GFP蛋白实验报告
GFP(绿色荧光蛋白基因)的免疫印迹-1
GFP(绿色荧光蛋白基因)的免疫印迹-1[实验原理]免疫印迹（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测三个部分组成。
第一步是做SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。
第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持物上，用得最多的材料是硝酸纤维素膜(NC膜)和PVDF膜，蛋白转移的方法多用电泳转移（转移电泳），它又有半干法和湿法之分。
第三步是用特异性的抗体检测出已经印迹在膜上的所要研究的相应抗原。
免疫检测的方法可以是直接的和间接的。
现在多用间接免疫酶标的方法，在用特异性的第一抗体染色后，再用酶标的第二抗体（碱性磷酸酶（Ap）或辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗第一抗体的抗体）染色，再加酶的底物显色，通过膜上的颜色或X光底片上暴光的条带来显示抗原的存在。
为了使初学者能够在实验过程中观察到所要检测的目的蛋白，本实验使用的是非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳，以保持GFP的天然活性，利用荧光对其进行追踪。
此外，实验中用国产的HRP标记的蛋白A取代第二抗体，以节省费用。
蛋白A是从细菌分离的一种能识别多种动物IgG的蛋白，在许多场合它都可以作为第二抗体的替代物。
同样是为了节省费用，实验中用醋酸纤维素膜（AC膜）代替硝酸纤维素膜（NC膜），这样要便宜得多，而效果却无大差别。
第一部分：GFP抽提物在非变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳非变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳，除试剂中不含SDS及蛋白样品不加热处理外，其余的与SDS-PAGE几乎相同。
因为要做免疫印迹，电泳结束后，凝胶不染色，而是做转移电泳。
[仪器、材料和试剂](一)仪器与器材1．垂直板电泳槽及配套的玻璃板，梳子2．电泳仪3．微波炉4．小型高速离心机5．专用紫光灯（BIO-RAD公司）6．枪，枪头，1.5mL 离心管(二)材料1．蛋白样品：GFP粗提物的饱和硫酸铵沉淀(三)试剂1．1.5mo1／L Tris•HCl pH 8.82．0.5mo1／L Tris•HCl pH 6.83．30％Acr／Bis 29.2g Acr + 0.8gBis，用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4℃存放。
绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆、表达和粗提取
绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆、表达和粗提取南方医科大学2011预防医学（卫生检验检疫）摘要目的：研究绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因在大肠杆菌中的基因克隆与重组表达，以及对其进行粗提取。
方法：从E.coli DH5ɑ中用碱提取质粒的方法提取质粒pEGFP-N3和质粒pET-28a。
然后用质粒DNA 的琼脂糖凝胶电泳对已经提取的产物进行电泳，确定从大肠杆菌中成功提取了质粒。
再用限制性内切酶BamHI和NotI对成功提取的质粒进行酶切，并对酶切后的质粒进行琼脂糖凝胶电泳，用以确定已经提取了GFP基因。
将含有GFP基因的质粒转化到感受态细胞E.coli BL-21中，用LB培养基对转化后的E.coli进行扩大培养。
用IPTG诱导GFP基因表达可以看到浅绿色菌落。
最后对绿色荧光蛋白进行粗提取。
结论：本实验有助于学生掌握最基本的分子生物学实验技术，为进一步的实验奠定基础。
关键词：绿色荧光蛋白基因克隆重组表达转化粗提取目录1 前言 (3)2 实验目的 (4)3 实验设备 (4)4 材料及试剂 (5)5 实验操作步骤 (5)5.1操作流程 (5)5.2质粒DNA的分离与纯化 (6)5.2.1 质粒的培养 (6)5.2.2 质粒的DNA的碱提取法 (6)5.2.3 质粒DNA的鉴定与纯化 (7)5.3酶切及连接 (8)5.3.1 双酶切 (8)5.3.2 回收酶切产物（采用DNA回收试剂盒进行回收） (8)5.3.3 连接 (9)5.4大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 (9)5.4.1 LB（Luria-Bertain）液体和固体培养基的配制（参考附录）.. 95.4.2．感受态细胞的制备 (CaCl2法) (9)5.4.3 转化涂板 (10)5.5GFP蛋白的诱导表达 (10)5.6绿色荧光蛋白的粗提取 (11)参考文献 (11)附录 (12)1LB培养基的配制： (12)2.溶液Ⅰ (12)3.溶液Ⅱ (12)4.溶液Ⅲ（100ML） (12)5.DN ASE-FREE RN ASE A (13)6.TE缓冲液（P H8.0） (13)7.20×TBE (13)8.G ENE F INDER-溴酚蓝上样缓冲液 (13)9．PEGFP-N3质粒全图谱 (13)10．P ET-28A质粒全图谱 (14)1 前言绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
生物技术综合大实验-GFP纯化
生物技术综合大实验实验报告GFP的分离与纯化姓名：专业班级院系：指导教师：完成日期GFP的分离与纯化摘要： GFP，在生物领域应用广泛。
本实验回顾了GFP提取纯化过程，包括细菌破碎、GFP沉淀、疏水过滤层析、透析、离子交换层析和凝胶过滤层析等步骤，来获得较纯的GFP，并运用SDS-PAGE来检测纯化效果。
关键词：GFP 应用进展层析 SDS-PAGE绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)是一类存在于这些腔肠动物体内的生物发光蛋白。
1962年Shimomura等首先从多管水母(Aequorin victoria)中分离出一种分子量为20kDa的称为Aequorin的蛋白。
由于水母整体荧光及提取的蛋白质颗粒荧光都呈绿色，因此，人们将这种蛋白命名为绿色荧光蛋白。
1992年Prasher 等克隆了GFP基因的cDNA，并分析了GFP的一级结构；1994年Chalfie 等首次在大肠杆菌细胞和线虫中表达了GFP，开创了GFP应用研究的先河，之后很快发现GFP能在多种异源细胞中表达，GFP在细胞学、分子生物学和医学、病毒学等领域中迅速掀起了一股热潮；1997年10月18~22日在美国New—Jersey专门召开了一次关于GFP的国际会议。
1994年钱永健改造了GFP，使得GFP的荧光变强、变色。
由此和Shimomura、Martin Chalfie共享了2008年诺贝尔化学。
从此，荧光蛋白带来了生物技术的新革命。
GFP本身是一种酸性，球状，可溶性天然荧光蛋白，分子量约27×103，一级结构为一个由238个氨基酸残基组成的单链多肽。
在395 nm具有最高光吸收峰，肩峰为473 nm；发射光谱λmax=508~509nm。
GFP性质极其稳定，易耐受高温处理，甲醛固定和石蜡包埋不影响其荧光性质。
其变性需在90℃或pH<4.0或pH>12.0的条件下用6mol/L盐酸胍处理，一旦恢复中性环境，或去除变性剂，虽然变性的蛋白质并不能完全复性，但是复性蛋白质同天然蛋白质对温度、pH 变化的耐受性、抗胰蛋白酶消解的能力是相同的。
gfp报告基因
gfp报告基因GFP (Green Fluorescent Protein) 是一种来源于水母的蛋白质，它因其强烈的绿色荧光特性而备受研究者们的喜爱。
通过观察GFP 在生物体内的表达情况，科学家可以了解基因的功能、活性以及细胞的生长与分化情况。
在这篇文章中，我们将深入探讨GFP 报告基因的意义和应用。
GFP最初在1962年被發现，其荧光特性的发现对生物学领域带来了革命性的影响。
与其他荧光探测技术相比，GFP 是一种非侵入式探针，因为它并不需要与其他荧光染料或化学物质相结合才能发出荧光。
这使得研究者能够直接观察目标生物内的蛋白质。
通过将 GFP 基因导入目标生物体内，科学家们可以通过其发出的荧光来追踪蛋白质的表达情况以及其在细胞中的位置。
GFP 报告基因的应用可谓广泛且多样。
首先，GFP 提供了一种非常强大的工具来研究基因的表达与调控。
通过将 GFP 基因与其他特定的目标基因结合，科学家可以实时观察到基因在不同阶段中的表达情况。
这对于研究细胞周期、基因调控机制以及疾病发展过程中的基因表达有着重要的意义。
其次，GFP 报告基因也被广泛应用于研究生物体的发育过程。
通过在受精卵中导入 GFP 基因，研究者能够观察到胚胎在不同发育阶段中细胞的生长、分化以及器官形成等过程。
这不仅有助于对发育生物学的理解，还为研究异常胚胎发育以及基因治疗提供了平台。
除了基础研究领域外，GFP 还在许多应用领域发挥了重要作用。
例如，在药物开发中，通过将 GFP 基因引入药物靶标细胞中，科学家们能够直观地观察到药物分子在细胞中的作用和效果，从而提高药物研发效率。
此外，GFP 还广泛应用于植物学和环境科学领域，研究植物的生长、环境污染和气候变化等问题。
然而，尽管 GFP 的应用广泛，但也存在一些挑战和限制。
首先，GFP 报告基因技术并非完美，它有可能对目标生物体的正常生理过程产生干扰，从而导致不准确的结果。
此外，GFP 只能用于活体观察，不能提供关于目标蛋白质的详细结构和功能信息。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告----绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆、表达和纯化一、实验背景绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
当受到紫外或蓝光激发时，GFP发射绿色荧光。
它产生荧光无需底物或辅因子发色团是其蛋白质一级序列固有的。
GFP由3个外显子组成，长2.6kb；GFP是由238个氨基酸所组成的单体蛋白，相对分子质量为27.0 kMr，其蛋白性质十分稳定，能耐受60℃处理。
1996年GFP的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由3个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内。
发色团是由其蛋白质内部第65-67位的Ser-Tyr-Gly自身环化和氧化形成。
1996年GFP的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的,桶的顶部由3个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内。
实验使用的EGFP蛋白取自原核-真核穿梭质粒pEGFP-NB3B的蛋白质编码序列。
此质粒原本被设计于在原核系统中进行扩增，并可在真核哺乳动物细胞中进行表达。
本质粒主要包括位于PCMV真核启动子与SV40 真核多聚腺苷酸尾部之间的EGFP编码序列与位于EGFP上游的多克隆位点；一个由SV40 早期启动子启动的卡那霉素/新霉素抗性基因，以及上游的细菌启动子可启动在原核系统中的复制与卡那抗性。
在EGFP编码序列上下游，存在特异的BamH I及Not I限制性内切酶位点，可切下整段EGFP编码序列。
表达EGFP 蛋白使用的pET-28 原核载体包含有在多克隆位点两侧的His-tag polyHis 编码序列；用于表达蛋白的T7 启动子，T7 转录起始物以及T7 终止子；选择性筛选使用的lacI 编码序列及卡那霉素抗性序列，pBR322 启动子，以及为产生单链DNA 产物的f1 启动子。
绿色荧光蛋白(GFP)的基因克隆及表达
绿色荧光蛋白（GFP）的基因克隆及表达摘要绿色荧光蛋白（GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
采用PCR技术，对实验室提供的质粒pEGFP-N1中的目的基因进行扩增。
所得PCR产物和质粒pET-28b经过BamH I和Nde I双酶切后，用琼脂糖凝胶电泳法检测酶切产物的酶切情况并回收凝胶，再利用T4DNA连接酶将目的基因与载体连接起来，得到重组质粒。
将重组质粒导入克隆菌E. coli DH5a中培养扩增，提取阳性菌落质粒进行重组子鉴定，进而导入表达菌E. coLi BL-21大肠杆菌感受态细胞中，经IPTG诱导目的基因表达产生绿色荧光蛋白。
关键词：绿色荧光蛋白 PCR 基因克隆表达1.前言1.1绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
当受到紫外或蓝光激发时，GFP 发射绿色荧光[1]。
1.2 GFP 的结构GFP中央是一个圆柱形水桶样结构，如图二。
长420 nm，宽240 nm，由11 个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由3个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内。
发色团是由其蛋白质内部第65-67位的Ser-Tyr-GLy自身环化和氧化形成。
1.3 GFP的研究应用GFP可标记细胞和蛋白质，具有广泛的应用前景。
GFP及其突变体已被广泛应用于基因表达调控、蛋白质空间定位、生物分子之间相互作用、转基因动物]2[等方面。
基于新型功能荧光蛋白的光学分子成像技术的发展，为在活细胞乃至活体动物内研究基因表达和蛋白质功能提供了更多的选择空间。
GFP还用于观察微生物、发育机理研究、细胞筛选、免疫学等方面。
本实验是利用实验室提供的质粒pEGFP-N1,其结构如图三所示。
其上有所用酶的酶切位点。
gfp表达质粒的构建实验报告
gfp表达质粒的构建实验报告1.实验目的本实验旨在构建含有绿色荧光蛋白（GFP）表达质粒，以便在细胞中实现GFP的高效表达，为后续的生物荧光成像等应用提供支持。
2.实验原理质粒是一种小型、自主复制的DNA分子，可与细菌染色体DNA分离。
质粒上有多个限制性酶切位点，可用于插入外源基因。
通过将目的基因插入质粒，并导入受体细胞，可以实现目的基因的表达。
本实验将使用含有GFP基因的质粒，将其导入大肠杆菌细胞中，使其表达出绿色荧光蛋白。
3.实验材料3.1仪器设备：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、恒温培养箱、恒温水浴锅。
3.2试剂：质粒提取试剂盒、限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶Ⅰ、dNTPs、电泳缓冲液、琼脂糖凝胶。
3.3细胞系：大肠杆菌细胞。
4.实验步骤4.1获取含有GFP基因的质粒：从公共数据库中获取含有GFP基因的质粒序列，并通过PCR扩增获得大量质粒。
4.2酶切质粒：使用限制性核酸内切酶对质粒进行酶切，获得含有GFP基因的片段。
4.3连接质粒：将酶切后的质粒片段与连接酶的作用下，将其连接至具有相同黏性末端的大肠杆菌质粒上。
4.4转化大肠杆菌：将连接后的质粒转化至大肠杆菌细胞中，通过抗生素筛选出含有重组质粒的大肠杆菌。
4.5验证重组质粒：通过PCR和DNA测序等方法验证重组质粒是否正确插入目的基因。
5.实验结果通过本实验，我们成功构建了含有GFP基因的重组质粒，并成功导入大肠杆菌细胞中。
通过荧光显微镜观察，发现大肠杆菌细胞发出绿色荧光，表明目的基因已正确表达。
6.结果分析通过本实验结果，我们可以得出以下结论：首先，本实验成功构建了含有GFP基因的重组质粒；其次，通过荧光显微镜观察到目的基因已在大肠杆菌细胞中表达出绿色荧光蛋白；最后，本实验为后续的生物荧光成像等应用提供了支持。
7.结论本实验成功构建了含有GFP基因的重组质粒，并在大肠杆菌细胞中实现了目的基因的高效表达。
该实验结果为后续的生物荧光成像等应用提供了有力支持，具有重要价值。
荧光蛋白实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解荧光蛋白的基本原理和应用。
2. 掌握荧光蛋白表达、纯化和检测的方法。
3. 分析荧光蛋白在不同条件下的表达水平。
4. 探讨荧光蛋白在细胞生物学研究中的应用。
二、实验原理荧光蛋白是一种在特定条件下发出荧光的蛋白质，广泛应用于生物化学、细胞生物学和分子生物学等领域。
荧光蛋白的发光机制是：当蛋白质分子吸收特定波长的光子后，其电子从基态跃迁到激发态，然后以发射光子的形式释放能量，产生荧光。
三、实验材料1. 荧光蛋白基因（如绿色荧光蛋白GFP）2. 表达载体（如pET28a）3. E. coli感受态细胞4. DNA重组克隆试剂盒5. 转化试剂盒6. 限制性内切酶7. 连接酶8. 蛋白质纯化试剂盒9. 荧光显微镜10. 激光共聚焦显微镜四、实验方法1. 荧光蛋白基因克隆（1）设计引物：根据荧光蛋白基因序列设计一对引物，用于扩增目的基因。
（2）PCR扩增：以荧光蛋白基因作为模板，进行PCR扩增。
（3）克隆：将扩增得到的荧光蛋白基因克隆到表达载体上。
2. 荧光蛋白表达（1）转化：将重组质粒转化到E. coli感受态细胞中。
（2）诱导表达：在适当的温度和IPTG浓度下诱导荧光蛋白表达。
（3）收集菌体：离心收集表达荧光蛋白的菌体。
3. 荧光蛋白纯化（1）超声破碎：将收集到的菌体进行超声破碎。
（2）亲和层析：利用荧光蛋白与亲和树脂的结合特性，进行亲和层析纯化。
（3）洗脱和收集：用适当的洗脱液洗脱纯化的荧光蛋白，收集洗脱液。
4. 荧光蛋白检测（1）紫外-可见光谱：检测纯化荧光蛋白的浓度和纯度。
（2）荧光光谱：检测纯化荧光蛋白的激发光谱和发射光谱。
（3）荧光显微镜：观察荧光蛋白在细胞中的表达和定位。
5. 荧光蛋白应用（1）细胞培养：将荧光蛋白表达载体转染到细胞中，观察荧光蛋白在细胞中的表达和定位。
（2）共聚焦显微镜：利用激光共聚焦显微镜观察荧光蛋白在细胞中的动态变化。
五、实验结果与分析1. 荧光蛋白基因克隆成功克隆了荧光蛋白基因，并在载体上得到表达。
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GFP蛋白实验报告
《GFP蛋白实验报告》
摘要：本实验旨在通过转染细胞，观察绿色荧光蛋白（GFP）在细胞内的表达
情况，以及其在细胞内的定位。
结果显示，GFP蛋白成功表达并定位在细胞质内，为进一步研究细胞内生物过程提供了有力的工具。
引言：绿色荧光蛋白（GFP）是一种源自水母的蛋白质，具有自身发光的特性。
由于其独特的特性和广泛的应用价值，GFP已成为生物学研究中不可或缺的工具。
本实验旨在通过转染细胞，观察GFP在细胞内的表达情况，以及其在细胞
内的定位。
材料与方法：本实验使用了含有GFP基因的质粒进行细胞转染，通过荧光显微
镜观察GFP在细胞内的表达情况，并使用共聚焦显微镜观察GFP在细胞内的定位。
结果：转染后，观察到细胞内出现了明亮的绿色荧光，证实GFP蛋白成功表达。
进一步的共聚焦显微镜观察显示，GFP蛋白定位在细胞质内，与预期结果一致。
讨论：本实验证实了GFP蛋白在细胞内的表达和定位情况，为后续研究细胞内
生物过程提供了有力的工具。
此外，GFP蛋白还可以用于追踪蛋白质在细胞内
的运输和定位，以及观察细胞的活动状态，具有广泛的应用前景。
结论：通过本实验，成功观察到GFP蛋白在细胞内的表达和定位情况，为生物
学研究提供了重要的实验数据和工具。
GFP蛋白的广泛应用将为细胞生物学和
分子生物学领域的研究提供新的思路和方法。