绿色荧光蛋白的研究现状与应用
绿色荧光蛋白在细胞成像中的应用

绿色荧光蛋白在细胞成像中的应用生物医学研究中,细胞成像的应用非常广泛。
而绿色荧光蛋白(GFP)因为可溶性、稳定性、表达方便等优点,已成为生物荧光成像研究中较为常见的标记基因。
下面我们从GFP的来源、结构、特点以及在细胞成像中的应用等几个方面来分析这一常用工具。
GFP的来源及结构GFP最初被从荧光海葵(Aequorea victoria)中发现,并被用于标记蛋白质的表达。
GFP经过多年的研究,现在已经应用于生物医学研究中的细胞成像、NGS等领域。
GFP分子由238个氨基酸组成,可以折叠成11个β转角和一个层状的环形。
其中β转角通过大量蛋白质交联形成β桶结构,环形结构中则存在一个由三个氨基酸组成的柔性环(5-8咪单元环),它能够在荧光染色分子进入柔性环的情况下,自发地形成苯环,同时改变自己的电子排布,从而发出强烈的绿色荧光信号。
GFP的特点与其他荧光染色物相比,GFP有以下几个特点:1. 可重复性:GFP的表达是稳定的,可以在不同的实验中使用。
2. 可控性:GFP标记可以通过表达载体进行控制,允许调整GFP的表达水平和特定部位的表达。
3. 可视性:GFP标记可直接被观察到,无需显微镜观察或临床检查,对于生物诊断和治疗研究具有很大的价值。
4. 可变化性:GFP有多种突变的形式,因此可以用于定量研究。
5. 无毒性:GFP标记物不会对健康产生影响。
GFP在细胞成像中的应用由于GFP的绿色荧光强度和GFP蛋白质的表达量之间的相对线性关系,因此GFP被广泛用于细胞成像的研究。
GFP也可以同时标记多个蛋白质,以便研究他们之间的交互作用。
在细胞成像中,GFP可以用来确定细胞形态、位置、运动和信号传导等特定事件。
例如,GFP透过标记膜蛋白的方法,可以标记出特定结构如细胞膜、线粒体、内质网、细胞核、胞板等等。
此外,GFP可以标记蛋白质酶、膜转运蛋白、核酸酶、激酶等多种细胞分子,具有非常丰富的变化形式,如分子翻译、效果、降解等等。
绿色荧光蛋白及其在细胞生物学研究中的应用

绿色荧光蛋白及其在细胞生物学研究中的应用近几十年来,绿色荧光蛋白(GFP)被广泛用于生物学的研究,特别是在细胞生物学领域,它在基因表达分析、膜蛋白研究,以及定位和追踪细胞外状态变化等方面提供了有力的工具。
绿色荧光蛋白最初是从拟南芥中分离出来的,它是一种可以在生物细胞中发出可见的绿光的蛋白质。
GFP可以与其他蛋白质结合在一起,可以用来检测特定蛋白质的表达和定位。
利用绿色荧光蛋白的特性,我们可以实现转基因技术的可视化,同时实现基因的定位,这使得细胞的动态变化以及基因调控可以被直观定量地观察出来。
在GFP的研究过程中,科学家发现GFP本身也有可以改进的特性,不仅可以让它发出绿色的光,也可以被用来实现转基因技术的可视化。
它的发光强度与温度变化和环境改变有关,当温度提升或温度较高时,GFP的发光强度会增强。
GFP还可以用来检测特定的一种或多种蛋白质,能够实现精确的蛋白质定位。
同时,研究人员还发现GFP的表达能力可以被亚细胞定位,发现细胞内部基因表达的动态变化。
GFP也被用于膜蛋白研究,可以很好地实现膜蛋白在细胞表面的定位,从而有助于我们更好地分析膜结构和功能,为细胞生物学研究带来新的视角。
此外,GFP还可以被用于探索和分析细胞外状态变化,它能够通过显示细胞的迁移、聚类、分离等状态变化来揭示细胞的行为和表型特征,成功地帮助了许多细胞生物学研究。
绿色荧光蛋白是一种重要的细胞生物学研究工具,它的出现使得细胞的研究变得更加容易,提高了生物学研究的效率。
它不仅可以被用于基因表达分析和定位,也可以用于膜蛋白研究,使我们更好地了解细胞的行为和表型特征,实现细胞外状态变化的追踪,进而发现基因调控的模式,目前,GFP的技术已经成为细胞生物学研究技术的重要组成部分,将为未来更多的细胞生物学研究带来更多的帮助。
综上所述,GFP在细胞生物学研究中具有重要的意义,它提供了一种强大的分析工具,可以实现基因表达分析、膜蛋白研究和细胞外状态变化的定量观察。
绿色荧光蛋白及其在细胞生物学研究中的应用

绿色荧光蛋白及其在细胞生物学研究中的应用绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein, GFP)是一种从水母Aequorea victoria中分离出来的荧光蛋白质,可以发射绿色荧光。
由于GFP具有结构简单,对细胞无毒性和较强稳定性等特点,因此被广泛应用于细胞生物学和生命科学研究中。
以下是关于GFP及其在细胞生物学研究中的应用的介绍。
一、荧光蛋白及GFP的来源荧光蛋白质是一种含有环状芳香族氨基酸残基的蛋白质,能够吸收外部能量并将其转化为荧光发射。
GFP最初是在1955年,美国南加州大学的Osamu Shimomura研究水母发光机制时发现的。
GFP由238个氨基酸组成,分子量约27kDa。
GFP基因被克隆后即可在其他生物中表达,使它成为了生物体内最常用的荧光标记物之一。
二、GFP的结构和原理GFP的荧光由3个氨基酸残基Tyr(酪氨酸)、Ser(丝氨酸)和Gly(甘氨酸)构成的环状结构决定。
当氧气与Tyr形成共轭键时,便使荧光激发能量被吸收,并在GFP分子腔内缓慢扩散,直至荧光发射。
三、GFP在细胞生物学中的应用1、荧光定位GFP被广泛用于生命科学中细胞定位的研究。
由于GFP具有细胞膜透性和结构稳定性等特性,可以将其组装到生物体内,使其具有明亮的绿色荧光。
通过转化所需的基因序列来表达GFP,可以使研究人员直接在活细胞中观察到融合GFP蛋白质的定位和空间分布状况。
2、蛋白质交互作用GFP也被用作蛋白质交互作用的研究工具。
在这种情况下,GFP被连接到研究的蛋白质上,而研究人员观察到GFP与其他蛋白质结合的情况,从而确定蛋白质之间是否相互作用。
3、表达和异常行为GFP还可用于研究蛋白质的表达和异常行为。
通过表达GFP基因,可以探究研究对象的分泌情况、活动状态、质量控制和分解情况等。
4、细胞轨迹追踪GFP被广泛应用于细胞追踪研究中。
通过转染GFP基因,可以实时跟踪特定细胞类型的运动和位置,比如细胞分裂、游走和迁移等。
绿色荧光蛋白(GFP)技术在细胞生物学研究中的应用

自催化作用都能产生。荧光生色团非常稳定, 不易变性,
用酸、碱处理或者加入盐酸胍都不会使它失去荧光。但是
当pH 值恢复到中性或者移去变性物时,它的荧光又会恢 复到变性前的水平。GFP 的生色团之间是通过共价键结
合。生色团形成的机理目前尚不清楚,但在有分子氧存在
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3 广谱性
首先表现在它的表达几乎不受种属范围的 限制,在微生物、植物、动物中都获得了 成功的表达;其次就是没有细胞种类和位 置的限制,在各个部位都可以表达,发出 荧光。
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4 易于载体构建
由于GFP 较小,只含有238 个氨基酸,编 码GFP 的基因序列也较短,约2.6kb,所
1 对细胞生理过程的监控 在过去的几年中,通过随机和人工诱变得到了许多不同颜色的GFP突
变体。通过基因操作,许多蛋白都成功的与GFP进行了融合,通过这 些融合蛋白就可以对相应蛋白的表达和转运及生理反应进行监控。目 前GFP融合蛋白对细胞内迅速的生理反应的报告大概有三种方式:转 移和定位、GFP光谱的生化修饰、荧光共振的能量转移(FRET)。 Shen[10]等在培养的神经元中发现,细胞内的Ca2+瞬间变化就会 引起GFP标记的钙调蛋白激酶Ⅱ(CaM KⅡ)可逆地易位到突触后膜的 densities上。Shi[11]等用GFP标记来监控α-氨基羟甲基恶唑丙酸 (AMPA)的受体,发现它会从细胞内膜转移到树突棘的表面,根据突 触中AMPA受体的含量可以解释突触沉默、活化的原因和机制。 Siegel[12〕等将野生型的GFP插人Shake K十通道的特殊部位,形 成一个异源嵌合体,这个嵌合体发出的荧光将会随着细胞的去极化作 用而缓慢的减少。相反,Yanagawa[13]等将β-内酰胺酶插人GFP得 到了一个融合体,当此融合体与β-内酰胺酶抑制肽(BLIP)结合时,它 的荧光发射量会大大增加。
绿色荧光蛋白的应用及发展前景汇总

学士学位论文文献综述题目绿色荧光蛋白的应用及发展前景姓名周紫嫣学号专业生物工程指导教师周小萍职称教师中国·武汉二○一二年四月目录摘要 (II)关键词 (II)Abstract (II)Key words (II)1 GPF的发现 (1)2 GFP的结构及发光原理 (1)2.1 GFP的结构 (1)2.2 GFP的发光原理 (2)3 GFP在生物技术中的应用 (2)3.1 GFP作为报告基因 (2)3.2 GFP用于研究病毒与宿主的关系 (3)3.3 GFP用于药物筛选 (3)3.4 GFP作为生物传感器 (3)3.5 GFP用于融合抗体 (4)3.6 GFP用于计算细胞生长速度 (4)3.7 GFP用于基因表达调控 (4)4 GFP存在问题及发展前景 (4)参考文献 (5)致谢 (5)绿色荧光蛋白的应用及发展前景摘要绿色荧光蛋白(GFP)是一种由水母(Aequorea Victoria)体内发现的发光蛋白。
分子质量为26kDa,由238个氨基酸构成,第65~67位氨基酸(Ser-Tyr-Gly)形成发光团,是主要发光的位置。
其发光团的形成不具物种专一性,发出荧光稳定,且不需依赖任何辅因子或其他基质而发光。
绿色荧光蛋白基因转化入宿主细胞后很稳定,对多数宿主的生理无影响,是常用的报道基因。
本文综述了绿色荧光蛋白的发现过程,基本性质,应用及其发展前景。
关键词绿色荧光蛋白;报告基因;药物筛选;融合抗体Green fluorescent protein application and development prospectAbstractGreen fluorescent protein (GFP) is a kind of the jellyfish (Aequorea Victoria) found in the body of the luminous protein. Molecular quality as kDa 26, with 238 amino acids, 65 ~ 67 of amino acid (Ser-Tyr-Gly) form shine group, is mainly the position of the light. The light the formation of the group has no species specificity, a fluorescent stability, and does not need to rely on any auxiliary factors or other matrix and shine. Green fluorescent protein gene into the host cell is stable, for most of the host physiology no effect, the report is a common gene. This paper reviewed the green fluorescent protein discovery process, basic properties, application and development prospect.Key wordsGreen fluorescent protein;Report gene;Drug screening;Fusion antibody1 GPF的发现2008年的诺贝尔化学奖授予从事有关:“绿色荧光蛋白( GFP) 的发现,表达和发展”并取得重要成就的三位科学家:日本科学家下村修(Osamu Shimomura);美国科学家马丁·沙尔菲(Martin Chalfie)和美籍华裔科学家钱永健(Roger Y. Tsien)。
对绿色荧光蛋白(GFP)的了解及应用

对绿色荧光蛋白的了解及应用学院:生命科学学院姓名:马宗英年级:2011学号:2011012923前言绿色荧光蛋白(green fluorescent protein),简称GFP,是一种具有奇妙特性的“光学蛋白质”。
这种蛋白质从成分和结构上来说,没有丝毫的特殊性,它的组成单元是20种常见的氨基酸,二级结构也是普通的α螺旋和β片层。
但是,这种蛋白质却具有一个非常特别的性质——发出绿色荧光。
【关键词】绿色荧光蛋白生命科学应用一、绿色荧光蛋白绿色荧光蛋白最早是由下村修等人于1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现的。
其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,吸收蓝光的部分能量,发出绿色荧光。
野生型水母GFP的一级序列已由其cDNA序列推导出来[1],它至少存在4种同源GFP,但这些突变并不影响GFP的基本功能,只是使突变的GFP具有了新的性质。
生色团是GFP发出荧光的物质基础,也是GFP结构中的一个重要组成部分。
GFP的生色团位于氨基酸序列64~69位的六肽内,65~67位的丝氨酸、脱氢酪氨酸、甘氨酸通过共价键形成的对羟基苯甲基咪唑环酮是一个独特的、相当稳定的环状三肽结构,构成了GFP生色团的核心[2],见图1。
图2为生色团的形成机制。
图1 多管水母中GFP生色团的化学结构和附近序列图2生色团的形成机制目前人们对GFP的荧光发光机制并不十分清楚,大家只是认为,GFP是生物发光过程中的能量受体,并且是最终的发光体,不同的生物发光机制各不相同,不同的突变体发光机制也有很大差异。
二、GFP在生命科学中的应用1、作为蛋白质标签(protein tagging)利用绿色荧光蛋白独特的发光机制,可将GFP作为蛋白质标签(protein tagging),即利用DNA重组技术,将目的基因与GFP基因构成融合基因,转染到合适的细胞中进行表达,然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋白质进行细胞内的活体观察。
绿色荧光蛋白及其在细胞生物学中的应用

绿色荧光蛋白及其在细胞生物学中的应用绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,简称GFP)是一种源自于海葵的蛋白质,具有绿色荧光特性。
它的发现和应用为细胞生物学研究带来了巨大的突破,成为了生物学研究中的重要工具。
本文将介绍绿色荧光蛋白的特性和它在细胞生物学中的应用。
绿色荧光蛋白的发现和研究始于上世纪60年代末。
由于GFP具有独特的荧光特性,能够发射绿色荧光,并且不需要外源性荧光素或酶辅助作用,使得它成为细胞生物学研究中的理想标记工具。
通过将GFP基因与其他基因融合,研究人员可以追踪和观察特定基因在活细胞中的表达和运动。
GFP的应用广泛涉及细胞生物学的多个领域。
首先,GFP可以用来研究细胞的结构和形态。
通过将GFP与细胞骨架蛋白或细胞器定位蛋白融合,研究人员可以直接观察细胞骨架的分布和细胞器的定位,进而了解细胞的结构和功能。
GFP在细胞生物学中的应用还包括研究蛋白质的亚细胞定位和动态变化。
通过将GFP与感兴趣的蛋白质融合,研究人员可以实时观察蛋白质在细胞中的定位和运动。
这种技术被广泛应用于研究蛋白质的转运、分泌和降解等过程,有助于揭示蛋白质的功能和调控机制。
GFP还可以用于研究细胞的信号传导和相互作用。
通过将GFP与信号分子或蛋白质相互作用的区域融合,研究人员可以观察信号分子的活动和相互作用过程。
这为研究细胞信号传导通路的调控机制提供了有力的工具。
除了在基础研究中的应用,GFP还被广泛用于生物荧光成像和生物医学研究。
通过将GFP标记的细胞或组织注射到动物体内,研究人员可以实时观察和追踪细胞或组织的活动和变化。
这种技术被应用于研究胚胎发育、神经元活动、肿瘤生长等过程,对于理解生物学的机制和疾病的发生发展具有重要意义。
总结起来,绿色荧光蛋白作为一种重要的标记工具,为细胞生物学研究提供了强大的支持。
通过GFP的应用,研究人员可以实时观察和追踪细胞和蛋白质的活动,揭示细胞的结构和功能,以及了解生物学的机制和疾病的发生发展。
绿色荧光蛋白的研究现状与应用

绿色荧光蛋白的研究现状与应用【摘要】绿色荧光蛋白(GFP)最早发现于水母体中,是一种十分重要的蛋白质。
由于其众多的优点,现已在分子生物和细胞生物的研究中应用十分广泛。
随着技术的进步和研究的进一步深入,GFP基因也在许多其他方面将发挥着越来越重要的作用。
【关键词】绿色荧光蛋白;生色团;报告基因2008年10月8日,瑞典皇家科学院诺贝尔奖委员会授予三位科学家:日裔美国科学家下村修(Osamu Shimomura)、美国科学家马丁?查尔非(Martin Chalfie)和美国华裔科学家钱永健(Roger Y.Tsien)诺贝尔化学奖,以表彰他们在绿色荧光蛋白(GFP)研究方面做出的突出贡献。
1 绿色荧光蛋白的理论研究1.1绿色荧光蛋白的发现绿色荧光蛋白最早于1962年在维多利亚多管发光水母体内被发现,同时它也存在于水螅和珊瑚等腔肠动物体内。
它的内源基团可以在蓝光或紫外光激发下发射绿光,属于生物发光蛋白。
绿色荧光蛋白在水母体内之所以能发光,主要依靠水母素的辅助。
水母素和GFP之间能发生了能量转移,在钙的刺激下,其能量可转移到GFP,刺激GFP发光。
1.2绿色荧光蛋白的结构和发光原理1992年Prasher等克隆了GFP基因的cDNA并分析了其一级结构。
野生型GFP基因组全长2600bp,由3个外显子和2个内含子组成,编码238个氨基酸,分子量约28kDa。
GFP的三维立体结构是由11个β折叠围在四周形成一个中空的圆柱体,1条α折叠贯穿在圆柱体的中间,其中有一段位于65-67位的3个氨基酸残基(Ser-Tyr-Gly)形成的杂环咪唑啉结构组成生色团,位于圆筒中央并附着在α螺旋上。
绿色荧光蛋白的发光原理是位于氨基酸第65位的Ser的羧基和67位的Gly的酰基经过亲核反应生成咪唑基,66位的Tyr通过脱氢使芳香团与咪唑基结合,形成对羟基苯甲酸咪唑环酮生色团发出荧光。
GFP的最大和次大的激发波长分别是395nm和475nm。
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绿色荧光蛋白的研究现状与应用
【摘要】绿色荧光蛋白(GFP)最早发现于水母体中,是一种十分重要的蛋白质。
由于其众多的优点,现已在分子生物和细胞生物的研究中应用十分广泛。
随着技术的进步和研究的进一步深入,GFP基因也在许多其他方面将发挥着越来越重要的作用。
【关键词】绿色荧光蛋白;生色团;报告基因
2008年10月8日,瑞典皇家科学院诺贝尔奖委员会授予三位科学家:日裔美国科学家下村修(Osamu Shimomura)、美国科学家马丁?查尔非(Martin Chalfie)和美国华裔科学家钱永健(Roger Y.Tsien)诺贝尔化学奖,以表彰他们在绿色荧光蛋白(GFP)研究方面做出的突出贡献。
1 绿色荧光蛋白的理论研究
1.1绿色荧光蛋白的发现
绿色荧光蛋白最早于1962年在维多利亚多管发光水母体内被发现,同时它也存在于水螅和珊瑚等腔肠动物体内。
它的内源基团可以在蓝光或紫外光激发下发射绿光,属于生物发光蛋白。
绿色荧光蛋白在水母体内之所以能发光,主要依靠水母素的辅助。
水母素和GFP之间能发生了能量转移,在钙的刺激下,其能量可转移到GFP,刺激GFP发光。
1.2绿色荧光蛋白的结构和发光原理
1992年Prasher等克隆了GFP基因的cDNA并分析了其一级结构。
野生型GFP基因组全长2600bp,由3个外显子和2个内含子组成,编码238个氨基酸,分子量约28kDa。
GFP的三维立体结构是由11个β折叠围在四周形成一个中空的圆柱体,1条α折叠贯穿在圆柱体的中间,其中有一段位于65-67位的3个氨基酸残基(Ser-Tyr-Gly)形成的杂环咪唑啉结构组成生色团,位于圆筒中央并附着在α螺旋上。
绿色荧光蛋白的发光原理是位于氨基酸第65位的Ser的羧基和67位的Gly的酰基经过亲核反应生成咪唑基,66位的Tyr通过脱氢使芳香团与咪唑基结合,形成对羟基苯甲酸咪唑环酮生色团发出荧光。
GFP的最大和次大的激发波长分别是395nm和475nm。
溶液中,395nm激发的荧光发射峰在508nm,375nm激发的荧光发射峰在503nm。
1.3绿色荧光蛋白的优点
绿色荧光蛋白的独特之处即它的优点很多,主要有:荧光反应不需要底物和任何其他辅助因子,只需要在蓝光和紫外光下照射,利用荧光显微镜甚至是直接用肉眼就可以观察,易于检测且灵敏度高;荧光性质稳定,对光漂白有较强的耐受性;无毒害,转化后细胞仍可连续传代;通用性好,无种属特异性;分子量小,易于构建载体;不受假阳性干扰,结果真实可靠;可进行活细胞定时定位观察;易于得到突变体。
2 绿色荧光蛋白的应用
1994年Chalfie等首次在大肠杆菌细胞和线虫中表达了GFP,开创了GFP 应用研究的先河。
也正是由于绿色荧光蛋白的许多优点,使得其应用十分广泛。
2.1作为报告基因
GFP通常用作报告基因,可用来检测转基因效率,把GFP基因连接到目的基因的启动子之后,通过测定GFP的荧光强度就可以对该基因的表达水平进行检测。
GFP最显著的优势是荧光反应不需要底物和其他辅助因子。
有利必有弊,
它最大的缺点是没有放大功能,不能像酶分子一样将信号放大,所以一般需要启动子驱动GFP基因在细胞内可以足量表达。
目前,此方法无论在农杆菌介导或基因枪介导的植物遗传转化中还是在活细胞、转基因胚胎和动物中都已得到非常广泛的应用。
2.2作为融合标签
通过基因工程等生物学技术,GFP基因可以与外源基因融合构成嵌合基因。
其表达产物既保持了外源蛋白的生物活性,又表现出与天然GFP相似的荧光特性。
GFP的这种特性为蛋白质提供了一种荧光标记,不仅可以检测蛋白质分子的定位、迁移,还可以研究蛋白质分子的相互作用以及蛋白质构象变化,并依靠荧光共振能量转移来进行检测。
2.3其他
GFP还有其他重要应用:(1)研究基因表达的调控元件;(2)研究基因表达的时序控制与空间定位;(3)发育分子机理研究,GFP可以作为活体标记,在原位观察细胞的生长和运动。
特别对于身体透明的动物观察起来更方便;(4)药物筛选,由于可以用不同颜色的GFP衍生物标记相关的蛋白来观察单细胞内相互作用的靶蛋白,再分离出目的细胞,从而可用于大规模药物筛选;(5)临床检验,生产出GFP标记的抗原或抗体,就可以免疫诊断;(6)转基因动物和植物的筛选标记,微生物在体内的感染途径,病毒和宿主的相互作用等,如将其插入动物、细菌或细胞的遗传信息中,随着细胞复制,可观察不断长大的癌症肿瘤、细菌的生长;(7)作为生物传感器,野生型和多种突变型GFP都有依赖pH的荧光变化,因而可以被用来检测活细胞内的pH等等。
3 绿色荧光蛋白的优化和改造
天然的GFP的荧光强度低,表达易受温度的影响,翻译合成后的蛋白质构象折叠的效率低,而且具有多个吸收峰。
为了使得GFP在应用时具有更好的特性,通过生物学方法对GFP进行了优化和改造。
一般是更换生色团的氨基酸。
通过基因突变将第65位的Ser点突变为Thr,这样可以增强荧光强度,而且可以优化单个吸收峰。
Chalfie等科学家,还对GFP的颜色进行了改造,以扩大其用途。
由GFP改造而成的变体以及GFP本身,覆盖了从蓝色到黄色的光谱范围,按其发射波长由短至长可分为蓝色(BFP)、青色(CFP)、绿色(GFP)、黄绿色(YFP)四大组,这些也都是通过对生色团的氨基酸进行点突变,例如野生型的绿色发光位点为Ser—Tyr—Gly,蓝色为Ser—His—Gly,青色为Thr—Trp—Gly,黄绿色为Gly—Tyr—Gly。
4 展望
随着分子生物学技术的发展,对GFP的理论研究进一步加深,GFP基因在启动子分析、抗病检测和细胞筛选等方面的应用也越来越广泛。
目前虽然仍有一些还未解决的难题,但随着技术的进步以及科研人员的进一步探索,有理由相信GFP将在未来的生物学领域发挥越来越重要的贡献。
参考文献
[1]何琪杨,张鸿卿.薛绍白.国外医学分子生物学分册.1997,19:279—283
[2]赵华,粱婉琪,杨永华等.植物生理学通讯.2003,39:171—178。