薄层色谱法
色谱学 第三章 薄层色谱
在吸附色谱过程中，溶质、溶剂和吸附剂三 者是相互联系而又相互竞争的，如此构成了 整个层析分离过程 。 在薄层吸附色谱过程中，主要为物理吸附， 无选择性。因之吸附剂与多元组分溶液接触 时，一方面任何溶质都可被吸附（当然单位 重量吸附剂所能吸附物质的量，即“吸附量” 会因物质种类而异），另一方面，吸附剂也 可吸附流动相分子。由于物理吸附是可逆的， 故被吸附的分子同时也可被解吸出来。
偶氮染料 偶氮苯 对甲氧基偶氮苯 苏丹黄 苏丹红 对氨基偶氮苯 对羟基偶氮苯
Ⅱ 0.61 0.28 0.18 0.11 0.04 0.01
表3-2 硅胶活度分级法 Rf Ⅲ Ⅳ 0.70 0.83 0.43 0.67 0.30 0.53 0.13 0.40 0.07 0.20 0.01 0.07
除上二种外，还有其他一些吸附剂。吸附剂品种如下： （1）硅胶：薄层色谱用为200~250目粒度，规格很多，一般如有石膏作粘 结剂，称硅胶G；石膏含量为5~20%，一般为10~13%，亦有用淀粉作粘 结剂的，称硅胶S，不加粘结剂者称硅胶H或硅胶N，为了便于观察组分的 斑点，也可在硅胶中加入荧光指示剂。如果又加有粘结剂时，则称为硅胶 GF或硅胶GF254，即吸收254nm紫外光。 （2）氧化铝：根据加有粘结剂情况不同，有H、G、HF、GF等品种。 （3）硅镁吸附剂：即费罗里硅土，使用前要在130℃下活化二小时。 （4）纤维素：长度仅为2~20微米的短纤维，分天然纤维和微晶纤维两种 形式，也可加粘合剂、一般用于亲水性物质的分离，如羟基化物等，但缺 点为不能用浓硫酸等腐蚀性溶剂进行显色。 （5）聚酰胺：这是一种使用广泛的有机吸附剂，多用于分离酚类化合物， 样品容量大，但粘结能力差，可加入纤维素或淀粉作粘结剂。 （6）烧结薄层板：这是一种多次使用的薄层板，是由200~300目石英或玻 璃粉，与200~300目硅胶或氧化铝按1：25重量混合，用乙醇调成浆料，涂 在玻璃板上。0.25~0.3毫米厚，然后在700~780℃高温下烧结，即成烧结板。 烧结板用一次后可用乙醇或其它有机溶剂洗涤，最后用水洗干净后烘干再 继续使用。
tlc薄层色谱法操作步骤
tlc薄层色谱法操作步骤
TLC薄层色谱法操作步骤如下：
1. 选取TLC板：选择一张标记编号的TLC板，并涂上一层固定相，常用的固定相包括硅胶和氧化铝等，这些材料通常被涂在玻璃板上，形成一个厚度为0.1-0.25mm的均匀层。
2. 制备样品：将待分析物质溶于合适的溶剂中，制备成适当浓度的溶液。
3. 点样：使用毛细管将样品“点”到左下角的板上。
该点应距离底部和边缘1cm。
4. 分离：将涂有样品的TLC板置于一个密闭的容器中，使其在室温下进行色谱分离。
分离过程中，待分析物质会随着移动液向上运动，并在固定相上留下一系列的斑点。
分离时间取决于待分离物质的性质和所使用的移动液。
5. 开发：取出分离完毕的TLC板，将其放入一个开发槽中，用适当的溶剂进行开发。
开发液的选择取决于待分析物质的性质和固定相的种类。
开发时间也取决于样品和开发液的性质。
6. 分析：开发完毕后，从开发槽中取出TLC板，将其放置在紫外灯下照射，观察样品斑点的颜色和形状。
薄层色谱法简介
➢ TLC定量分析时，样品量的适宜范围为最小检出量的几倍至几 十倍。
➢ 样品原点一般在1mm左右为佳，原点过大或样品量过大，会导 致分离变坏。
薄层色谱的展开剂
➢ 薄层色谱的展开，需在密闭容器中进行，使展开 剂蒸气在缸内达平衡。
➢ 硅胶为固定相主体的正相色谱，溶剂的极性越大， 对化合物的洗脱能力越大，即Rf值越大。
（1）碘蒸气显色：将展开的薄层板挥发干展开剂后，放在盛 有碘晶体的封闭容器中，升华产生的碘蒸气能与许多有机物分子 形成有色的缔合物，完成显色。
（2）紫外线显色：用掺有荧光剂的固定相材料制板，展开后 用紫外线照射展开的干燥薄层板，板上的有机物会吸收紫外线， 在板上出现相应的色点，可以被观察到。
薄层色谱的使用操作
下降法
（3）下降法：用滤纸或纱 布等将展开剂吸到薄层板的 上端，使展开剂沿板下行， 这种连续展开的方法适用于 Rf值小的化合物。
薄层色谱的使用操作
3.显色
分离的化合物若有颜色，很容易识别出来各个样点。但多数情 况下化合有颜色，要识别样点，必须使样点显色。通用的显色方 法有碘蒸气显色和紫外线显色。
• （3）若在同一板上点几个样，样点间距离应为1 ～ 1.5 cm
• （4）点样要轻，不可刺破薄层 • （5）点样结束待样点干燥后，方可进行展开
薄层色谱的使用操作
2.展开
（1）上升法： 将色谱板垂直于 盛有展开剂的容器中，适合于含 粘合剂的色谱板。
上升法
薄层色谱的使用操作
倾斜上行法
（2）倾斜上行法： 色谱板倾 斜10～15°，适用于干板或无 粘合剂软板的展开；色谱板 倾斜45～60°，适用于含有粘 合剂的色谱板
（2）若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了 原点上，此溶剂的极性过弱。
薄层色谱法(TLC)
单一溶剂的极性顺序为（从小到大）：石油醚→环己烷→四氯化碳→三氯乙烯→苯→甲苯→二氯甲烷→氯仿→乙醚→乙酸乙酯→乙酸甲酯→丙酮→正丙醇→甲醇→吡啶→乙酸混合溶剂的极性顺序（从小到大）：苯∶氯仿（1+1）→环己烷∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶丙酮（95+5）→苯∶丙酮（9+1）→苯∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶乙醚（9+1）→苯∶甲醇（95+5）→苯∶乙醚（6+4）→环己烷∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶乙醚（8+2）→氯仿∶甲醇（99+1）→苯∶甲醇（9+1）→氯仿∶丙酮（85+15）→苯∶乙醚（4+6）→苯∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶甲醇（95+5）→氯仿∶丙酮（7+3）→苯∶乙酸乙酯（3+7）→苯∶乙醚（1+9）→乙醚∶甲醇（99+1）→乙酸乙酯∶甲醇（99+1）→苯∶丙酮（1+1）→氯仿∶甲醇（9+1）1．薄层板的选择和铺制（1）薄板的选择最常用的薄板是玻璃板，其大小选择：根据目的、样品量、组分的数目多少和展开的方式等综合而定。
小量制备：待分离组分总量在0.5～1g左右，可采用400mm×350mm的薄板1~3块即可。
预试或定性分析：用单项展开时，多用载玻片（200mm×50mm，200mm×25mm或75mm ×25mm）。
双向展开或小量制备时，一般采用200mm×200mm或400mm×200mm的大板。
玻璃板要求：平整、光滑、干净。
（2）制板方法：干铺法和湿铺法干铺法概念：就是将吸附剂颗粒或粉末均匀地平铺在玻璃板上的方法，所制得薄板称为干板。
吸附剂粒度要求：一般为150~200目左右。
涂铺方法：把玻璃板平放在平台上或实验台面上，先将吸附剂大致平摊在玻板上，然后两手握住一根带有两个套圈的粗玻璃棒，按照图所示方向推动，把多余的吸附剂除去，便可得到一块均匀的薄板。
玻棒套圈可以用塑料管或胶布等制成。
两个套圈的厚度和距离，便是薄层的厚度和宽度。
薄层色谱法原理
薄层色谱法原理薄层色谱法（TLC）是一种常用的色谱分离技术，它利用吸附剂涂覆在玻璃、铝箔或塑料片上作为固定相，以及流动相在固定相上移动来进行分离。
薄层色谱法具有操作简便、分离速度快、分辨率高等优点，因此在化学分析、药物分析、食品安全等领域得到了广泛的应用。
薄层色谱法的原理主要包括样品的施加、色谱板的开发和结果的观察三个步骤。
首先，样品的施加。
在薄层色谱法中，样品通常以溶液的形式施加在色谱板上。
施加样品时，需要注意样品的量不宜过多，以免影响色谱分离的效果。
另外，样品的施加位置也需要注意，通常会在色谱板的底端施加样品。
接着是色谱板的开发。
色谱板的开发是指将色谱板放入开发槽中，使流动相在色谱板上上升，样品成分在固定相上分离的过程。
在开发的过程中，需要控制好开发槽的温度和湿度，以及开发时间的长短，以保证色谱分离的效果。
最后是结果的观察。
开发结束后，可以通过裸眼观察或者使用紫外灯等方法来观察色谱板上各成分的分离情况。
观察的结果可以通过标记或者摄影的方式进行记录，以便后续的定性和定量分析。
薄层色谱法的原理基于不同成分在固定相和流动相之间的相互作用力不同而实现分离。
在色谱板上，固定相的吸附作用是色谱分离的基础。
当样品溶液施加在色谱板上时，不同成分会因为与固定相的相互作用力不同而在色谱板上产生迁移差异，从而实现分离。
而流动相的选择和开发条件的控制则会影响色谱分离的效果。
总的来说，薄层色谱法是一种简单而有效的色谱分离技术，其原理基于不同成分在固定相和流动相之间的相互作用力差异。
通过样品的施加、色谱板的开发和结果的观察三个步骤，可以实现对不同成分的分离和检测。
在实际应用中，薄层色谱法可以用于化学分析、药物分析、食品安全等领域，为相关领域的研究和检测提供了有力的支持。
薄层色谱法原理
薄层色谱法原理薄层色谱法（TLC）是一种常用的色谱分离技术，它广泛应用于化学、生物化学、药学等领域。
薄层色谱法原理简单易懂，操作方便快捷，因此备受青睐。
本文将对薄层色谱法的原理进行详细介绍，以帮助读者更好地理解和应用这一技术。
薄层色谱法的原理基于物质在固定相和流动相之间的分配行为。
在薄层色谱法中，样品被置于薄层色谱板上，然后板上的样品与流动相接触，流动相在板上上升，样品被带上升。
不同成分在流动相和固定相之间的分配系数不同，因此它们在上升的过程中会发生分离。
通过观察分离后的斑点，可以得到样品的成分信息。
薄层色谱法的分离原理可以用化学的分配系数来解释。
分配系数是指在两种相（通常是固定相和流动相）之间分配的物质的比例。
不同物质的分配系数不同，因此它们在两相之间的分配也不同。
在薄层色谱法中，固定相是薄层色谱板上的吸附剂，而流动相则是向上移动的溶剂。
样品在两相之间分配后，就会在薄层色谱板上形成斑点，不同物质的斑点位置不同，从而实现了分离。
薄层色谱法的原理还涉及到色谱板的选择和制备。
色谱板通常由玻璃、铝箔或塑料制成，表面涂有吸附剂。
吸附剂的选择对于分离的效果至关重要，不同的吸附剂适用于不同类型的样品。
制备色谱板时，需要注意涂布均匀、干燥彻底，以确保分离的准确性和重复性。
在实际操作中，薄层色谱法的原理可以通过简单的实验来验证。
首先准备好色谱板和溶剂，然后将样品在色谱板上施加，最后将色谱板放入溶剂中。
通过观察色谱板上斑点的形成和移动，就可以直观地了解薄层色谱法的分离原理。
总之，薄层色谱法的原理是基于物质在固定相和流动相之间的分配行为。
通过合理选择色谱板和溶剂，以及严格控制实验条件，可以实现对样品的有效分离。
薄层色谱法原理简单易懂，但在实际操作中仍需谨慎对待，以确保分离的准确性和重复性。
希望本文对读者对薄层色谱法的原理有所帮助。
薄层色谱法
槽展开缸或适宜大小的干燥
器代替，如碘蒸汽。
l检视装置
为装有可见光、 254nm（荧光萃灭）及 365nm紫外光光源及相 应的滤光片的暗箱， 可附加摄像设备供拍 摄图像用，暗箱内光 源应有足够的光照度。
l薄层色谱扫描仪
系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点， 或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将 扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量 的分析仪器。
薄层色谱法可针对不同的样品采用不同的显色 方法和显色剂进行显色，从而可以专门针对某一 化合物进行检视，或对紫外光和可见光下无吸收 的化合物进行检视。极大的提高了薄层检视的专 属性与灵敏性。这是薄层色谱法灵活性的一个集 中体现。即同一薄层板可生成可见光、紫外光谱、 荧光光谱和荧光淬灭光谱。
主要的显色方法有：喷雾显色、浸渍显色与蒸 气熏蒸显色。
四、点样操作
l 点样前薄层板准备
Ø薄层板表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气 泡、无破损及污染。铝基片薄层板可根据需要剪 裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得 有破损。
Ø临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不 需活化。
Ø如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用异 丙醇、二氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂（8:2） 在展开缸中上行展开预洗，取出，晾干，110℃活 化，置干燥器中备用。（注意标记方向）
有的品种可以熏以试剂或试液的蒸气（如碘蒸气、氨蒸 可采用摄像设备拍摄， 以光学照片或电子图像 的形式保存。也可用薄 层扫描仪扫描记录相应 的色谱图。（在紫外光 下拍摄时，应使用适宜 的滤光片滤除紫外光。）
八、系统适用性试验
按各品种项下要求对实验条件进行系统适用性试 验，即用供试品和对照品对实验条件进行试验和调整， 应达到规定的检测灵敏度、分离度、重复性和比移值 要求。
薄层色谱法的基本原理
薄层色谱法的基本原理
薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用的分析技术，基于物质在固定相上的分配和迁移差异实现物质分离和检测。
薄层色谱法的基本原理如下：
1. 固定相：将一层薄薄的固定相涂覆在玻璃、金属或塑料基质上，形成薄层色谱板。
常用的固定相有硅胶、氧化铝或纤维素等，它们可以吸附和分离不同物质。
2. 样品施加：将待分析的混合物样品沿着色谱板底部施加。
样品可通过滴管或微量注射器等工具点状施加在色谱板上，通常施加位置为距离色谱板底部约1-2 cm处。
3. 迁移：将色谱板置于封闭的容器中，容器内加入有机溶剂或某种移动相，将移动相铺满容器底部。
容器盖上后，移动相沿着色谱板向上上升。
物质分子会与移动相相互作用，并迁移到上方。
迁移距离取决于化学物质与移动相的亲疏性。
4. 分离：在固定相上，不同物质在移动相中的迁移速度不同，导致分离。
物质越亲近固定相的亲疏性越大，它们迁移速度越慢。
分离后的物质会在色谱板上形成不同的斑点。
5. 可视化：将色谱板取出，根据待分析物质的性质选择合适的显色方法，如紫外灯照射、着色剂喷洒、化学反应等，在色谱板上的斑点处产生可见的色谱带。
通过比较样品斑点的运动距离和标准物质的运动距离，可以推断待分析样品中的物质成分。
薄层色谱法具有操作简便、速度快、分离效果好等优点，因此广泛应用于化学、生物等领域的物质分离和分析。
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薄层色谱（Thin-Layer Chromatography: TLC）是在玻璃板上，塑料片或者铝箔覆盖有很薄的一层吸附剂的一种用于分离混合物的色谱法。
薄层板展开的方法是其中一端被溶剂浸润后，溶剂在吸附剂的间隙中扩散，溶剂往上方移动进行爬板（毛细管现象）。
如果在板子上点样混合物的话，那么化合物也会随着溶剂的移动而移动。
这个时候，由于化合物与固定相（吸附剂）的吸附度，移动相（溶剂）的亲和性的差异，混合物中各个化合物的移动速度与移动距离（Rf值）也不同。
也是利用这个原理，该方法可以用于有机化合物的分离纯化。
特别是在有机合成中，作为吸附剂的有硅胶，矾土，纤维素等等，展开溶剂的话通常有乙酸乙酯/正己烷体系，二氯甲烷/甲醇体系等等，根据具体情况运用到的体系也不同，这里就不多举例了。
TLC点板与跑板方法（出处：）
TLC跑板法可以称为追踪一个反应的眼睛，是十分简便但又特别重要的分析手段。
往往不重视TLC或者对此方法掌握的不是很好的人，做实验也是多少有点问题的。
而怎样点板比较好呢？通常如上图所示，左边是原料，右边是混合物，中间是原料与反应混合物，这样的一个点板方式小编认为是比较推荐的。
而中间的这个原料与反应混合物叠加的点有以下三点作用：
由于展开的方法问题有可能造成爬板的时候不是直线爬，所以有时候原料与反应混合物的Rf值可能差距不大，会分不清楚
避免由于反应混合物中溶剂残留的问题，影响到Rf值
有时候反应混合物在点板的时候会分解，有可能观测不到。
除了以上三点以外，我想这样点板还有很多好处，希望能够作为参考。
另外展开后，如何确认点的位置，一般我们用UV 或者显色剂的方法来观测，这在我们chem-station 以前的文章（各种TLC显色剂的调配方法）中有详细阐述，有需要的同学可以作为参考。