真菌(1-3)-β-D葡聚糖

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血清(1-3)-β-D-葡聚糖检测对深部真菌感染辅助诊断的价值

血清(1-3)-β-D-葡聚糖检测对深部真菌感染辅助诊断的价值

血清(1-3 )-$-D-葡聚糖检测对深部真菌感染辅助诊断的价值孙晓红帅丽华汪红潘斌*(九江学院附属医院,江西九江332000)+8要】目的探讨血清葡聚糖检测对深部真菌感染辅助诊断的价值。

方法选取2015年11月一2016年 11月在我院接受治疗的80例深部真菌感染患者,对所有患者 进行真菌培养鉴定以及血清B D G检测,对比检测结果。

结果通过对比发现,血清B D G检测阳性51例,阳性率为63.75% (51/80);真菌培养阳性38例,阳性率为47.500(38/80)。

真菌 培养为阳性和阴性的患者其血清B D G的含量比较具有U著差 异(!<0.01)。

结论血清(1-3)-5_D-葡聚糖检测可快速的 诊断出疑似深部真菌感染,但是血清(1-3)-6-D-葡聚糖检 测的阳性结果还需要真菌培养进行鉴定,两种诊断方式结合对 深部真菌感染的诊断具有较高的临床价值。

【关键词】血清(1-3)-7-D-葡聚糖检测深部真菌感染真菌培养诊断价值D O I:10.19435/j.l672-1721.2018.14.054深部真菌感染主要是指患者的内脏、黏膜以及皮下组织遭 受致病性真菌侵犯,导致气管感染所引起的疾病类型。

其发病 率较高且病情进展较快,诊断率较低,若不及时治疗就会导致病情恶化,甚至导致患者死亡,具有较高病死率。

有相关研究,深部真菌感染是导致恶性患者死亡的主要一,其 较,对患者 造成了严重威胁,所以及早地诊断疾病 治疗有 。

诊断时较 ,感性较,以有效进 期诊断以及治疗,病死率以 期 ,f(1-3)-p-D- 快速的 诊断,具有高效率的性,对深部真菌感染的助诊断有 的 (!)。

1-3)-.-D-深部真菌感染 诊断的 ,下。

1资料与方法1.1一般资料选取2015年11月一2016年11月在我院受治疗$0深部真菌感染患者,其中男48例,32 j;年龄4.3岁~88岁,平均年龄(46.15±41.85)岁。

(1,3)-β-D葡聚糖检测对侵袭性真菌感染的诊断意义

(1,3)-β-D葡聚糖检测对侵袭性真菌感染的诊断意义
速、 阳性 率 高 , 用 于侵 袭 性 真 菌 感 染 的 早期 快速 诊 断 。 可
【 键 词】 ( ,)8D 葡聚 糖 ; 真 菌 ; 侵 袭性 感 染 关 13 一一 -
D1 1 . 9 9 j is . 6 29 5 . 0 0 1 . 0 0: 0 3 6 /.sn 1 7 —4 5 2 1 . 7 0 6
李 军 , 浚霁。 陈 伟 , 王 , 黎 敏 邓 少丽。 陈 呜。 1 青海省 西 宁市解放 军 第四 医院 , , (. 检 验科 8 0 0 ;. 1 0 7 2 第三 军 医大学 大坪 检验科 , 庆 重 40 4 ) 0 0 2
【 要】 目的 摘
探 讨 血 浆 ( , ) D 葡 聚 糖检 测 对侵 袭性 真 菌感 染 的诊 断 价 值 。 方 法 应 用 MB 8 1 3一 -0微 生 物 动
we e 5 p s t e p t n s we e i e t id b h e e to f pa ma ( , 一 - g u a wi h o i v a e o r o ii a i t r d n i e y t e d t c in o l s 3 v e f 1 3) 7D- l c n, t t e p st e r t f h i
2. a n H os t l, D pi g pia Thid iia y M e c r M lt r dialUni e s t , v r iy Cho gqi g 00 n n 40 42, Chi a n
[ src] Ob et e Toe po eteda n si au fpama( , ) D-l cn i h ee t no v sv Abta t jci v x lr h ig o tcv leo ls 1 3一 gu a n t ed tci fi a ie o n

1-3-β-D葡聚糖水平检测在深部真菌感染中的价值

1-3-β-D葡聚糖水平检测在深部真菌感染中的价值

1-3-β-D葡聚糖水平检测在深部真菌感染中的价值摘要】目的:比较血浆1-3-β-D 葡聚糖水平检测与传统真菌培养方法的敏感性,明确血浆1-3-β-D 葡聚糖水平检测在深部真菌感染诊断中的临床价值。

方法:统计2011年1月—2011年8月我院住院病人中血浆真菌1-3-β-D葡聚糖检测结果大于20p g/m l的28例病人的真菌培养结果,结合临床资料,评价血浆1-3-β-D葡聚糖水平检测在深部真菌感染中的价值。

结果:在这28份真菌1-3-β-D葡聚糖检测值大于20pg/ml的病例中,只有7例真菌培养是阳性,在这28例患者中,临床依据真菌1-3-β-D葡聚糖检测结果给予氟康唑或伊曲康唑等抗真菌药物治疗有效的有23例,2例治疗无效,3例因放弃治疗而出院。

结论血浆真菌1-3-β-D 葡聚糖水平检测与传统真菌培养相比能更早、更灵敏地反映深部真菌感染,对临床诊断及治疗深部真菌感染有早期、积极的作用。

【关键词】真菌 1-3-β-D葡聚糖真菌培养深部真菌感染近几年来,随着留置导管、插管等新技术在临床上的普遍开展应用,临床上应用大量新的、高效广谱抗菌药物、免疫抑制剂和激素治疗方案的增多, 以及获得性免疫缺陷患者的不断增多, 使得深部真菌感染的发生率呈不断上升趋势[1],临床上以往诊断深部真菌感染主要依赖于病原学检查,包括直接显微镜镜检真菌孢子或者菌丝、真菌培养和组织检查,但是由于这些方法的灵敏度较差,有的耗时较久,且检出率较低,从而不能满足临床早期诊断深部真菌感染的需要。

研究已经发现,1-3-β-D葡聚糖几乎是所有真菌细胞壁上均具有的特异性成分之一,检测血液或体液中的1-3-β-D葡聚糖用于诊断深部真菌感染有一定的价值和意义[2]。

为了能够进一步证实检测血浆中真菌1-3-β-D葡聚糖对深部真菌感染的临床价值,我们分析了血浆真菌1-3-β-D葡聚糖大于20p g/ml的病人所对应的真菌培养结果,返回临床查阅相应病人的诊断及其治疗情况,现将结果报告如下。

1—3—β—D葡聚糖动态检测在深部真菌感染抗真菌药物疗效评价中的应用

1—3—β—D葡聚糖动态检测在深部真菌感染抗真菌药物疗效评价中的应用

1—3—β—D葡聚糖动态检测在深部真菌感染抗真菌药物疗效评价中的应用目的:探讨血浆1-3-β-D葡聚糖(BG)动态检测在深部真菌感染抗真菌药物疗效评价中的应用价值。

方法:选取38例疑似深部真菌感染患者作为观察对象,应用MB-80微生物动态快速检测系统及GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒定量检测血浆1-3-β-D葡聚糖含量,并与真菌培养进行对照。

结果:BG动态检测法与真菌培养法检测阳性结果均为18例时,BG动态检测阳性而真菌培养为阴性共20例,也即当BG动态检测法均为阳性时,真菌培养法阳性检出率为47.4%。

38例患者中21例經抗真菌药物治疗后血浆BG呈下降趋势,降至健康水平(BG 值<10 pg/ml)。

结论:血浆1-3-β-D葡聚糖动态检测法较传统的真菌培养法更简便、快捷、阳性率高,可作为抗真菌药物疗效评价的重要指标。

标签:血浆1-3-β-D葡聚糖;深部真菌感染;抗真菌药物近年来,由于广谱抗菌药物、糖皮质激素的广泛应用,临床深部真菌感染的发病率和死亡率呈明显上升趋势,而传统的诊断方法,如真菌培养、病理组织性等方法由于耗时长、阳性率低、费用高而难以实现及早诊断及早治疗的目的。

基于此,本文笔者探讨了目前较为流行的血浆1-3-β-D葡聚糖动态检测法诊断深部真菌的可行性和效果,结果证实动态检测法可作为抗真菌药物疗效评价的重要参考指标。

现报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料选取2010年7月-2011年6月笔者所在医院收治的38例疑似深部真菌感染患者,血液检测血浆1-3-β-D葡聚糖动全部≥50 pg/ml。

以上38例患者均动态检测3次血浆1-3-β-D葡聚糖水平,取平均值,再对38例患者至少1次真菌培养。

1.2 方法1.2.1 仪器与试剂选用北京金山川科技公司提供的MB-80微生物动态快速检测系统、GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒,及附属的T01智能恒温仪、冰浴槽。

1.2.2 检测方法(1)取静脉血2 ml置入无热源肝素钠真空采血管,3000 r/min 离心,分离血浆;(2)提取上述血浆0.10 ml加入0.9 ml样品处理液D中,混匀后置于70 ℃恒温10 min,取出后迅速注入冷水浴中,并冷却至37 ℃以下,作为待测血浆样品;(3)取待测血浆样品0.2 ml加入酶反应主剂中(冻干粉),溶解后转移至无热原平底反应管中,插入MB-80微生物动态检测系统中进行反应,1 h后自动计算待测血浆中1-3-β-D葡聚糖含量。

(1,3)-β-D葡聚糖在侵袭性真菌感染中的研究进展

(1,3)-β-D葡聚糖在侵袭性真菌感染中的研究进展

项 纳入 1 1 个 研究 、1 0 6 8 例 患者的 Me t a分析结果显 示 ,G
试验 检 测 I F I 感 染 的敏感 性 为 7 5 . 0 %,特 异性 为 8 7 . O %,受
试者 工作 特征 ( R O C)曲线 下面积 为 0 . 8 9 ,研究 结果 提示 ,
G试验 在诊断 I F I 时具有 较高 的敏感性 与特异性 ,在筛查侵 袭性真菌病 中具有较高 的实用价值 。
测B G的两种 试验分别为 日本 研制 的 F u n g i t e c — G g l u c a .试剂 , 阳性阈值为 > 2 0 n g / L ,以及美 国研 制的 G l u c a t e l l 试 剂 ,阳性
阈值 为 > 6 0 n g/ L;国 内 目前 多采用 G K T 2 5 M s e t 动态 真菌 检
浓度为 2 8 1 n g / L( 中位数 ) ,而单纯肺 炎组与非感染 组 B G浓 度 分别 为 2 8 n g / L和 1 0 n g / L ,真 菌感 染组 B G水 平显 著高 于 其 他两组 ( P < O . 0 0 1 ) ; 真菌感染组 、单 纯肺炎组和非感 染组
酶原级联反 应 ,使凝 固蛋 白原 转变为凝胶状 的凝 固蛋 白,使 整个反应 可通过光谱仪测量其 光密度进行量化 。 目前 国外检
浙江临床 医学 2 0 1 7 年9 月第l 9 卷第9 期
・1 7 6 9・
( 1 ,3) 一 — D 葡聚糖在侵袭性真菌感染中的研究进展
尹秋 生
近年来 ,随着 广谱抗 生素 、糖 皮质激 素 、免疫 抑制 剂 、
冬 兰
缺乏性 发热患者 中 ,将 B G 阳性 的标 准设 为连续 ≥ 2次 、浓

血浆1—3-β-D葡聚糖检测对疑似肺部真菌感染患者诊断的临床应用价值探讨

血浆1—3-β-D葡聚糖检测对疑似肺部真菌感染患者诊断的临床应用价值探讨

实验 组 1 —3—1 3一D 葡 聚 糖 含 量 明
高于对 照组 ( P<0 . 0 1 ) , 痰培养 阳性 组 1 — 3一B—D葡聚糖水平明显高于痰培养
d o i .1 0 0 7 —6 1 4 x . 2 0 1 3
05. 2 4 4
1— 3一B—D葡 聚 糖 含 量 检 测 , 对 两种方
血浆 1—3一B—D葡聚糖 检测 对临 床肺 部真 菌感 染患 者的诊 断价值 , 报告如下 。
资 料 与 方 法 2 0 1 0年 1 0月 ~2 0 1 1年 4月 收 治 疑
法 的阳性 检 出率 进 行 比较 , 真 菌 培 养法 3 2例 阳性 , 阳性 率 4 5 . 0 7 %, 血浆 1— 3一 B—D 葡 聚 糖 检 测 法 阳性 5 7例 ( 以 > 2 0 P g / ml 判为 阳性 ) , 阳性率 8 0 . 2 8 % 经统
结 果
高, 将其用 于念珠菌 血症 的早期诊 断明显 优 于 传 统 的 培 养 法 和 血 清 学 诊 断 试
验 。 本 文 实 验 组 中 需 要 注 意 的 是 , 检 测 1—3一B—D 葡 聚 糖 含 量 不 能 用 于 隐 球 菌 感 染 的 诊 断 。 因 为 隐 球 菌 具 有 荚 膜, 1 —3一B—D葡 聚 糖 不 易 释 放 , 故 该 成
阴性组 ( P <0 . 0 1 ) 。 实 验 组 与 正 常 对 照 组 外 周 血 1— 3—1 3 一D葡 聚 糖 测 定 结 果 ,
见表 1 。
分可能不宜作 为 隐球菌感 染 的早期诊 断 指标 。本文所有病例 中无 隐球菌感染者 ,
有 关 隐 球 菌 感 染 后 1—3一B—D 葡 聚 糖 的变 化 还 有 待 进 一 步 观察 。本 研 究 中 , 3 0 例 正 常对 照 组 标 本 两 种 方 法 均 显示 阴 性 ,

1,3-β-D-葡聚糖(BG)检测侵袭性真菌感染诊断中的影响因素分析

1,3-β-D-葡聚糖(BG)检测侵袭性真菌感染诊断中的影响因素分析

1,3-β-D葡聚糖(BG)在检测侵袭性真菌感染诊断中的影响因素分析近20年来,由于大剂量广谱抗生素、抗肿瘤药物的长期应用,器官移植及造血干细胞移植等治疗方法的完善,各种导管在体内的介人以及恶性肿瘤、艾滋病等免疫功能低下患者的不断增加,侵袭性真菌感染的发病率明显上升。

侵袭性真菌感染(IFI)临床常无特异性,而真菌实验室诊断方法中镜检、培养、血清学诊断、组织病理学检查和分子生物学方法的检出率较低,G试验检测时间短其为非侵人手段在临床上广受关注。

目的及意义:分清1,3-β-D-葡聚糖检测(G试验)干扰因素,提高准确性。

G试验是及激活试剂中鲎变形细胞裂解物中的凝固酶(G因子),形成凝固蛋白,根据反应物的浓度变化对1,3-β-D葡聚糖浓度进行定量检测。

G试验是念珠菌感染的首选检查方法,检测速度快。

G试验是新的真菌抗原检测方法、念珠菌感染首选检查方法,在深部真菌感染早期诊断有重要意义,检查结果作为方法学评价标准,弥补了传统病理学及培养的不足,提高IFI检测率,缩短检查时间,早期治疗赢得时间为临床合理用药提供帮助。

G试验标准值:<10pg/ml为阴性,10pg/ml-20pg/ml是观察,>20pg/ml 阳性。

一般两次及以上G试验阳性及临床特征,并排除干扰因素就可以确定真菌感染。

BG升高原因:1,3-β-D葡聚糖((1,3)-β-D-glucan,BG)广泛存在于多种真菌细胞壁中,是真菌的特有多糖成分,包括念珠菌、曲霉菌、镰刀菌及卡氏肺孢子菌.占其干质量的50%以上,细菌、人和病毒都不含该成分,真菌菌丝生长的过程中、进入人体体液或深部组织后,经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后,1,3-β-D葡聚糖可从细胞壁中释放出来,使血液和体液(如尿、脑脊液,腹水,胸水等)中1,3-β-D葡聚糖含量升高,故检测血液中的BG可以协助侵袭性真菌感染(IFI)的诊断,当真菌在体内含量减少时,机体免疫可迅速清除 1,3-β-D-葡聚糖。

1,3-β-D-葡聚糖检验简介

1,3-β-D-葡聚糖检验简介

残基骨架作为主链 ➢ 以分支状1-6-β-D葡萄糖残基
作为侧链
B1, 3葡聚糖合成酶
18
1,3-β-D-葡聚糖特性
对热极为稳定,高压121℃并不能使其灭活。在念珠 菌和曲霉菌细胞壁中含量较多,对G实验灵敏。
当真菌进入人体血液或深部组织后,经吞噬细胞的吞 噬、消化等处理后,(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释 放出来,从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌 在体内含量减少时,机体免疫系统可将其清除。
25
例1
1,3-β-D-葡聚糖与循环半乳甘露聚糖的检测比较: 用于治疗和监测中性粒细胞减少性成人曲霉菌病
➢ 中性粒细胞减少症患者40例 (发展为曲霉菌病的高危人群) ➢ 该研究选择1,3-β-D-葡聚糖(BG)和半乳甘露聚糖(GM)
两个指标 用于监测中性粒细胞减少性成人曲霉菌病患者 ➢ BG和GM两项指标均可用于指导临床诊断和治疗真菌性疾 病, 但BG可早于GM升高. BG和GM联合检测用于曲霉菌病 的诊疗, 其特异性和阳性率均为100% .
结论: BG和GM联合检测有助于临床鉴定血液病患者是否合并真 菌感染, 并将单一试验假阳性给诊疗带来的影响降低到最小 .
26 Carmen Pazos, Jose Ponton, etc. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY,Jan.2005
例2
儿童1,3-β-D-葡聚糖水平研究
30
小结
1,3-β-D-葡聚糖是侵袭性真菌感染早期 诊断、疗效观察、预后评估有价值的实 验诊断。
1,3-β-D-葡聚糖检验其敏感性优于GM 侵袭性真菌感染的诊断与治疗是一个复
杂过程,实验室与临床应密切联系,为 临床医生提供诸如显微镜检查、真菌培 养、血清学标志物等多方面信息。
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附1真菌(1-3)—β—D葡聚糖检测标准操作规程
1.目的
规范真菌(1—3)-β-D葡聚糖检测的操作规程,保证结果准确性。

2.原理
实验条件下,来源于某些真菌细胞壁的(1—3)—β—D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的酶促凝集系统,使反应溶液的透光度发生变化。

利用(1—3)—β—D葡聚糖标准品建立β-D—葡聚糖生物效应与透光度变化关系的标准曲线,便可定量地测定人血液的(1—3)- β-D葡聚糖含量.
3.试剂
真菌(1-3)—β-D葡聚糖检测试剂盒,湛江安度斯生物有限公司。

试剂盒包装规格:20人份/盒。

复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。

若当次试验有剩余,可将剩余的试剂溶液置-20℃以下冷冻保存,一周内使用.不能反复冻融试剂溶液.
4.检测设备: LKM动态试管检测仪。

5.实验用具:250 μl无热原吸头、20—200 μl移液器、75℃试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管
架、无热原真空采血管(肝素抗凝剂).
6.标本采集及送检要求
6.1标本采集要求
6.1.1采集过程要求无菌操作,用指定的肝素类抗凝、无菌、无β葡聚糖采血管;
6.1.2常规住院病人早上用药前空腹采血,血透患者透析前采血。

6.2标本的送检和保存要求
标本采集后应在半小时内离心,4小时内检测完。

若当日不能及时检测的标本应将离心后的血浆转移至无β葡聚糖的容器内-20℃以下冷冻保存,一周内使用。

7.实验操作
7.1在试验开始前,先开启LKM动态试管检测仪,预热,一段时间后发出哔的一声,试管仪温度达
到37℃,待用;
7.2取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血1~2 ml,以400 g离心10分钟;
7.3取富含血小板的血浆100 μl,加到样品稀释瓶中,在旋涡混合器上轻轻混匀,然后插入75℃
试管恒温仪中加热10分钟;
7.4加热10分钟后,将样品稀释瓶从75℃试管恒温仪中取出,使其降至室温即可,即为1:10稀释的样品供试溶液;
7.5取β—G试剂1支,开启;
7.6取β-G试剂复溶液1支,开启后用移液器取0。

25 ml加入β—G试剂中,轻轻摇匀,澄清后得
试剂溶液备用;
7.7打开检测软件连接LKM动态试管检测仪,进入临床检查采集数据界面,点击“开始”按钮,使检
测软件进入待采集状态;
7.8取本试剂盒所配的专用反应试管,先取已制备好的样品供试溶液100 μl加入反应试管中,然后
加入50 μl试剂溶液,每个样品供试品溶液平行两管;
7.9加样完毕,依次拿起试管在旋涡混合器上轻点一下,使试管中的溶液均匀混合,然后把各试管逐
一插到LKM动态试管仪中,反应开始,37℃反应75分钟,在反应结束前填写试验相关的信息;
7.10反应完毕,检测软件将自动处理数据,计算出样品供试溶液中的(1-3)—β—G葡聚糖测量值,
进入“临床检查数据报告”可查看检验结果,进入“临床检查数据分析”可查看反应曲线.
8.假阳性因素
8.1(1-3)-β-D葡聚糖污染.使用非试剂厂家提供的采血管、反应试管、吸头等容易受(1—3)—β-D
葡聚糖污染;
8.2某些纤维素透析膜污染,如血液透析、腹膜透析等;
8.3G试验前注射过香菇多糖、脂肪乳等药物;
8.4手术后使用纱布。

9.假阴性因素
9.1不敏感菌:某些真菌如接合菌(毛霉菌、根霉菌)细胞壁没有(1-3)—β-D 葡聚糖成分;隐球
菌细胞壁外有荚膜致使(1-3)—β-D 葡聚糖释放不出,这些真菌G试验不能检测.有临床症状,但G试验阴性时,临床医生可考虑这两种真菌感染的可能。

9.2定植菌:研究显示,定植真菌不引起患者血液的(1-3)—β-D 葡聚糖升高,即使是严重定植。

因此G试验阴性可以区分真菌定植或侵袭性感染。

10.结果分析
表1 结果分析表
11.反应曲线分析
表2 反应分析曲线
正常的真菌阳性曲线异常的真菌阳性曲线
正常的真菌阳性曲线走势呈反“S”形,曲线终点的RT值较低。

异常的真菌阳性曲线走势呈“S”形,曲线前段突然下降,曲线后段趋平,曲线终点的RT值较高。

1、异常的真菌阳性曲线一般是临床用药产生的干扰,建议排除干扰后重新检测;
2、对达限时间短(<700s),测量值高(〉6000pg/ml)的阳性结果,应做反应曲线分析;
3、为对患者负责,建议对检测阳性结果都做反应曲线分析.
12.注意事项
12.1预热采集在进行试验之前,LKM动态试管检测仪一定要提前预热30分钟左右,使其达到工作
温度37℃后,打开检测软件连接试管仪,在加样反应前点击“开始"按钮,使软件进入待采集状态.
12.2取样与保存①可检测的样本:血液、尿液、腹水等;②采集要求:采样过程要求无菌操作,
无热原真空采血管采血;③保存:样品采集后应在半小时内离心,若4小时内不用,可分离出血浆置—20℃以下冰箱中进行冷冻保存30天。

12.3样本预处理及加样反应①采有血液的无热原真空采血管应以400g离心10分钟;②取已分
离的血浆上清液的中部;③75°C加热应为时间10分钟,加热完毕后冷却至室温;④插管要一次性插到底,插入后不能再触碰;⑤每个样本的平行两管必须插入仪器的连续两孔;⑥可在插入管反应后再填写相关的试验信息,但一定要在试验结束前填写,否则数据将不保存。

13.临床意义
13.1G试验可以早期、快速诊断侵袭性真菌病(IFD),可用于真菌感染早期筛查;
13.2适用于念珠菌,曲霉,肺孢子菌,镰刀菌,地霉,组织胞浆菌,毛孢子菌等侵袭性感染检测,不适
用于检测隐球菌和接合菌感染;
13.3与GM试验(半乳甘露聚糖检测)联合可区分曲霉菌或其他真菌感染;
13.4高危患者建议每周检测2—3次。

参考文献
1.真菌(1—3)-β—D葡聚糖检测试剂盒说明书。

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