2 RNA病毒与人类肿瘤
逆转录病毒
逆转录病毒（Retroviruses）归类于逆转录病毒科（Retroviridae），包括一大类含有逆转录酶（reversetranscriptase）的RNA病毒，分为肿瘤病毒亚科、泡沫病毒亚科和慢病毒亚科，每一亚科又有若干个属（表33-1）。
肿瘤病毒亚科（oncovirinae）大多引起禽类、猫、鼠、猴等动物肿瘤，与人类疾病相关者有人类嗜T细胞病毒（humanT-celllymphotropicvirus,HTLV）；泡沫病毒亚科（spumavirinae）的致病作用尚不清楚；慢病毒亚科（lentivirinae）中的人类免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus,HIV）则是艾滋病的病原体，正受到人类的广泛关注。
三个亚科病毒的生物演化和亲缘关系见图33-1。
第一节人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒（HIV），是获得性免疫缺陷综合征（acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS）的病原体。
AIDS首次报道于1981年，1984年证实其病原为HIV。
因病毒最初分离于淋巴腺综合征的同性恋患者血清，曾称之为淋巴腺病相关病毒（lymphadenopathy-associatedvirus,LAV），此后分别又有人类嗜T细胞病毒Ⅲ型（HTLV-Ⅲ）、AIDS相关病毒（AIDS-relatedvirus,ARV）之称。
1986年经国际病毒分类委员会（InternationalCommitteeonTaxonomyofViruses,ICTV）建议，将LAV、HTLV-Ⅲ和ARV统一命名为人类免疫缺陷病毒，俗称艾滋病病毒。
HIV分HIV-1型和HIV-2型，前者引起全球AIDS流行，后者主要分离自西部非洲的艾滋病患者。
HIV感染的范围在逐步扩大，我国自1985年发现首例AIDS以来，感染人数逐年快速增长，严重威胁着人类的身心健康，受到人们的广泛关注。
一、生物学性状（一）形态与结构成熟的病毒直径100~120nm、20面体对称结构、球形，电镜下可见一致密圆锥状核心，内有病毒RNA分子和酶，后者包括逆转录酶、整合酶（integrase）和蛋白酶（protease）。
肿瘤分子生物学
肿瘤中整体的低甲基化
• 肿瘤组织相对于正常组织整体呈现低甲基 化状态
• 目前有3种机制解释基因组整体的低甲基化在肿瘤中所 扮演的作用： 1.低甲基化导致原癌基因的去甲基化失活，导致癌基 因的大量 表达 （Myc 基因） 2.整体的低甲基化是细胞染色体不稳定的易感因素 3.低甲基化使肿瘤转移增加, DNA甲基化水平愈低 肿 瘤的浸润 能力就越高，临床分期也愈晚
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3.反转录病毒癌基因（v-onc)的起源
反转录病毒癌基因起源于细胞内的原癌基因
研究发现，反转录病毒基因组中所带有的onc基因并非 来自病毒本身，而是这些病毒在感染动物或人体之后获得 的细胞原癌基因。
动物或人原癌基因经病毒修饰和改造后，成为病毒基 因组的一部分并具有了致癌性，其作用的靶分子也往往发 生改变。
• 在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是唯一存 在的化学性修饰碱基
• 在人类基因组DNA中，约3％～4%的胞 嘧啶碱基以5-甲基胞嘧啶形式存在
• 大约70％～80％的5-甲基胞嘧啶存在于 CpG序列中，CpG二核苷酸集中的区域 称之为CpG岛
• 限制性内切酶HapII 和MspI 均能识别 CCGG, 但不能识别 Cm CmGG
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异常生长的肿瘤细胞
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癌症：严峻的现实
WHO报道： • 全球每年约有1000多万人新患癌症， • 每年约有670多万人死于癌症， • 几乎每5-6秒钟就有一名癌症患者死亡。 我国目前: • 每年平均约有150万人新患癌症， • 每年约有80万人死于癌症， • 癌症的死亡从1949年占总死亡原因的第十位
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• 原病毒(provirus)： 被整合的反转录病毒DNA分子 • 它能指导病毒mRNA的合成， • 并利用宿主细胞中的蛋白质合成机器，翻 译生成病毒外壳蛋白等，最后组装成病毒 颗粒。
microRNA-361-5p在人类恶性肿瘤中的研究进展
2021,25(2):117-121.实用临床医药杂志Journal of Clinical Medicine in Practice-117-microRNA-361-5p在人类恶性肿瘤中的研究进展齐媛，郭宝良(哈尔滨医科大学附属第二医院乳腺外科，黑龙江哈尔滨，150000)摘要：研究表明，microRNA(miRNA)在恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。
miRNA通过各种机制参与细胞基因转录调控，其中与下游靶基因mRNA的特异性结合并使其降解为经典的调控机制。
近年来，miR-367-5p在恶性肿瘤中的表达失调得到了验证,通过调节与肿瘤生长、转移、上皮-间质转化(EMT)等方面相关的靶基因，进一步参与恶性肿瘤的增殖、凋亡、转移以及耐药性等相关生物学过程,并为恶性肿瘤的诊断及预后预测提供重要依据。
作者对miR-367-3p在不同肿瘤中的作用及相关机制进行综述，并展望其应用前景。
关键词：微小核糖核酸；恶性肿瘤；基因调控；靶基因中图分类号：R730.2；R329.2文献标志码：A文章编号：1672-2353(2027)02-177-35D0I：10.7619/jcmp.20201614Research progress of microRNA-311-5pin human malignant tumorsQI Yuan,GUO Baoliang(Department of'Breast Surgery,the Second^filiated Hospital of'Harbin MedicalUniversity,Harbin,Hedongjiaag,173000)Abstroch:Studids have showa thai microRNA(miRNA)plays ca inponaai aid in thd occao-naca ani deyelopmeat of tumors.MiRNA pdnicipdtds R thd resulatiou of callulao gess traa-scnptiou throorU diRenat mectanisms,amoo-which tha speciRc binCina ant dearaVatioo of dowa-stream tar-el geac mRNA is tha most classic reaulato—mechanism.Ia receai years,tha dysreaulatioo of miR-261-3p expnssioa in malinnaat tumors has baa yaified.By reaulatina tarad relatea to-tUat associatea with tumon growth,eaitUelial-meseachymai transitioo(EMT)and otUcn aspects,miR-361-3p furthen iavolve in tha relevaai bRlooical processas of rmainridat tumom,iacUrRa proliRratioo, dpoptosis,metastasis,v V drug resistaaca,v V R proviavs aa iRportaai basis foe tha diaaaosis ana prooaosis of mpin—vt tumoia.This卩1^>reviewea tha roles anC relatea mechanisms of miR-371-3p in diRereat tumors,and R s aaplicatiou prospect is prospectea.Key worCs:microRNA；malinnaat tumoo；uiv reaulatiou;tarael uiv1背景microRNA(miRNA)是一种非编码RNA,在进化中高度保守，人类基因2%的miRNA可通过调控网络影响机体近43基因的表达⑴。
溶瘤病毒在肿瘤诊治中的应用 ppt课件
利用靶细胞中抑癌基因的失活或缺陷从而选择性地感染肿瘤细胞，在其内大量复制并 最终杀伤、裂解肿瘤细胞，而对正常细胞没有杀伤作用。
direct destruction of the tumour cells (lysis or apoptosis) 直接感染并杀死癌细胞 release new infectious virus particles 复制并杀伤更多癌细胞 stimulate host anti-tumour immune responses 激发免疫反应，吸引更多免疫细胞来
继续杀死残余癌细胞 优点：选择性、可自我复制、可改造、可多路径攻击癌症，同时破坏癌细胞的多种进
程，并触发 “旁观者机制” （安全性、耐药性、持续性？）
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PPபைடு நூலகம்课件
溶瘤病毒(oncolytic virus)
天然对于肿瘤细胞具有特异性感染或杀伤能力的病毒（呼肠孤病毒、细小病毒、新城 疫病毒）
Herpes simplex virus 1(HSV-1)
起步： 1991, Science, Martuza RL et al：
HSV-1, 失活胸苷激酶基因（TK），裸鼠恶性脑胶质瘤U87治疗
第一代：1716毒株：
去除ICP34.5（ γ 34.5）神经毒基因，正常细胞可凋亡，病毒无法复制； 肿瘤细胞IFN缺失，PKR低表达，病毒可复制并溶瘤
2015.09.29
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PPT课件
溶瘤病毒(oncolytic virus)
An oncolytic virus is a virus that preferentially infects and kills cancer cells. 具有复制能力的肿瘤嗜好性杀伤型病毒
分子生物学试题库含参考答案
分子生物学试题库含参考答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.HBV DNA 定量达多少以上可以提示复制活跃( )A、107 copies/mlB、106 copies/mlC、105 copies/mlD、108 copies/mlE、104 copies/ml正确答案：A2.众多肿瘤中遗传因素最突出的一种肿瘤是A、肝癌B、结直肠癌C、前列腺癌D、乳腺癌E、肺癌正确答案：B3.下列不属于血友病 B 间接诊断方法的是A、PCR-RFLPB、PCR-SSCPC、双脱氧指纹图谱D、毛细管电泳E、变性高效液相色谱正确答案：D4.下列不是影响DNA 复性因素的是A、DNA 浓度B、DNA 的分子量C、温度D、碱基组成E、DNA 的来源正确答案：E5.Sanger 双脱氧链终止法使用的链终止物是A、NTPB、dNTPC、α-35S-dNTPD、α-32P-dNTPE、ddNTP正确答案：E6.双脱氧终止法测定核酸序列时，使用 ddNTP 的作用是：A、作为 DNA 合成的正常底物B、形成特异性终止链C、标记合成的DNA 链D、使电泳时 DNA 易于检测E、使新合成的 DNA 链不易形成二级结构正确答案：B7.下列关于Taq DNA 聚合酶的描述，错误的是A、以 dNTPs 为原料B、催化形成3’,5’-磷酸二酯键C、使 DNA 链沿5’→3’方向延伸D、不具有3’→5’外切酶活性E、扩增的DNA 片段越长，碱基错配率越低正确答案：E8.相对于第一代测序技术，新一代测序技术不具有的优点：A、模板不需要克隆B、并行C、较长的测序读长D、一次运行可产生海量的高质量数据E、高通量正确答案：C9.HIV-1 中最易发生变异的基因是A、polB、nefC、envD、gagE、tat正确答案：C10.SDS 是一种阴离子表面活性剂，其可断开蛋白质分子内和分子间的( )A、氢键B、离子键C、二硫键D、酯键E、疏水键正确答案：A11.荧光原位杂交的描述正确的是A、快速确定是否存在目的基因B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：C12.对于寡核苷酸探针，杂交温度一般低于其 Tm 值A、30~40℃B、20~30℃C、5℃D、10~15℃E、15~30℃正确答案：C13.用于基因定位的技术是：A、荧光定量 PCR 技术B、PCR-RFLP 技术C、PCR 微卫星检测技术D、原位杂交技术E、cDNA 表达芯片技术正确答案：D14.不属于移植配型中常用的分子生物学检测技术是 ( )A、RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSPB、PCR-SSCPC、PCR-SequencingD、PCR-SSO/基因芯片技术E、FISH正确答案：E15.硝酸纤维素和PVDF 膜结合蛋白主要靠( )A、疏水作用B、氢键作用C、离子键作用D、盐键作用E、酯键作用正确答案：A16.下列方法中能同时检测几种疟原虫混合感染的是A、竞争 PCRB、巢式 PCRC、多重 PCRD、普通 PCRE、PCR-RFLP正确答案：C17.SYBR Green Ⅰ技术常要求扩增片段不大于A、50bpB、100bpC、200bpD、300bpE、400bp正确答案：D18.PCR 反应的基本过程不包括A、预变性B、退火C、淬火D、变性E、延伸正确答案：C19.唯一一个在结肠上皮增殖过程中起看门作用的基因是A、MCC 基因B、DCC 基因C、APC 基因D、p53 基因E、HNPCC 基因正确答案：C20.单基因遗传病诊断最重要的前提是A、了解相关基因的基因克隆和功能分析等知识B、了解患者的家族史C、进行个体的基因分型D、了解相关基因的染色体定位E、疾病表型于基因关系已阐明正确答案：B21.最早发现与 mtDNA 突变有关的疾病是A、肿瘤B、Leber 遗传性视神经病C、糖尿病D、耳聋E、MELAS 综合征正确答案：B22.下列哪些技术不适用于鉴定菌种亲缘性：A、随机扩增DNA 多态性分析B、连接酶链反应C、PCR-RFLPD、多位点测序分型E、DNA 测序技术正确答案：B23.下列不符合转座因子含义的是A、转座因子是 DNA 重组的一种形式B、可在质粒与染色体之间移动的DNA 片段C、转座子是转座因子的一个类型D、可移动的基因成分E、能在一个 DNA 分子内部或两个 DNA 分子之间移动的 DNA 片段正确答案：A24.荧光定量 PCR 检测核酸量的时间段在A、非指数期B、PCR 反应的最初阶段C、PCR 反应最后的时间阶段D、指数期的起始阶段E、指数期的终末阶段正确答案：D25.关于荧光原位杂交技术叙述不正确的是( )A、可以用于遗传病的产前诊断B、无需经过核酸的提取C、用放射性核素标记探针D、用荧光素标记探针E、可以用于基因定位正确答案：C26.下列疾病不可进行基因诊断的是A、组织水肿B、SARS 疑似患者C、肿瘤D、艾滋病E、血友病正确答案：A27.目前测序读长最大的测序反应：A、双脱氧终止法B、焦磷酸测序C、连接测序D、化学裂解法E、边合成边测序正确答案：A28.HIV 核酸类型是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：D29.单细胞基因扩增一般采用下列何种技术增加检测的敏感性和特异性A、巢式 PCRB、多重 PCRC、PCR-RFLPD、等位基因特异性 PCRE、PCR-SSCP正确答案：A30.关于支原体的描述错误的是A、支原体是一类在无生命培养基中能独立生长繁殖的最小原核细胞微生物B、支原体有一个环状双链 DNAC、以二分裂方式进行繁殖D、其分裂与 DNA 复制同步E、解脲脲原体、人型支原体和生殖器支原体均可引起泌尿生殖道感染正确答案：D31.定点诱发突变可以通过以下哪个过程获得：A、PCRB、LCRC、RT-PCRD、SSCPE、ASO正确答案：A32.结核杆菌的分子生物学检验临床意义中不包括A、疗效评价B、耐药检测C、快速诊断D、鉴别诊断E、早期诊断正确答案：E33.对于相同大小的核酸片段，最快的转移方法是A、虹吸转移B、真空转移C、电转移D、向下虹吸转移E、毛细管电泳正确答案：B34.以下关于原癌基因说法不正确的是A、普遍存在于人类或其他动物细胞基因组中的一类基因B、在生物进化过程中不稳定C、在控制细胞生长和分化中起重要作用D、容易在多种因素作用下激活成活性形式的癌基因E、活性形式的癌基因才引起细胞癌变正确答案：B35.以下不是在移植配型中常用的分子生物学检测技术是A、核酸分子杂交技术B、PCR 技术C、基因芯片技术D、免疫组化技术E、基因测序技术正确答案：D36.在人类基因组 DNA 序列中，DNA 甲基化主要发生在A、腺嘌呤的 N-6 位B、胞嘧啶的 N-4 位C、鸟嘌呤的 N-7 位D、胞嘧啶的 C-5 位E、鸟嘌呤的 C-5 位正确答案：D37.为了避免反复冻融对核酸样品产生的破坏作用，最好( )A、将核酸大量保存B、将核酸冻干保存C、将核酸沉淀保存D、将核酸溶解保存E、将核酸小量分装保存正确答案：E38.线粒体疾病的遗传特征是A、近亲婚配的子女发病率增高B、发病率有明显的性别差异C、女患者的子女约 1/2 发病D、交叉遗传E、母系遗传正确答案：E39.表达谱芯片A、是在 DNA 水平研究基因之间的表达关系B、是在 mRNA 水平研究基因之间的表达关系C、是在蛋白质水平研究基因之间的表达关系D、不能用于疾病机制的研究E、不能指导个体化治疗正确答案：B40.目前最常用的TB 分子检测方法是A、PCRB、real-time PCRC、SDAD、LPAE、DNA chip正确答案：B41.判断 HBV 复制及传染性的直接指标是检测A、HBV DNA 多聚酶活力B、HBsAgC、HBV DNAD、HBeAgE、HBcAg正确答案：C42.引起急性移植排斥反应最重要的抗原是A、ABO 血型抗原B、HLA 抗原C、超抗原D、异嗜性抗原E、Rh 血型抗原正确答案：B43.描述随机扩增多态性 DNA 技术不正确的是 ( )A、引物序列随机B、有多条引物C、电泳分离产物D、需要限制性内切酶酶切E、反应基因组多态性正确答案：D44.下列病毒中，基因组可直接作为mRNA 的 3 种病毒是A、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、流感病毒B、脊髓灰质炎病毒、AIDS 病毒、麻疹病毒C、脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒、新型肠道病毒D、脊髓灰质炎病毒、乙型肝炎病毒、轮状病毒E、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、甲型肝炎病毒正确答案：C45.第二代测序技术一般不用到A、双脱氧链终止法B、文库接头C、高通量的并行 PCRD、高通量的并行测序反应E、高性能计算机对测序数据进行拼接和分析正确答案：A46.下列关于 real-time PCR 引物设计的原则中，不正确的是A、两条引物的Tm 值相差尽量大B、G+C 的含量应在 45%~55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L 之间E、引物过长可能提高退火温度正确答案：A47.目前确认与人类肿瘤发生有关的RNA 病毒是A、人乳头状瘤病毒B、乙型肝炎病毒C、EB 病毒D、人类疱疹病毒-8E、丙型肝炎病毒正确答案：E48.基因诊断间接方法不包括A、基于 SNP 的单倍型分析B、Southern blotC、基于 STR 的微卫星分析D、PCR-RFLPE、RFLP 连锁分析正确答案：B49.美国食品药品监督管理局规定用于检测尿液标本中淋病奈瑟菌的方法是A、革兰染色镜检B、抗酸染色镜检C、淋病奈瑟菌 16SrRNA 基因检查D、ELISAE、动物接种正确答案：C50.双链 DNA 的 Tm 值主要与下列哪项有关 ( )A、A-T 含量B、G-T 含量C、A-G 含量D、T-G 含量E、C-G 含量正确答案：E51.实时荧光 PCR 中，GC 含量在 20%~80% (45%~55%最佳) ，单链引物的最适长度为A、35~50bpB、15~20bpC、55~70bpD、5~20bpE、70~90bp正确答案：B52.组织 DNA 提取中，EDTA 的作用是A、抑制 DNaseB、沉淀 DNAC、减少液体表面张力D、抑制 RNaseE、去除蛋白质正确答案：A53.关于 DNA 芯片原位合成法的描述错误的是：A、也称在片合成B、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针C、包括光导原位合成法D、包括原位喷印合成法E、包括直接点样法正确答案：E54.关于点样法进行 DNA 芯片制备不正确的是A、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针的 DNA 芯片制备技术B、通过高速点样机直接点样C、多用于大片段 DNA 探针的芯片制备D、成本低E、速度快正确答案：A55.镰状细胞贫血患者，代替其血红蛋白β链 N 端第六个氨基酸残基谷氨酸的是A、丙氨酸B、丝氨酸C、缬氨酸D、苯丙氨酸E、酪氨酸正确答案：C56.TaqMan 探针技术要求扩增片段应在A、50~150bpB、200~250bpC、300~350bpD、150~200bpE、250~300bp正确答案：A57.生物芯片根据芯片上固定的探针种类不同可分为几种，不包括：A、DNA 芯片B、蛋白质芯片C、细胞芯片D、组织芯片E、测序芯片正确答案：E58.对于 BRCA 基因突变的检测，以下最常用的方法是A、变性高效液相色谱法B、单链构象多态性分析C、变性梯度凝胶电泳D、异源双链分析E、直接 DNA 序列分析正确答案：E59.利用DNA 芯片检测基因的表达情况，杂交条件应选( )A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案：A60.关于SYBR Green Ⅰ 的描述，不正确的是A、荧光染料的成本低B、适用于任何反应体系C、操作亦比较简单D、特异性强E、不需要对引物或探针进行预先特殊的荧光标记正确答案：D61.人类基因组中包含的基因数目约为A、6 万~8 万B、大于 10 万C、2 万~3 万D、1 万~2 万E、4 万~6 万正确答案：C62.关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述不正确的是A、特异性高B、可依赖氨基酸序列推测其序列C、分子量小D、可用于相似基因顺序差异性分析E、可用末端转移酶进行5’端标记正确答案：E63.关于 DNA 芯片描述不正确的是A、探针为已知序列B、有序地高密度地固定于支持物上C、理论基础是核酸杂交D、可研究基因序列E、不能研究基因突变正确答案：E64.不符合分子诊断特点的是A、易于早期诊断B、检测对象为自体基因C、样品获取便利D、灵敏度高E、特异性强正确答案：B65.决定 PCR 反应特异性的是A、模板B、dNTPC、引物D、缓冲液E、Taq DNA 聚合酶正确答案：C66.下列 DNA 序列中的胞嘧啶易发生甲基化修饰的是A、5’-CCCCCT-3’B、5’-GGGGCC-3’C、5’-CGCGCG-3’D、5’-GCACAC-3’E、5’-CTCTCCC-3’正确答案：C67.平台效应的出现与下列哪个因素关系最密切：A、引物浓度B、初始模板量C、TaqDNA 聚合酶浓度D、Mg2+浓度E、反应变性时间正确答案：B68.多重 PCR 的描述中正确的是：A、同一个模板，多种不同的引物B、相同的引物，多种不同的模板C、多个模板，多种引物D、引物的Tm 值、反应时间和温度、反应缓冲液等尽量不一致以区分不同产物E、同一反应内各扩增产物片段的大小应尽可能相同或接近正确答案：A69.未知突变的检测，下列最准确的方法是A、PCRB、RFLPC、核酸杂交D、序列测定E、ASO正确答案：D70.线粒体病分子生物学检验标志物不包括A、缺失或插入片段B、点突变位点C、重复序列D、线粒体单体型E、SNP 位点正确答案：C71.组织 DNA 提取中，苯酚-氯仿抽提离心分三层，DNA 位于A、上层B、中间层C、下层D、中间层和下层E、上下层均有正确答案：A72.人类基因组的碱基数目为A、4.0×10 bp8B、4.0×10 bp9C、4.0×10 bp6D、3.0 × 109bpE、2.9×10 bp6正确答案：D73.核酸序列的基本分析不包括A、测序分析B、分子量、碱基组成、碱基分布C、限制性酶切分析D、序列变换分析E、统计分析正确答案：E74.基因芯片技术的主要步骤不包括( )A、杂交反应B、信号检测C、芯片的设计与制备D、样品制备E、酶切分析正确答案：E75.在对病原体检测中，一次性获得信息量最大的技术是 ( )A、ELISAB、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、原位杂交技术E、基因芯片技术正确答案：E76.DNA 指纹分子的遗传性基础是A、连锁不平衡B、MHC 的多样性C、DNA 的多态性D、反向重复序列E、MHC 的限制性正确答案：C77.基因芯片技术在移植配型中有着越来越广泛的应用，也具有其他技术不能比拟的优点，以下不属于基因芯片技术特点的是A、高通量B、操作繁琐C、微缩化D、观察判断直观E、自动化程度高正确答案：B78.有关 HPV 描述错误的是A、核酸类型为 DNAB、结构蛋白 L1 和 L2 是包膜上的主要和次要蛋白C、HPV 对皮肤和黏膜上皮细胞具有高度亲嗜性D、病毒核酸合成主要发生在棘层和颗粒层E、大多数宫颈癌组织中病毒以整合状态存在正确答案：B79.RNA/RNA 杂交体的 Tm 值一般应增加A、1-5℃B、5~10℃C、10~15℃D、15~20℃E、20~25℃正确答案：E80.HBV 的外膜主蛋白是由A、Pre-S1 基因编码的B、Pre-S2 基因编码的C、S 基因编码的D、Pre-S1、Pre-S2 和 S 基因三部分基因区共同编码的E、Pre-S2 和 S 基因区共同编码的正确答案：C81.最能直接反映生命现象的是：A、蛋白质组B、基因组C、mRNA 水平D、糖类E、脂类正确答案：A82.电脑显示和打印出的 DNA 碱基序列图谱中不出现的颜色：A、紫B、蓝C、绿D、黄E、红正确答案：A83.有关 PCR 的描述下列不正确的是A、是一种酶促反应B、引物决定了扩增的特异性C、由变性、退火、延伸组成一个循环D、循环次数越多产物量就越大，可增加循环次数提高产物量E、扩增的对象是 DNA 序列正确答案：D84.开展耳聋基因诊断有重要临床意义，但不包括A、可作为听力筛查的一个有效辅助手段B、可以预测下一代出现耳聋的概率C、可以预测耳聋疾病的病情和预后D、可作为有效治疗耳聋的手段之一E、可以了解患者发生耳聋的分子病因正确答案：D85.关于 p53 基因说法不正确的是A、属于抑癌基因B、在进化过程中高度保守C、编码蛋白为转录因子p53 蛋白，与调控细胞生长周期、调节细胞转化、DNA 复制及诱导细胞凋亡有关D、可单独作为乳腺癌预后的分子标志E、定位于人染色体 17q13 上正确答案：E86.HIV 最易发生变异的部位是A、核衣壳蛋白B、内膜蛋白C、刺突蛋白D、逆转录酶E、包膜蛋白正确答案：C87.关于梅毒螺旋体的描述错误的是A、主要通过性接触、输血、胎盘或产道等途径感染人体B、可侵犯皮肤黏膜、内脏器官，导致心血管及中枢神经系统损害C、梅毒螺旋体属于苍白密螺旋体的苍白亚种D、梅毒螺旋体是梅毒的病原体E、不会对胎儿产生影响正确答案：E88.一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称A、杂交B、变性C、复性D、探针E、复杂性正确答案：A89.关于测序策略的叙述正确的是A、应该具有最大重叠、最小数量的测序反应B、最小的目的DNA 片段 (如＜1kb) ，可以使用引物步移法C、最小的目的DNA 片段 (如＜1kb) ，可以使用随机克隆法D、大片段未知序列DNA 测序，可以直接测序E、大规模基因组计划，可以使用多个测序策略正确答案：E90.一般来说核酸杂交的温度低于其 Tm 值多少度A、5~10℃B、40~50℃C、30~40℃D、15~25℃E、10~15℃正确答案：D91.下列不是临床分子生物学实验室分析前质量控制内容的是A、实验室严格分区B、进行核酸提取的有效性评价C、临床标本的采集、运送和保存符合要求D、所用试剂和耗材的质量符合要求E、定期进行仪器设备的功能检查、维护和校准正确答案：B92.DNA 双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA 分子成为单链，这一过程称A、变性B、复性C、复杂性D、杂交E、探针正确答案：A93.影响DNA 分离纯化效果的是A、材料新鲜，低温保存B、加核酸酶抑制剂C、剧烈震荡D、除净蛋白质E、除净多糖正确答案：C94.下列说法正确的是A、液状石蜡切片中缩短蛋白酶 K 的消化时间可增加提取 DNA 片段的长度B、组织样本不需蛋白酶 K 消化即可进行核酸提取C、用于提取核酸的石蜡切片需要先用二甲苯脱蜡D、用于提取核酸的石蜡切片不需脱蜡即可进行核酸提取E、新鲜的组织样本需要先用二甲苯脱蜡才能进行核酸提取正确答案：C95.关于 PCR-RFLP 错误的是A、采用特定的限制性内切酶对 PCR 产物进行处理B、对酶切后的片段长度进行分析C、判断有无点突变D、突变位点不必在限制酶识别序列中E、需先进行 PCR 扩增正确答案：D96.未来基因诊断的主要发展方向是A、胎盘着床前诊断B、母体外周血中胎儿细胞分析技术C、对常见病进行分子诊断D、对多发病进行分子诊断E、以上都是正确答案：E97.以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为A、纯合体患者B、正常人C、携带者D、杂合体患者E、不能确定正确答案：C98.乙型肝炎病毒的核酸类型是 ( )A、双股 DNAB、负股 DNAC、正股 DNAD、单股 DNAE、DNA-RNA 二聚体正确答案：A99.下列有关 cDNA 探针的描述不正确的为A、利用mRNA 通过 RT-PCR 在体外反转录可制备大量的 cDNA 探针B、cDNA 探针不包含内含子C、cDNA 探针不包含大量的高度重复序列D、由于 cDNA 探针自身所携带的 poly(dT)，有可能产生非特异性杂交的问题E、cDNA 探针合成方便，成为探针的重要来源正确答案：E100.关于 RNA 探针的描述下列不正确的是A、可用于随机引物标记B、特异性高C、灵敏度高D、可用非同位素标记法标记E、不易降解正确答案：E。
一本实用的肿瘤学参考书《临床肿瘤学》(上册)
第一篇肿瘤学概论第一章临床肿瘤学绪论第一节肿瘤的发生情况肿瘤虽然是一类古老的疾病，早在2-3千年前埃及和我国已有关于肿瘤的记载，但当时远不在常见病之列。
在20世纪初肿瘤在世界各国仍是比较罕见的疾病。
我国直到50年代初，在北京市居民死亡率中肿瘤占第9位。
但近半个世纪以来，肿瘤这类疾病在医学领域内的地位愈来愈重要，目前已成为多发病、常见病，为居民死亡原因的第一、二位，严重威胁人民的健康。
其主要原因有4方面：随着工业化的发展，环境里的致癌物愈来愈增多；空气和水的污染；吸烟；不良生活习惯，包括膳食的不平衡、以及食品添加剂和某些药物的滥用。
癌症在全世界范围内有增多趋向，如果人们不采取有效的措施，这一趋势将继续下去，在21世纪很多国家男性癌症死亡率将增加20％~50％，女性将增加12％~40％。
英国的R.Peto教授甚至预言我国如不大力开展戒烟，到2025年将成为肺癌第一大国。
随着医学的发展，过去许多严重威胁人类健康的急性传染病、寄生虫病、营养不良和新生儿死亡等等由于找到了病因，采取了适当的预防措施和有效的治疗，因而得到了控制。
它们的发病和死亡率都已大大下降。
而相对来说，一些病因比较复杂，尚无十分有效治疗方法的疾病，如心脑血管疾病和癌症，在医学领域内的地位就显得愈来愈重要了。
如前所述，北京市癌症死亡在1951年为常见原因的第9位，1956年为第5位，到了1964年以后就排在前2位了,1996年以后已居第1位。
上海市1960年癌症排在第6位，1980年以后就成了第1位。
1990年全国肿瘤死亡率抽样调查的结果表明我国无论城乡均占常见死因的第二位，这种相对地位的提高在很大程度上是由于其他疾病死亡率下降的结果。
近半个世纪以来，由于生活水平的提高和医药卫生工作的发展，人们的平均寿命延长了。
以北京市为例，1947年东城区居民平均寿命仅为35岁，而目前超过70岁。
肿瘤的发病年龄高峰在40~45岁以后，所以相应地肿瘤发病率和死亡率也有增高。
MicroRNA与肿瘤
综 述
M icroRNA
(
与 肿瘤
徐 锋 综述, 高建平, 程 文 审校
南京大学医学院临床学院 泌尿外科, 江苏南京 210002) 南京军区南京 总医院
[ 关键词 ] M ic roRNA ; 肿瘤发生; 诊断; 基因治疗
[ 1 5] D icer 蛋白而不是D ro sh a 蛋白的水平下调 。
由 RNA 聚合 酶� 转录 的 。 其最 初产 物是 被称为 pr i2 m iRNA
(p r i 。 P r i2 m a ry m iRNA ) 的 前体分 子 m iRNA 在一 种D rosha RN a se 的作用下, 剪切为具有茎环结构约 70 个核苷酸长度的 m iRNA 前体 (P re 2 m iRNA ) 。 p 调控胚胎后期发育的基因 lin24, 随后在多种 生物物种中鉴别出上千种m iRNA s [2 23]。 许 多m iRNA 的表达水 平具有较强的保守性、 基因簇集 现象、 时空特 异性及组织 特异性: ①保守 性 。 在已克 隆到的
m iRNA 中, 几乎所有的m iRNA s 的基因存在于相近动物中,
m RNA 之间的 错配程 度决定 的, 匹 配程度 高的 目的 mRNA
列进展。 本文从m iRNA 的概念与特征、 作用 m iRNA 的产生、 机制及与肿瘤的关系等方面作一阐述。
1 m iRNA 的发现及其生物学特性 1993 年, L ee 等
[1 ]
在 秀 丽新小 杆 线虫 (C. elegans ) 中 发
中图分类号: R 730 143 文献标识码: A 文章编号: 1672 2 271X (2008) 06 2 0436203 M icroRNA 简称为 m iRNA , 通常长度为 19～ 25 个 核苷 酸, 是 一类 重要 高度 保守 的非 编码 的小 分子 单链 RNA 。最新 有 关 研 究 表 明: m iRNA 与 肿 瘤 存 在 着 紧 密 关 联, 已 在
微小RNA-200家族与肿瘤关系的研究进展
微小RNA-200家族与肿瘤关系的研究进展易小芳;邢荣春;郑家芬【期刊名称】《中国全科医学》【年(卷),期】2013(16)11【摘要】肿瘤一直是威胁人类健康的重要致死性疾病,近年来其发病率逐渐上升.随着基因分子水平的深入研究,肿瘤发病机制取得了部分进展.越来越多的研究表明,微小RNA(miRNA)-200家族与肿瘤的发生密切相关,本文主要对近年来miRNA-200参与肿瘤细胞增殖、分化、侵袭和转移等过程的机制方面做一综述,希望能对肿瘤的早期诊断、治疗和预后判断有所帮助,以降低病死率.%Tumor has been a life - threatening disease to human and has increasing incidence in recent years. Genetic and molecular research has unveiled cancer pathogenesis to certain extent. Increasingly more studies have shown that miRNA -200s is closely related with the occurrence of cancer. Therefore, this paper reviews the mechanism of miRNA -200 involving in tumor cell proliferation, differentiation, invasion and metastasis.【总页数】4页(P1309-1312)【作者】易小芳;邢荣春;郑家芬【作者单位】443003,湖北省宜昌市,三峡大学第一临床医学院【正文语种】中文【中图分类】R730.1【相关文献】1.微小 RNA 与恶性肿瘤关系的研究进展 [J], 王方平;郑洁2.微小RNA-92与恶性肿瘤关系的研究进展 [J], 郭凤军;邹颖刚;李丹;田静岩3.微小RNA-200家族对糖尿病及其并发症的影响 [J], 钱玲玲;徐凤;王如兴4.微小RNA-200家族在三阴性乳腺癌发生发展中的作用 [J], 倪苗苗; 周宪春5.微小RNA-200家族在子宫内膜癌中的临床研究 [J], 邢景娜;王世荣;薛娟;任红伟;丁亚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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HIV的复制
1 包膜融入胞内：HIV包膜上与CD4的结合 区位于病毒gp120的C3区段，结合后病毒包 膜和细胞膜融和，核衣壳进入细胞桨。 2 脱衣壳 3 核酸合成：逆转录酶作用下：形成 RNA:DAN杂交体；由RNA水解酶除去亲代RNA; 再由-DNA合成+DNA，形成双股DNA.
4、δ逆转录病毒属
代表种：牛白血病病毒（BLV) 还包括: 人T细胞白血病病毒(HTLV) HTLV和BLV均为外源性病毒，BLV可引起 牛产生B细胞淋巴瘤；HTLV能导致人发生 T细胞淋巴瘤和某些神经系统疾病。 HTLV缺少病毒癌基因，但其基因组中含 有一个PX区域，此区域的编码产物可对 病毒基因和细胞基因表达起调控作用。
HIV的复制:
HIV的gp120与细胞上受体结合→包膜融合核衣 壳入胞→脱壳释放出RNA进行复制。
Entry into the cell
T4 (CD4+) cells are major target
Receptor 1
Human HeLa Cell Human HeLa Cell transfected with CD4 antigen
4 进入细胞核，在整合酶配合下，病毒DNA 整合到细胞染色体中。 5 病毒复制的复活：在宿主RNA多聚酶作用 下，病毒 DNA转录成RNA。 胞浆内转录成衣壳蛋白：转录出病毒的 mRNA,在细胞核糖体上翻译出病毒的结构蛋 白和非结构蛋白，后者可修饰RNA成为病毒 子代基因组RNA. ,与结构蛋白装配为核衣 壳。 6.从宿主细胞获得包膜，构成完整的具有 感染性的子代病毒，以出芽方式释放到细 胞外。
1980年法国巴斯德研究所从一例淋巴腺病 综合症(LAS)病人分离到1株新的逆转录病 毒，命名为淋巴腺病综合症相关病毒(LAV)。 同时Gallo实验室也报道分离出类似病毒， 称HTLV-Ⅲ。研究表明LAV / HTLV-Ⅲ与人 类获得性免疫缺陷综合征(AIDS)有关。 国际病毒命名委员会将此2种病毒定名为人 类免疫缺陷病毒（HIV）,属逆转录病毒中 的慢病毒亚科。只有HIV感染人类。
（二）慢病毒亚科（lentivirinae） 慢病毒亚科与神经系统和免疫抑制性疾 病有关。包括Visna病毒、Maedi病毒和 HIV等。 Visna病毒引起的神经系统脱髓鞘疾病， 潜伏期数月，疾病持续数周至数年，动 物最终死亡。 Maedi病毒只感染羊，引起羊肺腺瘤，肺 可肿大为正常肺的2倍，潜伏期约2年， 疾病持续3-6个月，死亡率很高。
代表种：小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)
MMTV能以包括外源性病毒和内源性病 毒两种形式存在， 它除了含有病毒必 需基因（gag, pol, env）外，还含有 一个功能尚不清楚的ORF，但不携带病 毒癌基因。
外源性MMTV多发现于高乳腺癌的纯种小 鼠（C3H）中，在乳腺组织和乳汁中大 量存在，因此MMTV很容易通过乳汁传给 乳鼠， 并使之发展为乳腺癌。 但内源性MMTV不论在低乳腺癌发生率， 还是在高乳腺癌发生率的小鼠品系中均 可以检测到，其MMTV前病毒DNA整合在 宿主细胞的DNA中。
3、γ逆转录病毒属
代表种: 小鼠白血病病毒(MLV) 其它主要成员：
Moloney小鼠白血病病毒(Mo-MLV) Harvey小鼠肉瘤病毒(Ha-MSV) Abelson小鼠白血病病毒(A-MuLV) 猴肉瘤病毒（SSV)
该病毒属包括大多数从啮齿动物、食 肉动物和灵长类动物中分离的外源性 病毒和内源性病毒，以及从鸟类中获 得的部分外源性病毒，如网状内皮细 胞增生病毒（REV）。 在人类基因组中含有这一属的内源性 缺陷前病毒DNA，但未见到病毒的复 制颗粒。
HIV特点:
有包膜球状中型病毒（80-120nm） 病毒基因组有2条ss+ RNA。 病毒具有反转录酶和整合酶 基因复制时，可生成DNA中间体，并与细胞 染色体整合。 具有gag基因（组特异性的蛋白：聚合蛋白， 基质蛋白，衣壳蛋白）,pol基因（聚合酶， 反转录酶，整合酶）,env的基因（包膜糖 蛋白）
HIV分为两型：HIV-1与HIV-2。多数国家的 HIV感染是由HIV-1造成的，并且感染HIV-1 后超过90%的患者会在10－12年内发病成为 艾滋病；HIV-2主要分布在西部非洲。 HIV-2基因结构：与HIV-1有差别，它不含 VPU基因，但有一功能不明VPX基因。核酸 杂交法检查HIV-1与HIV-2的核苷酸序列仅 40%相同。env基因表达产物激发机体产生 的抗体无交叉反应。
艾滋病病人因抵抗能力极度下降会出现 多种感染，如带状疱疹感染、口腔霉菌 感染、肺结核，特殊病原微生物引起的 肠炎、肺炎、脑炎等，后期常常发生恶 性肿瘤，直至因长期消耗，全身衰竭而 死亡。 虽然全世界众多医学研究人员付出了巨 大的努力，但至今尚未研制出根治艾滋 病的特效药物，也无有效预防的疫苗。
三、人类嗜T细胞病毒 （HTLV）
逆转录酶与三种功能有关： ①使RNA形成RNA－DNA杂交体； ② RNA－DNA杂交体解离出RNA； ③再合成DNA－DNA的双股链。
一、逆转录病毒科分类
（一）泡沫病毒亚科（spumavirinae）
病毒常向胞质内空泡芽生，只在分裂的细 胞中增殖，使感染细胞发生泡沫变性，可 以感染许多哺乳类动物（灵长类、仓鼠、 牛和兔），尚未发现与人类疾病有关。 表现为：①动物持续的感染；②虽然感染 但并不发生病理性损害；③自发地形成泡 沫空泡合体细胞。例如，猫合胞体病毒、 牛合胞体病毒、猴泡沫病毒等，这些病毒 在体外无转化作用。
（三）肿瘤病毒亚科 （oncovirinae）
是逆转录病毒中数目最多的亚科，与 动物的白血病、肉瘤、淋巴瘤和乳腺 癌的发生密切有关。 1998年国际病毒分类委员会（ICTV） 根据病毒基因组结构和核苷酸序列及 其相关特性， 将RNA肿瘤病毒亚科分 为5个属。
1、α逆转录病毒属
代表种为：禽白血病病毒(ALV) 其它主要成员有： 劳氏肉瘤病毒 (RSV) 禽成髓细胞病毒(AMV) 劳氏相关病毒(RAV) 禽成红血细胞病毒(AEV)
2．Pol基因 编码聚合酶前体蛋白 （P34），经切割形成蛋白酶、整合 酶、逆转录酶、核糖核酸酶H，均为 病毒增殖所必需。
3．gag基因 编码聚合前体蛋白 （P55），经蛋白酶水解成P17、P24、 P7核蛋白，使RNA不受外界核酸酶破 坏。
4．TaT基因 编码P14蛋白，可与LTR结 合，以增加病毒所有基因的转录率，也 能在转录后促进病毒mRNA的翻译。 5．Rev基因 产物是一种顺式激活因子， 增强gag和env基因的表达，以合成相应 的病毒结构蛋白。
我国的状况
第一个时期（传入期）从1985年开始，每 年只有几例感染者被发现，多数是国外来 华的人员，或者是出国回归人员。大概持 续了4－5年。 第二个阶段（蔓延期）1989年至1993年， 主要集中在云南边境，中国开始了艾滋病 的流行。 第三个时期（快速增长期）从1994年开始， 其特点是以很快的速度波及全国。
1、传播途径 （1）水平传播：性接触、输血、注射； （2）垂直传播：胎盘、产道和母乳。 2、所致疾病 HTLV-1引起：成人T细胞白血病（ATL）和 B细胞淋巴瘤； HTLV-2引起：毛细胞白血病，慢性CD4细 胞淋巴瘤； 3、HTLV感染特点: 无症状感染，潜伏 期长，约1/20的感染者出现临床表现。
not Infected
Infected
HIV - Life History
CCR5 is a chemokine receptor
HIV
chemokine
CD4
CCR5 (CXCR4)
CD4
CCR5 (CXCR4)
Mutant
CD4 CCR5
Macrophage (T cell)
艾滋病严重地威胁着人类的生存，已引 起WHO及各国政府的高度重视，人员及经 费投入惊人。据统计，目前全球有近 4000万人感染了艾滋病病毒，成千上万 人命丧于此。 HIV感染者从感染初期算起，要经过数年、 甚至长达10年或更长的潜伏期后才会发 展成艾滋病病人。
成人T细胞白血病（ATL）病因学研究经 历了曲折的过程，直至20世纪80年代， 美国(1980）和日本学者（1981）从人类 T淋巴细胞白血病细胞分离出一种新的病 毒，且在体外可连续传代，并证实与人T 细胞白血病有病因学上的联系。有全身 性或局限性皮损（53％），如红皮病、 结节等。
免疫学和分子杂交方法研究表明，美国分 离的HTLV和日本的ATLV性质是一样的。 1983年9月在美国冷泉港举行的T细胞白血 病病毒讨论会上，学者同意两者是一种病 毒，并建议统一使用HTLV的命名。 目前从世界不同的实验室分离出的HTLV已 达100多株，由于其RNA和主要核心抗原 （P24、P19）的性质相似，归为HTLV-1型， 并认为是引起成人T淋巴细胞白血病（ATL） 的病原。
HIV模型图
脂双层膜
gp120 包膜糖蛋白 gp41 p24衣壳蛋白
p14内膜蛋白
p7核衣壳蛋白 逆转录酶 整合酶 蛋白酶
HIV的基因功能小结
调节基因编码蛋白的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ能
1．env基因 编码并糖基化成gp160，再 裂解成gp120和gp41。
gp120含有抗原决定簇，是Th细胞 表面CD4分子的配体，与病毒对T细胞 的吸附有关，在病毒与细胞融合中起 重要作用。gp120与跨膜蛋白gp41以非 共价键相连。gp41与靶细胞融合，促 使病毒进入细胞内。
包括外源性病毒(exogenous virus)和 内源性病毒(endogenous virus)。 外源性病毒是指在动物之间或细胞之 间进行水平传播的病毒。有些外源性 病毒的基因组还带有病毒癌基因，如 RSV含有src癌基因。
RSV病毒基因组的结构
长末端 重复序列
正常的病毒基因
癌基因