Alb-cre／DTR 小鼠可诱导性肝损伤模型的建立
小鼠肝癌模型的建立及PTP1B表达的研究
小鼠肝癌模型的建立及PTP1B表达的研究肝癌是目前世界上最常见的癌症之一，而小鼠肝癌模型是研究肝癌病理生理学、分子遗传学等方面的重要工具。
本文将介绍小鼠肝癌模型的建立过程及PTP1B表达的研究。
1. 小鼠肝癌模型的建立小鼠肝癌模型可以通过许多方法进行建立，其中最常用的是化学诱导法、基因改造法和放射性物质诱导法。
本文将着重介绍化学诱导法建立小鼠肝癌模型的过程。
首先，选择适合的小鼠品系进行实验，一般选择C57BL/6J品系的雄性小鼠。
然后，通过口服或注射的方式给小鼠灌服化学致癌物质二甲基亚硝胺（DMN）、二乙二酸氮氫鈉（DEN）或对二氯苯胺（2-AAF）等化学物质，导致肝脏发生损伤和炎症反应，进而促进肝癌的发生。
此后，可根据肝癌的形态特征、肿瘤大小和数量、肿瘤组织学特征等指标对小鼠进行肝癌诊断。
2. PTP1B表达的研究PTP1B是一种酪氨酸磷酸酶，在正常情况下具有负调控胰岛素和胰高血糖素信号通路的作用。
PTP1B在多种人类肿瘤中发挥着重要的作用，如乳腺癌、前列腺癌和肝癌等。
因此，对PTP1B在肝癌发生发展中的作用进行深入研究具有重要意义。
通过小鼠肝癌模型可以获得不同发展阶段的肝癌组织标本，可用于研究PTP1B的表达情况。
目前主要采用免疫组织化学、Western blot、实时荧光定量PCR等技术手段进行测定。
研究结果显示，肝癌组织中PTP1B的表达显著升高，与肝癌细胞增殖和转移相关。
另外，PTP1B抑制剂等新型治疗手段的出现为治疗肝癌带来了新的机遇。
通过对PTP1B的研究，不仅可以深入了解肝癌的发生发展过程，还可以为肝癌的治疗提供新思路和策略。
总之，小鼠肝癌模型的建立和PTP1B表达的研究对于肝癌相关研究具有重要的意义。
未来还需要进一步加强肝癌发生机制和新型治疗手段的研究，为肝癌的预防和治疗提供更有效的手段。
肝功能损伤小鼠模型制备方法
可以参考以下步骤来制备肝功能损伤小鼠模型：
实验动物选择：选择SPF级Balb/c小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g-22g。
实验分组：实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
建模方法：建立小鼠慢性肝损伤模型。
具体方法为腹腔注射20%CCL4油溶液（5ml/kg），一周2次，连续注射12周。
在12周末次给药3d后，腹腔注射D-Gal（1g/kg）、LPS（10ug/kg）。
干预给药：分别给药TSA（Trichostatin A），正丁酸钠，NF-κB抑制剂（PDTC）等。
模型评价：待小鼠清醒后放回饲养室饲养，密切关注小鼠的状态及生存状况并做好记录。
在建模完成后，处死各组小鼠，取血并分离血清用于生化检测；取肝组织、肠组织进行病理检测。
生化指标包括ALT、AST；取肝组织时，经固定、脱水、包埋后，制石蜡切片；取肠组织进行HE染色。
对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤小鼠肝组织糖基转移酶Colgalt2表达的变化
对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤小鼠肝组织糖基转移酶Colgalt2表达的变化郭乐乐;张晓慧;张向颖;胡中杰;任锋;张晶【摘要】目的探讨对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤小鼠肝组织糖基转移酶Colgalt2表达的变化.方法取C57BL/6小鼠100只,采用腹腔注射APAP溶液法建立小鼠急性肝损伤模型.首先建立不同浓度干预组,每组10只,分别给予[0 mg·kg-1 APAP(对照组)、100 mg·kg-1 APAP处理组、250 mg.kg-1 APAP处理组、500 mg·kg-1 APAP处理组和1000 mg·kg-1 APAP处理组],再建立不同时间干预组,每组10只,均给予500 mg·kg-1 APAP腹腔注射,分别观察[0 h APAP(对照组)、2 h APAP处理组、4 h APAP处理组、8 h APAP处理组和12 h APAP处理组].采用Real-time quantitative PCR和Western blot法检测肝组织对糖基转移酶Colgalt2基因及其蛋白表达情况.结果在250 mg·kg-1、500 mg·kg-1和1000 mg·kg-1 APAP处理组,血清ALT分别为(1360.5±189.8)IU/L、(3191.2±118.6)IU/L和(5022.7±234.6)IU/L,AST分别为(2147.1±133.4)IU/L、(3628.8±107.9)IU/L和(5854.5±295.1)IU/L,较对照组显著升高(P<0.05);在4 h、8 h和12 h APAP处理组,血清ALT水平有类似的变化;在100 mg·kg-1、250 mg·kg-1、500 mg·kg-1、1000 mg·kg-1 APAP处理组,肝组织Colgalt2基因水平较对照组显著升高;在2 h、4 h、8 h和12 h APAP处理组,肝组织Colgalt2基因水平较对照组逐渐显著升高,肝组织Colgalt2蛋白表达水平也随APAP干预剂量的增加和干预时间的延长也呈逐渐增强趋势.结论肝组织糖基转移酶Colgalt2在对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤小鼠发病过程中发挥着重要的作用.【期刊名称】《实用肝脏病杂志》【年(卷),期】2019(022)001【总页数】4页(P29-32)【关键词】急性肝损伤;对乙酰氨基酚;糖基转移酶;Colgalt2;小鼠【作者】郭乐乐;张晓慧;张向颖;胡中杰;任锋;张晶【作者单位】100069 北京市首都医科大学附属北京佑安医院丙型肝炎与中毒性肝病科;100069 北京市首都医科大学附属北京佑安医院丙型肝炎与中毒性肝病科;北京市肝病研究所;100069 北京市首都医科大学附属北京佑安医院丙型肝炎与中毒性肝病科;北京市肝病研究所;100069 北京市首都医科大学附属北京佑安医院丙型肝炎与中毒性肝病科【正文语种】中文对乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）和含有APAP的药物是最常用的解热镇痛药，临床上主要用于普通感冒或流行性感冒引起的发热，以缓解轻至中度疼痛[1]。
四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型建立与考察
基金项目!河南省科技创新人才计划C杰出青年项目"%&)%""&%""!"$%国家-十三五.科技重大专项课题"!"%'RU%"$!&&"+C""!$ 作者单位!%"""(#北京解放军总医院第五医学中心中医肝病科"付双楠#宫?$%河南中医药大学"高达#郭佳佳#苗明三#朱平生$ 通信作者!朱平生#!"#$%!LE)8$,65E+,6! %!+*(G"%宫?#!"#$%!6G,6"#,("!!%+(*(G"
期间自由饮水(摄食#第'天开始联苯双酯组以&*+!& "6+96灌胃#空 白 对 照 组 及 模 型 组 灌 胃 等 剂 量 蒸 馏 水#每天%次#连续灌胃$'%第%&天腹腔注射"*%? 浓度 44=) 橄榄油溶液制备急性肝损伤模型#分别于 造模后((+(%!和!)E后处理各组动物#以%"?水合 氯醛按"*"( "=+%"6麻醉动物#摘眼球取血#) \# )""";+"$,离 心 %& "$,#取 血 清#采 用 全 自 动 生 化 分 析仪测各组生化指标 2=K 及 2IK'
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小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型的建立
中华消化外科杂志 ２０１３年 ９月第 １２卷第 ９期 ＣｈｉｎＮｏ．９
·７０３·
·论著·
小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型的建立
麻勇 汪大伟 刘连新 王建奇 王继洲 潘华洋 潘尚哈 姜洪池
【摘要】 目的 建立小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型并分析损伤评估指标的变化趋势。方法 采 用 ９６只 ７～８周龄的纯系 Ｃ５７ＢＬ／６雄性小鼠作为研究对象，建立 ７０％肝脏缺血再灌注损伤模型。按照缺 血时间将小鼠分为假手术组和缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组，每组 ２４只。各组小鼠分别于再灌注后 ６、１２、２４和 ４８ｈ处死。通过检测血清 ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦα、ＩＬ６和巨噬细胞炎性蛋白２（ＭＩＰ２）水平以及病理组织学评 分、细胞凋亡指数等方法评估各组小鼠肝组织的损伤情况。两独立样本比较采用 ｔ检验。结果 术后 ８８只小鼠存活，８只死亡，造模成功率为 ９１．７％（８８／９６）。假手术组、缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＡＬＴ水平分别 为（３５±２４）Ｕ／Ｌ、（１７０３±４４２）Ｕ／Ｌ、（５１３３±６８１）Ｕ／Ｌ和（８２３３±８０８）Ｕ／Ｌ，缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＡＬＴ水平 显著高于假手术组（ｔ＝６．５４，１２．９７，１７．５６，Ｐ＜０．０５）；ＡＳＴ水 平 分 别 为 （８７±２８）Ｕ／Ｌ、（２６６７±４５１）Ｕ／Ｌ、 （６３３３±７７８）Ｕ／Ｌ和（９９６７±１１６８）Ｕ／Ｌ，缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＡＳＴ水平显著高于假手术组（ｔ＝９．８９，１３．８９， １４．６５，Ｐ＜０．０５）；ＴＮＦα水平分别 为 （１４±５）μｇ／Ｌ、（８３±１４）μｇ／Ｌ、（１３３±１７）μｇ／Ｌ和 （２０２±２１）μｇ／Ｌ， 缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＴＮＦα水平显著高于假手术组（ｔ＝７．７８，１１．８２，１５．３４，Ｐ＜０．０５）；ＩＬ６水平分别为 （３２±９）μｇ／Ｌ、（４９３±１６８）μｇ／Ｌ、（８４４±１６６）μｇ／Ｌ和（１３４５±１９８）μｇ／Ｌ，缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＩＬ６水平 显著高于假手术组（ｔ＝４．７４，８．４６，１１．４８，Ｐ＜０．０５）；ＭＩＰ２水 平 分 别 为 （３７±１１）μｇ／Ｌ、（１０２±３５）μｇ／Ｌ、 （１７７±３２）μｇ／Ｌ和（２７９±５０）μｇ／Ｌ，缺血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组 ＭＩＰ２水平显著高于假手术组（ｔ＝３．０５，７．２８， ８．１９，Ｐ＜０．０５）；细胞凋亡指数分别为 １．７％±２．１％、２２．７％±８．６％、５４．３％±１１．２％和 ７６．３％±１４．８％，缺 血 ３０、６０、９０ｍｉｎ组细胞凋亡指数显著高于假手术组（ｔ＝４．１０，８．０４，８．６３，Ｐ＜０．０５）。在缺血时间相同的 情况下，随着再灌注时间的延长，各监测指标呈“抛物线”样变化趋势。结论 小鼠肝脏部分缺血再灌注损 伤模型能较好地反映小鼠肝组织的损伤情况。随着缺血时间的延长，小鼠肝脏的缺血再灌注损伤程度逐 渐加重；随着再灌注时间的延长，ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦα、ＩＬ６、ＭＩＰ２以及病理组织学评分和细胞凋亡指数均呈 现“抛物线”样变化趋势。 【关键词】 肝脏； 缺血再灌注损伤； 小鼠； 模型
血管内皮间质样转分化遗传示踪小鼠模型的构建及其在肝纤维化研究中的应用
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ － ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｃｉｎｇ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ
ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｓｔｕｄｉｅｓ
， ， ， ， ， （ ， ＸＵ Ｈａｏ１ ＲＵＡＮ Ｂａｉ１，２ ＬＩ Ｚｈｉｗｅｎ１ ＦＡＮＧ Ｚｈｉｑｉａｎｇ１ ＷＡＮＧ Ｌｉｎ１ ＤＯＵ Ｋｅｆｅｎｇ１ ． １． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｎｄ ， ， ， ’ ， ； ， Ｓｐｌｅｎｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｘｉｊｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｉｒ Ｆｏｒｃｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｘｉ ａｎ ７１００３２ Ｃｈｉｎａ ２． Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｅｒｏｓｐａｃｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ ， ， ’ ， ） Ａｅｒｏｓｐａｃｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ａｉｒ Ｆｏｒｃｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｘｉ ａｎ ７１００３２ Ｃｈｉｎａ ： ， （ ： ） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ ＤＯＵ Ｋｅｆｅｎｇ ｄｏｕｋｅｆ＠ ｆｍｍｕ． ｅｄｕ． ｃｎ ＯＲＣＩＤ ００００ － ０００２ － ８８５７ － ５６６３
ｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｄＴｏｍａｔｏ ａｎｄ ｅＧＦＰ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｆｔｅｒ ｂｅｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｄ
， ｂｙ ｔａｍｏｘｉｆｅｎ ＬＳＥＣｓ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ Ｃｄｈ５ － ＣｒｅＥＲＴ ／ Ａｃｔａ２ － ＫＩ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｃｉｎｇ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｅＧＦＰ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ － ， ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈｏｕｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｔｄＴｏｍａｔｏ ａｌｏｎｅ． Ｃｏｎｃｌｕ
异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型的研究_禄保平
·论著·异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型的研究禄保平，杨晓娜，许家艳【摘要】目的探索应用异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型，并初步阐明其机制。
方法昆明种小鼠 50 只，随机分为异烟肼正常剂量造模组（常量组）、2 倍剂量造模组（2 倍量组）、5 倍剂量造模组（5 倍量组）、8 倍剂量造模组（8 倍量组）和空白对照组，每组各 10 只。
各造模组分别以 90、180、450、720 mg/kg 剂量的异烟肼灌胃，18 h 后检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平并取肝组织进行光镜观察，探索导致明显急性肝损伤的相对合适剂量。
另取昆明种小鼠 90 只，随机分为单纯造模组（40 只）、干预造模组（40 只）和空白对照组（10 只），各造模组以相对合适剂量异烟肼灌胃，其中干预造模组于造模前以甘利欣75 mg/kg 体重连续灌胃 5 d，18、36、54、72 h 后分别检测血清 ALT、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧物酶（GSH-Px）水平，并进行肝组织光镜和电镜观察，探索导致明显急性肝损伤的相对合适时间及可能机制。
结果在探索相对合适剂量实验中，2 倍量组小鼠血清ALT、AST 分别为（101.6 ± 6.3）和（108.1 ± 14.9）U/L，明显高于空白对照组的（30.1 ± 3.6）、（35.3 ± 6.5）U/L 和常量组的（52.8 ± 5.3）、（53.9 ± 8.9）U/L，差异均有统计学意义（均P < 0.05），肝细胞出现广泛的脂肪变性和水肿，肝窦几乎消失；5 倍量组小鼠死亡 7 只，8 倍量组小鼠则全部死亡。
在探索相对合适时间及发生机制实验中，应用2 倍剂量异烟肼灌胃后 18 h，单纯造模组小鼠血清 ALT、MDA 水平明显高于空白对照组，SOD、GSH-Px 水平明显低于空白对照组，肝细胞广泛损伤，细胞超微结构显著变化。
10种细胞损伤模型建立方法
10种细胞损伤模型建立方法转载请注明来自丁香园发布日期：2012-10-09 14:36 文章来源：丁香园分享到：收藏夹新浪微博腾讯微博开心网豆瓣社区人人网关键词：细胞细胞培养技术专题义翘神州丁香园丁香通点击次数：997现在很多实验都涉及到细胞损伤模型的建立和运用，如CCl4诱导肝细胞损伤模型（体内、体外）、PC12细胞的NO和淀粉样蛋白(Aβ)损伤模型、神经元缺血再灌注损伤模型，以及脉络宁对骨骼肌缺血再灌注损伤保护作用等。
一、体外肝细胞损伤模型建立（CCl4和H2O2）1大鼠肝细胞的分离和培养大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。
将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500 r·min-1，1 min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次。
然后用完全1640培养液（内含10％小牛血清，105U·L-1青霉素，100 mg·L-1链霉素和10 mg·L-1胰岛素）制成1×109个·L-1肝细胞悬液。
分离的肝细胞经0.6％台盼蓝拒染法测得细胞活力大于90％，高碘酸雪夫反应显示糖原法鉴定99％为肝实质细胞。
将上述肝细胞悬液分别加入24孔（每孔1 ml）和96孔（每孔0.1 ml）培养板中，置37℃，5％CO2培养箱中培养。
12～16 h后可见肝细胞贴壁于培养板孔底上生长。
2CCl4诱导肝细胞坏死性损伤模型的建立肝细胞培养12 h后，吸弃上清，更换培养液并加入不同浓度的CCl4〔（1～16mmol·L-1），以少量的二甲亚砜助溶，二甲亚砜终浓度为0.1％（体积分数）〕，作用不同时间（1～12 h）后，收集24孔板中培养上清检测AST，以及肝细胞的MDA含量和GSHpx 活性；同步测定96孔板中培养肝细胞的MTT反应。
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Alb-cre／DTR 小鼠可诱导性肝损伤模型的建立任晓楠;任蓉蓉;刘雪;杨华;秦波音;周晓辉【摘要】目的：建立Alb-cre／DTR双转基因小鼠模型并进行相关表型分析，在此基础上建立可诱导性肝损模型，用于肝脏疾病的相关研究。
方法将引进的Alb-cre和DTR小鼠扩繁后，通过杂交的方式获得双转基因小鼠。
提取小鼠尾部组织DNA，利用PCR方法进行基因型鉴定。
在双转基因小鼠上腹腔注射白喉毒素，之后在不同时间点进行称重、采血，检测血清ALT、AST水平。
结果将Alb-cre和DTR小鼠杂交、筛选后获得了Alb-cre／DTR双转基因小鼠，对该小鼠使用0.625 ng／g剂量的白喉毒素，可使小鼠血清中ALT与AST水平显著升高，解剖小鼠后观察到肝整体变白，HE染色结果显示肝细胞明显坏死。
结论成功建立可诱导特异性肝损伤小鼠模型。
%Objective To analyze the Alb-cre/DTR mouse phenotype, and establish a model of induced liver damage to serve basic researches of liver diseases.Methods The introduced Alb-cre and DTR mice were crossed to obtain Alb-cre/DTR mice and the genomic DNAs were extracted from the tail tissue of the mice for genotying by PCR.Diphtheria toxin was intraperitoneally(i.p.)injected into the Alb-cre/DTR mice, then the body weights were monitored and the sera were collected for the detection of serum ALT and AST levels.Results By crossing Alb-cre and DTR mice we obtained the Alb-cre and DTR double transgenic mouse.The intraperitoneal injection of diphtheria toxin in a dose of 0.625 ng/g body weight significantly induced liver injury in these mice, as showed by the elevated levels of ALT and AST, the gross appearance of liver damage and the pathological changes such as necrosis in the liver tissue.ConclusionsWe have ob-tained a novel mouse strain of Alb-cre/DTR by crossing Alb-cre and DTR mice.Liver damages in those Alb-cre/DTR mice can be induced by injection of diphtheria toxin.This established mouse model of inducible liver damage is a useful platform for the studies of liver damage and recovery, as well as liver transplantation.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2016(024)002【总页数】5页(P134-138)【关键词】Alb-cre;DTR;转基因;特异性肝损伤;小鼠【作者】任晓楠;任蓉蓉;刘雪;杨华;秦波音;周晓辉【作者单位】上海市公共卫生临床中心，上海201508;上海市公共卫生临床中心，上海201508;上海市公共卫生临床中心，上海201508;上海市公共卫生临床中心，上海201508;上海市公共卫生临床中心，上海201508;上海市公共卫生临床中心，上海 201508【正文语种】中文【中图分类】Q95-33肝疾病是对人类威胁最大的疾病之一［1-2］，除病毒性肝炎外［3-4］，肝脏疾病中肝硬化、肝癌等危害也相当严重；肝脏移植手术对于解决肝系统疾病和肝代谢紊乱等来说是一种非常重要的手段［5］，但是肝移植手术仍然面临很多尚未解决的问题，需要更多的相关研究来提高移植后肝细胞的再生和增殖问题。
与肝脏的移植相比，肝细胞的移植更具可行性［6］，所需费用也较小。
建立肝损伤动物模型是研究肝细胞移植和再生的关键性技术［7］。
基于上述研究背景，研究者利用Cre-loxp条件性敲除系统控制转基因表达的技术，将白喉毒素受体基因特定表达于小鼠肝细胞，构建了Alb-cre/DTR小鼠。
目前基于Cre-loxp 条件性敲除系统的应用非常多，但是通过该技术使用白喉毒素诱导肝损伤的动物模型还未见相关报道。
研究者构建的模型即可通过注射白喉毒素实现可控性、诱导性肝损的发生，是一种新型的肝损模型。
1.1 实验动物B6.Cg-Tg（Alb-cre）21Mgn/J小鼠（以下简称Alb-cre小鼠）引自美国Jackson实验室，pCAGSTOP-DTR-2A-EGFP小鼠（以下简称DTR小鼠）引自北京百奥赛图基因生物技术有限公司。
遗传背景均系C57BL/6小鼠。
1.2 小鼠的饲养和繁殖按照SPF级动物饲养标准在上海市公共卫生临床中心实验动物中心［SYXK（沪）2015-0008］进行饲养。
室内温度20～25℃，相对湿度50% ～60%，每日光照12 h，小鼠饲料、饮水、垫料均经高温高压灭菌处理。
将引进的Alb-cre和DTR 小鼠分别繁殖扩群后，采用公∶母=1∶1的同居方式进行繁殖，母鼠妊娠后单笼饲养。
产生F1代杂交小鼠后在幼仔21日龄左右离乳，剪脚趾标记，剪鼠尾待检测基因型。
1.3 主要试剂动物组织基因组小量提取试剂盒（DK611-02）和2×Taq PCR Master mix （PT102-02）购自上海莱枫生物科技有限公司，琼脂糖和DNA marker购自北京全式金生物生物技术有限公司，白喉毒素购自Sigma公司。
1.4 小鼠的基因型鉴定1.4.1 小鼠尾部基因组DNA提取剪小鼠尾0.5～1 cm置入EP管中，按照上海莱枫生物公司的动物组织DNA提取试剂盒的说明书进行DNA抽提。
1.4.2 小鼠基因组DNA的PCR扩增反应（Alb-cre 和DTR定型用引物如表1）（1）Alb-cre/DTR小鼠Alb-cre基因的PCR反应体系下列反应物构成25 μL的反应体系：2×PCR Master Mix 12.5 μL，上游引物（10 μmol/L）1 μL，下游引物（10 μmol/L）1 μL，模板DNA 2 μL，加ddH2O 8.5 μL，共25 μL。
PCR反应条件：预变性95℃ 5 min；变性95℃30 s；退火62℃30 s；延伸72℃30 s；共30个循环，最后再延伸72℃10 min，之后10℃保存。
（2）Alb-cre/DTR小鼠DTR基因的PCR反应体系下列反应物构成25 μL的反应体系：2×PCR master Mix 12.5 μL，上游引物（10 μmol/L）1 μL，下游引物（10 μmol/L）1 μL，模板DNA 2 μL，加ddH2O 8.5 μL，共25 μL。
WT rosa-GT PCR反应条件：预变性95℃ 5 min；变性95℃30 s；退火62℃ 35 s；延伸72℃ 35 s；共35个循环，最后再延伸72℃ 10 min，之后10℃保存。
Mutant EGFP PCR反应条件：预变性95℃ 5 min；变性95℃30 s；退火62℃ 20 s；延伸72℃ 20 s；共35个循环，最后再延伸72℃ 10 min，之后10℃保存。
1.4.3 琼脂糖凝胶电泳及结果分析PCR之后通过琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。
制备1%琼脂糖凝胶，取PCR反应终产物10 μL进行电泳，120 V，20 min。
电泳后使用凝胶成像系统进行电泳图片分析。
鼠尾琼脂糖凝胶电泳基因型片段为：鉴定Alb-cre基因，含有该基因的片段大小为275 bp，野生型则没有相应片段；鉴定DTR，野生型为Rosa-GT引物对扩增片段，大小为469 bp，纯合子为DTR/EGFP引物对扩增片段，大小为234 bp，杂合子为469 bp和234 bp，根据条带大小鉴别含有双基因的小鼠。
1.5 特异性肝损伤小鼠模型的建立取SPF级Alb-cre/DTR小鼠（含有cre、DTR杂合）和C57BL/6小鼠（购自上海斯莱克实验动物中心）各3只，9～10周龄，雄性，于实验前采血，分离血清，检测造模前小鼠本底ALT、AST值，之后称取体重，将0.625 ng/g小鼠体重剂量的白喉毒素溶于200 μL的PBS溶液中，通过腹腔注射的方式造模；分别于造模后第1、2、3、4、7、8、9天监测小鼠体重并采血，全血标本于室温静置1 h后600 r/min离心15 min分离血清，用于ALT与AST指标的检测，实验第四天时自然死亡小鼠解剖取肝进行大体观察，留取肝4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，观察肝病理组织学改变。
1.6 统计学方法数据均以均值±标准差表示，两组间均值的统计比较实用非配对t检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。
2.1 Alb-cre/DTR小鼠Alb-cre基因型鉴定结果通过PCR检测Alb-cre/DTR小鼠的Alb-cre基因型，含有Alb-cre基因的小鼠在279 bp有条带，野生型在相应位置则没有条带（图1）。
2.2 Alb-cre/DTR小鼠DTR基因型鉴定结果通过PCR检测Alb-cre/DTR小鼠的DTR基因型，野生型为469 bp，纯合子只有234 bp一条带，杂合子有469 bp和234 bp两条带（图2A和2B）。
2.3 肝损伤表型的建立2.3.1 小鼠体重变化的比较造模后，Alb-cre/DTR小鼠的体重开始下降，第4天降至最低，只有原有体重的（87.89% ± 0.8822），C57BL/6小鼠为（100.3% ±0.4490），两者差异有显著性（P＜0.001）。