酚能增加模型 动脉粥样硬化指数 ， 提示丹皮酚能通过 调节血脂水平 ， 脉 内皮细胞 ｅ 从而延缓动脉粥样硬化的形成 。 组动物 ｅ Ｎ Ｏ Ｓ 基因表达 ， 提高 ｅ Ｎ Ｏ Ｓ 酶的活力 ， 提示丹皮 氧化氮 （ Ｎ Ｏ）是 一 种 内 皮 依 赖 性 舒 张 因 子 酚可 能通 过改 变高 脂 血 症 动物 中 ｅ Ｎ Ｏ Ｓ的基 因表 达 ， 增 Ｎ Ｏ Ｓ酶 的活力 ， 促进 Ｎ Ｏ的释放 ， 从 而 改善 血 管 内皮 （ Ｅ Ｄ Ｒ Ｆ ） ， 主 要通 过 ｃ Ｇ ＭＰ途 经 引 起 细 胞 内钙 离 子 浓 度 强 ｅ
（ １ ８） ： ２ ７ ２ ４—２ ７ ２ ６ ．
［ ３ ］ 李骅 ， 王 四旺 ， 张邦乐 ． 丹皮酚的药理活性和药物动力学的研究进 展［ Ｊ ］ ． 亚太传统医药 ， ２ ０ １ ０ ， ６ （ ２ ） ： １ １ ０— ２ ．
［ ４ ］ Ｂ ｉ ａ ｎ Ｋ，Ｍ ｕ ｒ ａ ｄ Ｆ ．Ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｃ ｏ ｘ ｉ ｄ ｅ（ Ｎ Ｏ）ｂ ｉ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｍ ｔ ｉ ｏ ｎ ，ｒ ｅ ｇ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ，ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｌ ｅ ｖ ａ ｎ ｃ ｅ ｔ ｏ ｈ ｕ ｍａ ｎ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ［ Ｊ ］ ．Ｆ ｒ ｏ ｎ ｔ Ｂ ｉ ｏ ｓ ｃ ｉ ， ２ ０ ０ ３， ８： ２ ６ ４—２ ７ ８ ［ ５ ］ Ｚ ａ ｍ ｍｉ ｔ ｉ Ｗ，Ｍ ｔ ｉ ｒ ａ ｏ ｕ ｉ Ｎ，Ｍａ ｈ ｊ ｏ ｕ ｂ Ｔ ．Ｌ ａ ｃ ｋ ｏ ｆ ｃ ｏ ｎ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｅ —
Ｒ ｅ ｐ ｍｄ Ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｏ ｌ ， ２ ０ ０ ８， ５ ９ （ ２ ） ： １ ３ ９—１ ４ ５
［ ６ ］ 牛成伟 ， 周晓慧 ， 张金环 ， 等．丹皮酚对高脂血清损伤 的人 内皮细
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１ １ ３ ４・
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆＣ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｃ ｉ ｉ ｎ ｅ Ｖ ｏ １ ． １ ３ ， Ｎｏ ． １ ４ Ｊ ｕ ｔ ． ２ ０ １ ４
示 丹 皮酚 和 阳性 药 物辛 伐 他 汀 能 降低 高 脂 血 症 动 物 的 验 已经证明了丹皮酚可 以上调高脂血清损伤 的人脐静
胞内 ｃ Ｇ ＭＰ水 平升 高 ， 从 而起到扩张血管 ， 抑 制 血 小 板 和 白细胞 黏附 、 聚集 的作用 Ｊ 。本 实验 结果 显 示模 型组
大 鼠主动 脉血 管 ｅ Ｎ Ｏ Ｓ活 性 明显 低 于 正 常对 照 组 ， 与 模
ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｓ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｃ ｕ ｒ ｒ ｅ ｎ ｔ ｐ ｒ ｅ ｇ ｎ ａ ｎ ｃ ｙ ｌ ｏ ｓ ｓ ｉ ｎ ｔ ｕ ｎ ｉ ｓ ｉ ａ ｎ ｗ ｏ ｍ ｅ ｎ ［ Ｊ ］ ．Ａ ｍ Ｊ
［ １ ］ 尚晋．血管 内皮功 能 障碍 与 动脉 粥 样硬 化 ［ Ｊ ］ ． 福 建 医 药杂 志 ，
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ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｅ ｎ ｄ ｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｃ ｏ ｘ ｉ ｄ ｅ ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ａ ｓ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｓ ｍｓ ， ｈ ｏ ｍｏ ｃ ｙ ｓ ・
（ Ｎ Ｏ Ｓ ） ， Ｎ Ｏ Ｓ 广泛存在 于各种类 型的细胞 中， 其 中， 内 皮型一氧化氮合酶 （ ｅ Ｎ Ｏ Ｓ ） 分布于 内皮细胞、 神经组织 和血小板 中， ｅ Ｎ Ｏ Ｓ产生的 Ｎ Ｏ更接近血管平滑肌 ， 它可 激活 血管 平滑 肌 细胞 中 的可 溶性 鸟苷 酸环 化 酶 ， 引起 细