细菌对抗菌药物的敏感介绍
常见细菌耐药特征与抗菌药物敏感性试验
回答几个临床问题
6、选择药敏报告敏感的药物，为什么临
床治疗无效？
感染部位与药代动力学因素
药敏试验仅报告细菌对药物的敏感性，但不同 部位的感染，因根据药物浓度分布选择抗菌药 物。
投药 方案
剂量 时间
组织 体液 感染 部位
药理 毒理 抗菌 作用
药动学
药效学
抗菌药物在体内的过程
00-10-12 Dr.HU Bijie 8
警惕：产碳青霉烯酶（KPC）细菌
KPCs可使所有β-内酰胺类抗生素失活，包括所 有青霉素类，头孢类，单环β-内酰胺类，复合制 剂, 碳青霉烯类 死亡率很高 可采用多粘菌素B和/或替加环素(可增加一种氨基 糖苷类药物)进行治疗 可产KPC的细菌：肺炎克雷伯菌(最为常见)；产酸 克雷伯菌；大肠埃希菌；肠杆菌属；弗氏柠檬酸 杆菌；沙门菌属；沙雷菌属；铜绿假单胞菌
产ESBL 30％～70％
根据新的标准可以不检测ESBL
肠杆菌科细菌感染 及抗菌药物合理应用
天然耐药 肠杆菌属 沙雷菌属 枸橼酸杆菌
青霉素，糖肽类，夫西地酸， 大环内酯类，链阳菌素，利福平 达托霉素，利奈唑胺，林可酰胺
头孢西丁
产诱导型 AmpC酶
三代头孢，舒巴坦是强诱导剂
治疗：碳青霉烯类， 头孢吡肟氟喹诺酮
万古R 0%~5%
试用利奈唑胺＋（氟喹诺酮，氯 霉素，利福平或多西环素）
肠杆菌科细菌感染 及抗菌药物合理应用
天然耐药
青霉素，糖肽类，夫西地酸， 大环内酯类，链阳菌素，利福平 达托霉素，利奈唑胺，林可酰胺
肠杆菌 科细菌
抗菌药物 及获得性耐药
头孢类：三代头孢40～70％ 氨基糖苷类：阿米卡星10～20％， 庆大霉素40～70％ 喹喏酮类：70～80％ 碳青霉烯类：罕见 头霉素：不同菌属有所不同 复方磺胺：50～70％
细菌药物敏感试验实验报告
药物敏感试验又称药敏。
目的是指导临床针对性使用抗生素，减少细菌耐药的产生。
使感染能够及时控制，做到有的放矢。
测定细菌在体外抗菌药物敏感性（以下称药敏试验）的试验方法很多。
绝大多数临床实验室以琼脂扩散法作为常规方法测定常见的快速生长的病原菌。
本文介绍的是标准纸片扩散法。
本文提出的一系列建议有助于药敏试验的标准化。
具体地叙述了现行推荐方法的操作步骤，及其适应性和局限性。
本文还重温了国际协作研究会（ics）的有关建议和食品药物管理局（fda）的有关规定，并采纳了其中的有关章节。
只根据是否出现抑菌环而不考虑其大小来判断细菌对抗菌药物敏感性的试验方法，结果是不准确的。
纸片扩散法试验必须遵循标准的方法学原理，并根据抑菌环与最低抑菌浓度的相关性，并结合临床上已知敏感或耐药菌株的状况进行标准化，结果才能可靠。
要得到可靠结果，必须严格地按照本文的方法进行操作。
美国临床实验室标准化委员会（nccls）下设的纸片扩散法药敏试验分委员会推荐的标准方法，以bauer等介绍的方法为基础，是目前叙述最完整的试验方法。
其中的解释标准是综合临床和实验室的数据发展而来，并得到证实。
要测定和报告给哪些药物，须与感染科医生、医院的药品委员会及感染控制委员会协商，然后由实验室制定最合适的方案。
表1和表1a列出了治疗各类细菌感染有效的药物，其体外药敏试验结果也有助于感染的控制及流行病学研究。
做药敏试验，应从分离平板上挑选各种疑为致病菌的单个菌落，同时做菌种鉴定。
不同菌种不可在同一平板上做混合细菌药敏试验。
一般避免用临床标本（如无菌体液和尿液）直接做药敏，除非临床上急需且革兰氏染色只见到单一菌种，但随后应再以标准方法重做。
对感染性质不同，标本中混有浑浊细菌或正常菌群的情况，其中的细菌也许与感染治疗关系不大，常不必做药敏，不然反会招致错误的引导。
抗菌药物的敏感性试验及报告解读
明确提出在二级以上医院设立感染科与感染临床药师（第12、
13条），及临床微生物室（第14条）
6
Company name
概况和制定过程
第一章 总则
第六章 附则 第五章 法律责任
共六章 53条
第二章 组织机 构和职责
• 组织医院管理、临床、药学 、微生物检验、感染等方面 专家起草《抗菌药物临床应 用管理办法》
19
Company name
培养条件（一）
需氧菌： 35℃ ±2 ℃ ，16-18小时 嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌：20-24小时 葡萄球菌：33-35 ℃ ，OXA、MET、NAF、VAN24小时 肠球菌：VAN 24小时 溶血性链球菌、肺炎链球菌、奈瑟氏菌属等：20-24小时
20
Company name
操作：
无菌棉签蘸取菌液，在管壁内将多余菌液旋 转挤去后，在琼脂表面均匀涂布接种3次， 每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1 周。 室温干燥或35℃干燥5-15分钟 用纸片分配器或无菌镊子将药物纸片紧贴于 琼脂表面 纸片间距 20mm 纸片离平板内缘 15mm
15
Company name
抗生素药敏试验质控
• 4月11日起征求全国意见
• 制定《抗菌药物临床应用分
第三章 抗菌药物 级管理目录》
临床应用管理
• 4月15日期征求全国意见
第四章 监督管理
7
Company name
第三章 抗菌药物临床应用管理
• 三级医院 不得超过50种，二级医院 不得超过35种 • 同一通用名称药品的品种，注射剂型和口服剂型各不得超过2种，处方组成
葡萄球菌属 Mueller-Hinton（MH）琼脂
抗菌药物敏感性试验及细节耐药检测
抗菌药物敏感性试验及细节耐药检测抗菌药物敏感性试验与细节耐药性监测来源：检验医学在线2009-4-15 南网编辑2010-7-6一、需氧菌及兼性厌氧菌的药物敏感试验(一)纸片琼脂扩散法纸片琼脂扩散法又称Kirby-Bauer试验，是操作最简易、使用最广泛的抗菌药物敏感性试验。
1．试验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。
纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系，即抑菌圈越大，MIC越小。
2．培养基和抗菌药物纸片(1)培养基：水解酪蛋白(Mueller-Hin-ton，MH)培养基是CLSI/NCCLS采用的兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养基，pH值为7.2～7.4，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。
琼脂厚度为4mm。
配制琼脂平板当天使用或置塑料密封袋中4℃保存，使用前应将平板置35℃孵育箱孵育，使其表面干燥。
(2)抗菌药物纸片：选择直径为6.35mm，吸水量为20ul的专用药敏纸片用逐片加样或浸泡方法使每片含量达到规定所示。
含药纸片密封储存2～8℃或-20℃无霜冷冻箱内保存，β-内酰胺类药敏纸片应冷冻储存，且不超过l周。
使用前将储存容器移至室温平衡l～2h，避免开启储存容器时产生冷凝水。
3．细菌接种细菌接种采用直接菌落或细菌液体生长方法。
用0.5麦氏比浊标准的菌液浓度。
校正浓度后的菌液应在15min内接种完毕。
接种步骤如下：①用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂片接种3次，每次旋转60°，最后沿平板内缘涂抹1周；②平板置室温下干燥3～5min，用纸片分离器或无菌镊将含药纸片紧贴于琼脂表面；③置35℃孵育箱孵育16～18h后阅读结果，对甲氧西林和万古霉素药敏感试验结果应孵育24h。
细菌对抗菌药物的敏感试验(实验)
5．质量控制
采用标准菌株与测试菌在同一条件下做药敏试验。 标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内。如果超出该范围， 则不应发出报告，及时检查原因，予以纠正。
ATCC25923 金黄色葡萄球菌 ATCC25922 大肠埃希菌 ATCC27853 铜绿假单胞菌 ATCC29212 或 33186 粪肠球菌
金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验结果判断
无菌棉签 涂布
MH琼脂表面
室温 5min
贴含药纸片 35℃ 观察 16～18h 结果
操作注意事项：
菌液应在15分钟内接种完毕 接种后，平板放置时间不要超过5min 注意纸片距离
＞15mm ＞24mm
3．结果解释 测量抑菌圈直径，参照CLSI的标准解释结果。
20mm
4.影响纸片法药敏结果的因素 ①培养基质量 成分、pH、深度、硬度和表面 湿度等。 ②药敏纸片的质量 含药量和保存方式。 ③接种菌量 ④操作质量 接种后贴药片的时间；培养温度 和时间；抑菌圈测量工具的精度
大肠埃希菌抗菌药物敏感性试验结果判断
抗菌药物敏感性试验
成都医1.掌握纸片扩散法（K-B法）原理、操作 方法、结果的判读及其临床意义。
2.掌握纸片扩散法的质量控制。
实验内容 纸片琼脂扩散法（K-B法）
实验器材
1. 菌种： 金黄色葡萄球菌ATCC25923、 大肠埃希菌ATCC25922
（幼龄菌，1.5×108/ml） 2. 培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂）平板，1个/人 3. 抗菌纸片：青霉素（PEN）、红霉素(ERY)、庆大
霉素（GEN） 4. 其它：无菌生理盐水、无菌棉签、镊子、 接种环、
刻度尺（自带）、0.5 麦氏比浊管（相当于 1.5×108CFU/ml）
懂感染？得先明白细菌药敏报告~~
懂感染？得先明白细菌药敏报告~~抗菌药物敏感性试验（antimicrobial susceptibility testing，AST）简称药敏试验，是一种用于测定抗菌药物或其他抗微生物制剂体外抑菌能力的方法。
临床微生物学实验室进行药敏试验的目的主要包括：提供病原菌对各种常用抗菌药物的敏感情况，从而辅助临床合理使用抗菌药物；临床因疗效差而考虑更换抗菌药物时，应对拟选药物进行药敏试验，以确保多更换的药物抗感染治疗有效。
临床医生每天都要接触药敏报告，根据结果来应用抗菌药物，从而发现问题，但是微生物标本来自于全身各个部位，很复杂，是使用什么方法检测？是不是所有检测到的菌都要做药敏？药敏试验受到哪些因素影响？如何报告结果？报了一堆医院没有使用的药物，而医院使用的药在药敏试验中没有做？选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治疗无效？……现就一些常见问题进行解答：一、药敏试验的主要影响因素是什么？标本来源1、无菌部位来源标本分离的细菌最具有临床意义：如脑脊液、血液、体液、骨髓、关节腔液等，分离的任何细菌均需做药敏试验。
但是采集标本时有可能存在污染，如：（1）血培养分离的芽孢杆菌属、棒状杆菌属、单瓶培养阳性的凝固酶阴性葡萄球菌（表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌）（2）无菌体液中分离的芽孢杆菌属（3）如果多次在同一部位培养出同一种细菌，也需做药敏试验。
正常菌群或可能污染菌来源的标本：（1）对正常菌群或污染菌不做药敏试验（2）伤口、脓肿和来自其他污染部位标本：（3）分离到中量或大量生长的1或2种潜在病原菌，做药敏试验；（4）呼吸道标本：支气管肺泡灌洗液/保护性毛刷是好的标本，对质量合格痰标本中分离的中量或大量生长的1或2种可能病原菌做药敏试验。
二、抗菌药物敏感试验方法有什么？药敏常规方法，作为表型检测的，如现在用的纸片法，仪器自动/半自动商品化仪器；参考方法有琼脂稀释法、肉汤稀释法、表型确认方法；还有基因型检测，耐药基因检测。
细菌对抗菌药物敏感性的检验
细菌对抗菌药物敏感性的检验1、扩散法：琼脂加上细菌所需要的各种养料，将培养基融化后，倒入无菌培养皿中，冷却，凝成一个平面或叫平板(平皿)。
这时将含有少数细菌的菌液涂到平板上，培养后细菌就会分别在平皿上繁殖，如果在平皿的培养基内事先加入抗生素纸片，由于药物在培养基中扩散，起了抑(杀)菌作用，形成了不长菌落的抑制圈。
抑制圈的大小，反映某一抗生素对该菌抑菌的程度。
K-B法：最常用的药敏试验是WHO推荐的Kirby-Bauer纸片扩散法(K-B法)。
该法将药敏试验抑菌环大小分为四个等级，即：敏感、中度敏感、中介度、耐药。
由于中介度介于敏感和耐药之间，所以不予报告，故化验单上只报告敏感、中度敏感或耐药。
【临床意义】1．敏感：表示被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈，禁忌症除外。
2．中度敏感：表示被测菌株可以通过提高剂量被抑制或在药物被生理性浓集的部位被抑制，如β-内酰胺类药物。
3．中介度：这一范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的“缓冲域”，以防止由微小的技术因素失控所导致的较大的结果解释错误。
抑菌环落入中介度范围，意义不明确，如果没有其他可替代的药物，应重复做药敏试验，或以稀释法测定MIC。
4．耐药：被测菌不能被常用剂量所达到组织内或血液中的抗生素所抑制。
5．最低抑菌浓度：抑制被测菌的最低药物浓度。
6．最低杀菌浓度：抗菌药物杀灭细菌所需的最低浓度。
联合药敏试验：【临床意义】常用于严重感染时对两种或两种以上抗生素的选择。
常用K-B法和方阵棋盘稀释法。
结果以部分抑菌浓度FIC的指数报告。
1．FIC指数＜0．5，为协同作用。
即两种抗菌药物联合后的药效大于同样浓度的两种药物抗菌作用的总和。
2.FIC指数0．5～1，为相加作用，即两种药物联合后其活性等于两种药物抗菌作用的总和。
3．FIC指数1～2，为无关作用，即联合药物的活性与单独的抗菌作用相同。
4．FIC指数＞2，为拮抗作用，即两种药物联合后的抗菌活性小于单独一种药物的抗菌作用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
细菌对抗菌药物的敏感介绍
最常用的药敏试验是WHO推荐的Kirby-Bauer纸片扩散法(K-B法)。
该法将药敏试验抑菌环大小分为四个等级，即：敏感、中度敏感、中介度、耐药。
由于中介度介于敏感和耐药之间，所以不予报告，故化验单上只报告敏感、中度敏感或耐药。
此外药敏试验还可采用琼脂稀释法、液体稀释法和微量稀释法，以定量测定抗生素对细菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。
通常化验单报告MIC。
临床意义：
1．敏感：表示被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈，禁忌症除外。
2．中度敏感：表示被测菌株可以通过提高剂量被抑制或在药物被生理性浓集的部位被抑制，如β-内酰胺类药物。
3．中介度：这一范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的“缓冲域”，以防止由微小的技术因素失控所导致的较大的结果解释错误。
抑菌环落入中介度范围，意义不明确，如果没有其他可替代的药物，应重复做药敏试验，或以稀释法测定MIC。
4．耐药：被测菌不能被常用剂量所达到组织内或血液中的抗生素所抑制。
5．最低抑菌浓度：抑制被测菌的最低药物浓度。
6．最低杀菌浓度：抗菌药物杀灭细菌所需的最低浓度。