幽门螺杆菌相关性胃炎患者趋化因子IP-10、Mig的表达研究
幽门螺杆菌相关性胃炎患者趋化因子IP-10、Mig的表达
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中 国 人 兽 共 患 病 学 报
ｇ ｎ～ ， Ｏ 、 Ｃ趋 化 因 子 单 核 细 胞 趋 化 蛋 白 ｅ ｅａ ＧＲ — ） Ｃ
（ ｎ ｃ ｔ ｂ ｍｏ ｔｒ ｃａ ｔｐ ｏ ｅｎ，Ｍ ＣＰ １ 、 常 ｍｏ ｏ ｙ ｅ ｃ ｅ ａ ｔａ ｔｎ ｒ ｔｉ 一 ）正
１ ５ 统计 学 分 析 统 计数 据 以均 数 ±标 准差 （ ． ±
ＮＫ 细胞 、 巴细 胞 等在 炎 症 部 位 聚集 、 化 与 淋 活 参
组织 损 伤和 修复 。 国内外 已有关 于 Ｈｐ相关 性 胃炎
中 Ｃ Ｃ 趋 化 因子 白 细 胞 介 素一 （ ｔｒ ｋｎ ８ Ｌ Ｘ ８ ｉ ｅｌ ｉｅ ，Ｉ 一 ｎ ｕ
８ 、 长 相 关 癌 性 基 因 （ ｏ ｈｒｇ ｌｔｄ ｏ ｃ — ）生 Ｇｒｗｔ — ｕａｅ ｎ ｏ ｅ
其 受体 共 同作用 趋 化 、 活 中性 粒 细胞 、 核细 胞 、 激 单
＊安徽 理 工 大 学硕 博 基 金 （ ｏ２ １ＹＢ ０ ） 皖 南 医 学 院 中 青 年 基 Ｎ ０ ０ ０ ４ 和
金 项 目（ ＷＫ２ Ｏ Ｏ ） 合 资助 Ｏ８８联 通 讯 作 者 ： 金 红 ， ｍａｌ ｈｈ ｈ ｏ ｙ ｈ ｏ ｃ ｍ． ｌ 赵 Ｅ ｉ ｊ ｊ ｚ ａ ＠ ａ ｏ ． ｏ Ｃ ： ｑ 作 者 单 位 ：． 徽 理 工 大 学 医学 院 ，淮 南 ２ ２ ０ １安 ３０１ ２ ．皖 南 医 学 院 ， 湖 ２ １ ０ 芜 ４０２
胡友 莹 ，赵金 红 ，汪雪峰 ，李朝 品 ， 克 霞 王 ，王 健
摘 要 ： 的 探 讨 幽 门螺 杆 菌 （ ） 关 性 胃炎 患 者 胃粘 膜 内趋 化 因子 Ｉ一０ Ｍｉ 表 达 水 平 。 方 法 ２ 目 Ｈｐ 相 Ｐ １ 、 ｇ的 ８例 胃炎 患 者 行 胃镜 检 查 钳 取 胃粘 膜 标 本 ， 据 ＨＥ 染 色 、 速 尿 素酶 试 验 及 石 炭 酸 染 色 ， 为 正 常 胃粘 膜 组 、 依 快 分 Ｈｐ 阴性 胃炎 组 及 Ｈｐ 阳 性 胃炎 组 ， 并对 Ｈｐ 阳 性 胃炎 组 的 炎 症 活 动 程 度 进 行 分 级 。 以 Ｅ ＩＡ 法 检 测 胃粘 膜 内 Ｉ一０ Ｍｉ 表 达 水 平 。 结 果 正 常 对 ＬＳ Ｐ １ 、 ｇ的 照组、 Ｈｐ 阴 性 组 、 Ｈｐ 阳 性 组 的 Ｉ一０ Ｍ ｉ 量 分 别 为 （ ０ ５ １． ） （ Ｏ ４ ２ ． ） （ ７ ． ± ３ ． ） ｇ・Ｉ 。 （ ４ １ Ｐ １ 、 ｇ含 ３ ． ± ４ ６ 、 ６． 土 ３ ８ 、 １９ ９ ０ ２ ｎ 和 ２． ± ＿ １． ） （９ ５ １． ） （６ ． ±３ ． ） ｇ・ ， 正 常对 照 组 相 比 ， 异 显 著 （ 别 为 Ｐ＜ Ｏ ０ 、 ４ ４ 、 ４． ± ９ ４ 、１ ０ ６ ４ ６ｎ Ｉ ～ 与 差 分 ． ５ Ｐ＜ Ｏ ０ ） 且 Ｈｐ 阳 性 组 Ｉ 一 ．１ ， Ｐ １ 、 ｇ的表 达 水 平 与 胃粘 膜 炎症 活 动 程 度 均 呈 正 相 关 （一 ０ ９ １ ， ０ Ｍｉ ｒ ．８ １ Ｐ＜ ００ １和 ｒ ． ９ ８ Ｐ ０ ０ １ 。结 论 Ｉ－０ Ｍｉ ．０ ：０ ９ ３ ， ＜ ． ０ ） Ｐ１ 、 ｇ 介 导 了 Ｈｐ相 关 性 胃炎 炎 症 细 胞 的浸 润 ， 成 胃粘膜 组 织 损 伤 ， Ｈｐ 相 关 性 胃炎 发 病 机 制 中起 一 定 作 用 。 造 在
IL-12、IL-10及CRP水平在幽门螺杆菌阳性胃炎患者中的表达
收稿 日期 ：０ １０ －６ ２１－ ２ ９
［］ ５ 门雪琳 ， 王永瑞． 辛伐他汀对 慢性 阻塞性肺病 患者缓解 期 的影 响研
究 ［ ］ 实用心脑肺血管病杂志 ， １ ， （ ）５ ４５６ Ｊ． ２ １１ ４ ： － ． ０ ９ ５ ５ 作者简介 ： 王正维 （ ９ ５一） 男 ， 苏海安 人 ， １５ ， 江 本科 ， 主任 医师。 副
阳性者确定为 Ｈ 感染 。２周内未接受过抗生素药物 ｐ 治疗 ； ２周内为使用过质子泵和 Ｈ 受体抑制剂 、 ： 铋剂； ２周内未服用过非 甾体类抗炎药。排除标准 ： 合并有
全身严重感染性疾病 ； 胃、 有 十二指肠手术史 ； 合并有 自身免疫性疾病 ； 合并有支气管哮喘病或炎性肠病史 。 选择同期在我院体检的 １ 例健康人作为对照组 ， 中 ２ 其 男 ７例 ， ５ ； 女 例 年龄 ３ ５ （ ４— ５ 平均 ４ ． ７２ 岁。两 ６９４ ． ） －
杨 玉宇 （ 中山市人民医院消化内科， 广东 中山 ５８０ ） ２４０
摘要： 目的 探讨 Ｉ—２ Ｉ－０及 Ｃ Ｐ水平在幽 门螺杆菌 （ ｐ 阳性 胃炎患者 中的表达 。方法 Ｌｌ 、 ｌ Ｌ Ｒ Ｈ） 选择 ２０ ０ ８年 ６月 一 ０ １ ２ １
年 ３ 在我院消化科住 院治 疗的 Ｈ 感 染 胃炎患 者 ３ 例作 为观察组 。选择 同２ ２ 对 照组。两组患者均接受 电子 胃镜及 胃镜黏 膜活检 术检查 。采 用双 抗体夹 心 Ｅ ＩＡ法测 定 胃黏膜组织匀 浆上 清液 中 ＬＳ
关键词 ： 幽门螺杆 菌 ； 胃炎 ；Ｌ１ ； －０ Ｃ 反应蛋 白 Ｉ一２ Ｉ １ ； － Ｌ 中圈分类号 ： ５ ３ ３ Ｒ ７ ． 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：０ １８７ （０ ２ ０ 一 １０ －１４ ２ １ ） １
幽门螺杆菌阳性与消化性溃疡患者IL-8、IL-10、IL-12及NF-κB表达的关系研究
幽门螺杆菌阳性与消化性溃疡患者IL-8、IL-10、IL-12及NF-κB表达的关系研究林海;杜奕奇;李淑德;姜新华;何小燕;毛建生;马莉莉;陈永明;何雪云【期刊名称】《现代中西医结合杂志》【年(卷),期】2008(017)035【摘要】目的研究幽门螺杆茵(H.pylori)与消化性溃疡(PU)患者胃黏膜IL-8、IL-10、IL-12及NF-κB表达的关系.方法采用荧光定量PCR法测定168例H.pylori 阳性和46例H.pylori阴性的消化性溃疡患者以及30例正常对照者的胃黏膜IL-8、IL-10、IL-12及NF-κBmRNA含量,H.pylori阳性患者清除H.pylori后复查.应用免疫组化检测IL-8、IL-10、IL-12与NF-κB在胃黏膜组织的表达.结果 H.pylori阳性组胃黏膜IL-8、IL-12及NF-κBmRNA含量较H.pylori阴性组和正常对照组明显增高(P均=0.000);H.pylori阳性患者清除H.pylori后胃黏膜IL-8、IL-12及NF-κB mRNA含量降低(P均＜0.05).免疫组化结果显示H.pylori阳性组较H.pylori阴性组以及正常对照组IL-8、IL-12、NF-κB表达明显增强(P均＜0.05).结论 H.pylori感染可以诱导胃黏膜合成和释放IL-8、IL-12及NF-κB,它们是引起PU炎症以及进一步病理损害的重要因子.【总页数】4页(P5415-5417,5435)【作者】林海;杜奕奇;李淑德;姜新华;何小燕;毛建生;马莉莉;陈永明;何雪云【作者单位】浙江衢化医院,浙江,衢州,324004;第二军医大学长海医院,上海,200433;第二军医大学长海医院,上海,200433;浙江衢化医院,浙江,衢州,324004;浙江衢化医院,浙江,衢州,324004;浙江衢化医院,浙江,衢州,324004;浙江衢化医院,浙江,衢州,324004;浙江衢化医院,浙江,衢州,324004;浙江衢化医院,浙江,衢州,324004【正文语种】中文【中图分类】R573.1【相关文献】1.IL-12、IL-10及CRP水平在幽门螺杆菌阳性胃炎患者中的表达 [J], 杨玉宇2.不同菌型幽门螺杆菌感染消化性溃疡患者IL-10、TNF-α的表达情况观察 [J], 程晓娜;胡阳黔3.消化性溃疡患者幽门螺杆菌感染与IL-8、IL-10、TNF-α的关系 [J], 郭志强4.幽门螺杆菌阳性的慢性胃炎患者血清IL-8、IL-10的变化分析 [J], 张少勇5.幽门螺杆菌阳性消化性溃疡患者胃黏膜核因子κB、β-防御素-2表达及其与胃窦炎症的关系 [J], 凌江红;李家邦;聂海明;蒋荣鑫;申定珠;韦宗平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达
GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达德吉央宗;李勇【摘要】目的探讨GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达．方法高压水动力尾静脉注射pCMV-tag2B空载质粒的12只小鼠为对照组，注射pCMV-tag2B-HBx质粒的12只小鼠为观察组．采用Elisa法检测IFN-γ表达；采用免疫组化法检测小鼠肝脏中MIG，IP-10表达；扩增MIG，IP-10基因至pET42a，构建载体后行IPTG诱导表达；采用PAGE和Western blot法鉴定蛋白表达；采用GST柱纯化表达蛋白。
结果对照组小鼠肝脏中无MIG，IP-10表达，观察组小鼠肝脏中有MIG，IP-10表达；观察组小鼠肝脏中IFN-γ表达升高21．4％，对照组降低了54．1％，与小鼠肝脏中MIG，IP-10表达一致；MIG基因条带为330 bp，IP-10基因条带为246 bp，经重组质粒测序模版检测，并与Blast进行对比，测序结果与目的基因一致；未诱导组无蛋白表达，pET42a空载IPTG诱导仅有GST表达（26 kD），pET42a-mMIG，pET42a-mIP-10重组质粒IPTG诱导有mMIG，mIP-10表达；25℃下，IPTG质量浓度为0．2 mmol/L，转速为150 r/min，GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白含量最高；上清经15％SDS-PAGE检测可提高目的蛋白纯度；采用Western blot检测融合蛋白，经GST柱纯化后可见融合蛋白条带．结论 GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体可成功构建，具有高效表达特征，为制备抗体提供了良好条件．%Objective To investigate the construction and expression of GST-MIG, GST-IP-10 fusion protein ptotokaryon vector .Method 12 rats treated high pressure hydrodynamic tail vein injection of pCMV-tag2 B plasmid were taken as control group and 12 rats treated high pressure hydrodynamic tail vein injection of pCMV-tag2B-HBx plasmid were taken as observationgroup .The expression of IFN-γwas detected by ELISA method;the expression of MIG and IP-10 in liver were detected by immunohistochemical method;MIG and IP-10 genes were amplified to pET42a.After the construction of vector ,IPTG expression was induced;the protein expression was detected by PAGE and Western blot method;the expression protein was purified by GST column .Results The results showed that there was no expression of MIG and IP-10 in the liver of mice in the control group ,while MIG and IP-10 expressions were found in the observation group .IFN-γexpression in the liver was increased by 21 .4%in the observation group and that in the control group was reduced by54 .1%, which was in agreement with MIG and IP-10 expressions;MIG gene band was 330 bp,IP-10 gene band was 246 bp,and it was verified that the gene sequence was consistent with that of the target gene after the recombinant plasmid sequencing template detection and through the comparison with Blast;There was no protein expression in the non-induced group,there was only GST (26 kD)expression induced by pET42a IPTG,mMIG expression induced by pET42a-mMIG,pET42a-mIP-10 recombinant plasmid IPTG;The mass concentration of IPTG at 25℃ was 0.2 mmol/L, and speed ,the content of GST-MIG,GST-IP-10 fusion protein was highest at 150 r/m;The purity of target protein in the supernatant could be improved by 15%SDS-PAGE and the fusion protein band could be seen with Western blot method after the fusion protein was purified by GST column .Conclusion GST-MIG, GST-IP-10 fusion protein protokaryon vector can be successfully constructed ,which has a characteristic of high efficientexpression and can provide good conditions for the preparation of antibody .【期刊名称】《北华大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(000)004【总页数】5页(P413-417)【关键词】GST-MIG;GST-IP-10;融合蛋白;原核载体;构建与表达【作者】德吉央宗;李勇【作者单位】西藏大学医学院，西藏拉萨 850000;西藏大学医学院，西藏拉萨850000【正文语种】中文【中图分类】Q78趋化因子是机体内与肝素相结合的一种小分子蛋白，可将周围的白细胞输送至机体的炎症部位，趋化因子与相应的受体结合后可引导单核细胞有效穿透机体，并在机体获得性免疫应答过程中起着重要作用[1-3].IFN-γ是CX3C家族中趋化因子中的一员，可有效诱导部分单核因子的合成表达，在体内诱导MIG基因和IP-10基因的表达[4].有研究[5-6]表明：过继性HBV特异性基因转移至小鼠后，会造成肝脏内趋化因子的大量生成，进而诱发MIG和IP-10的高效表达，通过特异的抗原识别，进一步激活肝脏非实质细胞.为了探讨GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达，此次研究选取小鼠24只，随机分为两组，行高压水动力尾静脉注射pCMV-tag2B空载质粒和pCMV-tag2B-HBx质粒，然后进行对比研究，以期探讨GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达的关系.1.1 研究对象周龄为6～8周的小鼠24只，平均为(7.3±0.6)周，其中雌雄各12只，购自四川省实验动物繁育中心.1.2 材料pCMV-tag2B空载质粒与pCMV-tag2B-HBx质粒均通过B型超纯大量质粒提取试剂盒进行提取(北京博大泰克科技有限公司)；限制性内切酶和DNA连接酶(Fermentas公司)；DNA Maker，Taq MasterMix，Pfu MasterMix(北京天根生化科技有限公司)；胎牛血清、RIPA裂解液、蛋白浓度测定试剂盒(江苏碧云天生物技术研究所)；GST蛋白纯化试剂盒(Thermo公司)；IFN-γElisa试剂盒(BD公司)；蒸馏水(娃哈哈纯净水，杭州)；琼脂糖(Biowest公司).1.3 仪器超净工作台(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)；高速电动匀浆器(江苏金坛市仪美仪器公司)；凝胶图像分析仪(上海培清科技有限公司)；电泳仪(北京留意仪器厂)；细胞培养箱(美国Hepa Fliter公司)；PCR仪、高速台式低温离心机、紫外分光光度计(德国Eppendorf公司)；酶标仪(澳大利亚Tecan公司)；电热恒温水槽(上海精宏实验设备公司).1.4 方法对照组高压水动力尾静脉注射pCMV-tag2B空载质粒，观察组高压水动力尾静脉注射pCMV-tag2B-HBx质粒：称15 μg质粒溶于PBS中，给予小鼠尾部红外线加热，10 s内将液体快速推入小鼠的尾静脉，4 d后采用颈椎处理方法处死小鼠，行PCR检测，确认存在HBx基因即可.1.4.1 免疫组化法检测小鼠肝脏中MIG，IP-10表达取小鼠肝组织后用4%多聚甲醛进行固定，然后切片.在60 ℃下烤片过夜，再依次放入二甲苯110 mL、二甲苯210 mL、无水乙醇10 mL、95%乙醇10 mL、80%乙醇10 mL、75%乙醇10 mL、水5 mL，使用50 μL 3%H2O2滴片，室温下湿盒内放置15 min以灭活内源性酶.将800 mL柠檬酸修复液煮沸，并将片子置于其中，加热10 min后自然冷却到室温.将50 μL羊血清用于滴片，37 ℃下湿盒内放置30 min，然后孵育一抗.使用羊抗鼠IP-10抗体单抗和兔抗鼠MIG抗体单抗(11 000稀释)，用量50 μL，在4 ℃下湿盒内放置过夜，使用PBS冲洗3次，5 min/次，然后孵育二抗.使用驴抗兔和兔抗羊二抗(11 000稀释)，用量50 μL，在37 ℃下放置湿盒内60 min，使用PBS冲洗3次，5 min/次.双蒸水1 mL与蛋白浓度测定试剂盒中A液、B液、C液各1滴进行混合，用量50 μL，显微镜下观察直到显色.冲洗10 min，使用苏木素染色，着色后冲洗5 min，然后进行脱水，一次放入75%乙醇5 mL、80%乙醇5 mL、95%乙醇5 mL、无水乙醇10 mL、二甲苯210 mL、二甲苯110 mL，风干后可封片.1.4.2 Elisa法检测IFN-γ表达肝组织0.05 g放置于1 mL RIPA裂解液中，提前加入PMSF，控制其浓度为1 mmol，然后匀浆，冰浴30 min，蛋白裂解后在4 ℃下离心10 min，设定转速为12 000 r/min.取上清液，然后固定酶标条，每个孔内加入Elisa Diluent 50 μL，然后加入稀释好的标准液和检测样本，震荡混匀后可封板，在室温下孵育2 h.准备好Working Detector，向孔内加入洗涤液300 μL，甩干清洗5次，最后用吸水纸吸干，加入配好的Working Detector 100 μL，封板后在室温下孵育1 h，然后洗板7次，控制间隔时间在1 min.加入TMB-One-Step Substrate Reagent 100 μL，在室温下避光孵育30 min，然后加入Stop Solution 50 μL，在30 min 的终止时间内进行酶标仪吸光度数值读取，设定波长为450 nm.1.4.3 在不同时间点下PAGE和Western blot法鉴定蛋白表达接种重组菌4 mL到4 mL含有100 μg/mL那霉素的LB培养液内，37 ℃下250 r/min震荡过夜.取50 μL过夜液接种到5 mL含有100 μg/mL卡那霉素的LB培养液内，37 ℃下250 r/min震荡3.5 h.取1 mL未诱导的培养液额外操作，剩余培养液加IPTG，控制质量浓度到1 mmol/L，37 ℃下250 r/min震荡，选择不同时间点(3，4，5，10 h)取1 mL样品，12 000 r/min离心1 min，将沉淀悬浮于80 μL PBS液中，加缓冲液20 μL，沸浴10 min，12 000 r/min离心1 min，放冰上降温，到室温后加入15 μL 15%SDS-PAGE，在100 V下进行电泳，直到溴酚蓝迁移到分离胶质底部，行考马斯亮蓝染色，观察条带.1.4.4 GST柱纯化表达蛋白将GST柱放置室温平衡，使用10 mL PBS平衡凝胶，控制流速1 mL/min.使用0.45 μm滤膜进行过滤，然后上样，同时控制流速1 mL/min，收集流出物后检测A280值.使用10 mL PBS冲洗凝胶3次，控制流速1 mL/min，检测流出物的A280值，直到A280值到0为止.加入2 mL洗脱液，在25 ℃下孵育10 min，收集流出物，重复洗脱蛋白3次.使用2 mL再生液1冲洗凝胶，控制流速1mL/min，再使用2 mL再生液2冲洗凝胶，控制流速1 mL/min，重复冲洗3次，使用5 mL PBS平衡凝胶，纯化后使用Western blot检测GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白.2.1 免疫组化法检测小鼠肝脏中MIG，IP-10表达免疫组化法检测小鼠肝脏中MIG，IP-10表达结果分析显示(见图1～4)：40倍镜下观察对照组小鼠肝脏中MIG抗体、IP-10抗体未见棕黄色染色，无MIG，IP-10表达，观察组小鼠肝脏中MIG抗体、IP-10抗体呈棕黄色阳性染色，有MIG，IP-10表达.2.2 Elisa法检测小鼠肝脏中IFN-γ表达Elisa法检测小鼠肝脏中IFN-γ表达结果中，观察组小鼠肝脏中IFN-γ表达升高21.4%，对照组小鼠肝脏中IFN-γ表达降低了54.1%，与小鼠肝脏中MIG，IP-10表达一致.2.3 pET42a-MIG，pET42a-IP-10载体构建和表达2.3.1 MIG，IP-10基因扩增结果MIG，IP-10基因扩增结果分析显示(见图5～6)：MIG基因条带为330 bp，IP-10基因条带为246 bp，经重组质粒测序模版检测，与Blast进行对比，测序结果与目的基因一致，表明MIG，IP-10表达载体可成功构建.2.3.2 pET42a-MIG，pET42a-IP-10表达结果2.3.2.1 GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白在不同时间点诱导表达结果GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白在不同时间点诱导表达结果分析显示(见图7～8)：未诱导组无蛋白表达，pET42a空载IPTG诱导仅有GST表达(26 kD)，pET42a-mMIG，pET42a-mIP-10重组质粒IPTG诱导有mMIG表达(38 kD)、mIP-10表达(35 kD).2.3.2.2 GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白在不同诱导条件下表达结果GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白在不同诱导条件下表达结果分析显示(见图9～10)：25 ℃下，IPTG浓度为0.2 mmol/L，转速为150 r/min，GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白含量最高.上清经15%SDS-PAGE检测可提高目的蛋白纯度.2.3.2.3 GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白鉴定结果GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白鉴定结果分析显示(见图11)：采用Western blot 检测融合蛋白，经GST柱纯化后可见条带.高压水动力尾静脉注射pCMV-tag2B-HBx质粒是目前用于检测基因变化的有效方法之一[7]，通过开展有效基因微阵列分析可以得到不同功能的基因，可为相关疾病的诊断和治疗提供有效的科学依据[8].HBx转基因能够引发体内趋化因子的改变，在机体内的各种炎症反应过程中起着重要作用，通过荧光定量PCR检测可以掌握机体内的趋化因子变化程度和相应基因的表达水平改变情况[9].HBx基因可直接诱导肝细胞MIG，IP-10基因表达的异常升高，而这两个基因在白细胞迁移与肝病发展过程中均起着重要作用.机体内通过大量分泌IFN-γ可有效刺激肝细胞与肝非实质性细胞加速分泌MIG，IP-10基因，同时机体内IFN-γ还可阻断趋化因子减少单核淋巴细胞聚集到肝脏，同时对CTLs 的抗病毒能力也不会造成影响[10].因而可将MIG，IP-10作为此次研究的靶点，进而构建MIG，IP-10的原核表达载体.本次研究中，对照组小鼠肝脏中MIG抗体、IP-10抗体未见棕黄色染色，无MIG，IP-10表达，观察组小鼠肝脏中MIG抗体、IP-10抗体呈棕黄色阳性染色，有MIG，IP-10表达，说明MIG，IP-10蛋白表达与基因保持了良好的一致性.观察组小鼠肝脏中IFN-γ表达升高21.4%，对照组小鼠肝脏中IFN-γ表达降低了54.1%，与小鼠肝脏中MIG，IP-10表达保持了高度的一致性.其中观察组IFN-γ表达明显升高，表明小鼠肝组织在HBx的诱导下可引起MIG，IP-10表达明显升高.MIG基因条带为330 bp，IP-10基因条带为246 bp，经重组质粒测序模版检测，与Blast进行对比，测序结果与目的基因一致.未诱导组无蛋白表达，pET42a空载IPTG诱导仅有GST表达(26 kD)，pET42a-mMIG，pET42a-mIP-10重组质粒IPTG诱导有mMIG表达(38 kD)、mIP-10表达(35 kD)，说明扩增基因在测序检验后证实确已克隆到pET42a，表明原核的载体构建非常成功.25 ℃下，IPTG 浓度为0.2 mmol/L，转速为150 r/min，GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白含量最高，上清经15%SDS-PAGE检测可提高目的蛋白纯度.采用Western blot检测融合蛋白，经GST柱纯化后可见融合蛋白条带，说明原核的表达载体经转化IPTG 有效诱导后经GST柱可得到高纯度的融合蛋白，效果较好.综上所述，GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体成功构建，具有高效表达特征，可为制备抗体提供良好条件.【相关文献】[1] 谭玉明，钟丽，陶晓杰，等.卒中后抑郁患者外周血单核细胞趋化因子受体1、锌指蛋白A20的表达及甲状腺功能的改变[J].中国新药杂志，2012，21(22)：2654-2666.[2] 李定良，巫相宏.急性冠脉综合征患者趋化因子CXCL16与GRACE积分的相关性及临床意义[J].当代医学，2011，17(3)：19-21.[3] 林青，王春平.调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子与子宫内膜异位症[J].中国实用妇科与产科杂志，2012，28(7)：558-560.[4] 李敏，熊英，母得志，等.机械通气前后早产儿动脉血中IFN-γ和IP-10的变化[J].中国当代儿科杂志，2012，14(7)：496-498.[5] 范梦柏，王秀娥，宋承平，等.细胞因子TN F-α、IFN-γ、IP-10对结核性胸腔积液诊断价值的研究[J].中国防痨杂志，2012，34(8)：550-552.[6] 曹京燕，李呼伦，孙博，等.人缺血脑组织中IP-10和IFN-γ的表达[J].中国免疫学杂志，2006，22(5)：422-425.[7] 王健，赵金红，江水清，等.丙型肝炎病毒慢性感染与IL-8、IP-10、Mig表达相关性研究[J].第三军医大学学报，2006，28(13)：1420-1423.[8] 赵金红，王健，江水清，等.慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中趋化因子IP-10和Mig表达及其与干扰素治疗的相互关系[J].中国实用内科杂志，2007，27(4)：285-288.[9] 丁艳，贾德胜，王宝香，等.γ干扰素诱导单核因子和诱导蛋白10在婴儿巨细胞病毒肝炎相关性研究[J].中华实用儿科杂志，2008，23(7)：523-525.[10] 王洪艳，龚守良，齐亚莉，等.骨髓间充质干细胞对放射性胸腺损伤的修复作用[J].北华大学学报：自然科学版，2011，12(3)：300-303.。
幽门螺杆菌感染时细胞因子基因多态性影响黏膜细胞因子表达、胃部炎症和宿主特异性建群
幽门螺杆菌感染时细胞因子基因多态性影响黏膜细胞因子表达、胃部炎症和宿主特异性建群Rad R.;Dossumbekova A.;Neu B.;C. Prinz;杨雪娟【期刊名称】《世界核心医学期刊文摘：胃肠病学分册》【年(卷),期】2005(000)001【摘要】Background and aims: Recent studies linked cytokine gene polymorphisms to H pylori related gastric cancer development.The current study evaluated the role of cytokine gene polymorphisms for mucosal cytokine expression, the gastric inflammatory response, and bacterial colonisation during H pyloriinfection. Patients and methods: In 207 Hpylori infected patients with chronic gastritis, polymorphisms at different loci of the interleukin (IL)-10, IL-1B, IL-1 receptor antagonist (IL-1RN), tumour necrosis factor (TNF)-A, and interferon (IFN)-G genes were genotyped by polymerase chain reaction (PCR), restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis,and allelic discriminating TaqMan PCR. Mucosal cytokine mRNA copy numbers were determined by real time quantitative PCR. Presence of bacterial virulence factors was investigatedby cogA, vacAs1/2, and babA2 PCR. Biopsies were assessed with regard to the degrees of granulocytic/lymphocytic infiltration and the presence of intestinal metaplasia (IM) and atrophic gastritis (AG). Results: Proinflammatory IL-1 polymorphisms(IL-1RN 2+/IL-1B-511T/-31C+ ) were associated with increased IL-1β expression, more severe degrees ofinflammation, and an increased prevalence of IM and AG.Carriers of the IL-10-1082G/-819C/-592C alleles (GCC haplotype)had higher mucosal IL-10 mRNA levels than ATA haplotype carriers and were associated with colonisation by more virulent cogA + , vacAs1+ , and babA2+ H pylori strains.The TNF-A-307 (G/A) and IFN-G+ 874(A/T) polymorphisms did not influence mucosal cytokine expression or the inflammatory response to H pylori. Conclusions: Cytokine gene polymorphisms influence mucosal cytokine expression, gastric inflammation, and the long term development of precancerous lesions in H pylori infection. Host polymorphisms are associated with certain bacterial strain types, suggesting host specific colonisation or adaptation. These findings contribute to the understanding of the complex interplay between host and bacterial factors involved in the development of gastric pathology.【总页数】2页(P39-40)【作者】Rad R.;Dossumbekova A.;Neu B.;C. Prinz;杨雪娟【作者单位】Klinikum Recht s der Isar;TU Mü nchen;II Medizinische Klinik;Ismaningerstraβ e 22;81675 Mü nchen;Germany【正文语种】中文【中图分类】R573.3【相关文献】1.口腔黏膜病患者血浆中炎症细胞因子的表达及意义 [J], 明智慧;单笑;高凤香2.局部臭氧治疗对肛瘘创面中炎症细胞因子、生长细胞因子及凋亡分子表达的影响[J], 卢勇;吕雪丽;黄成龙;徐跃军3.细胞因子在炎症性肠病患者肠黏膜中表达的分析 [J], 孙钦娟;李琴;宛东;卢水蓉;胥明;郑萍4.炎症性肠病活动期患者肠黏膜白细胞介素-22结合蛋白及细胞因子表达研究 [J], 李息友;邱晓敏;曹杰5.肠黏膜组织中部分炎症细胞因子表达对溃疡性结肠炎患者黏膜愈合预后的预测价值 [J], 蒋继周因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌感染的萎缩性胃炎和胃癌组织中MIF的表达
幽门螺杆菌感染的萎缩性胃炎和胃癌组织中MIF的表达于晓辉;张双霞;戴飞;张方信;段惠春【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2010(19)9【摘要】目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)阳性的萎缩性胃炎和胃癌组织中巨噬细胞移动抑制因子 (macrophage migration inhibitory factor, MIF)的表达,探讨MIF表达和H.pylori感染与萎缩性胃炎和胃癌发病机制的可能联系. 方法收集萎缩性胃炎和胃癌组织各60例为实验组,正常胃黏膜25例为对照组,用快速尿素酶试验、Warthin-Starry银染色法和14C呼气试验检测两组患者的幽门螺杆菌感染,用免疫组化和原位杂交技术检测两组组织中MIF和MIF mRNA的表达. 结果萎缩性胃炎H.pylori阳性41例,其中MIF和MIF mRNA表达阳性分别为38例和37例,阳性率分别为92.7%和90.2%.胃癌组织中H.pylori阳性55例,其中MIF和MIF mRNA表达阳性分别为52例和51例,阳性率分别为94.5%和92.7%,以上结果与对照组比较,存在显著性差异(P＜0.001).结论 MIF表达和H.pylori感染可能与萎缩性胃炎和胃癌的发生有一定的联系.【总页数】4页(P838-841)【作者】于晓辉;张双霞;戴飞;张方信;段惠春【作者单位】兰州军区兰州总医院消化科,甘肃,兰州,730050;兰州军区兰州总医院消化科,甘肃,兰州,730050;兰州军区兰州总医院统计室,甘肃,兰州,730050;兰州军区兰州总医院消化科,甘肃,兰州,730050;兰州军区兰州总医院消化科,甘肃,兰州,730050【正文语种】中文【中图分类】R735.2;R573.3+2【相关文献】1.幽门螺旋杆菌感染与胃癌组织中p27、CyclinD1、MIF蛋白表达的相关性分析[J], 曹世堂;易小兵;王玉华;杨立宇2.胃癌组织中 MIF 与 miR-451的表达及其临床意义 [J], 王庆玉3.胃癌组织中miR－451与MIF的表达及与临床病理的关系 [J], 马宁;周云4.幽门螺旋杆菌感染与胃癌组织中p27、CyclinD1、MIF蛋白表达的相关性研究[J], 朱元良5.胃癌组织中miR-451与MIF的表达及与临床病理的关系 [J], 卢运龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
IL-10基因多态性与幽门螺杆菌相关胃癌易感性的关系
IL-10基因多态性与幽门螺杆菌相关胃癌易感性的关系吴绍燕;任磊;王永红;罗蓉;向瑜【摘要】Objective To discuss the relationship between IL-10 genes and susceptibility of H.pylori-associated gastric cancer of Han population in Chongqing district.Methods 100 H.pylori-positive patients with gastric cancer(gastric cancer group)and 140 H.pylori-positive healthy people (control group)were chose in the study,PCR-RFLP method was used to detect the IL-10-592 lo-cus polymorphisms of Han population in Chongqing district.Results Comparing with control group,IL-10-592 genotype frequency distribution of gastric cancer group has statistically significance (χ2=16.36,P<0.05).Logistic regression analysis showed that gastric cancer incidence risk of people carrying with IL-10-592 A/A genotype was OR=4.37(95%CI:2.04-9.38),comparing with the subjects carrying with IL-10-592 C/C.Conclusion Polymorphism of IL-10 gene has close correlated with H.pylori-asso-ciated gastric cancer,IL-10-592 C/C might be the susceptibility gene of H.pylori-associated gastric cancer.%目的：探讨重庆地区汉族人群中 IL-10基因型与幽门螺杆菌相关的胃癌易感性的关系。
根除幽门螺杆菌对慢性胃炎和胃溃疡组织中MIF蛋白表达的影响
根除幽门螺杆菌对慢性胃炎和胃溃疡组织中MIF蛋白表达的影响（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：张双霞，李光迪，于晓辉，张方信【摘要】目的通过检测幽门螺杆菌(Hp)感染及根除治疗对慢性胃炎和胃溃疡组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)蛋白表达的影响，探讨MIF和Hp在慢性胃炎和胃溃疡发生发展中的作用。
方法胃镜下随机采集胃黏膜活检组织，经14C呼气试验、Warthin starry银染色法检测Hp均为阳性，并经病理检验证实为浅表性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡各40例，Hp阴性的健康检查者25例，采用免疫组织化学SP方法分别检测各组MIF蛋白的表达；进行Hp根治治疗2周，停药4周后复查Hp及MIF，比较根除前后各组MIF水平。
结果MIF 蛋白在Hp阴性的正常胃黏膜中阳性表达低(2/25，8%)；在Hp感染的慢性浅表性胃炎(12/40，30%)、萎缩性胃炎(26/40，65%)和胃溃疡组织(19/40，47.5%)阳性表达增强，显著高于Hp阴性的正常胃黏膜组(57/120 vs. 2/25；χ2=13.376，P0.01)；在慢性炎症中，随着炎症程度增加，MIF表达增强，差异有显著性(12/40 vs. 26/40；χ2=9.825，P0.01)；Hp根除后，MIF蛋白表达阳性率较治疗前显著降低(57/120 vs. 23/103；χ2=15.264, P0.01)，而Hp仍为阳性者MIF 蛋白阳性率无显著变化。
结论Hp感染导致的胃黏膜慢性炎症及溃疡的形成与胃黏膜MIF的表达相关，根除Hp感染可降低胃黏膜MIF 基因表达的异常，可能对预防或减缓胃癌的发生和发展具有重要意义。
【关键词】巨噬细胞移动抑制因子；幽门螺杆菌；慢性胃炎；胃溃疡ABSTRACT: Objective To investigate the effect of Helicobacter pylori (Hp) infection on macrophage migration inhibitory factor (MIF) protein expression and explore the role of Hp and MIF in the development of chronic gastritis and gastric ulcer. Methods The biopsy tissues of gastric mucosa were collected under gastroscope, and Hp was detected by 14C breath test and Warthin starry method. We recruited 25 healthy people with normal gastric mucosa, 40 patients pathologically confirmed Hp positive with chronic superficial gastritis, 40 with atrophic gastritis and 40 with gastric ulcer. MIF protein expression was examined by immunohistochemical SP staining method, then Hp eradication was performed on Hp infected chronic superficial gastritis, atrophic gastritis and gastric ulcer for 2 weeks. Hp and MIF were re examined 4 weeks after drug withdrawal, and difference in MIFexpression was compared between Hp infected patients and Hp eradicated patients. Results The expression of MIF was low in normal gastric mucosa without Hp infection (2/25, 8%), but significantly higher in Hp infected gastric mucosa with chronic superficial gastritis (12/40, 30%), atrophic gastritis (26/40, 65%) and gastric ulcer (19/40, 47.5%); there was a significant difference between normal gastric mucosa without Hp infection and that of Hp infected patients (57/120 vs. 2/25; χ2=13.376, P0.01). MIF expression increased with the severity of inflammation in chronic gastritis, and there was a significant difference between superficial gastritis and atrophic gastritis (12/40 vs. 26/40; χ2=9.825, P0.01). The expression of MIF was noticeably decreased after Hp eradication compared with before(57/120 vs. 23/103; χ2=15.264, P0.01); however, there was no significant change in those patients whose Hp was still positive. Conclusion The expression of MIF on gastric mucosa is associated with the development of chronic gastritis and gastritis ulcer caused by Hp infection. Eradication of Hp could cut down the abnormally high MIF expression in gastric mucosa and slow down the formation and development of gastric carcinoma.KEY WORDS: macrophage migration inhibitory factor; Helicobacter pylori; chronic gastritis; gastric ulcer巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)是重要的炎症因子，能抑制巨噬细胞迁移，促进IV型过敏反应中巨噬细胞的聚积。
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幽门螺杆菌相关性胃炎患者趋化因子IP-10、Mig的表达研究【摘要】目的：研究幽门螺杆菌相关性胃炎患者趋化因子IP-10、Mig的表达意义。
方法：
选取我院于2017年1月至2017年12月期间收治胃炎患者30例作为观察组，并选取同期收
治的正常胃粘膜者15例作为对照组，采用快速尿素酶法与石碳酸染色进行检测，探究幽门
螺杆菌对于胃炎的致病因素。
结果：观察组患者的IP-10、Mig含量明显高于对照组，组间比
较差异存在差异P<0.05。
幽门螺杆菌阳性组IP-10、Mig含量明显高于幽门螺杆菌阴性组，组
间比较差异存在差异P<0.05。
结论：幽门螺杆菌相关行为肺炎患者胃粘膜上皮细胞内IP-10
与Mig表达明显升高，且IP-10与Mig表达升高程度与胃黏膜炎症活动程度呈正相关，趋化
因子在患者体内参与了炎性细胞浸润反应。
【关键词】胃炎；幽门螺杆菌；IP-10；Mig；表达研究
Expression of chemokine IP-10 and Mig in patients with Helicobacter pylori associated gastritis
Zhang Ying Dong Xiupeng Dujing，et al.
（General Hospital of Daqing Oil Field，Heilongjiang，Daqing，Heilongjiang 163453）
[Abstract]Objective：To study the expression of chemokine IP-10 and Mig in Helicobacter pylori associated gastritis.Methods：30 cases of gastritis in our hospital from January 2017 to December 2017 were selected as observation group，and 15 cases of normal gastric mucosa in the same period were selected as control group.The pathogenic factors of Helicobacter pylori to gastritis
were detected by rapid urease method and stone carbonation staining.Results：the levels of IP-10 and Mig in the observation group were significantly higher than those in the control group，and there was a significant difference between the two groups（P<0.05）.The levels of IP-10 and Mig
in Helicobacter pylori positive group were significantly higher than those in Helicobacter pylori negative group，and there was a significant difference between groups（P<0.05）.Conclusion：
the expression of IP-10 and Mig in gastric mucosal epithelial cells in the patients with HP related behavior increased significantly，and the level of IP-10 and Mig expression was positively correlated with the degree of inflammatory activity in the gastric mucosa，and chemokine was involved in inflammatory cell infiltration in the patients.
[Key words] gastritis；Helicobacter pylori；IP-10；Mig；expression study
幽门螺杆菌相关性胃炎的病理学特征为单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等炎症细胞浸润为
特征的一种胃部疾病[1]。
趋化因子是指炎症反应活动的敏感指标，可与受体共同作用趋化，
使中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞与NK细胞在炎症部位聚集、活化，并参与到组织损伤
与修复过程中[2]。
根据相关研究提示[3]，幽门螺杆菌相关性胃炎中的CXC趋化因子白细胞介
素-8、生长相关癌性基因、CC趋化因子单核细胞趋化、正常T细胞表达与分泌、活化时表达
下降因子、巨噬细胞炎蛋白等存在密切关系。
本文对幽门螺杆菌相关性胃炎中CXC趋化因子
IP-10、Mig表达情况进行观察，进一步探究幽门螺杆菌对于胃炎的致病因素，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 研究对象
选取我院于2017年1月至2017年12月期间收治胃炎患者30例作为观察组，其中男性13例，女性17例，年龄区间在19~59岁，平均年龄为（31.26±3.25）岁，其中幽门螺杆菌阳性
患者17例，幽门螺杆菌阴性患者13例；并选取同期收治的正常胃粘膜者15例作为对照组，正常胃粘膜者的纳入要求近5年内无饮酒史、吸烟史患者，近2个月未采用抗生素、非兹体
抗炎药、胃粘膜保护剂以及质子泵抑制剂等药物者。
纳入研究人员知情自愿下签署知情同意书，已上报我院伦理委员并获得同意。
1.2 方法
纳入研究对象均采用电子胃镜检查，并用同规格的活检钳位于幽门5cm处钳取胃粘膜标本，选取位置包括胃大弯、胃小弯、胃前壁与胃后壁等，分别进行幽门螺杆菌检查、趋化因子检测、病理学检测。
幽门螺杆菌感染判断标准：采用快速尿素酶法与石碳酸染色进行检测，两
项检测结果均提示为阳性，即为幽门螺杆菌感染阳性，两项检测均为阴性，则提示幽门螺杆
菌感染阴性，若两项检查结果不一致，则不纳入本次研究，并结合HE染色结果，将观察组
患者分为幽门螺杆菌阳性组、幽门螺杆菌阴性组。
胃炎患者胃粘膜组织IP-10、Mig检测方法：胃粘膜组织钳取后，将钳取的胎牛血清的RPMI 1640培养基的24孔培养板中，培养箱温度为37℃，饱和湿度，5%CO2，孵育24h，4℃研磨
匀浆后离心，离心速度为15000r/min，时间30min，取上清液放置于-70℃内保存，分别测定ELISA方法测定IP-10、Mig表达。
1.3 统计学分析
采用SPSS19.0软件进行本组数据进行比较，计数资料以（n，%）进行描述并行卡方检验，
计量资料以（x±s）描述并行t检验，若组间数据P<0.05则有统计学意义。
2结果
观察组患者的IP-10、Mig含量明显高于对照组，组间比较差异存在差异P<0.05，见表1；
3 讨论
本组研究发现，观察组胃炎患者胃粘膜组织中IP-10与Mig含量表达情况明显高于对照组健
康胃粘膜者，P<0.05；且幽门螺杆菌阳性胃粘膜患者的IP、Mig升高程度明显高于阴性患者，P<0.05。
根据结果提示，胃黏膜组织中IP-10、Mig表达与胃黏膜炎症程度呈正相关关系。
幽
门螺杆菌相关性胃炎患者胃粘膜组织中高表达的IP-10与Mig，在胃炎患者机体内参与了T细胞与单核细胞的选择性聚集，在感染局部高表达的IP-10与Mig也发挥着活化Th细胞与其他
免疫细胞作用，活化细胞可分泌更多的趋化因子，从而介导胃炎病变黏膜内淋巴细胞的聚集，并参与到幽门螺杆菌所致的胃炎反应中[4、5]。
综上所述，幽门螺杆菌相关行为肺炎患者胃粘膜上皮细胞内IP-10与Mig表达明显升高，且
IP-10与Mig表达升高程度与胃黏膜炎症活动程度呈正相关，趋化因子在患者体内参与了炎性细胞浸润反应。
参考文献：
[1]朱海山，招杰，苏有盛.幽门螺杆菌感染和慢性胃炎患者胃黏膜病理变化的关系[J].慢性病
学杂志，2018，19（03）：292-293+295.
[2]潘莲.幽门螺杆菌与慢性胃炎胃黏膜病理变化的关系[J].中外医学研究，2018，16（07）：176-177.
[3]赵婕，赵丽华.胃热汤治疗幽门螺杆菌阳性慢性萎缩性胃炎疗效观察[J].河南中医，2018，
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[5]胡友莹，赵金红，汪雪峰，李朝品，王克霞，王健.幽门螺杆菌相关性胃炎患者趋化因子IP-10、Mig的表达[J].中国人兽共患病学报，2011，27（07）：641-644.。