实验六 线粒体的活体染色和观察
线粒体活染色实验报告
线粒体活染色实验报告实验目的通过活染色技术观察和研究线粒体在细胞中的形态结构、数量和分布情况，进一步了解线粒体在细胞生物学过程中的功能和作用。
实验原理活染色是一种通过活体显微镜观察染色物在细胞中的分布和变化情况。
线粒体是细胞中重要的能量产生器，通过染色可以更直观地观察和研究线粒体的特征和状态。
本实验使用的线粒体活染色试剂为Mitotracker，它是一种荧光染料，可选择性地标记线粒体。
Mitotracker可以通过细胞膜进入细胞内，随着线粒体的活动而移动，通过检测荧光信号的分布和强度，可以直接观察线粒体在细胞中的运动和分布情况。
实验步骤1. 培养细胞：选择合适的细胞系，将其培养在含有适宜培养液的培养皿中，使细胞处于良好的生长状态。
2. 处理细胞：将培养好的细胞分为两组，一组为实验组，一组为对照组。
实验组细胞加入适量的Mitotracker活染试剂，对照组细胞不添加Mitotracker。
3. 孵育：将培养皿放入恒温培养箱中，以37C恒温孵育2小时，使Mitotracker 能充分进入细胞内，与线粒体结合。
4. 观察：将培养皿取出，用荧光显微镜观察细胞的荧光信号分布，并拍摄图像进行记录。
5. 分析：对实验组和对照组的观察结果进行比较分析，观察线粒体的数量、形态结构和分布情况变化。
实验结果通过荧光显微镜观察，我们发现实验组细胞中线粒体呈现出强烈的红色荧光信号，分布均匀且较为集中。
而对照组细胞中，没有观察到红色荧光信号，线粒体无特别明显的分布。
实验讨论1. 通过荧光显微镜观察线粒体荧光信号的数量、分布和形态结构变化，我们可以初步推测线粒体的活动程度和数量是否发生变化。
2. 通过与对照组细胞的比较，我们可以更准确地判断线粒体的特征和状态是否发生了变化。
3. 本实验结果表明，线粒体活染色技术可以用于研究线粒体在细胞功能和生物学过程中的作用和功能。
实验总结线粒体活染色技术是一种快速、准确的观察线粒体形态和特征的方法。
观察线粒体实验报告
观察线粒体实验报告观察线粒体实验报告线粒体是细胞中的一个重要细胞器，它在细胞内扮演着能量生产的关键角色。
为了深入了解线粒体的结构和功能，我们进行了一系列的线粒体实验观察。
本报告将详细介绍我们的实验过程和观察结果。
实验一：线粒体的形态观察我们首先使用显微镜对线粒体进行了形态观察。
通过细胞染色和显微镜放大，我们清晰地观察到了细胞质中的线粒体。
线粒体呈椭圆形或长圆形，大小约为1-10微米。
我们还发现，线粒体表面覆盖着一层光滑的膜，使其在细胞内具有良好的运动能力。
实验二：线粒体的功能观察为了进一步了解线粒体的功能，我们进行了线粒体的呼吸作用实验。
通过添加适当的底物和试剂，我们观察到线粒体产生了大量的ATP分子，这是细胞内能量的主要来源。
这表明线粒体在细胞内起着重要的能量转换作用。
实验三：线粒体与细胞凋亡的关系线粒体在细胞凋亡过程中也发挥着重要作用。
我们进行了线粒体与细胞凋亡关系的实验观察。
通过添加特定的药物，我们诱导了细胞凋亡，并观察到线粒体内的某些蛋白质释放到细胞质中。
这些蛋白质的释放触发了一系列的细胞凋亡信号，导致细胞死亡。
这个实验结果进一步证明了线粒体在细胞凋亡中的重要性。
实验四：线粒体与遗传疾病的关系线粒体还与一些遗传疾病的发生有关。
我们进行了一项实验，观察了线粒体DNA的突变对细胞功能的影响。
通过引入突变的线粒体DNA到细胞中，我们观察到细胞的能量代谢受到了明显的影响，导致细胞功能异常。
这一实验结果揭示了线粒体突变与一些遗传疾病的关联。
实验五：线粒体与老化的关系线粒体在细胞老化过程中也扮演着重要角色。
我们进行了一项实验，观察了线粒体功能与细胞老化之间的关系。
通过测量线粒体的呼吸作用和ATP产量，我们发现随着细胞的老化，线粒体功能逐渐下降，导致细胞能量供应不足。
这一实验结果进一步证明了线粒体在细胞老化中的重要性。
总结：通过一系列的线粒体实验观察，我们深入了解了线粒体的结构和功能。
线粒体不仅在细胞能量代谢中起着重要作用，还与细胞凋亡、遗传疾病和细胞老化等过程密切相关。
高中生物 线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察 【实验目的】 掌握一 ...
线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察【实验目的】掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。
【实验用品】一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。
二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。
三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。
【实验内容】一、兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。
染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。
将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。
(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
二、线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
三．线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体超活染色
兔子解剖流程
七、思考题 绘制兔子肝细胞或洋葱鳞茎表皮细胞的线粒体形态及 分布
六、实验步骤 1、兔子肝细胞线粒体的超活染色观察 （1）用空气注射法处死兔子，置于解剖盘中，迅速打开腹部， 取肝脏边液 （2）、取另一干净的表面皿，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液， 再将肝组织块移入染液，但不可将组织块完全浸没，要让组 织上面部分裸露在外面，这样细胞内的线粒体酶系可充分得 到氧化，易被染色，当组织块边缘被染成蓝绿色即可（一般 为20min） （3）、吸去染液，滴加Ringer溶液，用剪刀将组织块着色部 分剪碎，使细胞或细胞群散出。然后，用吸管吸去分离出的 细胞悬液，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片在低倍镜下选择 不重叠的肝细胞，在高倍镜或油镜下观察
实验五 线粒体超活染色 与显微观察
一、实验目的 掌握动、植物细胞活体染色的原理和相关的技术 二、实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织着色但又无害 的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内某些结构，而 不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起 细胞的死亡。 詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料， 可专一地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞 色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状 态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还 原为无色的色基（即无色状态）
2、洋葱鳞茎表皮细胞线粒体超活染色观察 （1）、用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴于干净 的载玻片上，然后，撕去一小片洋葱鳞茎内表皮，置于染 液中，染色10min。 （2）、用吸管吸取染液，加一滴Ringer溶液，注意使内表 皮组织展平，盖上盖玻片进行观察。 （3）、在高倍镜下，可见洋葱表皮细胞中央被一大液泡所 占据，细胞核被挤至一侧贴细胞壁处。仔细观察细胞质中 线粒体的形态与分布
线粒体的超活染色与观察
【实验目的】掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。
【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿 B（ Janus green B）和中性红（ neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿 B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
【实验用品】1、材料：小白鼠肝脏、睾丸2、试剂：Ringer 溶液： NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl 2 0.03g + 蒸馏水 100ml；1%、1/5000 詹纳斯绿 B 溶液：称取 50mg 詹纳斯绿 B 溶于 5ml Ringer 溶液中， 30-40 ℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为 1%原液。
实验六 线粒体的活体染色和观察
一、实验目的： 了解线粒体在细胞中的分布及形态、掌握研究方法。
二、实验原理： 健纳绿B（Janus Green B）对线粒体具有专一性染
色、毒性最小的碱性染料，由于线粒体中细胞色素酶 系的作用，使它始终保持氧化状态，并呈现蓝绿色， 在线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的色基。
• 三、实验材料：常规解剖器、大白鼠肝细胞
• 四、步骤及方法
• 1、鼠肝边沿较薄组织小块，放入盛有Ringer氏液 的培养皿内，洗去血液。
• 1、Ringer氏溶液的配方：
• NaCl
8.5/6.5克
• CaCl2
0.12克
• 重碳酸钠
0.2克
• 氯化钾
0.14克
• 磷酸氢二钠
0.01克
• 葡萄糖
2.0克
•水
1000ml
• 2、1% 1/5000浓度的健那绿B染液
• 称取0.5克Janus Green B溶于50mlRinger 氏溶液中，微热（30-40℃）使之很快溶解。 用滤纸过滤后即为1%原液。取1%原液1ml 加入49mlRinger氏液中，即成1/5000工作 液。装入滴瓶中备用。
• 2、将1/5000Janus Green B 染液倒入另一培养皿 中，将肝组织移入其内，但不可将组织块完全淹 没，要让组织上面部分半裸露在染液外面，这样， 细胞内的线粒体的酶系可充分得到氧化，线粒体 才易染色，一般染30-40分钟（组织块边缘染成蓝 绿色即可）。
• 3、染色后，用两根解剖针，同时用左右两手，用 一手的针压住组织块，然后用另一手的针稍稍用 力拉肝组织块边缘，就会有一些细胞或细胞群和 组织块分离。
实验二液泡系和线粒体的活体染色及观察解读
二、实验原理
活体染色是指对生活有机体的细胞或 组织能着色但又无毒害的一种染色方法。 它的目的是显示生活细胞内的某些结构， 而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、 化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术 可用来研究生活状态下的细胞形态结构和 生理、病理状态。
二、实验原理
根据所用染色剂的性质和染色方法的 不同，通常把活体染色分为体内活染与体 外活染两类。体内活染是以胶体状的染料 溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、 堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于 识别的目的。体外活染又称超活染色，它 是由活的动、植物分离出部分细胞或组织 小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定 在活细胞的某种结构上而显色。
四、实验步骤
⑵实验者用牙签宽头在自己口腔颊部粘膜处稍用 力刮取上皮细胞，将第一次刮下的粘液状物洗 去，将第二次刮下的粘液状物放入载玻片的染液 滴中，染色10～15min（注意不可使染液干燥， 必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸 吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 ⑶在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高 倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核 周围胞质中分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或 短棒状的结构，即线粒体。
七．实验作业
1．绘制口腔上皮细胞线粒体形态示意图。
2．绘制黄豆根尖细胞液泡形态示意图。
3．请谈谈实验中有哪些注意事项?
二、液泡系的超活染色与观察
中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高 尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的 液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着 色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
小麦或黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色 观察
⑴ 实验前，把黄豆培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其 发芽，胚根生长到1以上备用。 ⑵ 用双面刀片把黄豆幼苗根尖（约1～2cm长）小心切一 纵切面，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色 5～10min。 ⑶ 吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子 轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。 ⑷ 在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见 细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡， 这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察， 在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增 大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色 的巨大液泡，占据细胞的绝大部分空间，将细胞核挤到 细胞一侧贴近细胞壁处。
线粒体活性监测实验报告
本实验旨在通过一系列实验方法，监测线粒体的活性，了解线粒体在细胞代谢中的作用，并探讨影响线粒体活性的因素。
二、实验原理线粒体是细胞内的能量工厂，通过氧化磷酸化过程产生ATP，为细胞提供能量。
线粒体活性可以通过检测其呼吸链酶活性、线粒体膜电位、ATP产生量等指标来评估。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 人胚胎肾细胞（HEK293）- 胰蛋白酶- DMEM培养基- 胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）混合维生素- 胰岛素- 转铁蛋白- 硒- 健那绿染液- 线粒体呼吸链复合体活性测试盒- ATP检测试剂盒2. 仪器：- 倒置显微镜- 流式细胞仪- 分光光度计- 离心机- 细胞培养箱1. 细胞培养：将HEK293细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养。
2. 线粒体活性检测：- 线粒体呼吸链复合体活性检测：使用线粒体呼吸链复合体活性测试盒，通过测定细胞内NADH脱氢酶和细胞色素c氧化酶的活性，评估线粒体呼吸链复合体的活性。
- 线粒体膜电位检测：使用流式细胞仪，通过检测细胞内线粒体膜电位的变化，评估线粒体膜电位的变化情况。
- ATP产生量检测：使用ATP检测试剂盒，通过测定细胞内ATP的产生量，评估线粒体的ATP产生能力。
3. 影响因素研究：- 温度对线粒体活性的影响：将细胞置于不同温度下培养，检测线粒体活性指标的变化。
- 药物对线粒体活性的影响：使用不同药物处理细胞，检测线粒体活性指标的变化。
五、实验结果1. 线粒体活性检测：- 线粒体呼吸链复合体活性检测结果显示，细胞内NADH脱氢酶和细胞色素c氧化酶的活性均较高，表明线粒体呼吸链复合体的活性较好。
- 线粒体膜电位检测结果显示，细胞内线粒体膜电位较为稳定，表明线粒体膜电位较好。
- ATP产生量检测结果显示，细胞内ATP的产生量较高，表明线粒体的ATP产生能力较强。
2. 影响因素研究：- 温度对线粒体活性的影响：在较低温度下，线粒体活性下降；在较高温度下，线粒体活性上升。
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盛军庆 南昌大学生命科学与食品工程学院
实验七、线粒体的活体染色和观察
一、实验目的： 了解线粒体在细胞中的分布及形态、掌握研究方法。
二、实验原理： 健纳绿B（Janus Green B）对线粒体具有专一性染
色、毒性最小的碱性染料，由于线粒体中细胞色素酶 系的作用，使它始终保持氧化状态，并呈现蓝绿色， 在线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的色基。
• 称取0.5克Janus Green B溶于50mlRinger 氏溶液中，微热（30-40℃）使之很快溶解。 用滤纸过滤后即为1%原液。取1%原液1ml 加入49mlRinger氏液中，即成1/5000工作 液。装入滴瓶中备用。
• 6、结果：油镜下，可见肝细胞质中线粒体被染成蓝绿色， 呈颗粒状或线条状，在细胞核周围分布得特别多。
• 1、Ringer氏溶液的配方：
• NaCl
8.5/6.5克
• CaCl2
0.12克
பைடு நூலகம்• 重碳酸钠
0.2克
• 氯化钾
0.14克
• 磷酸氢二钠
0.01克
• 葡萄糖
2.0克
•水
1000ml
• 2、1% 1/5000浓度的健那绿B染液
• 3、染色后，用两根解剖针，同时用左右两手，用 一手的针压住组织块，然后用另一手的针稍稍用 力拉肝组织块边缘，就会有一些细胞或细胞群和 组织块分离。
• 4、用吸管将分离的细胞吸起，放在载玻片中央的 Ringer氏液中。垫两根头发，盖上盖玻片，液体 不要太多。
• 5、油镜观察：观察时，不断地上下微调节螺旋， 使盖玻片上下稍稍移动，这样所观察到的材料总 得到充足的氧气，线粒体的染色才显示得非常清 楚。
• 三、实验材料：常规解剖器、大白鼠肝细胞
• 四、步骤及方法
• 1、鼠肝边沿较薄组织小块，放入盛有Ringer氏液 的培养皿内，洗去血液。
• 2、将1/5000Janus Green B 染液倒入另一培养皿 中，将肝组织移入其内，但不可将组织块完全淹 没，要让组织上面部分半裸露在染液外面，这样， 细胞内的线粒体的酶系可充分得到氧化，线粒体 才易染色，一般染30-40分钟（组织块边缘染成蓝 绿色即可）。