线粒体的活体染色
线粒体的活体染色
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3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进 行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布 着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是 线粒体。
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2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色观察
1) 用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔， 取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管 吸取Ringer 液，的活体染色与观察 1、人口腔上皮细胞线粒体的超活染色观察 1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴两 滴1/5000詹纳斯绿B染液。
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2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上 皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中， 染色10—15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再 加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的 染液，置显微镜下观察。
4) 在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜下观察，可 见具有l～2 个核的肝细胞质中，有许多被染成蓝绿色的 线粒体，注意其形态和分布状况。
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五、作业：
1、绘口腔上皮细胞形态结构。
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口腔上皮细胞 的线粒体分布
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洋葱内整理表ppt皮细胞的线粒体分布 13
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三、实验用品
1. 器材： 显微镜、手术器械、载玻片、盖玻片、吸管、牙
签、吸水纸、小平皿。 2. 试剂：
Ringer液、1/5000詹纳斯绿B、1%甲苯胺兰。 3. 材料：人口腔上皮细胞、小白鼠肝细胞。
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四、实验方法
（一）人口腔上皮细胞的制备与观察
• 用牙签刮取口腔上皮细胞均匀地涂在载片上(不可反复涂沫)，滴一 滴甲苯胺兰染液，染色5分钟，盖上盖片，吸去多余染液。显微镜下 观察可见覆盖口腔表面的上皮细胞为扁平椭圆形，中央有椭圆形核 ，染成蓝色。
实验二液泡系和线粒体的活体染色法
实验二液泡系和线粒体的活体染色法实验二液泡系和线粒体的活体染色法一、液泡系的活体染色液泡系（vacouome）是细胞内一种重要的细胞器，它普遍存在于动植物细胞。
动物细胞液泡系是法国学者M．Parat继Dangeard发现植物细胞液泡系之后于1924年第一次发现的。
在一切动物细胞内皆有。
通常为圆形泡状，数目多少不定。
除少数例外，腺细胞和幼年的细胞，通常有极性，皆集中在核的顶部上方，位于细胞的中央部分。
液泡系和线粒体（mitochondria）组成一个特殊的区域名高尔基区。
液泡是细胞内浓缩产品的重要场所，有十分重要的生理功能。
动物细胞内的液泡因为很小，如果不经过活体染色，就很难显示出来。
在有些细胞（如胰脏细胞）可用相差显微镜观察到液泡系。
根据中性红活体染色的结果，可知液泡系分为大、中、小三种类型的液泡。
小液泡被中性红染成均匀一致的深红色，即为“含浆液泡”（Vacuoles Plasmoccrines）。
经中性红染色后呈橙红色，有的边缘呈深红色新月形或环形，这是中等的“含分泌粒液泡”（Vacuoles rhagiocrines）。
含成熟分泌颗粒的大液泡因已全部蛋白质化，所以不再被中性红染色，只有液泡的残余部分（新月形或环形）被染成红色。
中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核绝对不被染色。
如果细胞死亡，细胞质及核才被中性红染成弥散的红色。
此时，液泡染色消失，液泡开始毁坏。
为了保证观察材料处于生活状态，要求一定的细胞环境条件——适宜的温度、渗透压、PH值、营养成分等。
因此观察时室温不要过高或过低，显微镜灯要有必要的滤热装置。
细胞材料要浸泡在生理盐水中。
长期观察还要注意防止因生理盐水蒸发而改变渗透压，并供给所需的养分等。
（一）仪器设备和材料1．复式显微镜（ X10、 X40及油镜头），擦镜纸2．解剖器，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。
3．实验材料（1）黄豆幼苗根尖（绿豆或水稻也可），把黄豆培育在培养皿中潮湿的滤纸上，使其发芽，直到胚根伸长到一厘米以上。
高中生物 线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察 【实验目的】 掌握一 ...
线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察【实验目的】掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。
【实验用品】一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。
二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。
三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。
【实验内容】一、兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。
染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。
将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。
(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
二、线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
三．线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
实验二 线粒体超活染色技术及观察
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【实验方法】 １、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于37℃恒温水浴： （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 （3）人口腔上皮细胞黏液 牙签刮取 （4）染色10～15min，盖上盖玻片，吸去周围染液， 显微镜下观察。 （5）计数50个细胞中线粒体数目，得出平均值。 ２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于37℃恒温水浴： （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 （3）洋葱鳞茎内表皮 镊子撕取 （4）染色10～15min，吸去染液，加Ringer溶液１ 滴，盖上盖玻片，显微镜下观察． （5）计数50个细胞中线粒体数目，得出平均值。
• 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同, 活体染 色可分为体内活染与体外活染两类.体内活染是以 胶体状的染料溶液注入动植物体内,染料的胶粒固 定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的 . 体外活染又称超活染色，是由活的动植物分离出部 分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料因其 “电化学”特性与被染部分相互吸引被选择固定在 活细胞的某种结构中而显色。 • 但不是任何染料都可作为活体染色剂使用,一般应 选择那些无毒或毒性小的碱性染料(易溶于类脂质) 并配成较稀的溶液来使用.詹纳斯绿Ｂ是活体染色 中重要的染料，对线粒体有专一性．詹纳斯绿Ｂ可 专一性地对对线粒体进行活染，这是由于线粒体内 的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化 状态(即有色状态),呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞 质中,这些染料被还原为无色的色基。
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【注意事项】 1、显微镜的使用 2、掌握好詹纳斯绿Ｂ染色时间 3、实验结束后，注意清理实验用具 【作业】 1、绘出人口腔上皮细胞和洋葱鳞茎内表皮 细胞示线粒体的形态与分布 • 2、分析染色时间对结果影响。
液泡系和线粒体的活体染色及观察
二、实验原理
线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上 分布有细胞色素氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B 保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显 色，而细胞质中的染料被还原成无色。
液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重 要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂，将液 泡染成红色。在活细胞中，细胞质和细胞核不 着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核 着色。
液泡系和线粒体的活体染色及观察
College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity
一、实验目的
学习并了解线粒体和液泡系超活染色的基本原 理、方法和注意事项；
学习如何观察动、植物活细胞内线粒体、液泡 系；
了解动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、 数量与分布；
将蟾蜍处死，剪取胸骨剑突最薄的部分一小块， 放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色 5~10min。
用吸管吸去染液，滴加Ringer液，盖上盖玻片 进行观察。
在高倍镜下，可见软骨细胞为椭圆形，细胞核 及核仁清楚易见，在细胞核的上方胞质中，有 许多被染成玫瑰红色大小不一的泡状体，这一 特定区域叫“高尔基区”，即液泡系。
二、实验原理
根据所用染色剂的性质和染色方法的 不同，通常把活体染色分为体内活染与体 外活染两类。体内活染是以胶体状的染料 溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、 堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于 识别的目的。体外活染又称超活染色，它 是由活的动、植物分离出部分细胞或组织 小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定 在活细胞的某种结构上而显色。
称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液，稍加热 （30~40度）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于
液泡系和线粒体的活体染色及观察
2）植物细胞线粒体的活体染色与观察（洋葱鳞茎内表皮 细胞）
⑴用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴在干净的载波片上， 然后用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置于染液中，染色10～ 15mห้องสมุดไป่ตู้n。
⑵吸去染液，加一滴Ringer 液，注意使洋葱内表皮展平，盖上盖 片，显微镜观察。
⑶在高倍镜下，可见表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤 至旁边，在其周围有线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状。 仔细观察细胞质中线粒体的形态、数目和分布。
⑷ 在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大 小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点 向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大， 数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的 绝大部分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
六．实验中的注意事项
1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持它的充分氧化能力。 2、实验中速度要快，以免组织细胞死亡。
称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液，稍加热（30~40度）使之很快溶 解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于
暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。
临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml
Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。
3．1%、1/5000詹姆斯绿B溶液
称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加
二、实验原理
• 线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上分布有细胞色素 氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而 使线粒体显色，而细胞质中的染料被还原成无色。
• 液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重要的功能。中性 红是液泡的特殊染色剂，将液泡染成红色。在活细胞中，细胞 质和细胞核不着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核着 色。
实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察
实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察一、实验目的1、掌握解剖小鼠的基本技术与方法；2、掌握线粒体的超活染色原理及方法；3、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、实验原理1、线粒体线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2、活体染色活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
实验一 线粒体的超活染色
实验一线粒体的活体染色与观察一、实验目的1．观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
2．学习一些细胞器的活体染色技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是将胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
三、实验仪器、材料和试剂1．仪器：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、。
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实验四线粒体的活体染色
实验目的：
1.掌握线粒体的活体染色原理及方法。
2.熟悉在耳缘静脉用空气栓塞法处死兔子的方法。
3.了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。
实验原理：
线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。
一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。
脊的横切面呈囊状或管状。
脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。
实验用品：
一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。
二、器材和仪器普通光学显微镜、手术器材一套、解剖盘、腊盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、20ml注射器、吸管。
三、试剂l／300詹纳斯绿B染液、0.9%Ringer氏液(哺乳类用)。
实验内容和方法：
一、兔肝细胞线粒体的活体染色
（一）方法
1.用空气栓塞法处死兔子（见图4-1），置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（约2～3mm3大小）。
2.放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，再用吸管吸去Ringer 氏液。
3.在平皿内滴加1／300詹纳斯绿B（Janus green B）染液，，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边缘染成蓝色时即可，一般需要染色30分钟。
染色期间翻动组织块几次，使其各表面均有机会接触空气和染液。
4. 染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，去除大组织块，就会
有一些游离的细胞或细胞群从组织块脱离留在载片上。
5.滴加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分，镜检。
结果：显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
二．线粒体的电镜照片观察
观察三张线粒体超薄切片的电镜照片：第一张是小鼠肾小管上皮细胞中线粒体的电镜照片，可见线粒体呈椭圆形和杆状，由双层膜包围，内膜向内突起成平板状脊，脊与线粒体长轴垂直排列，肾小管上皮细胞重吸收作用需要能量，线粒体数目多。
第二张是恒河猴脊髓突触内线粒体。
可见线粒体体积小、数目多，脊与线粒体呈同心圆排列。
第三张是小鼠睾丸间质细胞线粒体，线粒体的脊为分支的管，在照片上呈单层膜泡状。
作业：绘制光镜下肝细胞活体染色所见的线粒体及电镜下肾小管上皮细胞中线粒体的形态结构。