常规组织病理技术 (1)

第二章常规组织病理技术

活体组织检查：活检的目的

●协助临床对病变作出诊断或为疾病

诊断提供线索

●了解病变性质、发展趋势，判断疾病

的预后

●验证及观察药物疗效，为临床用药提

供参考依据

●参与临床科研，发现新的疾病或新的

类型，为临床科研提供病理组织学依

据

活检的应用范围

●协助临床对病变作出诊断或为疾病

诊断提供线索

●了解病变性质、发展趋势，判断疾病

的预后。

●验证及观察药物疗效，为临床用药提

供参考依据

●参与临床科研，发现新的疾病或新的

类型，为临床科研提供病理组织学依

据

活检标本类型

●手术摘除的器官、组织，如阑尾、甲

状腺、胆囊、淋巴结等

●穿刺抽取组织，如肝、肾、淋巴结的

穿刺组织

●自病变部位切取的小块组织，包括用

纤维胃镜、纤维支气管镜等内镜钳取

的病变组织

●刮取的组织：刮出的子宫内膜组织

（诊刮），外科手术刮取的病变骨组

织等

活体组织标本的固定与送检

●固定存放送检

组织与细胞的取材

●一张好的切片是保证病理诊断和科

研结果准确性的前提和基础

与正确的取材、合适的固定和良好的染色密切相关

组织处理要求完整保存组织细胞的形态

最大限度保存组织或细胞成分的抗原性抗原不弥散，以保证其准确定位

组织取材

（一）一般原则

●厚度0.2～0.3c m；面积1～

1.5c m2

●较薄的皮肤、腔道器官及囊壁组织等

应剪成细条缠绕成同心圆状

●骨组织需先经脱钙处理

●若需保存新鲜组织，应将所取组织用

锡箔纸包好，浸入液氮速冻，然后置

-70℃冰箱中

（二）取材注意事项

刀剪应锋利、避免前后拉动和挤压●避免使用有齿镊，动作轻柔以免挫伤

或挤压组织

●避开坏死组织和血凝块，去掉异物●取病变主体、病变与正常交界和正常

组织各一块

固定及常用固定剂

一、概念：将组织浸入某些化学试剂中，使组织细胞内的物质能尽量保持其生活状态时的形态结构和位置

二、固定的作用

1.保持组织、细胞与生活状态时相似的结构和形态，防止组织自溶和细菌繁殖导致的组织腐败

2.保持细胞内蛋白质等成分凝固并定位于原有部位

3.便于区别不同的组织成分：固定可使组织细胞中各种成分沉淀、凝固并易着色

4.有利于切片：固定剂兼有组织硬化的作用，能使组织细胞从半液体状变为半固体状

5.有利于免疫组化染色和核酸原位杂交：完整保存及准确定位抗原、D N A和R N A 成分

三、组织固定的注意事项

1.取材后要及时固定，尤其是温度高的季节，以免腐败

2.容器：最好选择广口的容器，一是避免组织受挤压变形，二是方便取材时易于取出

3.固定液要足量，至少应为组织块总体的5倍以上

4.根据不同研究目的选择不同的固定液

M a s s o n染色，最好用甲醛升汞、

Z e n k e r液或b o u i n液固定

●保存细胞内糖原应选用C a r n o y液固

定

●显示尿酸盐结晶可用100%酒精固定

5.固定时间：视组织块大小、固定温度、固定液种类而定

●一般固定6小时以上，然后保存于70%

酒精中

●温度低于4℃时，固定时间应延长

●比较大的标本除延长固定时间外，还

应做多个切面固定，以免固定不均匀

四、固定方法

1.浸泡法

2.蒸汽固定法：常用于固定组织中的可溶性物质

3.灌注固定法：用于组织块过大或固定剂难以进入其内部的标本（如整个器官、整只动物）

4.滴加法：细胞涂片

5.微波固定法（63℃～65℃）：具有核膜清晰、染色质均匀、组织结构收缩小等优点，但由于其固定时间不易掌握，一般不主张运用于小组织块固定

常用固定液及其配制

（一）单纯固定液：由单一化学物质组成1.甲醛

（1）优点：价格便宜、组织穿透力强、固定均匀、组织收缩小，可长期保存标本（2）缺点：易挥发，有一定毒性

（3）性质：交联性组织固定剂

（4）适用范围：适合多种特殊染色，对脂类和类脂体、神经及髓鞘均有良好的固定效果；也可固定高尔基体、线粒体和糖类

（5）使用浓度：10%f o r m a l i n，即10m l 市售原液（40%）加90m l的水，此液的甲醛实际浓度为4%

2.中性甲醛

以p H7.2～7.4的磷酸缓冲液（P B S）为溶剂配制的甲醛溶液，浓度同前

●优点：固定效果及对组织抗原的保存

均优于一般甲醛溶液

●是科研用组织最常用的固定液

3.乙醇

（1）优点：具有硬化、固定、脱水等作用，还能保存糖原和尿酸结晶

（2）使用浓度：固定组织用80%～95%为好，70%的乙醇可用于保存组织；证明尿酸结晶和保存糖原用100％浓度

（3）缺点：

●组织渗透力较弱

●能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，核

蛋白沉淀后能溶于水，使核染色不良●高浓度乙醇固定的组织硬化显著，组

织收缩明显且脆，既影响切片，又致

组织形态改变，影响诊断

●溶解脂肪、类脂质和血红蛋白，还损

害其它色素

（二）混合固定液：由多种化学物质混合组成

1.A-F液

酒精-甲醛固定液

●固定兼脱水，固定后可直接入95%酒

精脱水

●配制方法：95%以上浓度酒精90m l，

40%甲醛10m l，混合而成

2.B o u i n液

（1）优点：渗透力强，对组织固定均匀，收缩很小，不会使组织变硬变脆，适用于睾丸活检等小组织的固定

（2）固定时间：小块组织只需数小时，较大脏器固定12～24小时

（3）配制方法：苦味酸饱和水溶液75m l，40%甲醛水溶液25m l，冰醋酸5m l

80%酒精150m l，40%甲醛60m l，冰醋酸15m l，加入结晶苦味酸1g（用前配制）3.Z e n k e r液

（1）优点：H E染色最好的固定液，此液固定的标本，胞核和胞质染色清晰

（2）固定时间：12～24小时