绿色荧光蛋白的应用及其最新研究进展
绿色荧光蛋白的结构与应用
GFP荧光持续时间较长，在450-490nm蓝光激发下，能保持 10min以上荧光。
03 GPF的应用
显像与示踪技术
绿色荧光蛋白（GFP）的结构与应用
由于GFP稳定无毒，所以可 使动物体内复杂结构可视化，使 得实验研究更加直观清晰。You 等通过GFP标记的裸小鼠，检测 GFP基因在小鼠各器官中的表达 状况，为选择疾病模型和移植供 体提供了依据。
报告基因
绿色荧光蛋白（GFP）的结构与应用
GFP由于具有光信号传导机制，可用 作活细胞内的荧光感受器。荧光感受器常 用于检测各种分子对生物的有效性，甚至 可以用于研究活细胞中蛋白质的构象变化。 在检测某物质对于某种生物是否有毒性方 面，GFP荧光感受器也有较大的利用价值。
荧光感C 受器
绿色荧光蛋白（GFP）的结构与应用
GFP
GFP的发光现象由其生色团决定，GFP表达后折叠，在有氧条件下 第66位氨基酸残基脱氢，使Ser65-Tyr66-Gly67环化形成对羟基苯咪唑啉 酮，即生色团。
02 GPF的优点
GPF的优点
绿色荧光蛋白（GFP）的结构与应用
性质极其稳定，高温、甲醛固定和石蜡包埋不影响其发光性 能，对强光或长时间光照都有较强的耐受能力，对大多数普 通酶有较强抗性。
GFP
Байду номын сангаас
目录
CONTENTS
01 GFP的结构
03 GFP的应用
02 GFP的优点
04 +
参考文献
01 GPF的结构
绿色荧光蛋白（GFP）的结构与应用
GFP
绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein，GFP）是一类能被蓝紫光激 发而发出绿色荧光的蛋白。
绿色荧光蛋白在肿瘤活体光学成像中的应用新进展
制 、血 管生 成 、药 物 筛选 和 疗 效 评 判 等 光 学 成 像 技 术 中的 最 新 应 用． 活 体 分 子 成 像 的 未 来 成像 技 术 进 行 了展 望 ． 对 绿 色 荧光 蛋 白作 为 活 体 分 子 成 像 技 术 新 的报 告 基 因 。 肿 瘤 的早 期 诊 断 及 实时 、无创 监 测 肿 瘤 的 发 展 变化 等 方 面 在 起 了很 大 的 作 用 ， 肿 瘤 的诊 断 、 对 药效 学研 究 以及 临床 药物 疗 效 的判 定具 有 重 大 意 义．
ｎ ｌｙ，ｔ ｅ ｆ ｔ ｒ ｏ ｐｅ ｔｏ ｎ ｖｖ ｌ ｃ ｌ ｒｉ ａ ｉ ｅ ｈｎ ｌ ｇｅ ｓｇｉｅ ａｌ ｈ ｕ ｕ ｅ ｐｒ ｓ ｃ ｆｉ ｉ ｏ ｍｏ ｅ ｕ ａ ｍ ｇｎｇ ｔｃ ｏ ｏ ｉｓ ｉ ｖ ｎ．
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发光细菌GFP的表达机理及应用
发光细菌GFP的表达机理及应用发光细菌GFP是绿色荧光蛋白的简称，是由Aequorea victoria这种水母所产生的一种蛋白质。
GFP不但具有高度的应用价值，而且还是生物学研究中最有用的分子标记之一。
本文将从发光细菌GFP的表达机理、应用以及未来发展等方面进行介绍。
一、发光细菌GFP的表达机理GFP是一种由238个氨基酸组成的蛋白质，主要在海水深处生活的Aequorea victoria珊瑚中产生。
GFP通过吸收紫外线光激发，产生荧光。
GFP能在任何类型的生物组织内发光，不会产生有害影响。
除了绿色之外，GFP还能产生黄色、蓝色、紫色、红色等颜色的荧光。
这些颜色的荧光由不同种类的GFP进行表达，这些不同种类的GFP都具有不同的结构和光学特性。
GFP的结构包含一个由11肽段组成的β桶状结构和一个由α螺旋段组成的关键性结构域。
通过对这个结构域的分子工程改造，研究人员可以对GFP进行改造，使其在其他物种内表达并发光。
二、发光细菌GFP的应用GFP已成为生物医学领域的热门研究课题。
由于GFP可以与其他蛋白质相结合，并且不会对细胞造成任何影响，能够用于实现对生物系统的准确研究。
GFP可以制作成质粒，通过质粒转染等方法，将其导入到需要研究的细胞内。
利用GFP可准确观察到细胞内各种蛋白质分子的定位和表达等情况。
1、生物病理学：GFP在生物病理学领域已经有了广泛的应用。
与其他标记方法相比，GFP标记具有许多优势。
第一，当有多种标记时，GFP在背景噪音中更易于辨认；第二，直接观察细胞在活体状态下的各种功能，例如细胞的表面形态、细胞器的运动等。
2、分子生物学：GFP已经成为分子生物学中最重要的分子标记技术之一。
通过观察GFP标记蛋白分子的表达、定位和交互关系，有助于更好地理解生物化学反应。
利用GFP标记，研究人员可以更好地分离和分析蛋白质、DNA和RNA，进一步深入研究生物化学反应。
3、神经科学：大多数神经科学家利用GFP生物标记技术，将化学物质或电压灵敏的通道与GFP合并。
绿色荧光蛋白
绿色荧光蛋白分子标记在环境微生物学研究中的应用摘要：荧光染料在微生物学中的应用受到广泛的关注。
近年来，来源于发光性生物的荧光蛋白进一步丰富了微生物学的研究手段。
其中绿色荧光蛋白(G reen fluorescent protein ，G F P ，来源于水母) 具有独特的应用价值。
G F P 及G F P 突变体在微生物降解污染物、生物膜菌群构架、环境生态学和环境检测生物传感器等研究领域取得了很好的应用效果。
关键词：绿色荧光蛋白，环境微生物，分子标记自然界中的许多生物都具有发光的能力，如细菌、真菌、萤火虫、深海鱼类和腔肠动物等。
它们的发光能力是由一类称为“荧光蛋白”的蛋白质赋予的。
G F P 标记系统是首次发现的不需要其他辅助条件的生物发光标记系统。
G F P 的激发光谱和发射光谱在活体和离体条件下完全相同，而虫荧光酶素的发射光谱在离体和活体条件下并不相同[1]。
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein)，简称GFP，这种蛋白质最早是由下村修等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。
其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。
这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，且这个冷光蛋白质与钙离子(Ca2+)可产生交互作用[1]2008年10月8日，日本科学家下村修（伍兹霍尔海洋生物学研究所）、美国科学家马丁·查尔菲（哥伦比亚大学）和钱永健（加利福尼亚大学圣迭戈分校）因为发现和改造绿色荧光蛋白而获得了当年（2008）的诺贝尔化学奖。
天然的G F P 是一种多肽，由23 8 个氨基酸组成，分子量27 k u 。
能够将蓝光转化成绿色荧光[2-3]。
C orm ack 等用定点突变的技术将包围S er—T yr—G ly 生色团的2 0 个氨基酸进行突变，得到一系列吸收峰红移的突变体。
这些突变体相对于野生型蛋白具有更高的折叠效率，荧光强度增强3 0 ～100 倍，使G F P 的应用前景更加广阔[5]。
基于绿色荧光蛋白标记技术的植物细胞分化研究
基于绿色荧光蛋白标记技术的植物细胞分化研究植物细胞分化是植物生长发育过程中非常重要的一环，它决定了植物的形态、结构和功能，是保证植物正常生长和发育的关键因素。
绿色荧光蛋白标记技术是一种在生物体中检测或观察特定基因表达的有力工具，在植物细胞分化研究中得到了广泛的应用。
本文将从绿色荧光蛋白标记技术的基础知识、应用原理、研究进展等方面综述其在植物细胞分化研究中的应用。
一、绿色荧光蛋白标记技术的基础知识1.1 绿色荧光蛋白的发现和分离1988年，Osamu Shimomura从蓝色发光水母中发现了绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)。
随后，Martin Chalfie发现了GFP的基因序列，并且成功地将其引入小鼠、斑马鱼等模式生物细胞中，使得这些细胞发出了明亮的绿色荧光，开创了GFP应用于生物学领域的新时代。
1.2 GFP的生化特性GFP是一种含有238个氨基酸的蛋白质，其大约490-510纳米的荧光光谱在黄绿光区域。
GFP内部内嵌着一个主要负责荧光产生的色团环结构，称为荧光色团环(fluorescent chromophore)，这个环结构的形成需要一个称为四肽环化酶的酶的作用，它能够将三个氨基酸(Cys-Tyr-Gly)连接成为一个四肽。
GFP的很多特性可通过改变它的核苷酸序列或蛋白质翻译后的修饰来进行调节。
二、绿色荧光蛋白标记技术在植物细胞分化研究中的应用原理2.1 基于突变筛选的植物细胞分化标记技术透过人工诱变或通过遗传突变等方法，可诱发部分植物基因的表达。
将这些基因与GFP合并编码后在自身植物基因组进行定位分析，可以标记该细胞在植物细胞分化过程中所处的位置或时期。
这种标记方法要求依赖性较高，因为研究者需要对某一个特定的基因进行变异和筛选才能得到标记，且标记区域为固定染色体某一地点。
2.2 基于转基因技术的植物细胞分化标记技术另外一种标记细胞分化的技术，是基于转基因技术，将被研究的目标基因与GFP融合编码构建植物转基因体系，作为一个构建植物转基因体系，标记细胞分化的技术来使用。
绿色萤光蛋白
绿色萤光蛋白(green fluorescent protein)，简称GFP，这种蛋白质最早在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。
其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。
这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，且这个冷光蛋白质与钙离子(Ca+2)可产生交互作用。
由水母Aequorea victoria中发现的野生型绿色萤光蛋白，395nm和475nm分别是最大和次大的激发波长，它的发射波长的峰点是在509nm，在可见光绿光的范围下是较弱的位置。
由海肾(sea pansy)所得的绿色萤光蛋白，仅有在498nm有一个较高的激发峰点。
在细胞生物学与分子生物学领域中，绿色萤光蛋白基因常被用作为一个报导基因(reporter gene)。
一些经修饰过的型式可作为生物探针，绿色萤光蛋白基因也可以克隆到脊椎动物(例如:兔子上进行表现，并拿来映证某种假设的实验方法。
我们这边细胞组的基本上都在用这个东东。
标记细胞GFP的分子结构和发光机制绿色荧光蛋白为一个由238个氨基酸残基组成的单链，GFP有两个吸收峰，主峰在395nm，次峰在470nm，其荧光发射峰在509nm。
GFP 的化学性质相当稳定，其变性需要在90℃或pH<4或pH>12的条件下用6mollL盐酸胍处理，这一性质与GFP的结构特性相关。
Yang等的研究表明，GFP是由两个相当规则的内含一个α-螺旋和外面包围l1个β-折叠的β-桶状结构组成的二聚体，β-桶状结构直径约3nm，高约4nm。
β折叠彼此紧密结合，象桶板一样形成桶状结构的外围，并且形成了一个规则的氢键带。
桶状结构和位于其末端的短α螺旋以及环状结构一起组成一个单独的致密结构域，没有可供扩散的配体进入缝隙。
这种坚实的结构保证了其稳定和抗热、抗变性的特点。
GFP的生色基团附着于α-螺旋上，几乎完美的包被于桶状结构中心。
位于圆桶中央的α-螺旋含有一个由六肽组成的发光中心，而发光团是由其中的三肽Ser65-Tyr66-Gly67经过环化形成了对羟基苯咪唑啉酮。
对绿色荧光蛋白(GFP)的了解及应用
对绿色荧光蛋白的了解及应用学院：生命科学学院姓名：马宗英年级：2011学号：2011012923前言绿色荧光蛋白(green fluorescent protein)，简称GFP，是一种具有奇妙特性的“光学蛋白质”。
这种蛋白质从成分和结构上来说，没有丝毫的特殊性，它的组成单元是20种常见的氨基酸，二级结构也是普通的α螺旋和β片层。
但是，这种蛋白质却具有一个非常特别的性质——发出绿色荧光。
【关键词】绿色荧光蛋白生命科学应用一、绿色荧光蛋白绿色荧光蛋白最早是由下村修等人于1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现的。
其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，吸收蓝光的部分能量，发出绿色荧光。
野生型水母GFP的一级序列已由其cDNA序列推导出来[1]，它至少存在4种同源GFP，但这些突变并不影响GFP的基本功能，只是使突变的GFP具有了新的性质。
生色团是GFP发出荧光的物质基础，也是GFP结构中的一个重要组成部分。
GFP的生色团位于氨基酸序列64~69位的六肽内,65~67位的丝氨酸、脱氢酪氨酸、甘氨酸通过共价键形成的对羟基苯甲基咪唑环酮是一个独特的、相当稳定的环状三肽结构,构成了GFP生色团的核心[2],见图1。
图2为生色团的形成机制。
图1 多管水母中GFP生色团的化学结构和附近序列图2生色团的形成机制目前人们对GFP的荧光发光机制并不十分清楚，大家只是认为，GFP是生物发光过程中的能量受体，并且是最终的发光体，不同的生物发光机制各不相同，不同的突变体发光机制也有很大差异。
二、GFP在生命科学中的应用1、作为蛋白质标签（protein tagging）利用绿色荧光蛋白独特的发光机制，可将GFP作为蛋白质标签（protein tagging），即利用DNA重组技术，将目的基因与GFP基因构成融合基因，转染到合适的细胞中进行表达，然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋白质进行细胞内的活体观察。
绿色荧光蛋白
GFP作为标记蛋白的优点
①荧光稳定 ②检测方便 ③无种属特异性，也无有细胞种类和位置的限制 ④GFP对受体细胞基本无毒害 ⑤易于构建载体，不受假阳性干扰 ⑥不需任何反应底物和辅助因子 ⑦可制成永久标本
蓝色荧光蛋白
双突变体Y66H/Y145F能在381nm光的激发下产生445nm 的蓝光，故称BFP。这种蓝光能进一步激发GFP产生绿光， 即发生荧光共振能量转移现象（FRET） 。
绿色荧光蛋白变异体的发色基团结构
EBFP：增强蓝色荧光蛋白；ECFP：增强蓝绿色荧光蛋白 EGFP：增强绿色荧光蛋白；EYFP：增强黄色荧光蛋白
绿色荧光蛋白的发光基团
Model of the fluorophore and its environment superposed on the MAD-phased electron density map at 2.2 Å resolution. The clear definition throughout the map allowed the chain to be traced and side chains to be well placed. The density for Ser65, Tyr66 and Gly67 is quite consistent with the dehydrotyrosine - imidazolidone structure proposed for the fluorophore. Many of the side chains adjacent to the fluorophore are labeled.
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绿色荧光蛋白的应用及其最新研究进展
一、 关键词：
绿色萤光蛋白、酵母双杂交系统、流式细胞仪、下修村、马丁·查尔菲、钱永健
二、 背景
2008年10月8日，三位美国科学家——伍兹霍尔海洋生物学实验室（Woods Hole
Marine Biological Laboratory, MBL）的Osamu Shimomura、哥伦比亚大学（Columbia
University）的Martin Chalfie以及加州大学圣地亚哥分校（University of California, San
Diego）的钱永健（Roger Yonchien Tsien），因在研究和发现绿色荧光蛋白（green fluorescent
protein,GFP）方面做出突出贡献而获得诺贝尔化学奖。
绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）最早由日裔科学家下村修于1962年在水
母（Aequorea victoria ）中发现。而后马丁·查尔菲则证明了GFP在作为多种生物学现象发
光遗传标记方面的应用价值。钱永健阐明了GFP发光的机制，并且发现了除绿色之外可用
于标记的其它颜色。他对细胞生物学和神经生物学领域的贡献具有划时代的意义。他的多色
荧光蛋白标记技术让科学家能够用不同颜色对多个蛋白和细胞进行标记，从而实现了同时对
多个生物学过程进行追踪。现在，三位科学家的研究成果已经作为标记工具在生物科学中得
到广泛应用。
三、 GFP的主要性能
GFP在蓝色波长范围的光照激发下发出绿色荧光，其发光过程需要冷光蛋白质Aequorin
的帮助，而且，这个冷光蛋白质可与钙离子（Ca2+）相互作用。GFP的激发光谱在400nm
附近有一个主激发峰，在470nm附近有一个次激发峰。发射光谱在505nm附近有一尖锐的
主发射峰，在540nm附近有一肩峰。在Aequorea victoria 中发现的野生型绿色荧光蛋白的
分子量较小，由238个氨基酸残基组成，仅为27~30kDa，而编码GFP的基因序列也很短，
为2.6kb。。GFP序列中的65-67位残基（Ser65-Tyr66-Gly67）可自发形成荧光发色基团——
对羟基苯咪唑啉酮。GFP的晶体结构是由11个β-折叠组成的柱状结构，直径约3nm，长约
4nm。柱中央有一个α-螺旋，发色基团在α-螺旋上，非常靠近柱的中心。蛋白的二级结构
大部分为α-螺旋和β-折叠。GFP的化学性质相当稳定，无光漂白现象（Photobleaching），
用甲醛固定和石蜡包埋亦不影响其荧光性质。在细胞生物学与分子生物学领域中，绿色荧光
蛋白基因常被用作报告基因。
四、 GFP的应用
1、酵母双杂交系统
原理：
将已知蛋白作为诱饵蛋白，在系统中捕获与其相互作用的蛋白质。人们可用GFP直接
监测蛋白质与蛋白质的相互作用,因此GFP广泛使用于此技术。
利用两个增强型GFP（EGFP）片段重建功能，从而开发出一种新型的报告系统以应用
于酵母双杂交系统。该系统在基因水平上将EGFP片段分别与诱饵蛋白及要捕获的蛋白融
合，在体内共表达，从而研究蛋白与蛋白间的相互作用。与现有的酵母双杂交系统相比，
EGFP系统中的诱饵、靶蛋白载体的报告基因和复制控制元件均得到了改进。在酵母中，当
蛋白与蛋白发生相互作用时，分开的EGFP能够重新结合而发出荧光。EGFP报告质粒包括
pNEGFP和pCEGFP。在乙醇脱氢酶1（ADH1）启动子控制下，诱饵蛋白质粒编码的EGFP
N-末端及靶蛋白质粒编码的EGFP C-末端能够被组成型表达，其转录被ADH1终止子序列
终止。构建的EGFP报告质粒pNEGFP和pCEGFP分别为色氨酸和亮氨酸选择性，并且它
们都是携带有低拷贝数起始位点（CEN6/ARS4起始位点）的着丝粒质粒。这些低拷贝数的
质粒降低了蛋白表达水平，从而解决了酵母细胞中的蛋白毒性问题。\
方法：
以分离EDPG为报告系统。
为了验证当酵母中的蛋白间发生相互作用时，被分离的EGFP会互补结合，以GAL4DD
作为诱饵蛋白，GAL11P作为靶蛋白进行了实验。在蛋白与蛋白相互作用的研究中，经常使
用这两种蛋白作为对照。实验中，研究人员将含有GAL11P的pCEGFP质粒
（pCEGFP:GAL11P）与包含GAL4DDpNEGFP:GAL4DD质粒一起转入酵母细胞，这样酵母
就会含有pCEGFP:GAL11P和pNEGFP:GAL4DD两个质粒，这两个质粒均可用于研究荧光
重建。另外，由于EGFP片段（NEGFP和CEGFP）的空间位阻效应可能会影响到荧光发色
基团的形成，为了确定合适的融合蛋白空间结构，构建出不同组合的EGFP报告质粒，它们
能够表达不同的EGFP片段组合。将NEGFP和CEGFP融合载体转入YM4217酵母中，同
时添加Ura、His、Leu和Trp。为了确定酵母细胞是否含有相应的质粒，采用NEGFP和CEGFP
融合蛋白特异引物进行PCR扩增。得到的PCR产物经1%琼脂糖电泳分离后，分别得到594bp
（1N-5N）、474bp（6N）、513bp（1C-4C, 6C）、243bp（5C）的扩增产物。相应的594bp（1N-5N）、
474bp（6N）、513bp（1C-4C, 6C）、243bp（5C）PCR产物只存在于转入后的酵母中，不存
在于用作对照的YM4217酵母中，这说明在酵母双杂交系统中可以使用不同的选择标记。
优势：
第一 EGFP报告基因既不需要外源底物也不需要任何辅助因子；
第二 该系统采用低拷贝数质粒，减少了细胞毒性；
第三 这些转录因子可被用作诱饵蛋白。
2. GFP在转基因动物研究中的应用
基因水平上标记不同的细胞群已成为非常普遍的研究。虽然Lac Z，即细菌β-半乳糖苷
酶基因仍在许多小鼠研究中作为筛选标记，但GFP在小鼠中的更具吸引力。由于GFP自身
的特点，它能够在体内或体外进行实时监测。GFP还有另一个优势，能采用流式细胞仪、
共聚焦显微镜及荧光计等技术进行定量检测。增强型GFP（EGFP）现在应用于转基因或基
因打靶小鼠。更为重要的是，人们现在已经开发出多种GFP光谱变体.
基因打靶和胚胎干细胞（ES）技术
基因打靶和胚胎干细胞技术的出现为小鼠基因组操作引进了新的方法。胚胎干细胞是来
源于后胚泡期胚胎的多能干细胞系，经体外繁殖和处理后可再导入胚胎。只要在体外进行基
因打靶和转基因操作，就可通过生殖细胞将亲本的基因组传递给后代。在胚胎干细胞中可
进行两种基因组改造：定向改造和非定向改造。定向改造就是预先确定并精确设计所要做的
改变，基因打靶就是定向改造。非定向改造是随机的，包括转基因和突变。研究中，这两种
方式可混合使用以达到不同的目的。黄色荧光蛋白（EYFP）和增强型蓝绿色荧光蛋白
（enhanced cyan fluorescent protein, ECFP）已应用于小鼠研究中。由于ECFP和EYFP的谱
线轮廓截然不同且没有重叠，所以这两种荧光蛋白可同时用作报告基因并共同显色，这对体
内双标记或荧光能量转移分析等研究是非常理想的。GFP及其颜色变体作为报告蛋白的应
用为科学研究提供了一个空前的高精度检测方法，代表着小鼠基因组改造技术的未来发展方
向，并开启了在同一个动物体内应用组合无创性报告基因的广阔前景。
同源重组和点特异重组可对基因组进行任何想要的改变。可通过多种方式进行随机突
变，利用外源基因陷阱载体可在基因组中随机定位，从而“劫持”基因表达并破坏基因功能。
胚胎干细胞的另一种应用是转基因，它与经典的原核注射类似。在体外，将载体自身的驱动
目的基因（通常为报告基因）的启动子整合入基因组，然后导入体内。因此，任何改造都能
够导入胚胎干细胞，随后通过生殖细胞传递给后代，这样就可以建立小鼠突变品系或嵌合体，
从而进行原位研究了。
三、应用仪器
流式细胞仪：
1、 组成：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机
和分析系统。
2、 原理：由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参
数由逻辑电路判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充
电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液
体被当作废液抽吸掉。
3、 指标：对于流式细胞仪常用的技术指标有荧光分辨率、荧光灵敏度、适
用样品浓度、分选纯度、可分析测量参数等。
参考文献：
1、 张运峰;范永山;冯志娟;林满丽;董金皋;;利用重组PCR技术构建适合真菌ATMT转化的
GFP基因表达载体[J];安徽农业科学;2009年27期
2、
贾延劼,杨于嘉,宋建辉,刘丽旭,刘杰波,郑湘榕;新生大鼠神经干细胞的分离培养[J];中国
当代儿科杂志;2002年02期
3、 单永立;李艳;朱学良;;绿色荧光蛋白——照亮生命科学的一盏明灯[J];生命科学;2008年
06期
4、 杨蕊,邹明强;流式细胞术的最新进展[J];分析测试学报;2004年06期