3-磷酸甘油醛脱氢酶
3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书 微量法
3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC2215规格：100T/96S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存。
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体12uL×1支，4℃保存。
临用前加入0.4mL蒸馏水充分混匀，或根据比例现配现用；用不完的试剂4℃保存一周。
产品说明：GAPDH（EC1.2.1.12）催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。
GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD+，340nm处测定NADH的减少量可反映GAPDH活性的高低。
试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
血清（浆）：直接检测。
二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，分光光度计蒸馏水调零。
3磷酸甘油醛脱氢酶糖无氧氧化
3磷酸甘油醛脱氢酶糖无氧氧化：探索能量生产的奥秘近年来，随着生物化学领域的深入研究，人们对于细胞内能量生产的理解也逐渐深入。
3磷酸甘油醛脱氢酶糖无氧氧化（简称G3P脱氢酶）作为细胞内糖代谢的关键酶之一，其功能和作用机制备受关注。
本文将深入探讨G3P脱氢酶在能量生成中的作用，以及对细胞生物学的重要意义。
1. G3P脱氢酶的基本作用G3P脱氢酶是细胞内糖酵解过程中的重要酶之一，其主要功能是将甘油3磷酸（G3P）转化为1,3-二磷酸甘油（1,3-BPG），同时伴随着NAD+还原为NADH的过程。
这一反应是糖酵解途径中的关键步骤，为线粒体内进一步产生ATP提供了重要的底物和能量。
2. G3P脱氢酶的作用机制在细胞内，G3P脱氢酶通过催化G3P与辅酶NAD+之间的氧化还原反应，实现了能量的转化和传递。
这一过程需依赖特定的酶促反应和离子通道的协同作用，通过精细调控和协调，最终实现了高效的能量生产。
3. G3P脱氢酶在细胞生物学中的意义作为细胞内糖代谢过程的关键环节，G3P脱氢酶在细胞的生物学功能中扮演着重要的角色。
它不仅参与了能量生产和细胞代谢的调控，还在细胞的生长、分化和凋亡等生理过程中发挥着重要作用。
对G3P脱氢酶功能的深入研究，有助于更好地理解细胞内能量代谢的调控机制，以及相关疾病的发生和发展。
总结回顾通过对G3P脱氢酶的功能、作用机制和在细胞生物学中的意义进行深入探讨，我们不仅更好地理解了细胞内能量生成的重要步骤，也为相关生物化学和医学领域的研究提供了重要的理论依据。
未来的研究方向应当继续聚焦于G3P脱氢酶的特性和调控机制，以期更深入、全面地揭示其在细胞生物学中的重要意义。
个人观点和理解我个人认为，G3P脱氢酶作为细胞内能量生成过程中的重要参与者，其作用机制和生物学意义至关重要。
通过深入研究G3P脱氢酶的功能和调控机制，有望为理解细胞内代谢过程和相关疾病的发生提供重要的理论支持。
希望未来能有更多前沿的研究能够加深我们对G3P脱氢酶的理解，为生命科学领域的发展做出更多贡献。
南农考研生化课题-(2)
糖类代谢一、填空：1. 麦芽糖水解产生的单糖是；蔗糖水解产生的单糖是。
2. 磷酸葡萄糖是某些代谢途径分支点上的重要化合物，它经酶催化而进入HMP途径，经酶催化可进入EMP途径。
3. 糖酵解主要在细胞的部位进行，该途径的关键酶有、和，其中最重要的调节酶是，该酶被高浓度的和所抑制。
4. 三羧酸循环在细胞的部位进行，其关键酶有、和。
5. 葡萄糖异生途径的关键酶有、、和。
6. 在真核生物中，1mol 3-磷酸甘油酸彻底氧化成CO2和H2O，净生成molATP。
7. 在线粒体中，催化丙酮酸氧化脱羧形成乙酰CoA(或-酮戊二酸氧化脱氢形成琥珀酰CoA)的酶是，它需要五种辅因子(即辅酶和辅基)，它们是、、、和，需要的金属离子是。
8. 在葡萄糖无氧酵解过程中，酶需要耗用无机磷酸(Pi)。
9. 在原核细胞中，1分子葡萄糖通过EMP途径分解成丙酮酸，在无氧条件下可产生分子ATP，在有氧条件下可产生分子ATP；若在有氧条件下彻底氧化成CO2，可产生分子ATP。
10. 在原核细胞中，下列物质被彻底氧化，各自可产生多少分子ATP?丙酮酸：、NADH：、F-1,6-diP：、PEP：、DHAP：。
11. 淀粉先磷酸解后再无氧酵解，淀粉的每个葡萄糖基可生成个ATP。
12. HMP途径在细胞的部位进行；对于该途径的总结果，被氧化的物质是，被还原的物质是；1mol的G-6-P通过此途径彻底氧化成CO2，产生mol的NADPH；该途径最重要的生物学意义是。
13. 1分子乳酸经由丙酮酸羧化酶参与的途径转化为葡萄糖，需消耗分子ATP。
14. 在真核生物内，1mol 6-磷酸葡萄糖彻底氧化为CO2和H2O，净生成molATP。
(按磷酸甘油穿梭计算ATP)15. 磷酸蔗糖合(成)酶利用作为葡萄糖的给体(供体)，作为葡萄糖的受体，生成产物后经酶水解而生成蔗糖。
16. 在真核生物中，丙酮酸氧化脱羧在细胞的部位进行。
17. 一分子乙酰CoA经TCA循环彻底氧化为CO2和H2O，可生成分子NADH、分子FADH2和分子由底物水平磷酸化生成的GTP。
实验九糖酵解中间产物的鉴定
生化实验室（11）——糖酵解中间产物的鉴定
实验的原理：利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷激甘油醛不再向前变化而积累。
硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。
然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸甘油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比。
产生糖酵解，当然需要生物了，我们用了酵母。
三支试管，1号管：加入了三氯醋酸，破坏了全部的酶，所以不可进行糖酵解；2号管，放进碘乙酸，对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的起抑制作用，3号管，什么都不加。
放进37℃中，然后就可以看到，3号管发酵得最爽。
泡泡是CO。
2
然后为了验证“3-磷酸甘油醛不再向前变化而积累”，所以我们再对2、3号管进行处理。
步骤不说了，看最后的结果，说明了2号管的3-磷酸甘油醛最多，也就是证明了碘乙酸的抑制剂作用。
做这些实验不是为了实验，而是为了学到东西；通过这个实验，我们得到了两个很爽的想法：
1.碘乙酸的抑制剂作用；
2.原来在糖酵解的分解循环中，中间产物有3-磷酸甘油醛；
这对于我们学习与研究糖酵解很有益处！。
人甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)ELISA 试剂盒 使用说明书
人甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)ELISA试剂盒使用说明书产品编号：D711286包装规格：48 TESTS / 96 TESTS声明：使用前仔细阅读本说明书。
只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
用途用于人血清、血浆或其他相关生物液体中甘油醛-3-磷酸脱氢酶的测定。
工作原理本试剂盒采用的是双抗夹心酶联免疫吸附检测技术（ELISA）。
测定样品中人甘油醛-3-磷酸脱氢酶水平。
向预先包被了抗人甘油醛-3-磷酸脱氢酶抗体的酶标孔中，加入标准品和样本，温育后，加入生物素标记的抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶抗体。
再与HRP标记的链霉亲和素结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
最后，在450 nm处测定反应孔样品吸光度（OD）值，样本中的人甘油醛-3-磷酸脱氢酶浓度与OD值成正比，通过绘制标准曲线计算出样本中人甘油醛-3-磷酸脱氢酶的浓度。
1 / 262 / 26原理图：试剂盒组成说明书1份1份封板膜5片5片预包被酶标板8孔X 6条8孔X 12条-20°C 标准品1瓶2瓶-20°C 标准品/样本稀释液SD120 mL X 1瓶20 mL X 1瓶2-8°C 浓缩生物素标记甘油醛-3-磷酸脱氢酶抗体（100X ）60 μl120 μl-20°C生物素标记抗体稀释液SD214 mL X 1瓶14 mL X 1瓶2-8°C浓缩HRP 标记链霉亲和素（100X ）60 μl120 μl-20°C （避光）HRP标记链霉亲和素稀释液SD314 mL X 1瓶14 mL X 1瓶2-8°C显色剂10 mL X 1瓶10 mL X 1瓶2-8°C （避光）终止液10 mL X 1瓶10 mL X 1瓶2-8°C浓缩洗涤液（25×）30 mL X 1瓶30 mL X 1瓶2-8°C需要而未提供的试剂和器材1.37°C恒温箱2.酶标仪（450 nm波长滤光片）3.精密移液器及一次性吸头4.去离子水或蒸馏水5.一次性试管6.洗板机或洗瓶，吸水纸注意事项1.试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
生物化学(2)第二章 糖的分解代谢
意义
将葡萄糖分子磷酸化成了易参加代 谢反应的活化形式； 磷酸化的葡萄糖分子带有很强的极 性基团，不能透过细胞膜，能够防止细 胞内的葡萄糖分子向外渗出； 为以后底物水平磷酸化贮备了磷酸 基。
己糖激酶特性： 1）需要二价金属离子如Mg2+或Mn2+ 作 为辅助因子，己糖激酶才有活性； 2）别构酶：G-6-P和ATP是其别构抑制 剂； 3）分布很广，动植物及微生物细胞中均有； 4）专一性：不强，能催化许多六碳糖， 如D-果糖、D-甘露糖等，但对葡萄糖亲 和力较大；
5）糖酵解的第一个调节酶（限速
酶）。 6）哺乳类动物体内已发现有4种己糖
激酶同工酶，分别称为Ⅰ至Ⅳ型。
肝细胞中存在的是Ⅳ型，称为葡萄
糖激酶。
己糖激酶
与
葡萄糖激酶 的区别：
己糖激酶能催化一切己糖，存在于细 菌、酵母及多种动植物中； 葡萄糖激酶只能催化葡萄糖转变为6磷酸葡萄糖，只存在于肝脏，肌肉中没有。 肝脏中的葡萄糖激酶量比己糖激酶量高。
该酶作用于粘稠的淀粉糊时，能使 粘度迅速下降成稀溶液状态，工业上称 此为“液化”。
存 在 动物的消化液、植物的种子和块根
α -淀粉酶可以看作是淀粉酶法水解 的先导酶，大分子淀粉经其作用断裂， 产生很多非还原性末端，为β -淀粉酶或 γ -淀粉酶提供了更多的作用点。 工业化一般水解淀粉时，用量
30-60单位/每克
乳酸
葡萄糖 丙酮酸 乙醛 乙醇
糖酵解
生醇发酵
（二）糖酵解的过程 包含四个阶段：
己糖磷酸酯的生成（己糖磷酸化） 丙糖磷酸的生成（磷酸己糖的裂解） 丙酮酸的生成 乳酸的生成
1、第一阶段：己糖磷酸酯的生成（葡萄糖分子 活化） 葡萄糖或糖原经磷酸化转变成1，6-二磷 酸果糖。 以葡萄糖为起始物： 葡萄糖的磷酸化 分成三个过程： 异构化 果糖磷酸的磷酸化
3磷酸甘油醛脱氢酶糖无氧氧化
3磷酸甘油醛脱氢酶糖无氧氧化（最新版）目录1.3-磷酸甘油醛脱氢酶简介2.糖无氧氧化过程3.3-磷酸甘油醛脱氢酶在糖无氧氧化中的作用4.3-磷酸甘油醛脱氢酶的应用5.结论正文3-磷酸甘油醛脱氢酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，简称 GAPDH）是一种参与糖酵解途径的酶，主要作用是在细胞溶酶体内进行氧化还原反应。
糖无氧氧化是一种在无氧条件下将葡萄糖分解为乳酸或酒精和二氧化碳的过程，这一过程在生物体内有着重要的生理意义。
本文将从 3-磷酸甘油醛脱氢酶的角度，探讨糖无氧氧化的过程及其应用。
在糖无氧氧化过程中，葡萄糖首先被磷酸化为葡萄糖 -6-磷酸（G6P），然后转化为果糖 -6-磷酸（F6P），接着果糖 -1,6-双磷酸（F1,6BP）产生，这个过程需要消耗一个 ATP 分子。
随后，F1,6BP 裂解为两个三磷酸甘油醛（3-phosphoglyceraldehyde，3-PGAL），此时 3-磷酸甘油醛脱氢酶发挥作用，将一个 3-PGAL 转化为磷酸二羟基丙酮酸（DHAP），同时产生一个 ATP 分子。
然后，DHAP 通过一系列反应转化为丙酮酸，最后生成乳酸或酒精和二氧化碳。
3-磷酸甘油醛脱氢酶在糖无氧氧化过程中起到了关键作用，它将一个不稳定的化合物 3-PGAL 转化为稳定的 DHAP，同时产生一个 ATP 分子，为细胞提供了能量。
此外，3-磷酸甘油醛脱氢酶还有其他功能，例如参与氧化应激反应、调控细胞生长等。
3-磷酸甘油醛脱氢酶在生物体内有着广泛的应用。
首先，由于其在糖无氧氧化过程中的关键作用，3-磷酸甘油醛脱氢酶可以作为研究糖酵解途径的重要靶点。
其次，3-磷酸甘油醛脱氢酶的活性可以作为评估细胞状态的指标，例如在缺氧、氧化应激等条件下，3-磷酸甘油醛脱氢酶的活性会发生变化。
最后，3-磷酸甘油醛脱氢酶还可以应用于生物医学领域，例如在肿瘤诊断、评估治疗效果等方面有着潜在的应用价值。
3-磷酸甘油醛氧化分解
3-磷酸甘油醛氧化分解
3-磷酸甘油醛氧化分解是一种生物化学过程，也称为3-磷酸甘油醛脱氢酶反应。
在这个过程中，3-磷酸甘油醛分子被氧化为3-磷酸甘油酸分子，并释放出一个还原当量的NADH。
该反应在细胞的代谢路径中起着重要作用，特别是在葡萄糖新陈代谢和脂肪酸合成中。
它是糖酵解途径的一部分，将糖分子转化为能量，同时产生了NADH，为细胞的氧化磷酸化提供还原当量。
3-磷酸甘油醛氧化分解是一个多步骤的反应，由多个酶催化。
首先，3-磷酸甘油醛与NAD+发生氧化还原反应，形成3-磷酸甘油酸和NADH。
然后，3-磷酸甘油酸发生脱羧反应，生成二磷酸甘油酸。
最后，二磷酸甘油酸通过进一步代谢，可以进一步转化为ATP或其他代谢产物。
总的来说，3-磷酸甘油醛氧化分解反应是将3-磷酸甘油醛分子转化为3-磷酸甘油酸，并释放出NADH的过程。
这个过程对于细胞代谢非常重要，因为它能够产生能量，并提供还原当量用于其他代谢反应。
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货号：QS2205-25 规格：25管/24样
3-磷酸甘油醛脱氢酶
(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
测定原理：
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。
GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD，340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH活性的高低。
自备实验用品及仪器：
分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：30mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体×1支，4℃保存；
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟；现配现用。
（2）在试剂三中加入500μL蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂4℃保存一周。
（3）在1mL石英比色皿中加入30μL样本、20μL试剂三和950μL工作液，混匀，加入最后一个试剂的同时开始计时，记录340nm处20s时的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
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GAPDH活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GAPDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=1072×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GAPDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=2.14×ΔA
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.03 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
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