疑难血型鉴定和疑难交叉配血
血型鉴定与交叉配血
根据红细胞膜上有无A抗原或B抗原， 将血型分为A型、B型、AB型及O型四 种。通常利用红细胞凝集试验，通过 正定型和反定型鉴定ABO血型。
正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测 定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原； 反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血 清中有无相应的抗A或抗B。
血型抗原
抗B A型RBC B型RBC O型RBC
-
-+
+
-
结果 O
+
--
+
-
A
-
++
--B来自++-
-
-
AB
Rh血型鉴定
一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液
二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性
红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原
其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原
血型抗体
常见的血型抗体分子大多属于IgM或IgG两类
*五类免疫球蛋白具有相似的单体结构 *两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成的四肽 链 (H2L2)---单体结构
1、 IgG 抗体
分子较小，通常以单体形式存在。多经妊娠 或输血后免疫产生。在盐水介质中只能致敏相应 抗原的红细胞，而不能使之凝集，所以又称为不 完全抗体。必须通过特定的方法（如抗人球蛋白） 使致敏红细胞发生凝集。
2. 各加LIM溶液0.7m1 ，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟。
3．普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液 倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
输血科疑难交叉配血试验标准操作规程
输血科疑难交叉配血试验标准操作规程1.目的为规范疑难交叉配血试验操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7(2)条款的要求制定本规程。
2.适用范围适用于医疗机构输血科对临床疑难交叉配血受血者，主要是对红细胞ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性及自身免疫性溶血性贫血(AlHA)患者的交叉配血试验。
3.职责医疗机构输血科技术人员负责疑难交叉配血试验。
4.原理本规程中疑难交叉配血是指受血者ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性或受血者是自身免疫性溶血性贫血患者等情况下的交叉配血试验。
配血前需确定受血者的ABO血型或红细胞不规则抗体的特异性,选择ABO血型相容的红细胞或红细胞不规则抗体对应抗原阴性的红细胞进行交叉配血试验。
5.所需设备和试剂普通离心机，血型血清学专用离心机，水浴震荡仪，普通显微镜等。
6.检测环境条件室温应控制在18-27°C,湿度应保持30%-70%°7.步骤与方法7.1交叉配血前受血者ABO血型鉴定不确定者执行《ABO疑难血型鉴定标准操作规程》，确定ABO血型后，再选择ABO血型相同或相容的献血者血液进行交叉配血试验。
7.2红细胞不规则抗体筛选阳性时7.2.1随机与库存血中多袋血液进行交叉配血试验，选择交叉配血相合的血液输注。
7.2.2我院库存血中无相合的血液时，应立即联系临床医生说明情况：①上述实际情况；②应送市血液中心进行“疑难配血”，会产生费用，存在配血不成功的可能：③详细告知家属，决定是否送市血液中心。
7.2.3家属同意后，由医生填写“免疫学申请单”，并抽取血样EDTA抗凝血5-10ml,送输血科。
7.2.4输血科联系血液中心，并送血样。
7.3冷型自身抗体或冷型AIHA患者交叉配血试验：执行7.2.2-7.2.4程序8.交叉配血结果判定主侧、次侧交叉配血均无溶血、无凝集，表示配血相合。
对于AlHA患者，已经排除同种抗体的存在，而所有交叉配血又都不相和时，可选择凝集强度弱于自身凝集的血液输注。
19血型鉴定及交叉配血室内质量保证措施
血型鉴定及交叉配血室内质量保证措施1、在血型鉴定及交叉配血时，工作人员必须有高度责任感，严格“三查七对”。
2、所用试剂要有三证，要有防伪标记。
3、不同批号试剂使用前要做一次新老试剂对照试验，合格后方可使用。
4、试剂在使用中当发现凝集效价降低时，对结果观察带来困难时，应查找原因，或弃去不用。
5、碰到ABO血型罕见亚型时，不要草率报告，应报告科主任，共同核实后方可下结论。
6、在交叉配血中逐一填写ABO正反型和RH试验结果，最后综合反应结果做出结论,在发出报告单前还需审核一遍。
7、交叉配血用原始标本须保存一周，以便发生输血反应时，查找原因。
ABO血型鉴定标准化操作规程1.检测原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B 型、AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。
2.标本采集与处理2.1受检者的准备病人不需空腹，根据病情随时可抽血检测。
2.2静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 标本的处理血标本室温放置30min～45min（或在37℃水温箱放置20分钟）后离心分离血清，置洁净试管加盖低温（4-8℃）保存3. 试剂和材料3.1抗A、抗B血型定型试剂。
（单克隆抗体）3.2 献血员5%红细胞盐水悬液；3.3 受检者血清；3.4 受检者5%红细胞盐水悬液。
4.方法4.1玻片法：4.1.1取清洁玻片1张（或用白瓷板1块），用蜡笔标明抗-A、抗-B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B分型血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴，混和。
4.1.2取洁净玻片一张（或白瓷板1块）用蜡笔标明A细胞、B细胞，然后分别滴加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B红细胞悬液1滴。
临床输血规范血型鉴定与配血操作步骤详解
临床输血规范血型鉴定与配血操作步骤详解输血是一项重要的医疗技术，对于一些临床病例来说，输血可以挽救患者的生命。
而在输血操作过程中，准确的血型鉴定与配血是至关重要的环节。
本文将从血型鉴定和配血操作两个方面，详细介绍临床输血规范的步骤。
一、血型鉴定血型鉴定是确保输血安全的前提，它是根据红细胞表面产生的抗原和抗体的相互作用来确定的。
目前，常用的血型系统有ABO血型系统和Rh血型系统。
以下是血型鉴定的步骤：1. 样本采集临床血型鉴定通常采用的样本是抗凝血全血或抗凝血血浆。
样本采集时，要保证无菌操作，并确保在采集前患者已经停药或者没有接受其他相关的干扰性治疗。
2. 血凝试验血凝试验是根据血型抗体与红细胞抗原相互作用而产生的凝集反应来确定血型。
常用的血凝试验有直接凝集试验和间接凝集试验。
在实验过程中，要严格按照试剂说明书进行操作，并记录凝集结果以及反应程度。
3. 抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验用于鉴定Rh血型系统。
该试验是通过抗人球蛋白抗体与红细胞抗原相互作用来确定血型。
操作过程中，也需要注意严格按照试剂说明书进行操作，并记录试验结果。
二、配血操作在完成血型鉴定后，即可进行配血操作。
配血的目标是寻找与受血者血型相匹配的供血者，以确保输血的安全有效。
以下是配血操作的步骤：1. 选择合适的供血者根据受血者的血型需求以及供血者的血型特点，选择合适的供血者。
一般情况下，可以通过ABO和Rh血型相匹配的原则来进行选择。
2. 交叉配血试验交叉配血试验是将受血者的血浆与供血者的红细胞进行反应，以判断是否存在抗体与红细胞抗原相互作用。
该试验主要用于检测受血者的血浆中是否存在不相容的抗体。
3. 输血前配血记录在进行输血之前，要对配血结果进行记录。
记录内容通常包括受血者与供血者的血型信息、交叉配血试验结果以及配血的目的等。
4. 输血操作输血操作中，要严格按照规范的操作流程进行。
首先，核对受血者和供血者的身份；其次，核对血液制品的标签与要求；然后，进行给药前的检查，包括外观、溶解情况和悬浊物等；最后，开始进行输血操作，同时监测受血者的生命体征。
血型鉴定与交叉配血
＋表示凝集，－表示无凝集
对抗血清的要求※
①高度特异，只能与相应的红细胞抗原发
生凝集，无非特异性凝集， ABO
血 抗B血清效价在1:64以上。 型 鉴 ③高亲和力，15秒内出现凝集，其强度 为3分钟时凝块>1mm2。 定
②高效价，抗A血清效价在1:128以上，
④无冷凝集素。
⑤无菌。分离血清后56℃，30min灭活。
型 （2）立即水平离心1000r/min, 10min. 鉴 定 （3）观察及判断血型结果①阳性：对照管细胞沉
淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中。 ②阴性：对照管和检测管细胞沉淀均在管底。 ③试验失败：对照管细胞在胶上或 胶中，应重新做试验。
（4）报告方式：同生理盐水法。
注意事项
ABO 血 型 鉴 定
【注意事项】
交 1.如果对患者的输血史或妊辰史不明， 叉 必须使用48h内的标本。 配 血 2.不能使用溶血标本。
（ 盐 水 凝 集 法 ）
3.配血后，受血者/供血者的全部标本 须于2～6℃冰箱保存7d以备复查。
交 叉 配 血
（ 盐 水 凝 集 法 ）
【方法学评价】
本法简易、经济、快速，缺点是
仅用于检查ABO血型系统的IgM 血型抗体是否相配，不能检出不 相配的IgG血型抗体。
（ 盐 水 凝 集 法 ）
查找原因。
②异型配血时，主侧无凝集无溶血，次侧
有凝集无溶血，可以输少量血；如主侧、
次侧均不凝集或主侧凝集，不能输血，
需查找原因
交 叉 （1）受血者xxx（X型）血清＋供血者xxx 配 （X型）红细胞 凝集与否及强弱程度 血 （ （2）供血者xxx（X型）血清＋受血者xxx
交叉配血试验的注意事项
血型交叉配型_血型鉴定和交叉配血技术的进展
血型交叉配型_血型鉴定和交叉配血技术的进展 医学界在输血治疗手段出现之初，曾发生过无数血的教训。1492年，首例输血由于使用的方法很原始，没有成功病人死亡；1667年法国国王御医Jean用羊血治疗精神病患者，偿试将动物血输给人导致死亡，这一严重事故使以后150多年没人再敢尝试输血治疗。1818年，英国产科医生JameBlundell首次用人血输治患者，取得一定效果。1900年奥地利维也纳大学科学家KarlLandteiner发现ABO血型及Rh血型系统，增加了人类对血型系统的认识。直到1907年，Hektoen建议通过献血者和受血者之间的交叉配血才提高了输血的安全性，ReubenOttenberg完成了首例使用血型和交叉配血的输血实验，开启了现代输血医学的新纪元职称。
输血前试验包括血型鉴定、抗体筛选和交叉配血，其中交叉配血是关键[1]。交叉配血是在血型鉴定的基础上，进一步证实血型测定是否有误，以及受血者和供血者之间是否存在血型不合的抗原抗体反应，以保证受血者的输血安全。这一试验对于未进行红细胞血型抗体筛选的患者尤为重要，红细胞血型抗体有完全抗体和不完全抗体。完全抗体为分子量较大的IgM抗体，可在盐水介质的交叉配血中与相应的红细胞发生凝集反应；不完全抗体指ABO系统以外的其他血型抗体，为分子量较小的IgG抗体，在盐水介质中虽然能够结合红细胞上的抗原，但不能使红细胞凝集，必须通过特定的方法使致敏红细胞发生凝集。根据红细胞血型抗体的特性，血型鉴定和交叉配血方法在不断产生，其检测技术也在不断发展。
1盐水交叉配血法 盐水法配血时，用生理盐水配制红细胞悬液，红细胞膜上由于唾液酸中的羧基离子而带负电，此负电荷形成的排斥力（Zeta电位）使单个红细胞之间保持一定的距离，当其与血清相配合时，血清中的大分子完全抗体，能在相应红细胞之间搭桥，使其发生凝集，通过观察凝集或溶血来判断配血结果。盐水法是交叉配血的必做项目，能简便快速的检测IgM型抗体，发现血型是否错误或判断是否发生溶血，但不能检出不完全IgG型抗体[2,3]，不能有效的防止免疫性溶血性和非溶血性输血反应的发生，因此单用盐水法配血存在一定的危险性。
血型鉴定及交叉配血基本操作
观察误差
提高操作人员的观察能力，通过培 训和实践使他们能够准确判断凝集 或溶血现象，减少观察误差。
特殊情况下的处理原则
弱抗原或抗体
在鉴定或配血时，若出现弱抗原 或抗体的情况，应采用灵敏度更 高的方法进行检测，如增加血清
血型鉴定的意义
输血安全
血型鉴定是输血前的重要步骤，确保 供血者和受血者血型相容，防止输血 反应和溶血性贫血等严重并发症。
疾病诊断
亲子鉴定
通过血型鉴定可以辅助进行亲子关系 的推断。
某些疾病与特定血型相关，血型鉴定 有助于疾病的诊断和预防。
血型鉴定的基本原理
01
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ02
03
抗原抗体反应
血型鉴定基于抗原抗体反 应的原理，通过检测红细 胞表面抗原和血清中相应 的抗体来判断血型。
报告出具
将鉴定结果记录在报告单上，并通知受检者或相关医疗机构。
03 交叉配血操作流程
交叉配血的意义与要求
交叉配血的意义
交叉配血是确保输血安全的重要环节，通过交叉配血试验可 以检测受血者和供血者血液之间是否存在不配合的情况，从 而避免发生输血反应。
交叉配血的要求
交叉配血试验应遵循严格的操作规程，确保试验结果的准确 性和可靠性，同时要保证血液样本的安全性和保密性。
注意事项
在交叉配血试验中，要确保血液样本新鲜、无污染，严格遵守操作规程，避免 人为误差。同时，对于有特殊血型的受血者，应特别注意选择合适的供血者。
04 血型鉴定与交叉配血的注 意事项与误差分析
操作过程中的注意事项
严格遵守无菌操作
在血型鉴定和交叉配血过 程中，必须确保操作环境 无菌，以避免细菌污染导 致鉴定结果不准确。
血型鉴定与交叉合血
• 注意事项： （1）Du 型人经输注D阳性红细胞后可产生抗D抗 体，所以患者为Du 型应作Rh阴性论，应输注Rh阴 性血液;供血者为Du 型，应作Rh阳性论，不应当输 给Rh阴性患者。 （2）Du 型妇女与Rh阳性丈夫生育的婴儿可以产 生新生儿溶血病。 （3）本实验不适合于自身凝集的样本的检查， 因自身凝集的样本容易引起假阳性。 （4）对于检测为弱阳性和阴性的样本，应采用 抗人球蛋白实验检测弱D抗原或不完全D抗原是否存 在，同时做进一步的确认实验。
2)按标记主侧管加受血者血清1滴，加供血者 红细胞悬液1滴。次侧管加供血者血清1滴，加 受血者红细胞悬液1滴，混匀，以1000r/min离 心1min，轻轻侧动试管，观察结果。室温较低 时，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集 反应。
结果判断及报告：
1) ABO同型配血,主侧和次侧均无溶血及凝集表示无 输血禁忌，可以输血。
22改良离子交叉配血试验改良离子交叉配血试验原理红细胞表面带有大量的负电荷当红细胞悬浮在电解质溶液中时阳离子会被红细胞的负电荷所吸引此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕而形成zeta电位zeta电位决定红细胞之间的相互排斥作用
血型鉴定与交叉合血
王炼红
解读
血型的定义及分类
血型是指各种血液成分的遗传多态性标记。血型抗 原不仅存在于红细胞上,也存在于白细胞和血小板上， 还存在于各种组织细胞、多数体液中，甚至不同个体 的血清蛋白间也存在型别的差异。 血型系统主要分类： 1.红细胞血型系统，其中又分为ABO血型系统、 Rh血型系统、MNS血型系统、P血型系统、Kell血型 系统、Kidd血型系统、Duffy血型系统 2.人类主要组织相容性抗原系统（HLA) 3.血小板血型系统（PHA） 4.血清型。血清型按蛋白质可分为免疫球蛋白、血 清酶、血清蛋白、补体等几大类。
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疑难血型鉴定和疑难交叉配血
1.疑难血型鉴定
疑难血型是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）的现象，多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。
因此，疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体和特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学和分子生物学研究方法对患者样本进行检测。
而对于不规则抗体筛查和鉴定，主要是对抗体种类和特性进行研究，尤其是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确的分析患者血清抗体的特异性。
在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析和处理：（1）分析可能存在的原因先排除人为操作因素，再通过了解患者临床资料分析可能的原因，主要包括抗原类影响因素和抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等，抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。
（2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。
流程图1 疑难血型鉴定流程
2014年1月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例，经一系列血清学试验确证该患者为P1Pk血型系统的p表型，经分子生物学基因测序，初步推断A4GALT 基因第3外显子的903C＞G突变是患者p表型形成的分子生物学基础，该研究成果从不同角度和深度撰写论文，先后发表《临床军医杂志》和《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。
在此之后的工作中，通过阅读文献自修学习，鉴定出Am、Bm、B3等血型亚型，形成了一套相对完整的疑难血型鉴定思路和流程。
2014年2月和2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗的患者，经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。
在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查和鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体的分布特征有了较为清晰的了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》，并形成了一套相对完整的不规则抗体筛查和鉴定流程。
2.疑难交叉配血
交叉配血是确保安全有效输血的最重要环节，只有交叉配血真正相合（相容）才能保障临床输血治疗的安全性。
现一般进行供者和受者ABO、RhD同型配血，只有配血相合时才能输血（特殊情况例外），当出现配血不相合时，则视为“疑难配血”。
目前，输血科常用的交叉配血的方法主要包括聚凝胺法、卡式法和抗球蛋白法。
当遇到异常的配血实验结果时，应以抗人球蛋白法为准，但任何一种实验方法都存在假阳性或假阴性的可能。
因此，需在不同的情况采取不同的检测技术，建立适合本实验室的血液免疫学检测流程。
在工作中遇到疑难配血时，可按照以下步骤进行分析和处理：
（1）分析可能存在的原因先排除人为操作因素，再通过了解患者临床资料分析可能的原因，交叉配血不合包括主侧配血不合和次侧配血不合，其产生原因主要如下：①主侧配血不合：患者血清中存在同种抗体、自身抗体、冷凝集素、药物抗体、血浆蛋白紊乱等因素；供着红细胞直抗阳性（相对少见）。
②次侧配血不合：患者红细胞黏附免疫球蛋白或抗体，直抗阳性，全凝集或多凝集；供着血清中存在同种抗体、自身抗体、冷凝集素、药物抗体、血浆蛋白紊乱等因素（相对少见）。
（2）设计实验进行配血疑难配血流程见流程图2。
流程图2 疑难交叉配血流程
临床上最常见的疑难配血情况为受血者血清中产生了不规则抗体，理论上我们应通过不规则抗体筛查和鉴定来确定患者血清中不规则抗体的特异性，选择不含相应抗原的供者红细胞进行输血，然而由于检测过程相对复杂且耗时较长，临床上此类患者配血常采用“盲配”。
此外，部分疑难配血患者血清中存在自身抗体，典型代表为自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者。
AIHA患者若直抗阳性而间抗阴性，一般不干扰主侧配血，但当AIHA患者直抗和间抗均阳性时，则患者主侧和次侧配血均不相合，临床上AIHA患者以后者情况居多。
对于AIHA患者，临床上一般多采用激素疗法而不主张进行输血治疗，但当患者因携氧不足而急需输血抢救时，其配血和输血原则一般为输注主侧凝集强度不高于患者自身对照凝集强度的血液，并且要少量输血。
近年来，对于疑难配血患者在相容性输血不能满足的情况下，尚有另一种输血治疗方法，即配合性输血：多采用O型洗涤红细胞或AB型血浆对患者进行临床输血治疗。
3.临床输血治疗
输血治疗是患者临床治疗的重要方式之一，然而不同临床科室的患者对不同血液制品的需求和输注特征并不相同：骨科和心胸外科等外科患者由于手术出血量较大而红细胞需求量较大，烧伤科患者由于大量凝血因子的消耗而对血浆和冷沉淀的需求量较大，产后大出血的患者则会同时需要输注大量的红细胞、血浆和
血小板。
因此，对于不同临床特征下的患者，我们要熟悉其临床输血治疗的特征，及时准确的为患者提供血液制品。
因此，为进一步加强临床医生对患者输血治疗指征的把控，结合我院临床科室特征，编写《简易输血指南》一书供全院医护人员参考学习。
此外，对于患者临床输血治疗的研究，先后探究了“新鲜冰冻血浆联合冷沉淀输注对产后大出血患者凝血功能影响”和“烧伤患者（成人）凝血功能状况和临床输血治疗的研究”。