南农博士生化真题

2009动物生物化学试题 一、简单题 （一） 以下试剂或技术常见于蛋白质研究，请简要说明其用途。 1. Trypsin 2. 6mol/HCl 3. MALDI-TOF 4. ß-Mercaptoethanol：ß-巯基乙醇，可作为保护剂加入到蛋白质的抽提液中，可防止或延缓巯基氧化作用发生。另外，在SDS-PAGE电泳中，加入巯基乙醇进行热变性可以使蛋白质分子中的二硫键还原. 5. Coomassie blue：一种染料， （二） 解释以下酶学动力学的概念 6. Kcat：催化常数，在单底物反应中，且反应过程只产生一个活性中间产物时，单位时间内每个酶分子或每一活性部位催化的反应次数。 7. Km：米氏常数，物理含义是指ES复合物消失速度与形成速度之比，其数值为酶促反应达到最大反应速度一半时的底物浓度，即当V=1/2Vmax时，【S】=Km 8. Vo：酶促反应初速度，指在反应初始阶段，底物浓度基本维持不变时的反应速度。 9. Ki： 10. Optimum pH：最适pH （三） 以下试剂或技术常见于核酸和基因分析，请简要说明其用途 11. DNA chips：DNA芯片 12. Northern blotting：RNA杂交 13. Restriction endonuclease：限制性内切酶，一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，限于切割其序列之间的键的核酸内切酶。 14. EB：溴化乙啶 15. GMSA 二、问答题 1. 研究人员观察到，肌肉中70kD的原肌球蛋白（Tropomyosin）的离心沉降速度反而比65kD的血红蛋白（Hemoglobin）慢，它们的沉降系数分别是2.6s和4.31s。请给出你对此现象的解释。 沉降系数:单位离心力的作用下颗粒沉降的速度，以Svedberg表示，简称S，单位为秒（s），1S单位等于1x10-13s。沉降速度基本上由分子大小和形状决定。血红蛋白分子是由四个亚基构成 四聚体， 2. 你不会不知道Meselson和Stahl关于DNA半保留复制的经典实验吧？如果复制时全保留的，那么实验结果会是怎样呢？（图） 实验：大肠杆菌在以15NH4Cl为唯一氮源的培养基中生长，经过连续培养使所有DNA分子上都标记15N。15N-DNA比普通的14N-DNA的密度大，在氯化铯密度梯度离心时，这两种DNA分子将形成位置不同的区带。如果将15N标记的大肠杆菌转移到普通培养基（14N的氮源）培养，经过一代后，所有DNA的密度介于15N-DNA,14N-DNA之间，形成了一半含14N，一半含15N杂合子。两代后，14N和14N-15N

杂合分子等量出现。在继续培养可以看到14N-DNA分子增多，证明了DNA分子复制时原来的DNA分子均可被分成两个单位，分别构成子代分子的一半，从而证明了半保留复制。 若是全保留复制的，15N标记的大肠杆菌转移到普通培养基经一代培养后，子代均为14N-DNA。 3. 简述信号肽与信号肽学说

4. 依赖cAMP 的蛋白激酶介导了大多数由 cAMP产生的生理效应，不仅有瞬时的信号传递，如肾上腺素引导肌糖原快速分解（几秒钟），还有较长时间的传递（数小时），如引起促生长素抑制素（somatostatin）基因的表达就是其中之一。请简要描述后一种情况可能的生化机制。（图解） PKA：依赖cAMP蛋白激酶，由两类不同亚基构成的四聚体，R2C2 ，R为调节亚基，C为催化亚基，全酶没有活性，只有cAMP结合至R亚基时，导致R与C解离，才形成有蛋白激酶活性的C亚基。 cAMP由ATP在腺苷酸环化酶（AC）作用下转变生成，并可被磷酸二酯酶（PDE）分解成5-AMP失活。AC由五部分组成，兴奋性激素受体（Rs）、抑制性激素受体（Ri）、催化亚单位（C），Gs（鸟苷酸调节蛋白）蛋白、Gi蛋白。G蛋白起核心作用，活化受体通过G蛋白偶联到AC，由G引起AC的兴奋或抑制，从而决定cAMP的浓度的升降以制约细胞内各种生理效应。G蛋白由ɑ、ß、γ三亚基组成的多聚体，ɑ是功能亚基，有GTP或,GDP的结合位点及受体结合位点并有潜在的GTP酶活性。在激活前以三聚体中的ɑ亚基与GDP结合的方式存在，无活性。一旦配体与相应受体结合后GDP就解离，G蛋白构型改变，GTP结合形成ɑßγ-GTP，然后再镁离子参与下，ɑ亚基被激活，G蛋白阿迷分解成有活性的ɑ-GTP和ßγ二聚体，游离的ɑ-GTP和ßγ二聚体参与调节相应的效应酶或离子通道。随后ɑ亚基发挥GTP酶作用，是与之偶联的GTP水解成GDP，重新形成与ßγ二聚体高亲和力的ɑ-GDP复合物，重聚形成三聚体失活。 兴奋性激素与Rs结合，形成复合物后引起Gs蛋白ɑ亚基构象改变，GTP结合到ɑ亚基引起ɑ亚基与ßγ二聚体解离。然后Gsɑ-GTP与无活性的C单位结合，使之活化，催化ATP生成cAMP。同理抑制性激素与Ri结合，形成复合物后引起Gi蛋白ɑ亚基构象改变，GTP结合到ɑ亚基引起ɑ亚基与ßγ二聚体解离。然后Giɑ-GTP与无活性的C单位结合，使之活化，催化ATP生成cAMP。 5. 以原核生物为例，请列举有哪些蛋白因子参与了蛋白质的生物合成过程（翻译），它们有什么功能和共性（原核生物翻译过程图解，核糖体结构图解） 三种起始因子IF1，IF2,IF3 参与起始复合物与70s核糖体的形成。IF3促进70s亚基的解离，并与30s亚基结合，结合有IF3的30s亚基与mRNA结合，正好是30s亚基的p位对准起始密码子AUG是起始tRNA进入p位。IF2结合起始tRNA，然后再与30s亚基结合，使起始tRNA进入30s亚基p位，同时结合GTP，50s亚基结合，GTP水解，释放能量改变30s和50s亚基的构象，促进70s核糖体形成，同时释放IF1和IF2，这时A,P位都处于正确构象，A位空着准备肽链延伸。 延伸需要延伸因子EF-Tu和EF-Ts及GTP参与。EF-Tu首先与GTP结合，再与氨基酰-tRNA形成三元复合物，进入A位，进入后GTP水解成GDP，EF-Tu.GDP二元复合物解离下来。此时的EF-Tu不能直接与GTP或氨基酰-tRNA结合，而是EF-Ts置换下GDP,再形成EF-Tu.GTP,从而引入下一个氨基酰-tRNA。然后转肽酶将p位上的甲酰蛋氨酰基转移到A位形成肽键。肽键形成后，EF-G和GTP结合上来，EF-G具有GTP酶活性将GTP水解，在A位形成的肽基-tRNA转移到P位，同时将P 位上的空载体tRNA逐出核糖体，mRNA向前移动一个密码子。 终止需释放因子促成终止作用，RF1识别UAA,UAG,RF2识别UGA,UAA.RF3能刺激RF1和RF2的活性，发挥终止作用。释放因子均作用于A位，且需P位被肽基-tRNA所占据。没有tRNA能识别终止密码子。 6. 对于“脂类能否在动物机体中转变成葡萄糖”这个问题，答案不是简单的是与否，为什么？

2008年动物生物化学试题 一、名词解释 1. Intein 2. Apolipoprotein 3. Telomere：端粒（端粒酶，Telomerase：一种核糖核蛋白酶，是一种特殊的DNA聚合酶，属于一种反转录酶，是由RNA和蛋白质组份构成，以脱氧核糖核苷酸为产物，以酶分子中的RNA亚单位中的一段序列为模板，延伸染色体3’端，解决通常DNA复制时引起的末端隐缩。） 4. SD Sequence：SD序列，mRNA起初密码子AUG上游方向4-13个核苷酸之前有一段富含嘌呤的序列，其一致序列为AGGAGG，称SD序列，能够与16SrRNA3’端的富含嘧啶的序列相结合。不同基因的SD序列不完全相同，从而控制单位时间内起始复合物形成的数目，最终控制翻译产物的数量。 5. G-protein：鸟嘌呤核苷酸（GTP）结合蛋白，以前称鸟甘酸调节蛋白，G蛋白根据种类不同结构稍有不同，都是有ɑ、ß和γ三个亚基组成的多聚体，ɑ亚基时功能亚基，不同的ɑ亚基构成了不同的G蛋白，其上有GTP或GDP结合位点及受体结合位点，并有潜在的GTP酶活性 二、问答题 1. 除了氧分子本身，还有哪些化学因子对血红蛋白的氧结合能力发生影响？怎样影响 血红蛋白与氧的结合受许多因素的影响，尤其是组织和红细胞重大H+,CO2,BPG等，并具有一定的生理意义。增加的CO2压力或H+浓度都能降低血红蛋白对氧的亲和力，使血红蛋白的氧合曲线右移，促进氧的释放，而高浓度的氧可促使血红蛋白分子释放H+和CO2这种现象称波尔效应。生理效应：当血液流经组织时，组织中较高的H+和CO2浓度有利于血红蛋白释放更多的氧，并结合起到缓冲血液pH和CO2

运输的双重作用。当血液流经肺部时，由于氧分压增高，促进H+和CO2释放并有利

于血红蛋白与氧结合。BPG由于在血红蛋白分子中形成盐键，是血红蛋白分子构象稳定，与氧的亲和力下降，氧合曲线右移。BPG是红细胞中大量存在的糖代谢的中间产物，它能与血红蛋白形成Hb-BPG复合物。当氧与血红蛋白结合时，BPG即被排出。在肺部由于氧分压较高，BPG的存在不会对血红蛋白结合氧的饱和度产生显著的影响，在组织中氧分压较低，红细胞中的BPG则有助于氧从血红蛋白中释放出来。 2. 基于RNA新功能，认为也将它看作反式作用因子。你认为与蛋白质反式作用因子有何不同？ 3. 某个酶符合米氏动力学。在反应体系中加入抑制剂后，最大反应速度下降了75%，而Km没有改变。问：这是何种形式的抑制作用？抑制抑制剂浓度为2.0x10-4mol/L,求Ki。 这是非竞争性抑制作用。速度方程V=Vmax[S]/(1+[I]/Ki)(Km+[S]),没加抑制剂的速度方程V=Vmax[S]/Km+[S] 在非竞争性抑制剂存在条件下，相对活性a=Vi/Vo。抑制强度：