大肠杆菌的试验方法
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编制：
日期：
审核：
日期：
批准：
日期：
4.7大肠杆菌及其他致病菌检查按一次检出结果为准，不再抽样复试。
5．记录保存：
5.1．质检部ห้องสมุดไป่ตู้管5年。
6．相关操作规程
6.1．电热鼓风干燥箱操作规程
6.2．电热恒温水浴锅操作规程
6.3．生化培养箱操作规程
6.4．手提式压力蒸汽消毒器操作规程
6.5．净化工作台操作规程
7．相关记录
7.1. 生物性能检测记录。
取样液5mL接种50mL乳糖胆盐发酵管，置35℃±2℃ 培养24 h，如不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。
如产酸产气，则划线接种伊红美蓝琼脂平板，置35℃±2℃培养18～24 h，观察平板上菌落形态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。
c. 冷却：冷却至23±2℃。
d. 测pH值：使灭菌后为pH7.4±0.2。
e．分装：分装至试管中，每支10.0ml，塞上硅胶塞，包好。
f．灭菌：121℃15分钟高压灭菌。
g．灭菌后，冷水快速冷却后备用。
有限公司
文件编号
WI-03-30
版号
A.0
大肠杆菌的测定方法
页次
生效日期
2020/01/02
4.6检验步骤
4.2 器具
烧杯（250ml）、量筒（100ml）、三角烧瓶（250ml）、试管、硅胶塞、白金耳、酒精灯、培养皿（φ90mm）、刻度吸管（1ml,5ml，20ml）
4.3 培养基、菌种：
伊红美蓝琼脂、胆盐乳糖（BL）增菌培养基、染色液（革兰氏染色用）
4.4 器具灭菌：
与样液接触的所有器具（刻度吸管、培养皿等）应按下述方法灭菌：包好后置手提式压力蒸汽消毒器内121℃20分钟高压灭菌，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160℃2小时干热灭菌。
有限公司
文件编号
WI-03-30
版号
A.0
大肠杆菌的测定方法
页次
生效日期
2020/01/02
1．目的
制订大肠杆菌的测定方法，对从事检测的操作人员进行培训指导，按测定方法操作。
2．适用范围:
本方法适用于大肠杆菌的测定。
3. 职责
质检部对本测定方法实施负责。
4.程序
4.1 仪器
电子天平、电热恒温鼓风干燥箱、净化工作台、手提式压力蒸汽消毒器、电热恒温水浴锅、生化培养箱
4.5 培养基配制：
4.5.1胆盐乳糖（BL）增菌培养基的配制：
按瓶签上的《用法》进行配制。以下配制量为100ml。
a.称量：称取瓶签上《用法》标示的胆盐乳糖（BL）增菌培养基粉末的量，倒入
100ml烧杯中。
b. 溶解：在装有胆盐乳糖（BL）增菌培养基粉末的烧杯中，加蒸馏水约80ml,温浴溶解后，加水至100ml。
取疑似大肠菌落1～2个作革兰氏染色镜检，同时接种乳糖发酵管，置35℃±2℃培养24 h，观察产气情况。
凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。
结果报告
凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。
日期：
审核：
日期：
批准：
日期：
4.7大肠杆菌及其他致病菌检查按一次检出结果为准，不再抽样复试。
5．记录保存：
5.1．质检部ห้องสมุดไป่ตู้管5年。
6．相关操作规程
6.1．电热鼓风干燥箱操作规程
6.2．电热恒温水浴锅操作规程
6.3．生化培养箱操作规程
6.4．手提式压力蒸汽消毒器操作规程
6.5．净化工作台操作规程
7．相关记录
7.1. 生物性能检测记录。
取样液5mL接种50mL乳糖胆盐发酵管，置35℃±2℃ 培养24 h，如不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。
如产酸产气，则划线接种伊红美蓝琼脂平板，置35℃±2℃培养18～24 h，观察平板上菌落形态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。
c. 冷却：冷却至23±2℃。
d. 测pH值：使灭菌后为pH7.4±0.2。
e．分装：分装至试管中，每支10.0ml，塞上硅胶塞，包好。
f．灭菌：121℃15分钟高压灭菌。
g．灭菌后，冷水快速冷却后备用。
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大肠杆菌的测定方法
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生效日期
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4.6检验步骤
4.2 器具
烧杯（250ml）、量筒（100ml）、三角烧瓶（250ml）、试管、硅胶塞、白金耳、酒精灯、培养皿（φ90mm）、刻度吸管（1ml,5ml，20ml）
4.3 培养基、菌种：
伊红美蓝琼脂、胆盐乳糖（BL）增菌培养基、染色液（革兰氏染色用）
4.4 器具灭菌：
与样液接触的所有器具（刻度吸管、培养皿等）应按下述方法灭菌：包好后置手提式压力蒸汽消毒器内121℃20分钟高压灭菌，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160℃2小时干热灭菌。
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WI-03-30
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A.0
大肠杆菌的测定方法
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生效日期
2020/01/02
1．目的
制订大肠杆菌的测定方法，对从事检测的操作人员进行培训指导，按测定方法操作。
2．适用范围:
本方法适用于大肠杆菌的测定。
3. 职责
质检部对本测定方法实施负责。
4.程序
4.1 仪器
电子天平、电热恒温鼓风干燥箱、净化工作台、手提式压力蒸汽消毒器、电热恒温水浴锅、生化培养箱
4.5 培养基配制：
4.5.1胆盐乳糖（BL）增菌培养基的配制：
按瓶签上的《用法》进行配制。以下配制量为100ml。
a.称量：称取瓶签上《用法》标示的胆盐乳糖（BL）增菌培养基粉末的量，倒入
100ml烧杯中。
b. 溶解：在装有胆盐乳糖（BL）增菌培养基粉末的烧杯中，加蒸馏水约80ml,温浴溶解后，加水至100ml。
取疑似大肠菌落1～2个作革兰氏染色镜检，同时接种乳糖发酵管，置35℃±2℃培养24 h，观察产气情况。
凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。
结果报告
凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。