线粒体詹姆斯绿染色

线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理60JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名；小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观；1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯；（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、；（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿；（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细；目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命；应用：研究Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。

苏铁木精英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。

化学式：C30H31N6Cl 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。

能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。

詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。

它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。

原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。

通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。

Cas 编号: MDL 编号: 分子式: 中文别名: 2869-83-2 MFCD00011758 C30H31ClN6 EINECS 编号: 220-695-6 Beilstein 编号: 分子量: 511.06 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium 英文别名: chloride Diazin Green S Union Green B C.I. 11050 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。

常用作线粒体专一性活体性状: 染色剂. 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态. 用途: 贮存: 联合国编号: Risk: Safety: Hazard: 用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化还原指示剂和铜的电镀添加剂。

密封干燥保存。

S24/25小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。

2. 实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液（3）实验材料：小鼠 3. 实验原理：（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。

这种染色方法常用的是化学染料。

目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。

应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。

（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。

体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学” 特性。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。

一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。

（3）选择活体染料的原则：① 性质：有电化学特性② 低毒、无毒③ 低浓度：如实验中使用的是1/5000的詹纳斯绿B染液④ 专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色⑤ 常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。

4. 实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。

剪开腹腔，取出肝脏。

选取边缘较薄的肝组织0.5cm2放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。

（2）滴加1/5000的詹纳斯绿B染液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液染色20~30mins。

以组织边缘被染成蓝绿色为准。

（3）吸去染液，重新把组织置于小烧杯中。

滴加Ringer液约0.5mL，用剪刀充分剪碎组织制成悬液。

（4）静置上述悬液1~2mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。

5. 实验结果：视野中可见比较大的、呈圆形的肝细胞，此种细胞内有一些小颗粒被染成蓝绿色，就是线粒体。

视野中也有一些较小的细胞，有些可看到红色，是血细胞。

10*40显微镜下6. 分析与讨论（1）结果分析：部分肝细胞的线粒体被染成绿色（2）注意事项① 取肝组织：取肝组织时，应注意选择肝的边缘部分，这一部分组织的厚度差比分剪碎组织制成悬液。

（3）静置上述悬液1~2mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。

5. 实验结果：视野中可见比较大的、呈圆形的肝细胞，此种细胞内有一些小颗粒被染成蓝绿色，就是线粒体。

视野中也有一些较小的细胞，有些可看到红色，是血细胞。

10*40显微镜下观察：6. 分析与讨论GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂是一种旨在通过一种毒性较小的碱性染料特异性地使具有活性功能的线粒体呈现蓝绿色，从而判断线粒体功能的完整性的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）制备物的功能检测。

产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。

技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。

线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌、肝、肾等器官和组织的细胞中。

大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取，或从组织培养细胞中提取。

在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。

詹纳斯绿B（Janus green B），是一种毒性较小的碱性染料。

它可以对活细胞进行直接染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体的线粒体。

线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中的染料被还原呈无色。

产品内容GENMED保存液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）毫升GENMED清理液（Reagent C）毫升保存方式保存在－20℃冰箱里；GENMED染色液(Reagent B)，避免光照；有效保证6月用户自备毫升离心管：用于线粒体染色的容器光学显微镜：用于线粒体染色观察分析实验步骤实验开始前，将℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent B）置于冰槽里融化，并放在暗室里。

然后进行下列操作。

一、纯化线粒体染色1．从纯化的线粒体样品中移出至微升（含细胞中提取的线粒体）到新的预冷的毫升离心管，置于冰槽里（注意：线粒体须均匀分布，没有聚集成团）。

2．加入等量微升的GENMED染色液（Reagent B），轻柔混匀。

3．放进暗室里，在室温下孵育1分钟。

4．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片。

5．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色圆形或椭圆形颗粒（注意：可见蓝绿色渐渐变淡现象）。

6．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失。

二、活体细胞染色1．将待测细胞（X 细胞）移入到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为500g（或2000RPM；例如eppendorf 5415）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED清理液（Reagent C）或GENMED保存液（Reagent A）5．加入微升GENMED染色液（Reagent B），充分混匀6．放进暗室里，在冰槽里孵育分钟7．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片8．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色线状或颗粒小体。

9．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失。

注意事项1．本产品为20次（活体细胞）或400次（纯化线粒体）操作2．所有操作均须无菌状态下进行3．线粒体样品操作须在低温下进行，且操作快速4．操作时，须戴手套5．建议染色完成后，即刻进行显微镜观察分析6．孵育时，须避免光照7．本公司提供系列线粒体试剂产品兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿B是线垃体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。

当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。

染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。

将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。

(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。

线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。

线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。

线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。

线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。