RNA电泳操作步骤

RNA电泳

试剂：

琼脂糖（Agarose）、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。

步骤

一5 x MOPS-EDTA Buffer的配制（0.1 M MOPS pH7；5mM EDTA；10mM NaAc）

1.称量20.9g的MOPS，置于1L烧杯中。

2.加700mL DEPC水溶解。

3.用2N NaOH调节pH至7.0

4.在上述溶液中加入10mL的1M的NaAC

5.溶液中加入10mL的0.5M的EDTA pH=8.0

6.加DEPC水定容至1L

7.用0.45um滤膜过滤后避光保存

二RNA样品处理方法

混合均匀后，70°C加热5min，迅速冷却至室温。（PCR仪操作）

三甲醛变性琼脂糖凝胶的制备

加1g琼脂糖到31mL DEPC水中，另加10mL 5 x MOPS-EDTA Buffer煮沸溶解。加入DEPC 水定容至41mL。将溶液冷却至60°C左右，加入9mL 37%甲醛，倒入胶槽中静置1小时。（胶中加入EB染料）

四电泳

混匀电泳槽中的1 x MOPS-EDTA Buffer电泳液，加样，10v/cm条件下电泳约1小时。电泳期间每隔15min混匀电泳槽中的电泳液一次。