营养缺陷型菌株的检出方法
分离、筛选、鉴定色氨酸营养缺陷型菌株
分离、筛选、鉴定色氨酸营养缺陷型菌株一、实验目的1、了解应用物理、化学因素对细菌进行诱变的方法2、初步掌握诱变产生营养缺陷型菌株的筛选与鉴定的方法技术，体会相应的科学理念。
二、实验原理1、诱变及诱变剂说明1.1利用化学、物理等诱变手段是微生物育种工作的常用手段主要有DNA碱基化学性质改变引起置换、插入移码、大片段畸变、碱基二聚体形成等，最终引起宜春啊信息复制之中的改变1.2本次试验利用紫外线进行诱变处理（主要是形成嘧啶二聚体，引起后续DNA复制错误，达到诱变的目的）1.3诱变后需要暗培养（防止光复活作用）1.4紫外线剂的控制---紫外灯的功率、照射距离、照射时间（需要前期试验确定，杀菌率在70%左右）2、营养缺陷型的培养生长情况营养缺陷型在完全培养基上生长良好，而在基本培养基上则不生长，未发生突变的野生型在两种培养基上都能生长（此为筛选的理论依据）三、实验材料菌种：大肠杆菌实验培养基：肉汤液体培养基（CM）；肉汤固体培养基（CMA）；2倍肉汤液体培养基（CM）；基本液体培养基（MM）；基本固体培养基（MM）；含色氨酸的基本培养基实验试剂：生理盐水，青霉素钠实验器材：10ML带盖离心管、10ml吸管、90mm培养皿、试管四、实验步骤1、菌种培养收集洗涤大肠杆菌接种于肉汤液体培养基，37℃静止培养18~24h无菌取10ml培养液放入无菌15ml离心管中，3500r/min 10min，弃上清液，留下菌体沉淀在上述沉淀中加入5ml无菌生理盐水，悬浮沉淀，备用2、诱变剂处理吸取上述洗涤悬液3ml，放至60mm培养皿中，摇晃成薄层。
将上述培养皿放在40w紫外灯下，距离30cm（处理前先开紫外灯稳定30min），灭菌1min，然后开盖处理5min。
照射完毕后，先盖上皿盖，再关紫外灯吸取3ml2倍肉汤培养液到上述处理后的培养皿中。
置于37℃恒温培养箱内，避光培养12h以上（此时是诱变后DNA复制形成纯合子过程）注意：紫外线防护，不要长时间暴露在其下3、淘汰野生型，浓缩缺陷型—基本培养基抗生素法：青霉素适用于细菌，制霉菌素适用于真菌菌丝过滤法：适用于丝状生长的真菌和放线菌4、鉴定色氨酸营养缺陷型持续观察，前后对照标记，在基本培养基上不生长，但是能在加了色氨酸的基本培养基上生长的便是色氨酸营养缺陷型菌株。
大肠杆菌营养缺陷型
大肠杆菌营养缺陷型菌株的筛选陈瑞州201110424108一.实验原理以微生物为材料的遗传学研究中，用某些物理因素或化学因素处理细菌，使基因发生突变，丧失合成某一物质（如维生素）的能力，因而它们不能在基本培养基上生长，必须补充某些物质才能生长。
这样从野生型经诱变筛选得到的菌株称为营养缺陷型。
常用的诱变法是紫外线照射诱变法。
但是，经处理后的细菌，缺陷型还是相当少的，必须设法淘汰野生型细菌。
因为抗生素能杀死生长的细菌而对不生长的细菌没影响，而缺陷型菌株在基本培养基中不能生长，由此通过含有抗生素的基本培养基即可淘汰野生型细菌，保留缺陷型细菌。
把经过浓缩的缺陷型菌液接种在完全培养基上，待长出菌落后，将每一菌落分别接种在基本培养基和完全培养基上，凡是在基本培养基上不长，而在完全培养基上生长的菌落就是营养缺陷型。
二.实验材料大肠杆菌K12的野生型菌株大肠杆菌三.实验器具和药品1.用具：灭菌培养皿（9cm），灭菌三角瓶（150ml），灭菌离心管。
2.培养基1)肉汤液体培养基：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，蒸馏水100ml，Ph7.2，高压灭菌15磅/英寸2 15分钟。
2)肉汤液体培养基（2E）：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，蒸馏水50ml，Ph7.2，高压灭菌锅15磅/英寸215分钟。
3)基本液体培养基：葡萄糖2g，蒸馏水98ml，pH7.0，高压灭菌8磅/英寸2 30分钟4)基本固体培养基：琼脂2g，基本液体培养基100ml，pH7.0，高压灭菌8磅/英寸2 30分钟。
5)无N基本液体培养基：K2HPO40.7g，KH2PO40.3g，柠檬酸钠·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.01g，葡萄糖2g，蒸馏水100ml，Ph7.0，高压灭菌8磅/英寸230分钟。
6)2N基本液体培养基：K2HPO40.7g，KH2PO40.3g，柠檬酸钠·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O0.01g，(NH4)2SO4 0.2g，葡萄糖2g，蒸馏水100ml，Ph7.0，高压灭菌8磅/英寸2 30分钟。
大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定
大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定关于菌株的几个概念：野生型菌株：从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始状态。
营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。
原养型：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上和野生型相同关于培养基：基本培养基（minimal medium，MM）：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，用[－]来表示。
完全培养基（complete medium，CM）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。
用[＋]来表示。
补充培养基（supplemental medium，SM）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组全培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成。
摘要：本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发大肠杆菌突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，获得100#大肠杆菌菌株，最后经生长谱法鉴定出该菌株为xxx缺陷型。
关键词：大肠杆菌紫外线营养缺陷型青霉素逐个测定法生长谱法一、目的1、了解营养缺陷型突变株选育的原理。
2、学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变、筛选与鉴定方法。
二、原理筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节：诱变处理、营养缺陷性的浓缩、检出、鉴定缺陷型。
本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。
三、器材离心机，紫外线照射箱，冰箱，恒温箱，高压灭菌锅；三角烧瓶，试管，离心管，移液管，培养皿，接种针四、材料(一)菌种E.coli(二)培养基、1LB培养液(Luria-Bertani 培养基,这个名字来源于英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。
是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。
加入抗生素的LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。
枯草芽孢杆菌营养缺陷型突变株的筛选
题目：细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定一、实验原理：筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节：诱变处理、营养缺陷性的浓缩、检出、鉴定缺陷型。
本实验选用亚硝酸钠为诱变剂来诱发突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。
二、实验器材：离心机，冰箱，恒温箱，高压灭菌锅；接种针，三角烧瓶，试管，离心管，移液管，培养皿，枪头三、菌种：大肠杆菌四、所有用到的培养基：（分别列出配方）1. LB培养液：酵母膏，0.5g；蛋白胨，1g；NaCl，0.5g；水，100ml，pH7.2 121℃灭菌15min2. 基本培养基：葡萄糖0.5 g，(NH4)2SO4 0.1 g，柠檬酸钠0.1 g，MgSO4·7H2O 0.02 g，K2HPO4 0.4 g，KH2PO4 0.6 g，重蒸水100 mL，pH 7.2，110℃灭菌20 min。
配固体培养基时需加2%洗涤处理过的琼脂。
全部药品需用分析纯，使用的器皿需用蒸馏水或重蒸水冲洗2~3 次。
3. 无N基本液体培养基：K2HPO4,0.7g；KH2PO4,0.3g; 柠檬酸钠3H2O,0.5g；MgSO4 7H2O,0.01g; 葡萄糖2g；水100ml，pH7.0 110℃灭菌20min4. 2N基本培养基：K2HPO4,0.7g；KH2PO4,0.3g; 柠檬酸钠3H2O,0.5g；MgSO4 7H2O,0.01g; (NH4)2SO4,0.2g;葡萄糖2g；水100ml，pH7.0 110℃灭菌20min5. 完全培养基同LB培养基，配置固体培养基，需加2%的琼脂。
6. 补充培养基(简称SM)：为满足某特定营养缺陷型菌株的营养要求而在基本培养基中加入某—种或几种营养成分的培养基称补充培养基。
7.醋酸缓冲液(pH4.5)（取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml）、0.1 mol/L亚硝酸钠溶液(68.995×0.1=6.8995g/L)、0.07 mol/L酸氢二钠溶液(pH8.6)(141.96×0.07=9.9372g/L)五、实验步骤1th day: 各种所需培养基、试剂的配制及所需器材灭菌2th day：菌体活化与培养：取一环E.coli于5mlLB液体三角瓶中，37℃培养过夜，14~16h.3th day：早上添加5mlLB液，充分混匀后，分装到两只三角瓶，继续培养5小时。
氨基酸缺陷性实验方案
2010级生物技术曹学敏学号：2010445007 2组氨基酸营养缺陷型的筛选及鉴定实验方案一、实验目的掌握对细菌进行诱变处理的方法以及对突变体检出、鉴定和获得营养缺陷型的方法二、实验材料(一) 菌种芽孢杆菌(二)培养基完全培养基（CM）：葡萄糖0.5 g 牛肉膏0.3 g 酵母膏0.3 g 蛋白胨 1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 琼脂2g 蒸馏水100 mL pH 7.2 100 Pa 灭菌20min。
基本培养基：（MM）葡萄糖0.5 g (NH4)2SO4 0.2 g 柠檬酸钠0.1 g MgSO4·7H2O 0.02 g K2HPO4 0.4 g 0.6 g 蒸馏水100 mL pH 7.2 100 Pa 灭菌20 min(三)主要药品：葡萄糖牛肉膏酵母膏蛋白胨MgSO4·7H2O (NH4)2SO4 柠檬酸钠K2HPO4 KH2PO4 亚硝基胍甲酰胺磷酸青霉素20种氨基酸（鸟氨酸苯丙氨酸谷氨酸甘氨酸组氨酸亮氨酸酪氨酸丝氨酸半胱氨酸异亮氨酸色氨酸丙氨酸蛋氨酸精氨酸苏氨酸天冬氨酸胱氨酸赖氨酸脯氨酸缬氨酸）（四）主要试剂：蒸馏水0.2mol/L pH 6.0 磷酸缓冲液生理盐水：0.9g氯化钠溶于100mL蒸馏水（五）器材及仪器：pH试纸黑纸吸水纸酒精灯接种环试管250ml 锥形瓶、100ml锥形瓶培养皿试管移液管10ml离心管玻璃棒玻璃珠玻璃刮灭菌牙签培养箱摇床离心机分析天平恒温水浴锅三、实验步骤（一）实验准备1.按配方配制培养基（配制200mL基本培养基、100mL完全培养基、100mL完全培养液和50mL基本培养液）和实验中所用药品。
2．取4mL融化完全培养基于试管中，盖上棉塞；分别取20mL完全培养液于两个250mL锥形瓶；然后将剩余的完全培养基与基本培养基放于锥形瓶中高温灭菌消毒，备用。
还需取7支10mL离心管、4支1mL移液管、3支5mL移液管、1支10mL移液管、10个大培养皿、10个玻璃刮250mL锥形瓶3个进行高温灭菌，备用。
实验5-营养缺陷型菌株筛选及鉴定
实验五、营养缺陷型菌株筛选及鉴定1、实验名称营养缺陷型菌株筛选及鉴定2、实验操作人3、实验过程简述3.1 营养缺陷型菌株诱变3.1.1培养基的配制配置两种类型的培养基，营养丰富培养基（YPD）和基本培养基（SC），其中营养丰富的培养基在诱变的过程中用来培养菌株，在基本培养基中选择性的加入氨基酸来进行筛选，分别标记为：SC5 (SC+His+Trp+Leu+Lys+Ura)；SC5-Lys (SC+His+Trp+Leu+Ura) SC5-Leu (SC+His+Trp+Lys+Ura)；SC5-Trp (SC+His+Leu+Lys+Ura)；SC5-His (SC+Trp+Leu+Lys+Ura)；SC5-Ura(SC+His+Trp+Leu+Lys)。
3.1.2稀释涂布在超净台，取0.1 ml菌悬液转接到0.9 ml无菌水中，混匀后，取0.1 ml 稀释液转接到0. 9 ml无菌水中，混匀后，继续进行10倍的梯度稀释，稀释到10-6；取0.1 ml稀释度分别为10-4、10-5、10-6的菌悬液，加入到YPD固体平板上，用涂布棒涂布均匀，每个稀释度涂5块平板；3.1.3紫外诱变每个稀释度各取一块平板，培养皿底部标记好组号-稀释度-紫外处理时间，将平板适当垫高，防止诱变不充分，用紫外照射分别诱变处理0、30、45、60、120秒，黑布包好，置于30℃培养箱培养48h；记录各平板上的菌落数，计算不同处理的细胞致死率。
致死率（%）=1-（特定时间点平板上菌落数X稀释倍数）/（0时平板上菌落数X 稀释倍数）X100%3.2 营养缺陷型菌株初筛3.2.1选取单菌落小组内部四人分别标号为A/B/C/D（本人标号为A）,本次实验选用了两种敏感性不同的菌株，选取两种菌株内生长较好的平板，每个平板每人取3个单菌落（每人2菌×3个单菌落），用记号笔圈出标记为A1/A2/…A6防止重复挑取；取1.5ml离心管装入1ml无菌水，用接种环从YPD平板上挑取单菌落，转接到无菌水中，摇匀，室温静置2h；3.2.2点板在准备好的YPD、SC培养基平板底部做标记（培养基名称-组号）,将小组成员点菌位置画好格子；分别取一接种环菌悬液对应点于SC和YPD培养基平板上（每人1行，做好标记）；将培养皿倒置于30℃培养箱中，培养48h，注意无论涂板、还是点板，一定等菌液被培养基吸收后，再挪动或倒置；记录各单菌落在不同培养基上生长情况（生长记“+”，不生长记“-”），并拍照；根据生长情况，判断本实验各菌株是否为营养缺陷型菌株。
细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定实验报告
工业微生物育种实验细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定|;关于菌株的几个概念：\野生型菌株：从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始状态。
营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。
原养型：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上和野生型相同关于培养基：基本培养基（minimal medium，MM）：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，用[－]来表示。
完全培养基（complete medium，CM）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。
用[＋]来表示。
补充培养基（supplemental medium，SM）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组全培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成。
摘要：本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发大肠杆菌突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，获得100#大肠杆菌菌株，最后经生长谱法鉴定出该菌株为脯氨酸缺陷型。
关键词：大肠杆菌紫外线营养缺陷型青霉素逐个测定法生长谱法一、实验目的1、了解营养缺陷型突变株选育的原理。
@2、学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变、筛选与鉴定方法。
二、实验原理筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节：诱变处理、营养缺陷性的浓缩、检出、鉴定缺陷型。
本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。
三、实验器材离心机，紫外线照射箱，冰箱，恒温箱，高压灭菌锅；三角烧瓶，试管，离心管，移液管，培养皿，接种针四、实验材料(一)菌种(二)培养基、1LB培养液：酵母膏，0.5g；蛋白胨，1g；NaCl，0.5g；水，100ml， 121℃灭菌15min22×LB培养液：其它不变，水，50ml。
3￥4基本培养基：葡萄糖 0.5 g，(NH4)2SO40.1 g，柠檬酸钠 0.1 g，MgSO4·7H2O0.02 g，K2HPO40.4 g，KH2PO40.6 g，重蒸水 100 mL，pH ，110℃灭菌 20min。
诱变筛选一营养缺陷型的枯草杆菌菌株
诱变筛选一营养缺陷型的枯草杆菌菌株一．实验目的1. 了解营养缺陷型突变株选育的原理。
2.掌握营养缺陷型突变株的诱变筛选的方法。
二．实验原理营养缺陷型是野生型菌株由于基因突变或者物理诱变，致使细胞合成途径出现某些缺陷，丧失合成某些物质的能力，必须在基本培养基中外源不加该营养物质，才能正常生长的一类突变株。
其本质是一种减低或消除末端产物浓度，以解除反馈控制的代谢调控方式，使代谢途径中间产物或分支合成途径中末端产物得以积累。
营养缺陷型菌株广泛应用于氨基酸、核苷酸、维生素的生产中，也广泛应用于基因定位、杂交及基因重组等研究中的遗传标记制作。
三．实验材料( 1 ) LB培养基：NaCl 10 g/L, Trypton 10g/L, Y east Extract 5 g/L( 2 )固体LB培养基：LB培养基中加入琼脂粉20g/L( 3 )MM培养基：1L纯水中加入：葡萄糖2克、无机盐混合液2mL、硫酸铵0.5克，硫氨素、核黄素0.1克( 4 )无氮MM培养基：同MM培养基但不含硫酸铵。
( 5 )鉴定用补充培养基：MM培养基中加入氨基酸混合液( 6 )菌种：枯草杆菌四．实验内容(一) 诱变处理1. 前培养取新活化的棒杆菌T6-13 斜面菌种—环，接入盛有20 mL 完全培养基的250 mL 锥形瓶中，30℃振荡培养14~16 h，再取1mL 培养液转接于另一盛有20 mL 完全培养基的250 mL 锥形瓶中，30℃振荡培养4~6h，使细胞处于对数生长期。
2. 菌悬液制备取10 mL 培养液于无菌离心管中，3500 r/min 离心10 min，弃上清液，打匀管底菌团，加入5mL 0.2mol/L pH 6.0 磷酸缓冲液，摇匀后倒入盛有45 mL 0.2mol/L pH 6.0 磷酸缓冲液并带玻璃珠的100 mL 锥形瓶中，振荡10 min，调整细胞浓度为5×108 个/mL，用完全培养基平板菌落计数法测定总菌数。
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营养缺陷型菌株的检出方法
营养缺陷型菌株是指由于缺乏一定的营养物质而在培养基上无法生长的微生物菌株。
营养缺陷型菌株通常需要添加特定的营养物质才能够在培养基上生长，因此对这类菌株的检出是非常重要的。
下面将介绍一些常见的营养缺陷型菌株的检出方法。
1.培养基筛选法
培养基筛选法是最常用的检出营养缺陷型菌株的方法之一。
该方法通过设计特定的培养基，只有符合特定营养要求的菌株才能够生长。
例如，对于缺乏特定氨基酸的菌株，可以设计一种缺乏该氨基酸的培养基，只有含有相应营养物质的菌株才能在该培养基上生长。
2.生化特性检测法
生化特性检测法是通过检测菌株的生化特性来区分不同类型的菌株。
对于营养缺陷型菌株，可以通过检测其在缺乏特定营养物质的条件下的代谢特性来确定其是否为营养缺陷型菌株。
例如，缺乏一种氨基酸的菌株在培养基上生长会产生特定的代谢产物，通过检测这些产物就可以确定该菌株是否为营养缺陷型菌株。
3.分子生物学方法
分子生物学方法在检出营养缺陷型菌株方面也具有重要的应用价值。
通过对菌株的基因组进行测序分析，可以发现其缺乏特定代谢途径的基因或者具有特定缺陷型基因的特征。
通过分析这些基因的表达情况可以确定菌株是否为营养缺陷型菌株。
总的来说，对于营养缺陷型菌株的检出需要综合运用培养基筛选法、生化特性检测法和分子生物学方法的手段。
通过综合应用这些方法可以快速、准确地检出营养缺陷型菌株，为菌株的鉴定和分类提供重要的帮助。
同时，对于一些工业应用、食品安全和环境监测等领域也有重要的意义。