实验五线粒体和液泡系的超活染色与观察
20141普通生物学实验教案
实验一：线粒体和液泡系的超活染色与观察【课前预习】1．什么是液泡系？2．为什么不能用一种活体染料同时观察多种细胞器？【目的要求】1. 观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布2. 了解细胞和细胞器的超活染色技术【基本原理】线粒体是细胞内一种重要细胞器，细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活细胞染色剂，毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，从而使线粒体显色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中的液泡系染成红色。
【实验用品】1. 器材：显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸2. 试剂：Ringer 液、1/5000 詹纳斯绿B、1/3000 中性红3. 材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦（或绿豆）幼根根尖【方法步骤】1．线粒体的超活染色与观察1）口腔上皮细胞线粒体的超活染色：1/5000 詹纳斯绿B1-2 滴，口腔上皮细胞（牙签刮取），载玻片于37℃恒温染色10-15min，显微镜下观察。
2）洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察：1/5000 詹纳斯绿B 溶液1-2 滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下观察。
2．小麦（或绿豆）幼根根尖液泡系的中性红染色观察小麦（或绿豆）幼苗根尖（1-2cm）纵切面切片，1/3000 中性红溶液1 滴染色5-10min，载玻片于37℃恒温水浴，盖上盖玻片压扁根尖，显微镜下观察。
【实验结果】口腔上皮细胞的线粒体分布洋葱内表皮细胞线粒体分布植物根尖液泡的中性红染色【实验报告】1．绘出人口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布并简要分析。
实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察
液，室温染色5-10min，吸去染液加一滴Ringer溶液，盖上盖玻片进行观察。注意
此时应该轻压盖片使根尖尽量压扁利于观察。
五、实验结果与作业：
对人口腔上细胞的线粒体活性染色结果绘图
注意：
对黄豆根尖液泡系的染色进行观察时，注意分别对根尖的不同区域进行观察， 并对其中的细胞的液泡进行比较。在根尖生长点附近的细胞形状较小排列紧密， 其中的液泡被染成红色，数量不只一个且较小；在伸长区的细胞形状逐渐变为长 方形，形状较大排列较为规则，其中的液泡也逐渐变少变大，并且颜色也变浅。 至成熟区后细胞中只可见一个很大的液泡。 液泡系（vacuolar system）： 在细胞内凡是由膜所包围的小泡和液泡，除线粒体和质体以外都属于液泡 系。液泡的来源是多方面的，它们与质膜、内质网、高尔基体有密切关系。在 电子显微镜下可明确地看到在细胞内有内质网、高尔基体、核膜等的囊状结构， 它们互相吻合，在细胞内构成复杂的网状结构，是内膜所包围的小泡和液泡的 统称
线粒体的形态, 大小,数目与分布
形态：线状，颗粒状 大小：长1.5m-3 m; 直径0.5-1.0 m。 胰脏外分泌细胞中有长达10~20μm的巨线粒体。 数目：几百到几千（与细胞种类，细胞生理功能和生理 状态有关）。 肝细胞约1700个线粒体，占细胞体积的20%； 许多哺乳动物成熟的红细胞无线粒体。 分布：不均匀（与细胞能量需求有关）
四、实验方法：
1、人口腔上皮细胞线粒体超活染色与观察 将清洁载玻片放在37度恒温水浴锅的金属板上，滴加2滴1/5000詹纳斯绿B 溶液，随后用牙签在口腔颊或者上颚处刮取上皮细胞放在载玻片的染液滴中，并 搅动几下。染色处理10-15min后盖上盖玻片进行观察。 2、植物细胞液泡系的超活染色与观察: 取豆芽的根尖0.5cm左右的长度进行纵切，尽量切的很薄，滴加中性红染
线粒体的超活染色与观察
【实验目的】掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。
【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿 B（ Janus green B）和中性红（ neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿 B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
【实验用品】1、材料：小白鼠肝脏、睾丸2、试剂：Ringer 溶液： NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl 2 0.03g + 蒸馏水 100ml；1%、1/5000 詹纳斯绿 B 溶液：称取 50mg 詹纳斯绿 B 溶于 5ml Ringer 溶液中， 30-40 ℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为 1%原液。
实验3-线粒体和液泡系的
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性 染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有 阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子， 这样，它们彼此就发生了吸引作用。但不是任何染料 都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒 性或毒性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使 用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶 解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，Janus green B 和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料， 对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
小麦根尖细胞液泡系的中性红染色观察 刀片→小麦幼苗根尖→切一纵切面→中 性红染色5-10分钟 吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻 片→镊子轻轻下压盖玻片→观察
五．实验结果
在小麦根尖细胞制片中，可见细胞质中 散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小 泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点 向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内， 液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在 成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大 液泡，占据细胞的绝大部分空间，将细胞核 挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
三、实验用品
（一）器材 显微镜、恒温水浴锅、镊子、刀片、载玻 片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸等。
（二）试剂
1、Ringer 溶液 生理盐水、缓冲液 氯化钠0.85g（变温动物用0.65g） ；氯化钾 0.25g ；氯化钙 0.03g ；蒸馏水100ml 2、1/3000中性红Ringer溶液 棕色瓶备用。 3．1/5000詹姆斯绿B Ringer溶液 最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。
五、实验结果 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进行 观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中分布着一些被染 成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即线粒体。
线粒体和液泡系的活细胞染色
【作 作
业】
一、绘图：人口腔上皮和小鼠肝细胞的超活染色结果。 绘图：人口腔上皮和小鼠肝细胞的超活染色结果。 线粒体和液泡系活体染色的原理是什么？ 二、线粒体和液泡系活体染色的原理是什么？
Experiment 10
线粒体和液泡系的活 细胞染色
【实验目的 实验目的】 实验目的
1．掌握细胞超活染色制作光镜标本的方法 ． 2. 了解线粒体和液泡系的基本形态、数量和分布 了解线粒体和毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构 而不影响细胞生命活动的一种染色方法。活染技术可用于研究生活状态下的细 胞形态结构及生理和病理变化。活体染色包括体内活染和体外活染两类。体外 活染又称为超活染色，是从活的动植物体分离出组织小块或部分细胞，以染液 浸染，使得染料选择性结合在细胞的特定结构上而显色。 詹纳斯绿 B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料毒 性小，是活体染色最重要的染料，对于线粒体和液泡系各具专一性。 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。詹纳斯绿 B 是线垃体的专一性活体染色剂，这是因为线粒体内的细胞色素氧化酶系可使染 料保持氧化状态呈蓝绿色，而在线粒体周围的细胞质中染料被还原为无色的色 基。 细胞内凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括 高尔基复合体、溶酶体、微体、吞噬泡等。中性红是液泡系专一的活体染色剂， 可将活细胞中液泡系染成红色，中性红染色可能与液泡中的某些蛋白有关。
【实验内容】 实验内容】
一、口腔上皮细胞线粒体的超活染色 1. 在洁净的载玻片上滴2-3d詹纳斯绿B和中性红混和染液。 2. 用消毒牙签在口腔颊部刮取口腔黏膜上皮，在染液中搅匀，染色15min。 3. 盖上盖玻片后镜检。可见细胞质中散在的被染成亮绿色的短杆状或颗粒状 线粒体。 二、小鼠肝细胞的超活染色 1. 小鼠颈椎脱臼处死，迅速打开腹腔，剪取肝脏边缘较薄的组织，置于含 Ringer液的平皿中，挤压去除组织中的血液，洗涤2-3次后吸去Ringer氏液。 2. 平皿内加詹纳斯绿B和中性红混和染液，注意让组织块上表面微露在染液 外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，使线粒体着色。 3. 染色25-30min，可见组织块边缘染成蓝色。将组织块用Ringer氏液洗涤1 次后转移至载玻片上，用镊子将组织块拉碎，使部分细胞或细胞群从组织块 脱离分散。 4. 去除稍大的组织块，使游离的细胞或细胞群留在载玻片上，盖上盖玻片， 镜检。可见肝细胞中含量丰富的线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察
实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察一、实验目的1、掌握解剖小鼠的基本技术与方法；2、掌握线粒体的超活染色原理及方法；3、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、实验原理1、线粒体线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2、活体染色活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告
线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告实验目的：
1. 了解超活染色的原理；
2. 掌握超活染色的方法；
3. 观察线粒体和液泡系的结构特点；
4. 学习常用的显微镜操作技巧。
实验步骤：
1. 取一份新鲜叶片，用透明胶带轻轻压住叶片，将透明胶带带上的叶片剥离下来。
2. 将剥离下的叶片放在载玻片上，加一滴超活染色溶液，并用盖玻片盖住。
3. 用粗目显微镜观察叶片上染色体的变化情况，观察细胞器的数量和形态特征，用细目显微镜进行进一步观察和记录。
实验结果：
经过超活染色处理后，我们可以清晰地观察到叶片细胞的结构特点。
其中，线粒体是细胞内重要的细胞器之一，其形态大小各异，常常呈圆柱状，且有许多线粒体。
而液泡是细胞内的囊状体，它可以储存水分、营养物质、色素等，体积大小不一，可见度较低，需要用高倍显微镜进行观察。
实验分析：
超活染色是一种能够使细胞有机物分解的过程中的酶不会破坏细胞结构和细胞器的染色方法。
该方法对细胞膜和细胞器的染色效果非常好，有助于观察和研究细胞的生理和功能，尤其是在细胞形态变化研究和药物筛选方面有着广泛的应用。
实验总结：
本次实验，通过超活染色，我们成功地观察到了植物叶片细胞内线粒体和液泡系的形态特点。
同时，我们也掌握了常用的显微镜操作技巧，对现代生命科学领域中细胞结构和功能的研究提供了帮助。
实验2线粒体和液泡系的超活染色与观察
实验2线粒体和液泡系的超活染色与观察中国海洋大学实验报告姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006线粒体与液泡系的超活染色与观察一、实验目的1、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；2、学习一些细胞器的超活染色技术。
3、观察豆芽根部细胞的液泡分布二、实验原理１、詹纳斯绿B染液被线粒体中的细胞色素氧化酶氧化而呈现蓝绿色，在细胞的其他部位因保持还原状态而呈现无色。
２、中性红染液为一种碱性染液，易随外周染液进入液泡，因液泡内环境偏酸性，所以使液泡被染上红色。
三、实验材料黄豆幼根根尖、人口腔上皮细胞，Ringer试剂，詹纳斯绿B染色液，中性红染液四、实验方法黄豆幼根根尖的超活染色（1）、使用中性红染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的中性红染液中染色１０分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察（２）、使用詹纳斯绿B染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液中染色10分钟盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察（３）、使用詹纳斯绿B和中性红染液混合染色①先加詹纳斯绿B，后加中性红染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液中染色10分钟向载玻片上的标本滴加中性红染液再染色１０分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察②、使用詹纳斯绿B和中性红染液同时染色将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液和中性红染液的混合物中染色10分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察人口腔上皮细胞的超活染色（1）、使用詹纳斯绿B染色用消毒牙签的钝端在口腔上皮轻轻地挂取部分上皮细胞在载玻片上滴加詹纳斯绿Ｂ染液，将牙签上的内容物在染液中混匀染色10分钟后，在显微镜下观察（２）、使用中性红染色用消毒牙签的钝端在口腔上皮轻轻地挂取部分上皮细胞在载玻片上滴加中性红染液，将牙签上的内容物在染液中混匀，染色10分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，在显微镜下观察五、实验结果1、观察根尖的染色情况图1、根部伸长区的切片及其在中性红染色下显示的液泡。
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四、实验方法
(一) 线粒体的超活染色与观察
• 洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 • 1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液１-2滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片
于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下观察．
(二) 小麦幼根根尖液泡系的中性红染色观察
• 初生小麦幼苗根尖（１－２cm）纵切面切片，1/3000中 性红溶液１滴染色5-10min，载玻片于37℃恒温水浴，盖 上盖玻片压扁根尖，显微镜下观察．
三、实验用品
1. 器材： 显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖 刀、 载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸
2. 试剂： Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ、1/3000中性红
3. 材料：洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦幼根根尖
称取50mg詹纳斯绿B溶于5mL Ringer溶液中，稍加微热 (30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1％原液。取1％原 液l mL加入49mL Ringer溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。 最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。
实验五线因为它具有溶解在类脂质 (如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。 • 詹纳斯绿 (Janus green B)和中性红 (neutral red)是常用的
碱性染料。 • 詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行活染,这是由于线
粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化 状态 (即有色状态), 呈蓝绿色。 • 中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中的液泡系 染成红色。
五、作业
绘出你所观察到的液泡及线粒体并简要分析