大黄的鉴定(实验)
02实验2 大黄、何首乌的鉴定
[目的耍求 目的耍求] 目的耍求
1.掌握大黄、何首乌的鉴定方法。 掌握大黄、何首乌的鉴定方法。 掌握大黄 2.熟悉大黄、何首乌异型构造的特点。 熟悉大黄、 熟悉大黄 何首乌异型构造的特点。
[实验材料 实验材料] 实验材料 1.掌叶大黄 掌叶大黄(Rheum palmatum L.)或唐古特大黄 掌叶大黄 或唐古特大黄 (R.tangulicum Maxim.ex Balf.)、药用大黄 、药用大黄(R.officinale Baill.) 根茎髓部星点横切片及药材粉末。 根茎髓部星点横切片及药材粉末。 2.何首乌 何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)的药材标本、 的药材标本、 何首乌 的药材标本 块根横切片及药材粉末。 块根横切片及药材粉末。 [仪器与试剂 仪器与试剂] 仪器与试剂 生物显微镜、刀片、镊子、试管、烧杯、培养皿、 生物显微镜、刀片、镊子、试管、烧杯、培养皿、水合 氯醛试液、稀甘油、酒精灯、 氯醛试液、稀甘油、酒精灯、氢氧化钾 。
2、大黄根茎髓部星点横切片，自外向内观察下列 、大黄根茎髓部星点横切片， 组织（示教） 组织（示教） ①木质部，位于形成层外侧，导管径向稀疏排列， 木质部，位于形成层外侧，导管径向稀疏排列， 直径较大。 直径较大。 ②形成层，连接成环，由数列扁平细胞组成。 形成层，连接成环，由数列扁平细胞组成。 ③韧皮部，位于形成层内侧，近形成层处具筛管群， 韧皮部，位于形成层内侧，近形成层处具筛管群， 有时可见大型粘液腔，内含红棕色物质。 有时可见大型粘液腔，内含红棕色物质。 至数列薄壁细胞组成， ④射线，由1至数列薄壁细胞组成，自韧皮部向外 射线， 至数列薄壁细胞组成 呈星芒状射出，细胞内含深棕色物质。 呈星芒状射出，细胞内含深棕色物质。 ⑤薄壁细胞含众多淀粉粒和大形草酸钙簇晶。 薄壁细胞含众多淀粉粒和大形草酸钙簇晶。 淀粉粒和大形草酸钙簇晶
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定一、实验目的：1、了解一个天然药物中含有的主要有效成分并对其进行提取分离。
2、掌握植物中活性成分的化学检测方法，并进行初步的鉴定工作。
二、实验原理：大黄是一味天然草药，具有泻下通便之效果。
其主要活性成份是大黄素与蒽醌类物质，其中瑞贝洛Ⅱ（rustbelineⅡ）、大黄素（emodin）、芦丁（rutin）等，在医学上有广泛的应用。
大黄素与蒽醌类物质在自然状态下大多处于质子化状态，存在于与水相较弱的有机溶剂中。
为了获得高品质的大黄素与蒽醌类物质，需要对有机溶剂进行筛选，筛选出适宜的溶剂并对大黄中的主要成分进行提取与分离工作。
三、实验步骤：A. 大黄中蒽醌的提取分离1、将粉末大黄紫锥子取 1g 加入圆底烧瓶中，加入 15 mL 95% 乙醇溶液，加热回流30分钟。
2、冷却后用干净的滤纸分离上清液用热水冲涤保持颜色相同（保留水冲涤液备用）。
3、将去溶剂后的渣用 10 mL 苯醇溶解，并过滤写滤液保存，不断冲涤干净渣质。
4、将 2mL 苯醇滤液分离于干净的离心管中，在室温下慢慢加入正硫酸，足量使呈酸性.，加入 5 mL 甲醇，蒸去溶剂后，注 1mL 50%氨水，筛过活性炭或过硅酸钠脱除杂物，使溶液呈现深黄色液体。
5、以上溶液在 20ml 分液漏斗中加入 20-25 mL 丙酮，振荡混合，分离两层液体，取下蒸馏收干（可以置于干燥器或开放场地自然干燥，当感觉无水分或连续称量两次称量值一致时即可）6、将干燥沉淀取少量溶解于绝对丙酮中成特邻醌的溶液。
7、分别进行下列试验来分离纯特邻醌：（1）纯特邻醌呈现红色；（2）用极少量生石灰进行检测，呈现橙色。
B. 大黄中大黄素含量的色谱定量测定色谱图谱图峰形面积法进行测定。
1、用同上操作，按“ A ”-“ E ”方法操作，取所得特邻醌溶液 1-5 mL 再加入丙酮使其溶解（溶液的浓度以能出现三个吸光峰为适宜，可调配NaOH溶液调节pH 值，使吸光峰相对集中于三个波长摆荡之一）。
实验指导(大黄)
实验二 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。
已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OO HR 2O HR 112-H -COOH大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。
大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。
（二）实验目的和要求1．熟悉蒽醌类成分的提取分离方法 2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。
3．学习用硅胶柱色谱分离精制大黄素 4．学习羟基蒽醌类化合物鉴定方法。
（三）实验流程图 略（四）实验步骤1、酸水解用天平称取大黄粉10g，置500ml烧杯中，加20%硫酸水溶液100ml，直火加热1h，用布氏漏斗抽滤，滤饼水洗后于70度左右干燥。
2、总羟基蒽醌苷元的提取滤饼经干燥后，置索氏提取器中（预习索氏提取器的结构原理和使用方法、注意事项），加入乙醚150ml，回流提取2h，得乙醚提取液。
实验四 根茎类药材的鉴定黄连、大黄、天麻
药用植物与生药学实验
黄连根切面图
药用植物与生药学实验
药用植物与生药学实验
黄连横切面主要观察
木栓层 皮层 石细胞 中柱鞘纤维
薄壁细胞
药用植物与生药学实验
黄连（味连）粉末
鳞叶表皮细胞：长方形，绿黄色或黄棕色， 壁波状弯曲或呈连珠状增厚。 石细胞：形多样，黄色，壁厚，壁孔明显。 纤维：中柱鞘纤维纺锤形或长梭形，壁厚。 木纤维较长，壁较薄，有稀疏的点状纹孔。 淀粉粒：多单粒，类圆形。
药用植物与生药学实验
黄连粉末主要观察
鳞叶表皮细胞 中柱鞘纤维 木纤维 石细胞
导管
药用植物与生药学实验
药用植物与生药学实验
鳞叶表皮细胞
药用植物与生药学鞘纤维
木纤维
药用植物与生药学实验
淀粉粒
药用植物与生药学实验
大黄
[来源] 蓼科植物 掌叶大黄Rheum palmatum、 唐古特大黄R. tanguticum、 药用大黄R. officinale的根及根茎。 前两种习称“北大黄”、后一种习称 “南大黄”
药用植物与生药学实验
三、实验器械、材料
器械、材料
玻片、刀片、 镊子、显微镜 、酒精灯、载 玻片、盖玻片 等。 黄连、大黄、 天麻玻片。黄 连、大黄、天 麻粉末。
药用植物与生药学实验
黄连
[来源]毛茛科植物 黄连Coptis chinensis
三角叶黄连C. deltoidea
云南黄连C. teeta的根茎。
4.标本请不要带走。
授课教师：程纪伦 办公电话：22896599
药学教研室
草酸钙簇晶：众多，棱角多短钝。 导管：多网纹导管，非木化。 淀粉粒：单粒脐点星状，类圆形，复 粒由2－5(7)分粒组成。
实验大黄黄连鉴定01
实验一 大黄、黄连的鉴定
一、内容： 1.黄连永久切片的观察； 2.大黄粉末透化装片观察：
簇晶、网纹导管 3.大黄粗粉末微量升华，镜检； 4.紫外灯下，观察黄连断面的荧光。
二、作业 1.绘大黄粉末图 2.绘黄连横切面1/4简图
实验一 大黄、黄连的鉴定
一、目的： 1.掌握大黄、黄连主要显微鉴别特征; 2.熟悉大黄、黄连的理化鉴别特征。 二、内容： 1.观察黄连(味连)横切面永久切片：
中 柱 鞘 纤 维 束
韧部
木部 射线
外韧型维 管束断续 环列 (放射状)
薄壁C含 淀粉粒
表皮 木栓组织 皮层 石细胞 中柱鞘纤维 韧皮部 织图例：
空白
木质部
韧皮部
皮层、髓
木栓层
结晶 石细胞群 纤维束
2.大黄粉末透化装片，观察： ①簇晶多，大型，棱角短钝或长尖
根 迹 维 管 束
外侧偶 见鳞叶 组织
①表皮部分脱落； ②外侧皮层(产生) 有木栓组织(及其外 组织均呈棕色)； ③皮层宽，有单个 或成群石细胞(染成 红色)，并可见根迹 维管束；
表皮(或脱) 皮层(或脱) 木栓组织 皮层
根迹维管束(纤维略呈纵切状)
石 细 胞
中 柱 鞘 纤 维 束
④中柱鞘纤维束木化( 染红)； ⑤外韧型维管束断续 环列(放射状)，韧部 窄，可见束中形成层 ⑥髓部偶见石C
注意： 烘烤后，升华 器不得直接放 在桌上，以免 烫损桌面！
4.紫外灯下，观察黄连断面荧光： 呈金黄色荧光。
二、作业 1.绘大黄粉末图（簇晶及网纹导管）； 2.绘黄连横切面1/4简图。
实验一 大黄、黄连的鉴定 姓名＿＿学号＿＿
簇晶
网纹导管
大黄粉末图
黄连横切面(1/4)简图
简要写出大黄的显微鉴定步骤
简要写出大黄的显微鉴定步骤
1.切片：将大黄标本切成薄片，厚度通常为0.1mm左右。
2.上清剂：将切片浸泡在脱脂汽油、醇、二甲苯等清洗剂中，去除样
品表面的杂质和着色物质。
3.染色：使用化学染料，如伊红、固原染色剂等，对样品进行染色。
4.加蓝：在染色前或染色后加一定浓度的碘化钾溶液，加强细胞核和
染色体的显色度。
5.封片：用封片剂将切片封在玻璃片和封片纸之间，使其保持平整。
6.显微镜观察：将封好片的样品放在显微镜下观察，根据不同的结构
特征，对大黄进行鉴定。
比如，大黄的草酸钙晶体可以用偏光显微镜观察。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
陈羽迪2012332870002 12生物制药（1 ）大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定实验报告一、实验目的1．掌握蒽醌苷元的提取方法—双相酸水解法。
2．掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法。
3．掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法。
二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H1.提取原理双相酸水解法，为一相为与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双相酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。