猪戊型肝炎
大理地区猪源甲型、乙型、戊型肝炎病毒血清流行病学调查
四川生理科学杂志２０１２；３４（３） １０３
敏度高，但仪器价格昂贵，薄层扫描法操作麻烦，可行性差。
在对总黄酮比色法含量测定过程中，注意消除显色剂或供 试液本身颜色可能存在的干扰。如果制得的待测液有不溶物
析出，应考虑改变溶媒的比例或离心，使待测液澄明，以保证测 得的吸收度值稳定［１ 。 本实验中所采用的标准品芦丁只是一种典型的黄酮类化 合物，并不能代表皂角刺中的黄酮类化合物，但由于它与皂角
刺中的黄酮类化合物在分别经颜色反应后，于５１０ ｎｌＴｌ处均有 最大值，因此可以利用其颜色反应在可见分光光度计下绘制标
准工作曲线，以测定总黄酮含量。今后可尝试以皂角刺中有代 表性的黄酮类化合物如槲皮素等为标准品，利用ＨＰＬＣ对皂角 刺总黄酮进行定量分析。
参考文献
１陈凤秀。尉艳霞，潘虹，等．洋葱黄酮类物质对人结肠癌ＨＣＴｌｌ６细 胞增殖和凋亡的影响［Ｊ］．中药药理与临床，２００８，２４（５）：３６—３９． ２赵新汉，王志宇，李晶，等．槲皮素诱导人白血病细胞Ｋ５６２的凋亡 口］．第四军医大学学报，２００６，２７（１５）：１３９５—１３９８． ３金蕾．ＮａＮＯ２一Ａｌ（Ｎ０３）ａ－ＮａＯＨ法测定总黄酮含量的实验条件研 究［Ｊ］．海峡药学，２００８，２０（５）：６６—６７． ４郭雪峰，岳永德．黄酮类化合物的提取・分离纯化和含量测定方法 的研究进展［Ｊ］．安徽农业科学，２００７，３５（２６）Ｉ８０８３－－８０８６． ５李万华，李琴，王小刚，等．皂角刺中黄酮类化学成分的分离鉴定 Ｄ］．西北大学学报（自然科学版），２００５，３５（６）ｔ７６３－－７６５． ６曹学锋，郭澄，张俊平．皂角刺总黄酮对小鼠细胞因子的调节作用 ［Ｊ］．时珍国医国药，２００２。１３（１０）：５８８－－５８９． ７许刚，张虹．竹叶中黄酮提取方法的研究［Ｊ］．分析化学。２０００，２８ （７）：８５７－－８５９． ８罗兰。郭丽冰，曾常青．大山楂丸中总黄酮的含量测定口］．时珍国 医国药，２００７，１８（９）｝２２０７－－２２０８． ９田洪磊，田呈瑞，詹萍．玉米苞叶总黄酮提取工艺研究［Ｊ］．粮食与 油脂，２００６，１７（１）：２４—２６． １０任顺成，丁霄霖．玉米须黄酮类测定方法的研究［Ｊ］．食品科学。 ２００４，２４（３）：１３９—１４２． １１管军军，方希修．大豆异黄酮测定方法概述［Ｊ］．西部粮油科技， ２００３，２８（６）：５９—６１． １２郑杭生，李计萍。韩炜，等．紫外一可见分光光度法测定总黄酮含量 的方法学考察要点［Ｊ］．中成药，２００８。３０（９）；１３６４－－１３６５． （收稿日期ｌ２Ｏ１２—４．１６）
【国家自然科学基金】_戊型肝炎病毒(hev)_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140801
序号科研热词推荐指数序号科研热词1戊型肝炎病毒61戊型肝炎病毒2戊型肝炎病毒(hev)22基因型3基因型23酶联免疫吸附测定4原核表达24猪5动物宿主25致病性6表位16肝炎病毒,戊型7衣壳蛋白17羊8结构蛋白18牛9组织病理学19预后10猪源戊型肝炎病毒110阳性选择11猪111间接酶联免疫吸附试验12抗原表位112重组,遗传13广西113通用性引物14巢式rt-pcr114逆转录-套式聚合酶链反应15屠宰猪115跨物种传播16家畜116调查17反应原性117诊断方法18单克隆抗体(单抗,mcab)118肝炎病毒19单克隆抗体119系统进化20免疫组化120病毒血症21人畜共患病121病毒蛋白质类22人兽共患病122病毒基因23亚型123病毒,戊型肝炎24gst融合表达124猪戊型肝炎病毒25特异性igm抗体26戊型肝炎27戊型28感染29序列同源性,氨摹酸30序列同源性,核酸31季节32存活率分析33基因分型34原核表达35动物宿主36免疫球蛋白m37假阳性反应38传播途径39人兽共患病40人41主要免疫表位42orf343ds-elisa2008年2009年
猪戊型肝炎病毒swCH-GS189株ORF2基因的克隆及序列分析
猪戊型肝炎病毒swCH-GS189株ORF2基因的克隆及序列分析
郝宝成;兰喜;柳纪省;胡永浩
【期刊名称】《生物技术通报》
【年(卷),期】2009(000)005
【摘 要】为进行猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒(HEV)核酸序列,设计了一对扩增HEV ORF2基因的引物,利用RT-PCR等方法克隆出了一株猪戊型肝炎病毒甘肃分离株GS189的ORF2基因cDNA片段.序列测定结果表明,swCH-GS189株的ORF2基因长2 025 bp,编码674个氨基酸,与GenBank中公布的其它毒株间的核苷酸序列同源性为79.1%～91.8%,推导的氨基酸序列同源性为89.5%～98.8%.系统发育进化树结果表明,该分离株为基因IV型.
【总页数】5页(P122-126)
【作 者】郝宝成;兰喜;柳纪省;胡永浩
【作者单位】甘肃农业大学动物医学院,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,农业部草食动物疫病重点开放实验室,兰州,730046;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,农业部草食动物疫病重点开放实验室,兰州,730046;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,农业部草食动物疫病重点开放实验室,兰州,730046;甘肃农业大学动物医学院,兰州,730070 【正文语种】中 文
【中图分类】S8
【相关文献】
1.7株猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆及序列分析 [J], 程伟;张志;吴发兴;张燕霞;李晓成;陈德坤
2.猪圆环病毒2型四川分离株ORF2基因的克隆与序列分析 [J], 杨泽晓;刘宁;王印;姚学萍;张彦明;杨增岐;汪开毓;韩茜
3.两株猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆和序列分析 [J], 何逸民;罗玉均;潘全会;吴翠花;曹宗喜;孔留五;李少方;张桂红
动物戊型肝炎研究进展
《上海畜牧兽医通讯》２００７年第５期 ・ １３ ・
动物戊型肝炎研究进展
鞠龚讷 － 孙泉云 葛 杰 华修国
（１上海交通大学农业与生物学院２０１１０１ ２上海市畜牧兽医站２０１１０３）
戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ，ＨＥＶ）感
染引起的急性病毒性疾病，主要通过粪、口途径传播。戊肝
以其水源性暴发流行和急性散发为特点，呈全球分布，是发
展中国家的主要问题之一。近年来，在发达国家的发病率也
呈上升趋势。历史上先后在东南亚、中亚、中东、北非和西非
以及墨西哥等国发生５０余次疫情。中国是戊肝的高发地之
一，迄今为止已暴发１１次，其中以１９８６年～１９８８年我国新
疆南部地区发生戊型肝炎水型流行最为严重，共计发病
１１９ ２８０例，死亡７０７例，是迄今世界上最大的一次戊型肝炎
流行，造成巨大的社会危害和经济损失。人群感染后死亡率
在０．５％～３％之间，孕妇感染病情较重，死亡率高达ｔ５％～ ２５％［ 引。
１９９７年Ｍｅｎｇ等 ４ 用ＥＬＩＳＡ方法证实美国猪中存在
ＨＥＶ抗体并用逆转录巢式聚合酶联反应法（ＲＴ—ｎＰＣＲ）检
测到猪ＨＥＶ ＲＮＡ，从猪体内分离出１株野生型戊型肝炎病
毒，与人类ＨＥＶ具有极高的同源性，后发现其可感染黑猩
猩和恒河猴，从而首次证实了戊型肝炎病毒在种问传播的可
能性及其公共卫生学意义，由此不少国家都启动了戊型肝炎
病毒的调查和研究工作。
随后又陆续在鼠、牛、羊、鸡、狗、禽类等动物上检测到
ＨＥＶ核酸阳性和ＨＥＶ抗体。我国猪血清中ＨＥＶ抗体阳性
率为７３％～１００％，平均为８３．６％，分离到的ＨＥＶ与人源分
离株高度同源，同属基因Ⅵ型；其他动物的血清ＨＥＶ抗体阳
性率较低，家犬为１５．１９％，宠物犬为４．６５％，牛群为
６．３％【５．６１
＊为通讯作者。 １ 病原学
戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ，ＨＥＶ）是１９８９年在东京
国际会议上正式命名的经肠道感染的非甲、非乙型肝炎病毒。
戊型病毒性肝炎的研究进展
华宴聆和临床感染病杂志ｒ电子版１２０１４年２月第８眷第１期ＣｈｉｎＪＥｘＤＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓｆＥ ０１４．Ⅵ）１．８．ＮＯ．１
戊型病毒性肝炎的研究进展
付宽王晓静孙凤霞
戊型病毒性肝炎是由戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒａｌ，ＨＥｖ）感染导致的急性传染病，主要经消化道传
播，常引起暴发流行。戊型肝炎虽然是自限性疾病，但
其病死率高于甲型与乙型肝炎，在孕妇中的病死率甚至 可达２０％～３０％”Ｊ。１９８６至１９８８年在我国新疆东南部
暴发的戊型肝炎疫情，共计发病１１９ ２８０例，死１ｌ＝７０７例， 其中孕妇４０４例。此外，自２００３年来我国戊型肝炎病例 已呈逐步卜升趋势，截至２００９年，其在急性病毒性肝炎
中所占比例已由２００３年８．８５％稳步上升至３１．６２％ ， 而在香港，近年来感染戊型肝炎患者数亦逐年上升，已
由２００７年的６５例上升８３％至２０１１年的１ｌ９例，而仅 ２０１２年２月份单月ＨＥＶ感染人数则达到了２７例。随着 临床研究的深入，该病正在受到更多的重视，现就近年
来戊型肝炎研究进展做以下综述。
一、病毒学 戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）为长约２７～３４ ｎｍ的无包膜 病毒，归类为戊型肝炎病毒属Ｌ３】。与人类相关的ＨＥＶ目
前分为４个基因型，仅有一个血清型。其中ＨＥＶ－１主要
见于亚洲与非洲地区，ＨＥＶ－２则在墨西哥较为多见，以 卜两型病毒只见于人类；而ＨＥＶ－３与ＨＥＶ－４则为人畜共 患病毒，ＨＥＶ－３在世界各地都有分布，ＨＥＶ－４则主要发 现在我国与日本 Ｊ。目前，我国患者中仅发现ＨＥＶ－１和
ＨＥＶ－４。ＨＥＶ基因组为线性正股单链ＲＮＡ，全长为７＿２
ｋｂ，两端为５一甲基鸟嘌呤帽与３．多聚核苷酸尾，中问则 是３个部分重叠的开放阅读框架（ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ，
ＯＲＦ）。ＯＲＦ１编码病毒的非结构蛋白，如转甲基酶、蛋 白酶、解螺旋酶、ＲＮＡ依赖性的ＲＮＡ聚合酶等。ＯＲＦ２
职业接触生猪人群戊型肝炎病毒感染的随访检测
２００７，２３（１Ｏ） 中国人兽共患病学报 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｅｓ １０５９
文章编号：１００２—２６９４（２００７）１０—１０５９—０４
职业接触生猪人群戊型肝炎病毒感染的随访检测＊
朱建福，郑英杰。，王法弟。，陆一涵。，高眉扬。，姜庆五。
摘 要：目的 评估职业接触生猪者感染戊型肝炎病毒的危险程度。方法 选择从事生猪饲养、屠宰、集市销售和兽医
等４个职业接触生猪人群作为研究对象，进行一年的随访。随访开始和结束时，分别采集静脉血５ｍｌ，按４倍的比例倍比稀释
进行抗ＨＥＶ－ＩｇＧ半定量检测，同一研究对象的血清同时进行平行检测。用单因素和多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归方法分析结果及其
危险因素。结果 随访未发现急性戊型肝炎病例。两次横断面调查结果显示。职业人群抗ＨＥＶ—ＩｇＧ阳性率分别为６８．９９
与７０．３０ 。１１．３６ （５／４４，９５％ＣＩ：３．７９～２４．５６ ）的人抗体阳转，是一般人群的２．６４倍（９５％ＣＩ：１．１３～６．２０）。在随访开
始时抗体阳性的人群中，１８．１８ （２４／１３２）的人抗体呈４倍以上增高；２．２７ （３／１３２）的人抗体阴转，１２．１２ （１６／１３２）的人抗
体有４倍以上下降；抗体阳性但抗体水平基本不变的占６７．４２ （８９／１３２）。随着年龄的增长，感染率有明显的增高趋势。结
论职业接触生猪与戊肝感染有关，个人不良卫生习惯可增加感染的风险。
关键词：戊型肝炎；感染；职业接触
中图分类号：Ｒ 文献标识码：Ａ
Ｏｎｅ－ｙｅａｒ ｆｏｌｌｏｗ。’ｕｐ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ａｎｔｉＩ－・ｈｅｐａｔｉｔｉｓ
ｅ ｉｖｒｕｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｍｏｎｇ ｐｅｒｓｏｎｓ ｗｈｏ ｗｏｒｋ ｗｉｔｈ ｓｗｉｎｅ
ＺＨＵ Ｊｉａｎ—ｆｕ。，ＺＨＥＮＧ Ｙｉｎｇ—ｊｉｅ。，ＷＡＮＧ Ｆａ—ｄｉ。，ＬＵ Ｙｉ—ｈａｎ。，ＧＡＯ Ｍｅｉ—ｙａｎｇ。，ＪＩＡＮＧ Ｑｉｎｇ—ｗｕ。
屠宰猪肝脏中戊型肝炎病毒(HEV)的检测及组织病理学观察
农业生物技术学报Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００８，１６（３）：３７３～３７９
・研究论文・
屠宰猪肝脏中戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的检测及组织病理学观察 木
王英华・，韦海涛：，余锐萍・料，赵景义：，李文贵・，李秀敏 ，刘利强 ，韩德平 ，王德成 ，于品 ，孙泉
（１＿中国农业大学动物医学院，北京１０００９４；２．北京畜牧兽医总站，北京１００１０７）
摘要：从北京、河北和河南三地的屠宰场共采集了５８ｌ头屠宰猪的肝脏。用抗一人戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）抗体做肝脏中ＨＥＶ 抗原的免疫组织化学染色，用针对ＨＥＶＯＲＦ２区设计的通用引物进行巢式ＲＴ．ＰＣＲ，结果发现，６个地区５８１头屠宰猪的肝脏 ＨＥＶ免疫组织化学阳性率都在９０％以上。从ｌ１４份肝脏样品中扩增到２条产物，与预期片段３４８ ｂｐ大小基本一致，位于ＨＥＶ
ＯＲＦ２区，序列分析、比较显示，扩增出的２个片段（ＧｅｎＢａｎｋ登录号为：ＥＵ３２６１４２和ＥＵ３７５５６５）同源性为９９．２％，与ＨＥＶ基因
Ｉ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型的同源性分别为７４．９％￣７８．７％，７３．９％￣７４．１％，７４．６％～７７％和８１．２％￣９３．７％。用扩增的核苷酸片段绘制的
基因进化树显示，２个分离株与ＨＥＶ基因Ⅳ型ＡＪ３４４１７ｌ、ＡＪ３４４１７２和ＡＪ３４４１８３位于同一分支，属于ＨＥＶ基因Ⅳ型。
关键词：戊型肝炎病毒（ＨＥｖ）；免疫组化；组织病理学；巢式ＲＴ—ＰＣＲ；屠宰猪 中图分类号：Ｓｌ８５，￥１８８文献标识码：Ａ 文章编号：１００６．１３０４（２００８）ｏ３—０３７３—０７
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ（ＨＥＶ）ａｎｄ Ｉｔｓ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ
Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｉｎ Ｌｉｖｅｒ ｏｆ Ｓｌａｕｇｈｔｅｒｅｄ Ｓｗｉｎｅ
ＷＡＮＧ Ｙｉｎｇ，ｈｕａ ，ＷＥＩ Ｈａｉ—ｔａｏ ，ＳＨＥ Ｒｕｉ—ｐｉｎｇ ，ＺＨＡＯ Ｊｉｎｇ—ｙｉ ，ＬＩ Ｗｅｎ—ｇｕｉ ，ＬＩ Ｘｉｕ—ｍｉｎ ，ＬＩＵ Ｌｉ—ｑｉａｎｇ ，
动物戊型肝炎病毒(HEV)RT—nPCR检测方法的建立及应用
——３４—— 嘲 中国动物检疫２０１０年第２７卷第１１期 动物戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）ＲＴ－ｎＰＣＲ 检测方法的建立及应用 张维谊 ，周锦萍’，王缦２刘健 ，鞠厚斌１ （１．上海市动物疫病预防控制中心，上海２０１１ ０３；２．上海科华生物工程股份有限公司，上海２Ｏ１ ２ ３２） 摘要：根据戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的４个基因亚型，寻找其保守序列ＯＲＦ２，成功设计了一套以Ｉ、Ⅳ型为主兼 顾ＩＩ、ＩＩＩ型的通用简并引物，摸索条件，建立检测动物戊型肝炎病毒反转录套式聚合酶链反应（ＲＴ—ｎＰＣＲ）的方法，扩 增片段为５０７ ｂｐ。该方法检测所需时间为５ ｈ，灵敏度可达１０ ｐｇ，特异性强、重复性好；经优化研制了动物戊型肝炎病 毒ＲＴ．ｎＰＣＲ检测试剂盒，保存期半年以上，该试剂盒可用于动物粪便、胆汁ＨＥＶ ＲＮＡ的检测。 关键词：戊型肝炎病毒；ＲＴ—ｎＰＣＲ；动物 中图分类号：￥８５２．６５９ ６；Ｒ３７３．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５—９４４Ｘ（２０１０）１１－００３４—０２ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＲＴ－ｎＰＣＲ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ Ｖｉｒｕｓ Ｚｈａｎｇ Ｗｅｉｙｉ ，Ｚｈｏｕ Ｊｉｎｐｉｎｇ ，Ｗａｎｇ Ｍａｎ ，Ｌｉｕ Ｊｉａｎ ，Ｊｕ Ｈｏｕｂｉｎｇ （１．Ｓｈａｎｇｈａｉ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１ １０３； ２．Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｈｕａｋｅ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｃｏ—Ｌｔｄ．，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０ １ ２３２） Ａｂｓ嘲：Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ（ＨＥＶ）ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｍａｊｏｒ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ， ｔｗｏ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ ａ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ５０７ｂｐ ｗｉｔｈｉｎ ＯＲＦ２ ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｎｅｓｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—ｎＰＣＰＯ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｅｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｆｍｉｓｈｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎ ５ ｈｏｕｒｓ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔ １ ０ｐｇ ＲＮＡ ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｔｈｒｏｕｇｈ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｅｉｏｎ，ｔｈｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ Ｋｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｋｅｐｔ ｆｏｒ ａｔ ｌｅａｓｔ ｈａｌｆ ａ ｙｅａｒ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｉｏｎ ｏｆ ＨＥＶ ＲＮＡ ｆｒｏｍ ａｎｉｍａｌ ｆｅｃｅｓ ａｎｄ ｂｉｌｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｅｓ；ＲＴ—ｎＰＣＲ；Ａｎｉｍａｌ 戊型肝炎病毒（ＨＥｖ）是经肠道 传播的非甲非乙型肝炎的主要病原 体之一，既可以引起大规模的暴发流 行，也可以引起散发型病例ｆ１－２１。与其 他肠道传播性疾病不同，ＨＥＶ在人与 人之间很少传播，动物是可能的传播 媒介。科学家陆续在猪、黑猩猩、恒河 猴、鼠、鸡、牛、羊、犬等与人类密切相 关的动物中发现ＨＥＶ天然感染＿３＿ ， 越来越多的证据表明戊型肝炎是一 种人畜共患病，凸现出在动物检疫中 的公共卫生意义［６１。 ＨＥＶ为单链ＲＮＡ病毒，约７．５ Ｋｂ，具有３个互相重叠的开放读码框 架（ＯＲＦ），其基因相对稳定，在猕猴 中多次传代不易漂移『３】，但是不同地 域分离株问基因变异较大，因此保守 引物选择成了ＰＣＲ诊断的关键。 Ｍｅｎｇ等［７１在缅甸株５６８７－－６３１９ｎｔ位 置设计了一套式ＰＣＲ引物，并于美 国猪中分离到了首株动物源性ＨＥＶ ＲＮＡ。该引物被广泛应用于ＨＥＶ核 酸检测。据现有报道中国ＨＥＶ流行 株主要为Ｉ、Ⅳ型嘲，本研究根据这一 情况，成功设计了一套以Ｉ、Ⅳ型为 主兼顾ＩＩ、ＩＩＩ型的通用引物，用于动 物ＨＥＶ ＲＮＡ的检测。 １材料和方法 １．１ 材料 基金项目：上海市科技兴农重点攻关项目，沪农 科攻字（２００６）第５—７号 １．１．１粪便、胆汁样本 采集上海地区猪、牛、羊新鲜粪 便样本和屠宰场新鲜屠宰动物的胆 囊，一７０℃保存。 １．１．２标准品和对照品 戊型肝炎病毒阳性标准品由复 旦大学公共卫生学院实验室赠送；对 照品为猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎 病毒、牛病毒性腹泻病毒、新城疫病 毒和犬瘟病毒由本实验室保存；阴性 样品为ＤＥＰＣ水。 １．１．３酶和其他试剂 ＡＭＶ酶、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶为美 国Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品；ＰＣＲ所需其他 试剂为ＴａＫａＲａ公司产品；Ｔｆｉｚｏｌ为 美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产品，氯仿、异丙 醇等其他试剂均为分析纯试剂。 １．１．４简并引物设计及合成 根据ＧｅｎＢａｎｋ中已发表的动物 ＨＥＶ序列，针对其保守ＯＲＦ２设计一 套简并引物，预扩增片段大小为 ５０７ｂｐ，由大连宝生物公司合成。 外套：Ｐ１（５７１６．５７３８）５’．ＧＡＡ ＧＣＷ ＴＣＷ ＡＡＹ ＴＡＹ ＧＣＣ ＣＡＧ ＴＡ．３’：Ｐ２（６６０４—６５８３）５＇－ＡＲＡ ＧＣＣ ＴＡＴ ＧＣＡ ＣＡＴ ＣＡＴ ＴＡＧ Ｃ．３’。 内套：Ｐ１（５９５５．５９７５）５＇－ＨＴＧ ＧＣＧ ＹＴＣ ＤＧＴ ＴＧＡ ＧＡＣ ＣＴＣ．３’： Ｐ２（６４６ １．６４４２）５’一ＧＣＷ ＡＹＡ ＣＣＣ ＴＴＲ ＴＣＣ ＴＧＣ ＴＧ一３’。 其中Ｒ＝Ａ或Ｇ， Ａ或Ｔ，Ｙ＝Ｃ 或Ｔ，Ｄ＝Ｇ，Ａ或Ｔ，Ｈ＝Ｃ，Ａ或Ｔ。 １．２方法 １．２．１样本、标准品和对照品的处 理 新鲜粪便样本用ＰＨ ７．４ ＰＢＳ ５ ｍＬ制成１０％的悬液，胆汁与ＰＨ ７．４ ＰＢＳ制成３：１的悬液，充分混匀，５ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，收集上清，备用或 置一７０℃保存；标准品和对照品，解 冻，５ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，收集上清， 备用。 １．２．２ ＲＮＡ的提取 取２００ ＩＪ Ｌ上清，加６００ Ｕ Ｌ Ｔｒｉ． ｚｏｌ，充分混匀；室温静置５ ｍｉｎ，加入 ２００ ｕ Ｌ氯仿，剧烈振荡３０ Ｓ；室温静 置５ ｍｉｎ后在４℃条件下１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ；将无色的上层水 相转移到离心管中，加入５ Ｏ０ｔＪ Ｌ预 冷的异丙醇，充分混匀；室温静置５ ｍｉｎ，在４℃条件下１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心 １５ ｍｉｎ；弃上清，加入预冷的７５％乙 醇ｌ ｍＬ，洗涤沉淀；在４℃条件下 ７ ５００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ。弃上清，空 气干燥：加入３０ ｕ Ｌ ＤＥＰＣ水溶解， 随即进行ＲＴ或置．７０℃保存备用。 １．２．３ ＲＴ—ｎＰＣＲ检测方法条件摸索 ＲＮＡ模板量：３～１０ ｕ Ｌ，退火温 度：４５℃～６０℃，循环数：３０－４０，延伸 时间：３０ ｓ－６０ Ｓ。 １．２．４特异性试验
不容忽视的潜在的人畜共患病-猪戊型肝炎
５８ 中国兽医杂志２０１３年（第４９卷）第２期 不容忽视的潜在的人畜共患病一猪戊型肝炎 王 衡，宁章勇，梁焕斌，古洪浪，张桂红 （华南农业大学兽医学院，广东广州５１０６４２） 中图分类号：￥８５８．２８ 文献标识码：Ｂ 文章编号：０５２９—６００５（２０１３）０２—００５８—０３ ２００３年，有报道称日本发现两例戊型肝炎 （Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ，ＨＥ）感染病例，１例５３岁患者尽管早 期出现严重的肝炎症状，但很快恢复健康；另１例 ７０岁患者出现同样的初期肝炎症状，但随后出现肝 昏迷并死亡于突发性肝衰竭。病原分离得知两例患 者感染的为Ⅳ型肝炎病毒；流行病学调查表明，在３ 个月内２人共同食用５次未熟的野猪肝＿】ｊ。另外， 收稿Ｅｌ期：２０１２ ０４—０９ 基金项目：高等学校博士点学科专项科研基金（２０１１４４０４１２ ＯＯ１０，２０１０４４０４１１０００９）；广东省教育厅育苗工程（２０ｌ２Ｉ ＹＭ一００３１） 作者简介：王衡（１９８１－），男，讲师，博士，从事动物病理学研究 Ｅ ｍａｉｌ：ｗａｎ曲ｅｎｇ２（）（］９＠ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 通讯作者：张桂红，Ｅ ｍａｉｌ：ｇｕｉｈｏｎｇｚｈ＠ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 龄大多在７５岁左右，多数人健康状况已较差；他们 的子孙，几乎没有从事兽医行业的，也就无从继承他 们的知识。目前，尚未有专著对维兽医知识进行总 结介绍，也无维兽医的教学机构或学术团体。本次 采访到的老兽医，基本上是受访地区仅存的维兽医 继承人，所以，如果他们去世，几乎也就等于维吾尔 传统兽医学的消失。 ９维兽医保存、研究的意义 维吾尔传统兽医学，是中华民族传统兽医学的 重要组成部分，既是宝贵的文化资源，也是实用的生 产技术。维兽医疗法普遍取材简便、成本较低，很多 内容不仅适用于新疆当地，也适合其他地区借鉴。 维兽医与中兽医、藏蒙兽医，分别代表了世界３个大 的传统医学体系，三者齐集于我国。三者从基本理 论到治疗手段，均有相似之处，又各有特色，如能互 相对比、交流，有利于各传统兽医学的丰富和发展。 １Ｏ 建议 维兽医学，作为传统兽医学的分支学科，应得到 有关行政部门、教学科研单位和中兽医学会的重视。 应该尽快在新疆维吾尔自治区范围内展开挖掘、整 理维吾尔传统兽医学知识的采风活动，对维吾尔老 兽医进行采访，收集他们的诊疗经验，编辑成册。重 点记录内容应包括：对各种动物生理、病理特性的论 述；各种兽医特色的诊断手法和各种动物疾病的诊 断标准；各种动物的穴位外治方法等，这些是在维医 知识中借鉴不到的。 香港明报新闻网（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｈｉｎａｎｅｗｓ．ｃｏｍ／ ｇａ／２０１Ｏ／１２—３０／２７５８１０９．ｓｈｔｍ１）在２０１０年年末报 道了这样一则新闻，称香港食物安全中心表示，香港 的戊型肝炎由１９９８年起逐渐上升，至２０１０年已达 １００宗，数字为历来的新高。患者通常有发烧、呕 吐、眼黄及尿液呈茶色等病征，报道同时指出，戊型 肝炎患者多曾去过高危地方，或曾食用贝或猪肝等 食物，以致染病。虽然两则报道相距７年，但在这７ 年里，世界各地尤其是发展中国家类似的报道数不 胜数。这提示我们戊型肝炎病毒正隐蔽在家畜、家 禽及野生动物体内，并悄悄地“潜伏”在我们周围。 戊型肝炎是引起暴发性及散发性肝炎的主要原 因，血清学调查表明［２］，世界１／３人口曾经感染过戊 应组织维兽医学术研讨会，在维兽医工作者之 间建立学术联络机制，成立维兽医学术团体，以便共 同开展保存和研究工作。可邀请维医人士一同参加 对维兽医的发掘、整理工作。同时，应加强对维吾尔 兽医古籍作品的搜集整理。 在条件具备后，可考虑在兽医院校对学生开展 选修课程教学，使维兽医学后继有人。 上述活动应该在自治区党和政府的领导下，有 组织地进行，这样才能取得较好效果。 应当认真贯彻执行“中国医药是一个伟大的宝 库，应当努力挖掘，加以提高”的指示精神，使维吾尔 传统兽医学知识发挥应有的作用。 参考文献： ［１］易沙克江・马合穆德．中国医学百科全书［Ｍ］．上海：上海科技 技术出版社，２００５． Ｅ２］ 巴音木仁．蒙古兽医研究［Ｍ］．辽宁民族出版社，２００６：１９－３３． ［３］ 内蒙古科技志编纂委员会．内蒙古科技大事记［Ｍ］．呼和浩特： 内蒙古人民出版社，１９９２． ［４］乌兰塔娜，萨仁高娃，巴音木仁．蒙古兽医与中兽医之间的渊源 关系研究ＥＪ］．内蒙古农业大学学报（社会科学版），２００８．１０ （２）：１４１—１４３． Ｅ５］马合穆德・喀什噶里．突厥语大辞典ＩＭ］．乌鲁木齐：新疆人民 出版社，１９８１，卷一，２１４、６２３；卷三，３３０． ［６］于船．于船文集［Ｍ］．北京：中国农业大学出版社，２００３，１５３、 １７０． ［７］阿不都热衣木・哈德尔．维吾尔医药学简史ＥＪ］．中国民族医药 杂志，１９９６，２（３）：９－１１． Ｅ８］潘晓蒲．兽医广禅侯［Ｍ］．太原：山西科学技术出版社，１９９３．
猪戊型肝炎介绍
猪戊型肝炎的详细介绍
猪戊型肝炎是颇受关注的新出现的人畜共患传染病之一。戊型肝病毒（SHEV）是人病毒性肝炎的主要原因。人戊型肝炎病毒是病毒性肝炎的主要病原之一，妊娠妇女感染后死亡率可达20%，人戊型肝炎病毒可以实验感染者。
1997年美国学者在本土的一只猪上分离出1株野生型戊型肝炎病毒，发现其与人类的戊型肝炎病毒有极高的同源性，并发现它可以感染黑猩猩和恒河猴，从而首次证实了戊型肝炎病毒种间传播的可能性。
SHEV目前在美国猪群中流行率很高，几乎难以找到阴性猪群，仅能在SPF猪中找到阴性猪。在加拿大、荷兰、西班牙、新西兰、澳大利亚、日本、台湾、尼泊尔等地相继发现SHEV，印度、缅甸和我国猪群中都存在戊型肝炎抗体，血清流行病学研究表明该病毒几乎无处不在。
养猪场内病毒的感染主要是粪便经口感染。常因饮用水被污染而引起戊型肝炎(HE)的爆发、流行和散发。
对感染猪群不同阶段猪的血清学检测表明，可以感染所有生长阶段的猪，并在其间传播，母源抗体一般在2月龄时下降，此后不久开始血清阳转。感染早期的猪的组织可以使接种猪感染，显示肝组织在传播中的作用。本病临床症状一直很难复制。Meng等用SHEV接种SPE猪，检测到了病毒血症，但未见临床症状，SHEV水平无显著升高。Kasorn-dorkbua等用猪戊型肝炎病毒人工感染妊娠母猪诱发了亚临床病毒性肝炎，可见轻微的显微镜下病变，但无明显的临床病症，肝酶水平不升高，繁殖性能和胎儿不受影响，也未见子宫内传播。由于难以找到SHEV阴性猪群，本病的研究一直采用SPF猪。Thacker等的研究显示，早期(17一19日龄)断乳可以防止垂直传播，仔猪严格隔离可以防止水平传播，通过这些措施能够建立无SHEV猪群。
对猪防治本病可采取早期（17日龄～19日龄）断奶，可以防止垂直传播，仔猪严格隔离可以防止水平传播，这些措施有助于建立无病毒猪样。