实验三 线粒体活体染色
高中生物 线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察 【实验目的】 掌握一 ...
线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察【实验目的】掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。
【实验用品】一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。
二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。
三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。
【实验内容】一、兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。
染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。
将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。
(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
二、线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
三．线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
实验3 线粒体和液泡系的超活染色与观察
【实验原理】
高碘酸—雪夫试剂反应，简称PAS反应。主要是利用 高碘酸作为强氧化剂，这种强氧化剂能打开C-C键，使多 糖分子中的乙二醇变成乙二醛，氧化所得到的醛基与 Schiff试剂反应形成紫红色化合物。颜色的深浅与糖类 的多少有关。 细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色 络合物，根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存 在。
细胞生物学 Fisheries College Cell Biology
实验三 线粒体和液泡系的超活染色与观察
细胞生物学 Fisheries College Cell Biology
一、实验目的
１、观察动植物活细胞内线粒体、液泡系 的形态数量与分布； ２、学习一些细胞器的超活染色技术。
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↓ 盖上盖玻片，显微镜下观察
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口腔颊部上皮细胞示线粒体
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２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察
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五、实 验 步骤
• 1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓ 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞
↓
刮下的粘液状物放到载玻片的染液滴中 ↓
染色10~l5min（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液）
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实验三 线粒体活体染色
油镜下小鼠骨髓细胞染色体
油镜下观察
染色体标本观察
线粒体活体染色
线粒体活体染色
线粒体电镜观察
A
C
M
C
N
M
线粒体电镜观察
C C C
N M
MV L
线粒体电镜观察
B M
M
N L
MV
MV
N
L
N
1、人口腔粘膜上皮细胞活体染色显示线粒体 （1）用消毒牙签刮取口腔粘膜细胞，用力应稍重些， 以便得到生活力教旺盛的细胞，将刮取物涂在载玻片 中央。 （2）滴1滴詹纳斯绿B染液于细胞涂片处，2~3分钟后 盖上盖玻片。 （3）用显微镜观察，在高倍镜下可见细胞质中散在一 些被染成亮绿色的短棒状和圆形颗粒，即为线粒体。
实验三 线粒体活体染色
线粒体活体染色
实验目的： 掌握线粒体活体染色的方法与原理
实验原理：
线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。 活 体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而 又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B是线粒体的专一 性活体染色剂。呈碱性，具有脂溶性，能够穿过细胞膜进入细胞内，并 通过其结构中带有正电荷的染色基团结合到带负电荷的线粒体内膜上。 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细 胞质中染料被还原，成为无色状态。
线粒体活体染色
活体染色：是使生活有机体的细胞或组织特异性着色， 但对该样本又没有毒害作用的一种染色方法。 目的：既显示活体细胞内的某些结构，又不影响细胞 的生命活动和产生任何物理和化学变化以致细胞的死亡。 应用：活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形 态结构和细胞生理、病理状态
线粒体活体染色
液泡的活体染色与观察实验报告
液泡的活体染色与观察实验报告线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告海南师范大学生命科学学院实验报告（2012——1013学年度第一学期）生物科学系2010 级一班姓名：学号：科目：细胞及遗传学实验实验项目：线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
（2）学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞。
2、试剂：1%，1/5000詹纳斯绿B溶液四、实验方法：1、取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
2、实验者用牙签宽头在自己口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
五、实验结果：1、在显微镜下观察，可以看到口腔上皮细胞一个个分散的被染成淡蓝色的细胞在细胞中可以看到在核周围有被染成深蓝色的颗粒状结构，即是线粒体。
六、实验结果分析：因为特定的活体染色剂特异地针对某种细胞器的生理生化特点起作用。
例如詹纳斯绿B只对线粒体具有专一性；而中性红则只对液泡系具有专一性。
因此，只用一种活性染色剂很难同时观察到多种细胞器。
用詹纳斯绿B就可以观察到线粒体了。
篇二：实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察一、实验目的：1、观察动物、植物活细胞内的线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
2、了解细胞的超活染色技术。
细胞生物学实验材料
实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五 DNA的细胞化学——Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验一荧光显微镜的原理和使用一、实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法；掌握荧光显微镜的使用方法和使用中的注意事项。
二、实验原理荧光显微镜是选择由高压汞灯或类似光源发出一定波长的激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。
与普通光学显微镜一样，荧光显微镜也有物镜、目镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。
所不同的是，荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统，它投射到样品上的是特定波长的激发光而不是普通的可见光。
在激发光的作用下，样品中的荧光物质产生图1荧光显微镜发射光（即荧光）。
因此，荧光显微镜观察到的是样品中能产生荧光的部分所呈现的荧光映象，普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。
某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。
因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。
三、实验用品荧光显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖刀、0.01%吖啶橙染色液（acridine orange）、蒸馏水、水葫芦叶片四、实验内容与方法（一）荧光显微镜的构造1、基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等）的基础上组成的。
线粒体和液泡系的超活染色与观察(分析“染色”文档)共9张PPT
• 1 ．绘出人口腔上皮细胞示线粒体的形态与 分布并简要分析。
• 2 ．绘出绿豆幼根根尖组织液泡系的形态与 分布并简要分析 。
• 2 ．洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 3 ．材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、绿豆幼根根尖
1/5000詹纳斯绿Ｂ1-2滴，口腔上皮细胞（牙签刮取），载玻片于３７℃恒温染色10-15min，显微镜下观察．
2 1
．．洋口葱腔•鳞上茎皮1内细/表胞5皮线0细粒0胞体0线的詹粒超体活纳的染超色斯活染绿色与Ｂ观察溶液１-2滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片于
察1/5．000詹• 纳斯1绿/Ｂ510-20滴，0口詹腔上纳皮斯细胞绿（牙Ｂ签刮1取-2）滴，载，玻片口于３腔７℃上恒皮温染细色10胞-15（min，牙显签微镜刮下观取察．），载玻片于３
1 2
．．绘了出解人细口胞７腔和上细℃皮胞细器恒胞的示超温线活粒染染体色色的技形术1态0与-分1布5并m简要in分，析。显微镜下观察．
（一）线粒体的超活染色与观察
中性红对液泡3系7的℃染色恒具有温专一水性，浴将活染细胞色中的1液0泡-系1染5成m红i色n。，显微镜下观察．
1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布；
• （二） 绿豆幼根根尖液泡系的中性红染色观察 实验三 线粒体和液泡系的超活染色与观察
1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布；
实验三 线粒体和液泡系的超活染色 与观察
一、实验目的
• 1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的 形态、发育和分布；
• 2 ．了解细胞和细胞器的超活染色技术
二、实验原理
• 詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行活染,这是由于 线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保
液泡系和线粒体的活体染色及观察
2）植物细胞线粒体的活体染色与观察（洋葱鳞茎内表皮 细胞）
⑴用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴在干净的载波片上， 然后用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置于染液中，染色10～ 15mห้องสมุดไป่ตู้n。
⑵吸去染液，加一滴Ringer 液，注意使洋葱内表皮展平，盖上盖 片，显微镜观察。
⑶在高倍镜下，可见表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤 至旁边，在其周围有线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状。 仔细观察细胞质中线粒体的形态、数目和分布。
⑷ 在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大 小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点 向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大， 数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的 绝大部分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
六．实验中的注意事项
1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持它的充分氧化能力。 2、实验中速度要快，以免组织细胞死亡。
称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液，稍加热（30~40度）使之很快溶 解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于
暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。
临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml
Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。
3．1%、1/5000詹姆斯绿B溶液
称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加
二、实验原理
• 线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上分布有细胞色素 氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而 使线粒体显色，而细胞质中的染料被还原成无色。
• 液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重要的功能。中性 红是液泡的特殊染色剂，将液泡染成红色。在活细胞中，细胞 质和细胞核不着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核着 色。
实验三线粒体的超活染色与观察.
实验三、线粒体的超活染色与观察
一、实验目的:
利用显微镜观察染色体形态。
二、实验原理:
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
根据染料的“电化学”特性, 碱性染料的胶体表面带阳离子, 酸性染料的胶体表面带阴离子, 可与被染部分的阴或阳离子相互吸引发生结合。
Jann ' s green是毒性较小的碱性染料，可专一对线粒体进行超活染色，由于线粒体中的细胞色素氧化酶系的作用,使染色始终保持氧化状态（即绿色;而线粒体周围的细胞质中则被还原成无色的色基（即无色。
三、实验用品:
0.03%的JgB 染液,人口腔上皮细胞
四、超活染色与观察:
标本制作（人口腔黏膜上皮细胞临时涂片:在载玻片上滴一滴JgB ,用牙签在口腔面颊刮取细胞,涂于染液中0.5—1min ,加盖玻片观察。
五、作业:
绘口腔上皮细胞线粒体形态与分布。
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线粒体活体染色
活体染色：是使生活有机体的细胞或组织特异性着色， 但对该样本又没有毒害作用的一种染色方法。 目的：既显示活体细胞内的某些结构，又不影响细胞 的生命活动和产生任何物理和化学变化以致细胞的死亡。 应用：活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形 态结构和细胞生理、病理状态
线粒体活体染色
3. 加至5ml低渗液，吹打后将离心管置37℃水浴中低渗 20min。
染色体标本制备
4. 1000r／min离心8min。，弃上清液。 5. 固定：加入新配制的甲醇：冰醋酸(3：1)固定液5ml，
立即用吸管将细胞轻轻吸打均匀，静置固定20min。 （如此反复固定2～3次，每次20min。） 6. 滴片：固定的细胞经离心后，吸去上层固定液，加入
油镜下小鼠骨髓细胞染色体
油镜下观察
染色体标本观察
线粒体活体染色
线粒体活体染色
线粒体电镜观察
A
C
M
C
N
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线粒体电镜观察
C C C
N M
MV L
线粒体电镜观察
B M
M
N L
MV
MV
N
L
N
染色体标本制备
实验仪器、用具
天平 离心机 温箱 显微镜 酒精灯
注射器 解剖盘 解剖剪 刀片 离心管 吸管 烧杯 冰冻载玻片
骨髓细胞染色体标本制备
1. 秋水仙素处理动物：按4μg/g体重的剂量经腹腔注 射秋水仙素，3～4h后杀死动物。
2. 取骨髓取出动物后肢的股骨，剪去两端骨骺。 用注射器吸取2ml 0.075M KCl溶液注入骨髓腔，将 骨髓细胞冲入离心管中，用吸管反复吸打骨髓细胞， 使细胞团块分散。
染色体标本观察
1. 在显微镜下可观察到染色体被Giemsa应用液染为紫 红色或桃红色。小鼠染色体数目2n=40。
2. 在低倍镜下可见较多的圆形的间期细胞核。寻找染 色体分散良好的中期分裂相，移至视野中央，然后 用油镜观察。在油镜下，可见40条清晰的染色体， 每条染色体中，还可以见到着丝粒、染色体长臂和 短臂等特征。
少量新配制的固定液，将细胞团块轻轻吸打成悬液。 在干净、冰冷的载玻片上滴2～3滴上层细胞悬液， 在酒精灯上文火烘干。
染色体标本制备
7. 染色：将玻片标本放于染缸中，用1：10 Giemsa应 用液染色10min。
8. 冲洗：在自来水管下细流水冲洗15s。 9. 观察：用滤纸吸干玻片标本，置于显微镜观察。
1、人口腔粘膜上皮细胞活体染色显示线粒体 （1）用消毒牙签刮取口腔粘膜细胞，用力应稍重些， 以便得到生活力教旺盛的细胞，将刮取物涂在载玻片 中央。 （2）滴1滴詹纳斯绿B染液于细胞涂片处，2~3分钟后 盖上盖玻片。 （3）用显微镜观察，在高倍镜下可见细胞质中散在一 些被染成亮绿色的短棒状和圆形 实验目的： 掌握线粒体活体染色的方法与原理
实验原理：
线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。 活 体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而 又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B是线粒体的专一 性活体染色剂。呈碱性，具有脂溶性，能够穿过细胞膜进入细胞内，并 通过其结构中带有正电荷的染色基团结合到带负电荷的线粒体内膜上。 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细 胞质中染料被还原，成为无色状态。
3. 加至5ml低渗液，吹打后将离心管置37℃水浴中低渗 20min。
精巢细胞染色体标本制备
1. 秋水仙素处理动物：按4μg/g体重的剂量经腹腔注 射秋水仙素，3～4h后杀死动物。
2. 取雄性小鼠睾丸及附睾组织，将其放在平皿中。加入 2ml 0.075M KCl低渗液，用剪子剪开睾丸及附睾组 织，使精细胞游离出来，吸取上清液转移到离心管中。
线粒体活体染色
小鼠肝细胞中线粒体的显示
实验四 染色体标本制备
染色体标本制备
实验目的： 初步掌握动物骨髓（精巢细胞）染色体 标本制备基本过程，了解操作步骤的原 理。
染色体标本制备
实验原理： 染色体是细胞内遗传物质的载体。骨髓细胞具有高度
的分裂能力，可直接观察到细胞周期中的各个时相。但通 常情况下，中期染色体在镜下的数量较少，如经秋水仙素 处理后，分裂的骨髓细胞大多被阻断在有丝分裂中期，经 离心、低渗、固定、滴片等步骤，便可得到理想的染色体 标本，用以观察中期染色体形态和染色体组型分析等实验。