医院细胞遗传室人羊水细胞培养及染色体制备作业指导书
高分辨外周血染色体制备与羊水细胞培养课件
细胞培养
将离出细胞种植适宜培 养基中，进行培养。
观察与记录
定期观察细胞生长情况 ，记录细胞形态、数量
等数据。
羊水细胞培养注意事项
01
02
03
04
无菌操作
整操作过程需无菌条件进行， 避免感染。
细胞鉴别
确保所培养细胞羊水中胎儿细 胞，而非母体细胞。
培养基选择
选择适宜、高质量培养基，保 证细胞生长繁殖。
细胞培养
将样本接种培养基中 ，适宜温度湿度条件 培养。
细胞固定
使固定剂将细胞固定 载玻片便染色。
染色
采高辨染色技术细胞 进行染色，便观察染 色体结构。
显微观察
使显微镜观察染色后 细胞，记录染色体形 态数目。
实验技巧享
细胞培养技巧
保持培养基清洁适宜温度，定期更换培养基 ，维持细胞生长。
染色技巧
根据同染色需求选择合适染色剂，控制染色 时间浓度。
综合征、威廉姆斯综合征等。
染色体结构异常
染色体结构异常可能导致身体畸 形、器官发育全等症状，如猫叫 综合征、Duchenne肌营养良症
等。
染色体基因突变
除染色体数目结构异常，基因突 变也可能导致遗传性疾病。高辨 染色体析可发现基因突变，进而
确诊相关疾病。
05
实验操作与技巧
实验操作流程
样本采集
采集外周血或羊水样 本，确保无菌操作， 避免污染。
固定技巧
选择适当固定剂，控制固定时间浓度，确保 染色效果。
显微观察技巧
选择适当显微镜倍数，调整焦距光源，便清 晰观察染色体形态。
实验安全须知
无菌操作
确保所操作无菌条件进行，避免交叉 污染。
防护措施
羊穿的方法及制备
羊水细胞培养染色体制备常规一、羊膜腔穿刺的时间及方法：1、羊膜腔穿刺的时间：最理想是在妊娠16~20周进行羊膜腔穿刺。
2、羊膜腔的穿刺方法：1）B型起声定位穿刺点，预先确定胎盘和胎头部位，尽量避开胎盘附着处进针。
2）、嘱孕妇排尽尿，以使膀胱空虚。
3）、检查穿刺部位的皮肤有无疖肿、皮炎，感染等不适合穿刺的情况。
4）、仰卧手术台上，然后嘱病人翻身数次，以使羊膜腔内脱落的细胞悬浮。
5）、恢复仰卧位后，按常规消毒腹部皮肤，铺上消毒孔巾。
6）、穿刺针通过腹壁、子宫，进入羊膜腔的过程中，术者会体会到三种不同的弹性阻抗性。
当估计穿刺针已进入羊膜腔后，轻轻抽出穿刺针针芯，接上无菌注射器。
7）、为了防止穿刺时注射器针头内混有母体细胞，可将先抽出的1~2ml羊水弃去，然后更换注射器再抽取羊水15~20ml，注入无菌、带盖的离心管内，供羊水细胞培养用。
8）、抽出羊水标本立即送至实验室进行培养。
二、羊水细胞培养：1、离心（1000~1500r/min）5分钟。
2、无菌环境中，吸出上清液留作其它检验用。
将剩下的0.5ml沉淀物轻轻打均。
用无菌滴管吸取沉淀悬液，分别平铺于两个无菌羊水培养瓶内。
3、吸取F10培养液2.1ml和小牛血清0.9ml于羊水培养瓶内，轻轻摇匀，塞紧瓶塞放入37°C培养箱内静置培养。
4、换液，于培养6~7天，将羊水培养瓶置接种箱内，吸出（倒出）瓶内培养液，加入新鲜F10培养液2.1ml和小牛血清0.9ml，塞紧瓶塞。
5、倒置显微镜下观察细胞生长情况。
如已贴壁生长，以后每天置倒置显微镜下观察一次。
6、当羊水瓶瓶壁布满圆形细胞或出现几个小岛布满许多圆形细胞。
每个圆形细胞饱满，边缘清晰，胞核清楚，内含丝状物。
细胞肿胀似阿米巴原虫伸出的伪足，象要破裂似的。
有的圆形细胞透亮，成双成对。
此时羊水培养的细胞可以收获。
一般9~12天可以收获。
收获前视细胞生长情况更换新鲜培养液。
7、于培养终止前4~6小时，每个培养瓶中加入秋水仙素，最终浓度为2~3ug/ml放入温箱继续培养。
下载人类染色体标本制备经验手册3.0
羊水细胞和绒毛膜组织专用培养基使用说明书一.产品介绍体外的羊水细胞与绒毛膜培养是每一个细胞遗传学实验室的重点工作，因为核型分析所需的中期(metaphase)染色体有赖于获得处于分裂状态下的细胞。
羊水穿刺与绒毛膜取样是现今主要的侵入性手段用于胎儿染色体异常的诊断。
BIOAMF-2 是一种改良的培养基，专门用于培养原代(primary culture)羊水细胞与绒毛膜组织以用于产前诊断。
本培养基处于冷冻状态并已添加谷氨酰胺(glutamine)和各种抗生素，开瓶即可使用。
注意事项和声明1. 体外诊断用。
本培养基不可用于治疗。
2. 如发现有任何沉淀物则请勿使用。
3. 使用本公司产品并不保证一定能取得任何有效的产前诊断结论。
4. 如超过瓶上的使用期限则请勿使用。
二.贮存和有效期BIOAMF-2培养基应保存于-20℃，有效期为18个月。
溶解后应存放于2-8℃，并于1周内使用。
存放时注意避光。
使用方法将BIOAMF-2培养基于2-8℃溶解后上下颠倒混合均匀。
注意：本培养基为完全配方(complete medium)已含谷氨酰胺(L-glutamine)和各种抗生素，开瓶即可使用。
三.使用范围BIOAMF-2培养基可用于：-- 初级羊水细胞培养-- 传代羊水细胞培养-- 绒毛膜细胞培养本培养基适用于开放与封闭式培养条件。
建议每片盖玻片上用2.5ml羊水细胞。
四.操作流程仅供参考注：所有操作均因应在无菌环境下进行1) 盖玻片培养法1. 将20ml羊水离心220g, 10分钟。
2. 小心的将上清羊水吸出，留0.5ml。
3. 加入3.5ml BIOAMF-2培养基并轻柔搅拌。
4. 将灭菌后的盖玻片（直径30mm）放在细胞培养皿（直径35mm）中，共4份。
每片盖玻片加上0.5ml悬浮培养液，加盖。
5. 放入37℃、5%CO2培养箱中培养。
6. 第二天在盖玻片上加1.5ml BIOAMF-2培养基。
7. 5天后检查盖玻片上细胞生长情况。
细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）
细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）外周⾎培养及染⾊体的识别 (2)⽩⾎病⾻髓及外周⾎染⾊体 (7)外周⾎细胞脆性位点检测技术 (9)⼈⽺⽔细胞培养收获操作程序 (11)绒⽑细胞培养和染⾊体分析 (13)⾼分辨染⾊体操作⽅法和识别 (15)GII式显带法 (21)N式显带法 (21)R(反式)显带法 (23)姐妹染⾊单体互换（SCE）技术 (23)荧光原位杂交操作程序 (25)附:细胞遗传学实验试剂配制标准操作规程（SOP） (27)天平称量操作规程 (27)药匙处理操作规程 (27)PBS配制规程 (28)胰酶配制规程 (28)培养基配制规程 (29)1N HCL配制规程 (29)1N N A OH配制规程 (29)外周⾎培养及染⾊体的识别1. 原理：外周⾎中的淋巴细胞⼏乎都是处在G0期或G1期，⼀般情况下是不分裂的。
当在培养基中加⼊植物⾎凝素（Phytohaemagglutinin PHA）时，这种⼩淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，并开始进⾏有丝分裂。
经过短期培养后，⽤秋⽔仙素处理就可获得⼤量中期分裂相的细胞，制⽚后可以清楚地对染⾊体进⾏观察与分析。
2. 外周⾎培养与收获操作步骤：2.1 采⾎：⽤20:1肝素（0.4%）温润⽆菌注射器抽取外周⾎5ml（注意：消毒时需脱碘）。
2.2. 种⾎：将注射器搓捏，使⾎样混匀，在⽆菌条件下，⽤7号针头垂直种⾎0.3ml±抗凝⾎（成年男⼦28滴，成年⼥⼦30滴左右，⼉童32滴）⾄外周⾎培养基内。
2.3. 培养：将培养瓶放⼊37℃恒温箱中培养68-72⼩时，注意第⼆观察培养液有⽆凝⾎、溶⾎或长菌的现象，可每天培养液摇⼀摇，以便细胞可获得充分的营养，但⼀般情况下可不摇。
2.4. 制⽚过程：2.4.1. 加秋⽔仙素：在培养完成前2-3⼩时，加⼊浓度为20ug/ml的秋⽔仙素2-3滴（7号针头竖滴）后，继续培养2-3⼩时。
医院羊水细胞染色体检查工作制度
医院羊水细胞染色体检查工作制度
1.依据病史和/或产前筛查结果，医生建议抽取羊水进行产前诊断，首先要填写知情同意书，尊重孕妇的选择。
2.检验单要填写规范、清楚和完整。
3.抽取羊水、接种羊水细胞要严格无菌操作并记录接种时间。
4.及时收取羊水细胞、制片、认真细致进行镜下检查。
5.检验后填写报告单时只标明染色体核型是否正常，需报具体核型必须符合产前诊断要求。
6.性别鉴定，须计生部门和医疗单位出具证明。
7.标本片保存日期待定，没有得到明确规定前一直保存。
羊水细胞培养及染色体制备方法的探讨
羊水细胞培养及染色体制备方法的探讨【摘要】目的：探讨羊水细胞培养及染色体制备方法。
方法：孕15~29周具有产前指征的50例孕妇，抽取羊水细胞培养6~7天，换液第二天取出观察，见有许多大而亮圆的分裂期细胞时，加入秋水仙素继续培养1小时后收获、低渗、固定、制片、消化、染色。
结果：50例羊水细胞培养全部成功，成功率100%。
有49例获得满意的染色体分裂相。
结论：该方法细胞培养成功率高、有效分裂相多、实验稳定、易于操作、成功率高。
【关键词】羊水细胞培养；染色体制备；方法羊水细胞培养及其染色体制备技术是胎儿染色体病产前诊断的重要手段。
由于羊水细胞培养技术要求高、羊水中活细胞少、培养周期长、易污染、分裂相少；细胞收获、低渗、固定、显带、染色诸多环节，相对于外周血染色体的制备，羊水细胞染色体制备的难度较大，任一环节不合适都可能导致失败。
针对上述情况，借鉴国内外的一些经验[1~5]，我们摸索出了一种简便、易行，提高羊水细胞培养及染色体制备成功率的方法，收到良好效果，现报道如下。
1 材料与方法1.1 材料：（1）标本来源：选择来我院遗传门诊咨询的15~29孕周，年龄25~45岁疑有染色体病胎儿的孕妇50例，其中产前筛查后，风险率大于1/270的40例，年龄大于35岁的孕妇10例。
（2）培养器皿：CO2培养箱，纯度99.99%的CO2，25 ml培养瓶（CORNING，型号：3289），离心机，倒置显微镜等。
（3）试剂：羊水培养基购自浙江贝因美公司。
20 ?滋g/ml的秋水仙素，1%的柠檬酸三钠，0.075 mmol/L的KCl，0.25%的胰蛋白酶，固定液由甲醇与冰醋酸按3∶1比例配成。
1.2 方法1.2.1 标本采集：嘱孕妇平卧在手术床上，让其左右翻身10次左右，以使羊膜腔内脱落的细胞悬浮，在B超引导下，用7号穿刺针经腹抽取羊水，先用5 ml 注射器抽出2 ml羊水丢弃，再换用20 ml注射器抽取羊水20 ml，并迅速送到无菌间。
羊水细胞原位培养法
［ ］ Ｓ ｅ， Ｗ．Ｊ Ｗ． Ｂｅ： ６ Ｌ ｎ ｔ Ｉ ４ ｔｌ Ｍ． ， ｅｅ ｒ ． Ｒ ｒ １ ． ｃ ， ． ｇ ９ ６ ａｅ ：
３３ ３５ ８－ ８．
［ ］ ＷａＩｏ ， ， ｓ ｔ Ｂｒｃ： ０ ＬｎｅＩ ５ ｈ ｔ ＪＡ Ｂ ｓ Ｆ， ｔｈ １７． ｃｔ ｓｍ ． ｒ ｅ ． ａｓ ９ ｏ ａ Ｉ ：
产前诊断之后，此项技术已成为产前诊断的一 个重要手段。然而，羊水细胞是胎儿皮肤等的 脱落细胞， 大部分是固缩的， 死亡的， 只有一部 分是活细胞， 且随着妊娠周数而变化［， ［ 不同妊 ｓ １
培养箱时将盖拧松， ｃ ， 使 ｏ 容易通人。 ３培养过程 ． 羊水抽出后，立即送往实 验室，８０ 分离心 ５ ０ 转／ 分钟， 吸弃上清液，留 ２ｌ ｍ 上清液与细胞沉淀物混合，使呈均匀的细 胞悬浮液。 一般 １ｍ 羊水可以培养 ２ ５１ 个塑料 培养瓶 （ ｌ 每ｍ 悬浮液内约含 １ ７Ｘ１＇ ５Ｘ ０ －２ １＇ ０ 的细胞数）每瓶内加混合培养基 ４ ｌ ， ｍ ，羊水
（ 甲醇 ： 冰醋酸为 ３ １ ：）混匀 ， 预固定 ５分钟。预 固定后再吸弃 ２ 又加人等量固定液， ｍｌ ， 固定 ５ 分钟后，将瓶内液体全弃尽，加人新鲜固定液 ５ ，固定 ２ 分钟， ｍ１ ０ 最后将 固定液全倒掉， 立即
１ｍ，分装二个离心管内备用。一般在取材后 ５１ ２ 小时内进行培养， ４ 效果较好。 （ 二）羊水细胞培养 １培养基 ． 为混合培养基， 其中含Ｆ 培 ｌ ｏ 养液 ７ ，小牛血清 ３ ，在每 ｍ 混合培养 ０ ０ ｌ 掖中， １０ 加 ０ 单位青霉素和 １０ｇ ０／ 链霉素。培 ｚ 养基的 ｐ Ｈ为 ７ －７ ０ ． ． ０ ２
遗传
Ｈ ＥＫＥＤ Ｉ Ａ Ｓ Ｔ
（ ｅ ｉｇ ５ ３ ： ２ ４ １ ８ Ｂ ｉｎ ） （ ） ４ － ； ９ ３ ｊ
医院细胞遗传室常用实验溶液试剂的配置作业指导书
医院细胞遗传室常用实验溶液试剂的配置作业指导书1目的规范试剂的配制，为临床实验的可靠性提供质量保障。
2原则专人负责，一剂一皿，一配一录，双人核签。
定期校对，可溯源。
3性能特征规范试剂的配制，为临床提供准确稳定有效的试剂，减少人为因素对临床试验结果的影响。
4 方法化学实验试剂的配制方法5 试剂与耗材量筒、烧杯、玻棒、电子称、量杯、容量瓶、定容瓶、油纸、药勺、100ul 加样枪、100ul 枪头6 操作步骤6.1 生理盐水准确称取氯化钠（NaCl ）（生产商xxxx, 批号xxxx 有效期xxx）8.5 g,加二蒸水溶解定容至1L,待充分溶解混匀装瓶，贴标签（配置日期、药品名称、浓度、用途、有效期、配制双人），记录双人签名6.2 0.075M 氯化钾溶液氯化钾（KCI）5.587g ,加二蒸水至1000ml,室温保存，用于细胞低渗处理。
6.312X SSC 溶液氯化钠（NaCl）105.3g柠檬酸钠（Na3C6H3O7• 5H2O）52.94g加二蒸水至1000ml，室温保存，临用时用二蒸水稀释至所需浓度。
6.40.25%胰蛋白酶溶液（Trypsin ）胰蛋白酶粉末（1:250）250mg无Ca2+, Mg2+的PBS 加至100ml先用少许消毒的PBS 将胰蛋白酶粉末溶解，再补足PBS 至100ml，搅拌混匀，置4C冰箱4小时，用0.22um微孔滤膜除菌，分装成小瓶于-20 C保存，用于消化细胞。
6.5Giemsa 染色液Giemsa 储备液：配制：Giemsa粉末1g加少许甘油混合研碎宀共计加入甘油66ml，充分混匀-倒入烧杯中在55-60 C水浴中加热2 小时T冷却T加入甲醇66ml，充分混合—在室温中静置2-3 周，过滤贮存于棕色瓶中，可长期使用。
6%Giemsa 工作液：47ml 蒸馏水中加入Giemsa 储备液3ml，用于染色体标本的染色，一般染色时间为10-20分钟。
6.6 无钙镁离子溶液氯化钠（NaCl）8 g氯化钾（KCl ）0.2g柠檬酸三钠（Na3C6H5O7?2H2O）1g 磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）0.05g 碳酸氢钠（NaHCO 3）1g 葡萄糖1g依次溶于二蒸水，最后加二蒸水至保存于4C冰箱备用。
高分辨外周血染色体制备与羊水细胞培养课件
行培养。
染色体分析
经过一定时间的培养后，采用 显微技术对胎儿细胞的染色体
进行分析。
羊水细胞培养的注意事项
适应症与禁忌症
羊水细胞培养适用于产前 诊断，但存在一定的风险 ，需严格掌握适应症和禁 忌症。
并发症
羊水穿刺可能导致感染、 出血、流产等并发症，需 严格消毒并确保操作规范 。
。
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THANKS
通过羊水细胞培养，可以了解 胎儿的染色体数目和结构，预 测是否存在遗传性疾病风险。
羊水细胞培养是产前诊断的重 要手段之一，有助于优生优育 。
羊水细胞培养的步骤
01
02
03
04
采集羊水
通常在妊娠16-20周进行羊水 穿刺，抽取约20毫升羊水。
羊水处理
将羊水离心后去除上清液，收 集沉淀的胎儿细胞。
细胞培养
高分辨外周血染色体制 备与羊水细胞培养课件
目录
CONTENTS
• 高分辨外周血染色体制备 • 羊水细胞培养 • 高分辨外周血染色体制备与羊水细胞培
养的应用 • 高分辨外周血染色体制备与羊水细胞培
养的挑战与展望
01 高分辨外周血染色体制备
染色体制备的基本原理
01
染色体是细胞核中的遗传物质， 通过染色体制备可以将细胞中的 染色体分离出来，以便进行遗传 学分析和诊断。
结果解读
染色体分析结果较为复杂 ，需由专业医生进行解读 ，并提供遗传咨询。
03 高分辨外周血染色体制备 与羊水细胞培养的应用
在遗传学研究中的应用
遗传疾病研究
高分辨外周血染色体制备与羊水细胞培养技术可用于研究遗传性疾病的发病机 制、基因突变类型和遗传模式，为遗传性疾病的预防和治疗提供科学依据。
产科羊膜腔穿刺作业指导书
产科羊膜腔穿刺作业指导书时间：羊水细胞培养染色体核型分析应在妊娠16〜23周进行。
【适应证】(一)产前诊断1.胎儿性别的诊断,适用于某些伴性遗传的遗传性疾病。
2.遗传性疾病的诊断。
（1）曾分娩过染色体异常的婴儿如唐氏综合征（先天愚型）。
（2）夫妇双方或其亲属有遗传性疾病者。
（3）近亲结婚者。
（4）高龄产妇(35周岁以上）。
3.唐氏综合征筛査。
4.孕早期曾患过严重的病毒感染或接受较大剂量放射线，服用过可能致畸药物。
AFP测定已排除胎儿神经管缺陷。
（二）了解胎儿成熟度对髙危妊娠孕妇，孕周在34周以下，须终止妊娠者，了解胎儿成熟度。
（三）羊膜腔注药1.死胎引产。
2.可经羊膜腔内注射肾上腺皮质激索，促胎肺成熟。
3.严重母儿血型不合而须做胎儿宫内输血。
4.为排除胎儿体表畸形或消化道畸形等，羊膜腔内注入造影剂可显示胎儿体表形态，并且当胎儿吞人造影剂后可显示胃肠道有否畸形。
（四）治疗羊水过多、过少急、慢性羊水过多胎儿无明显畸形时，做羊膜腔穿剌放出适量羊水；羊水过少则向羊膜腔中注人生理盐水，以延长妊娠时间，提髙胎儿存活率。
【操作方法及程序】术前排空膀胱取仰卧位。
确定穿刺点，一般选在宫底下二横指，腹部最隆起部位的两侧。
或在B超指引下选择穿剌点。
以穿刺点为中心消毒并向外围扩大，半径不小于10cm，铺无菌孔巾。
穿刺点可局部以0. 5%利多卡因浸润麻醉。
以7号无菌穿刺针垂直刺人，经腹壁及子宫壁两次阻力后进入羊膜腔时可有明显的落空感。
拔出针芯，见羊水溢出，用注射器抽取羊水20ml,立即送检。
拔除穿刺针，盖以无菌敷料。
【注意事项】1.手术需在手术室或具备严格消毒环境的产房内进行，谨防感染。
2.穿刺前必须排空膀胱以避免损伤。
3.在B型超声引导下进行手术时，先B超测定胎盘位置,然后避开胎盘选择羊水较多区做穿刺,穿剌点宜在中线附近，以防因穿剌针损伤宫旁血管引起内出血。
4.进针不宜过深，以防伤及胎儿。
5.抽不出羊水，可能因针孔被羊水中有形成分阻塞，如用有针芯的穿剌针则可避免；此外应注意穿刺部位、方向或深浅是否合适，往往经过调整即可抽出。
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医院细胞遗传室人羊水细胞培养及染色体制备作业指导书
1目的
规范羊水标本细胞培养及染色体制备过程，为临床羊水细胞染色体核型分析可靠性提供质量保证。
2测定方法
CO2培养/手工收获。
3测定原理
人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养，但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。
在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞，依据其外形和生长特征可分为以下三类：上皮细胞（E）、成纤维细胞（F）和羊水细胞（AF）。
E 细胞在胰酶消化的连续培养中不再生长，所以在培养过程中的生长期最短。
AF细胞在培养初期就长得很好，染色体分析大多用这类细胞。
F细胞在培养中的生长期最长，在较老的羊水培养物中占优势。
通常在培养后3-4天（可能更早些）即出现E细胞的集落，它们不适合作染色体分析。
大约在第7天出现的AF细胞可用于染色体制备。
如果在培养后第10天还未见长出新的细胞，就应考虑第二次羊膜穿刺。
4 性能特征
经G显带处理后可见300-550条显带。
5 样本类型及受检者准备
在无菌条件下抽得妊娠16-22+6周羊水后，注入15ml一次性离心管中，约抽30ml，立即送检。
6试剂
6.1 完全培养基100ml：在超净工作台内，用移液管将培养
基和其他各试剂分装入100毫升无菌瓶中（商业化培养基或F10培养基70ml，胎牛血清30ml，双抗：青霉素和链霉素，终浓度为100U/ml，用3.5%碳酸氢钠调节pH 为7.2-7.4）。
6.2秋水仙素浓度：20μg/ml。
6.3低渗液：0.075mol/L的KCl溶液
6.4卡诺固定液
6.5 0.25% EDTA-trypsin
6.6 生理盐水
7 仪器及耗材
酒精灯，烧杯，天平，离心机，CO2培养箱，冰盒，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器（5ml），离心管，无菌吸管，量筒，培养瓶，试剂瓶等。
8 操作程序
8.1 细胞接种与培养
8.1.1 在无菌条件下抽得妊娠16-22+6周羊水后，注入15ml
一次性离心管中，约抽30ml，
立即送检。
8.1.2以1500rpm离心10min。
8.1.3进接种培养室，在超净工作台上吸去上清液，每管约
留0.5ml，吸管打散细胞。
制成细胞悬液，再加入约
4.5ml完全培养基入管内，吸管充分混匀，移至25cm2
方形培养瓶中，置含5%CO2的37℃温箱行开放式培养。
8.1.4一般5天后镜下观察，可见成纤维样或上皮细胞生长，
当细胞生长旺盛，在贴壁细胞层的背景上出现圆形细胞
时，视情况（有较好的梭形细胞克隆）可换上完全培养
基，继续培养24-48小时，如细胞生长状况好，即可加
入秋水仙素0.04 -0.08µg/ml, (1ml注射器垂直加
20µg/ml秋水仙素2滴)4-6小时左右后行细胞学处理。
8.2 细胞收获
8.2.1倒出瓶中细胞上清液入10ml离心管中，生理盐水冲洗
培养瓶细胞面两遍。
8.2.2 使用0.25% EDTA-trypsin消化3-5分钟，待细胞面出现肉眼可见皱形改变时即用吸管吹打细胞，加入上清液或完全培养基终止消化。
8.2.3收集细胞悬液：离心，1500rpm，10min，去上清。
8.2.4低渗：加入0.075M KCl 4-6ml，吸管吹打，37℃水浴3-5min。
8.2.5预固定：加入1.5ml固定剂，轻混匀37℃水浴5min，
离心,1500rpm,10min。
8.2.6固定：去上清，加入固定剂8ml左右，轻混匀，37℃
水浴10min。
8.2.7室温1500rpm离心10min，去上清，约留0.5ml。
8.2.8 重复固定：同第7步。
8.2.9 离心，1500rpm，10min，去上清。
8.2.10根据管底细胞量适当加入几滴新鲜固定剂。
8.2.11滴片：每片1-2滴。
8.2.12 烤片：75℃烤箱烘烤3小时。
8.2.13 第二天行显带处理，详见7.1。
9 参考范围
9.1 染色体数目：46,XN ；
9.2 染色体结构：无明显结构异常。
10潜在变异来源
10.1 不排除细胞培养过程中发生突变的可能性，从而导致染色体数目或结构改变，因此应严格执行2-3线平行操作，以发现因培养过程导致的结果异常。
10.2 羊水标本应及时送检，送检过程中不宜受热或冰冻，实验人员收到羊水后应先观察羊水是否清亮，含胎脂的多少及是否为血性羊水；羊水中少量红细胞不需处理,如有明显血性羊水,立即在羊水中加入无菌肝素一滴。
10.3 接种所用器皿要进行严格的灭菌处理。
10.4离心时，一定要注意离心机内温度，必须达到室温方可
离心。
10.5培养基pH为7.2-7.4也是羊水细胞开放式培养成功的关
键，而密闭培养的pH为6.8-7.0。
10.6 注意接种时培养基不能加得过多，卧倒瓶子时，培养基不能接触瓶盖；
10.7羊水培养首先必须有好的培养基，传统的培养基是在
F10中加入一定比例的胎牛血清,由于营养成份较少,羊水细胞培养所需时间较长,培养成功率低。
目前大多数实验室已经采用商业化培养基（必须具备三证），稳定且重复性好。
10.8要根据细胞的生长状况，来决定所要收获的时间。
抓住
细胞生长旺盛时期相当重要，如羊水为血性羊水或胎脂较多需给予不同的处理。
要收获较多的分裂相,必须在适当的时机收获。
收获标准：于10倍目镜和4倍物镜下观察:
①以梭长形羊水细胞(AF细胞)为主要类型的生长细胞,形
成的细胞克隆覆盖1个或1个以上的完整视野。
②培养瓶中有2～3个以上细胞克隆,且每个细胞克隆中存在有20个以上的圆形、双圆形或葡萄状透亮细胞。
③细胞克隆中央的细胞开始老化,克隆周边细胞生长旺盛。
10.9收获细胞时要掌握好低渗时间及低渗液的量，吹打时力
度要均匀，滴片浓度不能太高，以免染色体不分散。
培养
收获时间大多数为8～9天,最早收获在第7天,最长14天。
显带时，胰酶消化时间一般比外周血要稍短，但需根据其胰酶活性而定。
11 环境和安全控制
11.1 试剂中含有防腐剂和稳定剂,请勿直接接触皮肤、眼睛、黏膜，一旦接触，立即用大量清水冲洗；受检标本均应假定含有传染性病原菌，其废弃过程应遵循实验室《生物安全管理程序》进行处理；
11.2 实验过程中应严格控制环境及实验仪器/设备的温度、湿度等相关条件，以确保实验条件稳定。