小鼠肝脏移植模型研究及其临床应用
肝细胞移植的临床应用
肝细胞移植的临床应用【摘要】 50多年前Sorrentino第一次用机械的方法把新鲜肝组织制成匀浆，并在体外进行药物实验，开创了肝脏功能的体外人工支持时代。
Berry和Friend 等在1969年用自己配置成的消化液进行大鼠肝灌注第一次完整分离肝细胞。
几十年来，肝细胞的分离培养及保存技术不断优化并为相关的肝脏研究和肝脏疾病的治疗提供了极为宝贵的途径。
尤其是近年来肝细胞移植的实验和临床应用不断取得进展，为肝脏疾病的治疗展现了诱人的前景。
优化和完善肝细胞的分离，培养和保存，仍然是关系到肝细胞移植效果的前提。
近年来，不少的研究者正致力于临床的应用研究。
根据所收集到的文献报道，世界各大医学中心目前已有近80例肝细胞移植的临床应用，其结果令人鼓舞。
可以预测，肝细胞移植作为整体器官移植的“桥梁”或替代治疗，将给众多肝病患者带来福音。
本文就近年来肝细胞移植的临床应用研究进展作一综述。
【关键词】肝细胞分离细胞培养移植临床应用肝脏是机体最重要的器官之一，在生理和病理状态下，它是能量代谢、解毒以及血浆蛋白合成的中心。
当发生急性肝功能衰竭时，只有15%～25%的病人得以生存［1］。
许多慢性肝脏疾病如肝硬化、肝癌等也最终导致肝脏功能的衰竭。
长期以来，国内外学者注重于肝器官移植的研究, 因为肝移植疗效显著，1年存活率可达70%以上。
但肝移植对技术条件、适应证及组织相容性等要求较高, 加之肝供体的短缺，使肝移植的临床应用严重受限。
因此，临床上急需其他方法，作为“桥梁”来缓解和改善肝功能，延长患者的生存时间，而等待肝移植，甚至取代肝移植。
由此，肝细胞移植及生物人工肝的研究成为热点［2,3］。
不管是肝细胞移植或生物人工肝，肝细胞的分离、培养和保存是肝细胞临床应用的基石。
就肝细胞分离培养和保存尤其是肝细胞移植的临床应用研究进展现综述如下。
1 肝细胞分离培养与保存1.1 肝细胞的来源1．1.1 人肝细胞人类肝脏细胞是最好的供体，因为肝脏细胞分化较高，有较好的合成和代谢功能［4］，因此肝细胞移植首选人肝细胞。
肝纤维化动物模型造模方法的研究进展
肝纤维化动物模型造模方法的研究进展I. 综述肝纤维化是一种严重的肝脏疾病，其病理特征为肝实质中大量纤维组织增生，导致肝脏功能受损。
肝纤维化的发生和发展受到多种因素的影响，如病毒感染、药物毒性、酒精性肝病等。
因此建立有效的动物模型对于研究肝纤维化的发病机制和治疗方法具有重要意义。
本文将对近年来关于肝纤维化动物模型造模方法的研究进展进行综述。
在构建肝纤维化动物模型时，首先需要选择合适的动物种类。
常用的动物模型包括CRISPRCas9基因敲除小鼠、自发性肝纤维化大鼠、四氯化碳(CCl诱导的肝纤维化大鼠等。
其中CRISPRCas9基因敲除小鼠是目前最为理想的肝纤维化动物模型之一，因为它可以精确地靶向特定基因进行敲除，从而有效地模拟人类肝纤维化的病理过程。
目前主要采用CRISPRCas9技术进行基因敲除。
通过构建特定的sgRNA序列，可以特异性地靶向目标基因，实现对其表达水平的抑制。
这种方法的优点是操作简便、高效，且可以精确地控制基因敲除的范围和程度。
然而CRISPRCas9技术仍存在一定的局限性，如可能导致非特异性敲除、影响其他基因的表达等。
因此未来还需要进一步优化该技术，以提高其在肝纤维化动物模型构建中的应用效果。
另一种常用的肝纤维化动物模型构建方法是通过化学物质的直接或间接作用诱导肝纤维化。
常用的化学物质包括四氯化碳(CCl、二甲基亚硝胺(DMN)、苯并芘等。
这些化学物质可以通过不同途径进入肝脏，引起肝细胞损伤和坏死，进而导致肝纤维化的发生。
然而这种方法存在一定的毒副作用，如长期暴露于高浓度的CCl4可能会导致肝癌的发生。
因此在使用化学物质诱导法构建动物模型时，需要严格控制剂量和时间，以降低实验风险。
A. 肝纤维化的定义和重要性肝纤维化是一种严重的肝脏疾病，其特征是正常肝细胞被大量的胶原纤维所替代，导致肝脏结构和功能的严重改变。
这种病变过程被称为纤维化，最终可能导致肝硬化，甚至肝癌。
因此对肝纤维化的早期诊断和治疗具有重要的临床意义。
小鼠肝脏T细胞耐受和免疫调节研究
小鼠肝脏T细胞耐受和免疫调节研究肝脏是人体重要的代谢器官，不仅可以代谢物质，还可以清除毒素。
同时，肝脏还是一个重要的免疫器官，其中T细胞在肝脏中扮演着重要的角色。
然而，肝脏与其他器官不同，它具有特殊的免疫系统，是体内唯一能够耐受大量抗原输入的器官。
肝脏耐受和免疫调节机制的研究对于肝脏移植、自身免疫性疾病和肝炎治疗等具有重要的临床意义。
本文将介绍一些最新的小鼠肝脏T细胞耐受和免疫调节研究的进展和成果。
重要的T细胞亚群肝脏中最重要的T细胞亚群是CD8+ T细胞和CD4+ T细胞。
CD8+ T细胞主要通过识别和清除肝脏内的病毒和肿瘤细胞，因此这些细胞是肝炎和肝癌等肝脏疾病的重要控制者。
CD4+ T细胞则是通过调节其他免疫细胞的功能（如抗体产生和细胞毒性T细胞的形成）来影响免疫反应。
在肝脏中，CD4+ T细胞在调节和抑制免疫反应中发挥至关重要的作用。
T细胞的耐受和免疫调节机制肝脏具有独特的免疫耐受和免疫调节机制。
当抗原进入肝脏时，肝内专门的抗原提呈细胞（如肝星状细胞）可以摄取抗原，并将其呈递给T细胞。
与此同时，肝脏内的调节性T细胞也会受到刺激，从而发挥免疫调节作用。
然而，在某些情况下，免疫耐受机制可能会被打破，T细胞将作为效应细胞对抗原做出反应，导致肝脏损伤和炎症。
近期的研究进展最近的一些研究显示，肝脏中的T细胞可能会通过多种机制调节免疫反应。
例如，肝脏MDSC（髓系来源的抑制性细胞）可通过直接干扰CD8+ T细胞的活性或通过分泌免疫抑制因子来抑制免疫反应。
此外，肝脏内的肝星状细胞还可以通过直接诱导CD4+ T细胞分化为调节性T细胞，从而抑制免疫反应。
这些新的研究揭示了肝脏中的多种调节性T细胞亚群之间的复杂相互作用。
另一个研究领域是T细胞受体（TCR）的研究。
研究人员使用基因编辑技术发现，特定的TCR可以诱导耐受或免疫活性，这表明特定的T细胞亚群可能更适合用于治疗某些疾病。
这项研究为肝脏T细胞耐受和免疫调节提供了可能用于临床治疗的新策略。
血管内皮间质样转分化遗传示踪小鼠模型的构建及其在肝纤维化研究中的应用
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ － ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｃｉｎｇ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ
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ｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｄＴｏｍａｔｏ ａｎｄ ｅＧＦＰ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｆｔｅｒ ｂｅｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｄ
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人源化小鼠模型在感染性疾病方面的研究及应用
人源化小鼠模型在感染性疾病方面的研究及应用摘要：研究人类疾病的发病机制需要理想的动物模型来进行大量的体内试验，但是动物种属差异使得某些病原微生物仅仅对人类具有特异的易感性及致病性，限制了人们对疾病发病机理的理解及预防治疗。
因此，构建具有人类功能性基因、细胞或组织的人源化动物模型尤为重要。
本文对人源化小鼠模型的研究概况及其在感染性疾病中的应用进行综述。
关键词：人源化小鼠；动物模型；感染性疾病人源化小鼠模型是指带有功能性的人类基因、细胞或组织的小鼠模型。
这种模型通常被用于人类疾病体内研究的活体替代模型[1]。
由于种属差异，利用普通动物模型得到的实验结果有时在人体上不能适用。
所以，利用转基因或同源重组的方法，将人类基因“放置”在小鼠模型上所制备的人源化小鼠模型，大大提高了其作为模拟某些人类疾病的有效性。
当前，基因被修饰的人源化小鼠模型已经在癌症、传染病、人类退化性疾病、血液病等许多不同的研究领域有广泛的应用，成为有价值的科研工具。
近几年，带有人类基因的人源化小鼠模型已经被证明在解码人类疾病奥秘中具有巨大的优势和广泛的应用前景[2]。
1人源化小鼠模型的发展人源化小鼠模型研究的第一次突破性进展是1983年Bosma等成功培养出的T/B淋巴细胞缺陷的重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠。
Bosma等于近交系C.B-17小鼠中发现位于第16号染色体的单个基因隐性突变可导致小鼠出现T/B淋巴细胞缺陷的重症联合免疫缺陷综合征（SCID），称为SCID小鼠。
SCID小鼠表现为缺乏成熟的功能性T、B淋巴细胞及低免疫球蛋白血症。
造成SCID小鼠出现严重免疫缺陷的最主要原因是纯合SCID基因突变导致淋巴细胞抗原受体基因VDJ编码顺序的重组酶活性异常，故不能有效地合成免疫球蛋白与T细胞受体。
但是由于这种小鼠存在正常的自然杀伤(NK)细胞以及单核/巨噬细胞系统，应用这种小鼠产生的人源化小鼠模型效率不高[3]。
NOD/SCID小鼠的发现和使用成为人源化小鼠模型发展过程中的又一里程碑式事件。
异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型的研究_禄保平
·论著·异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型的研究禄保平，杨晓娜，许家艳【摘要】目的探索应用异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型，并初步阐明其机制。
方法昆明种小鼠 50 只，随机分为异烟肼正常剂量造模组（常量组）、2 倍剂量造模组（2 倍量组）、5 倍剂量造模组（5 倍量组）、8 倍剂量造模组（8 倍量组）和空白对照组，每组各 10 只。
各造模组分别以 90、180、450、720 mg/kg 剂量的异烟肼灌胃，18 h 后检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平并取肝组织进行光镜观察，探索导致明显急性肝损伤的相对合适剂量。
另取昆明种小鼠 90 只，随机分为单纯造模组（40 只）、干预造模组（40 只）和空白对照组（10 只），各造模组以相对合适剂量异烟肼灌胃，其中干预造模组于造模前以甘利欣75 mg/kg 体重连续灌胃 5 d，18、36、54、72 h 后分别检测血清 ALT、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧物酶（GSH-Px）水平，并进行肝组织光镜和电镜观察，探索导致明显急性肝损伤的相对合适时间及可能机制。
结果在探索相对合适剂量实验中，2 倍量组小鼠血清ALT、AST 分别为（101.6 ± 6.3）和（108.1 ± 14.9）U/L，明显高于空白对照组的（30.1 ± 3.6）、（35.3 ± 6.5）U/L 和常量组的（52.8 ± 5.3）、（53.9 ± 8.9）U/L，差异均有统计学意义（均P < 0.05），肝细胞出现广泛的脂肪变性和水肿，肝窦几乎消失；5 倍量组小鼠死亡 7 只，8 倍量组小鼠则全部死亡。
在探索相对合适时间及发生机制实验中，应用2 倍剂量异烟肼灌胃后 18 h，单纯造模组小鼠血清 ALT、MDA 水平明显高于空白对照组，SOD、GSH-Px 水平明显低于空白对照组，肝细胞广泛损伤，细胞超微结构显著变化。
小鼠移植肝内白介素-6对移植肝功能恢复的影响
图一，肝移植物功能恢复过程图解肝脏再生的转录调控正常肝细胞处于静息期，具有潜在再生的能力。
在切除、缺血再灌注及肝移植的条件下，表现再生活性。
处于静止期的肝细胞，立即转向快速增殖，在２４—４８小时内启动第一轮的ＤＮＡ合成过程“４、“’。
在肝脏再生的复杂过程中，肝脏始终保持其它的功能相对稳定。
这其中当然有特殊类型的细胞和机制参与，目前尚未清楚上述问题的机制。
研究认为，细胞因子在再生早期转录因子的激活中起重要的作用。
参予的细胞因子有ＩＬ—ｌ、ＩＬ一６，ＴＮＦ—ｎ；转录因子有核因子。
Ｂ和信号转导，转录因子激活剂３（ＳＴＡＴ３）等““”’。
缺乏ＴＮＦ受体ｌ的转基因小鼠表现出明显的肝细胞复制缺陷，在肝切除后无明显的Ｎ卜。
Ｂ和ＳＴＡＴ３的ＤＮＡ激活的迹象“”。
在ＩＬ一６缺陷型的转基因小鼠的肝切除模型中ＳＴＡＴ３的ＤＮＡ结合活性消失，ＤＮＡ复制的现象非常迟缓“５“’。
再生过程调控系统相当复杂，需要多种转录因子和基因产物的相互作用和准确协调。
细胞因子表达、转录因子激活在炎症反应早期出现的细胞因子，ＴＮＦ—ｎ，ＩＬ－６等，也出现在大鼠肝移植模型的早期损伤修复中。
因此这些细胞因子有双重的作用，既参予炎症反应，又参加再生反应。
应用大鼠肝移植模型，发现转录因子的激活和细胞因子ＩＬ－６、ＴＮＦ—Ｑ与冷缺血时间明显相关。
随冷缺血时间延长，ＩＬ一６、ＴＮＦ—ｎ的表达增强，持续表达至再灌注后７２小时””。
其它参予的成分有ＮＦ。
Ｂ，Ｃ－ｊｕｎ，Ｎ一末端激酶（ＪＮＫ）””。
以前认为ＳＴＡＴ３参予细胞循环的激活，是否参予移植后的修复过中山大学博士学位论文：小鼠移植肝内白介素一６对移植肝功能恢复的影响正文复过程受多种因素影响。
移植物局部损伤和炎症也可引起更严重的免疫反应。
大鼠的肝移植模型证实移植后缺血再灌注损伤、免疫反应、组织修复过程相图二，肝脏的冷却血损伤和免疫反应互影响。
“３”，见图二。
另外观察到ＭＨＣ—ＩＩ类抗原，共刺激分子Ｂ７的表达增强””。
结直肠癌肝转移异种移植小鼠模型研究进展
结直肠癌肝转移异种移植小鼠模型研究进展
沈可(综述);胡晨(审校)
【期刊名称】《现代医药卫生》
【年(卷),期】2023(39)3
【摘 要】结直肠癌(CRC)是目前临床确诊率较高的恶性肿瘤,其发病率和死亡率也
持续增加。CRC高发病率在于缺乏常规筛查和不健康的生活方式,CRC确诊患者的
高死亡率主要归咎于肿瘤的侵袭性和转移性,而肝脏是最常受累和最致命的部位。
异种移植小鼠模型是研究CRC发生肝转移的病理过程、分子机制及临床治疗的主
要研究工具之一。该文将对CRC肝转移异种移植小鼠模型的研究进展做一综述。
【总页数】5页(P482-486)
【作 者】沈可(综述);胡晨(审校)
【作者单位】湖州师范学院医学院
【正文语种】中 文
【中图分类】R73
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直肠癌肝转移小鼠模型建立及应用现状5.小鼠结直肠癌肝转移原位瘤模型
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小鼠肝脏移植模型研究及其临床应用
肝脏移植是一种重要的治疗肝脏疾病的手段，但由于供体缺乏和排斥反应等问题，其临床应用受到了一定的限制。
为了更好地研究肝脏移植模型并探索其临床应用，科学家们运用小鼠作为模型进行了大量研究。
一、小鼠肝脏移植模型的建立
小鼠肝脏移植作为一种动物实验模型，是用来研究肝脏疾病治疗和肝功能重建
的有效手段。
研究人员运用小鼠同种、异种肝脏移植，成功模拟了肝脏移植术后肝移植组织修复、排异反应等生理过程，为肝脏移植的临床应用提供了重要参考。
在小鼠肝脏移植的模型建立中，需要进行供体与受体小鼠的筛选、肝脏获取和
获取后的处理等多个步骤。
在特殊条件下，肝脏移植后的小鼠可以成功存活，而且肝脏移植后的组织修复和新陈代谢状态也得到了良好的恢复。
二、小鼠肝脏移植模型的应用和相关研究
小鼠作为肝脏移植模型，极大地拓展了肝脏移植的研究领域。
基于小鼠肝脏移
植模型，研究人员开展了关于肝脏移植的多个研究领域，例如肝脏再生、免疫学、肝细胞发育以及治疗肝脏疾病等。
小鼠肝脏移植模型也得到了广泛的应用。
例如，在研究肝脏造血干细胞分化和
身份确定等方面，小鼠肝移植模型得到了广泛应用。
此外，小鼠肝脏移植还被用于评估局部和全身免疫反应，并为临床移植中的免疫抑制药物开发提供了基础。
不过，小鼠肝脏移植模型也存在一些不足。
例如，小鼠的生理结构与人类不同，导致肝脏移植效果需要配合其他调控手段才能发挥最大的治疗效果。
三、小鼠肝脏移植模型在临床应用中的前景
小鼠肝脏移植模型研究的热潮给人们带来了极大的期待，希望能有效地促进肝脏移植的临床应用。
目前，小鼠肝脏移植模型已被广泛地应用于肝脏移植相关的新药研究、肝脏再生等领域。
未来，随着相关研究的深入推进，小鼠肝脏移植模型有望实现与临床应用更好的衔接，推动肝脏移植技术的发展。
综上所述，小鼠肝脏移植模型的建立和研究具有重要意义，为肝脏移植的临床应用提供了理论基础和参考。
虽然小鼠肝脏移植模型研究存在一些不足，但随着相关研究的深入探索，相信小鼠肝脏移植模型的临床应用前景会更加广阔。