ANLN在肝内胆管癌中的表达及对胆管癌细胞增殖的影响
miRNA let-7a在肝内胆管癌组织中的表达和其对胆管癌细胞生物学行为影响的实验研究
分类号密级U D C 编号硕士学位论文miRNA let-7a 在肝内胆管癌组织中的表达及其对胆管癌细胞生物学行为影响的实验研究研究生姓名：周璐璐指导教师姓名、职称：李灼日主任医师学科、专业名称：外科学研究方向：肝胆胰外科2013年5月南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。
与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。
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作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。
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对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。
作者签名：导师签名：年月日年月日目录英文缩写词表--------------------------------------------------------------------1 中文摘要--------------------------------------------------------------------------2英文摘要--------------------------------------------------------------------------5引言--------------------------------------------------------------------------------9第一部分--------------------------------------------------------------------------13 材料与方法--------------------------------------------------------------------14结果-----------------------------------------------------------------------------17讨论-----------------------------------------------------------------------------20第二部分--------------------------------------------------------------------------24 材料与方法--------------------------------------------------------------------25结果-----------------------------------------------------------------------------30 讨论-----------------------------------------------------------------------------37结论--------------------------------------------------------------------------------40参考文献--------------------------------------------------------------------------41综述--------------------------------------------------------------------------------46主要成果目录--------------------------------------------------------------------57致谢--------------------------------------------------------------------------------58英文缩写词表ABBREVIATIONS缩略词英文全称中文全称CCK8 Cell counting kit-8 细胞计数试剂盒DMEM Dulbecco modified eagle medium Eagle’s培养基EDTA Ethylenediamine tetraacetic acid 二乙胺四乙酸FBS Fetal bovine serum 胎牛血清FAM fluorescein 羧基荧光素HMGA2 High mobility group protein A2 高迁移家族蛋白A2 miRNA MicroRNA 微小RNAmRNA Messenger RNA 信使RNAPBS Phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液RNA Ribonucleic Acid 核糖核酸siRNA small interfering RNA 小干扰RNAqRT-PCR quantitive Real-time PCR 实时荧光定量聚合酶链式反应DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜中文摘要miRNA let-7a在肝内胆管癌组织中的表达及其对胆管癌细胞生物学行为影响的实验研究研究背景与目的：肝内胆管细胞癌是起源于肝内胆管二级分支以上的一种原发于胆管上皮细胞的恶性肿瘤，或称为肝内型胆管癌。
β-catenin在胆管细胞癌中的表达特点及其临床意义
度随肿 瘤分化程度的增 高而逐渐增强，ｂ ｅ ａ ｔ ． ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ ￣
参与肿瘤的浸润及转移 ，表达程度受年龄、有无淋 巴结转移等病理参数影环蛋白 病理参 数
【 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｏ ｂ ｊ ｅ ｅ ｉ ｆ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｘ ｐ ｌ ｏ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ｎｃ ａ ｅ ｏ ｆ ｂ ｅ ｔ ａ － ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ ｉ ｎ ｃ ｈ ｏ ｌ ａ ｎ ｇ ｉ ｏ ｃ ａ ｒ ｃ ｉ ｎ ｏ ｍａ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ
ｂ ｅ ｔ ａ － ｅ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ ｉ ｎ ７ ０ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ｏｆ ｓ ａ ｍｐｌ ｅ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｃ ｈ ｏｌ ａ ｎ ｇ ｉ ｏ ｃ ａ ｒ ｃ ｉ ｎ ｏ ｍａ ． Ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｈ ｉ ｐ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｂ ｅ ｔ ａ — ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ｐ ａ ｒ ｍ ｅ ａ ｔ ｅ ｒ ｓ ｗａ ｓ ａ ｎａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｄ．
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７ ０ ２・
浙江临床医学２ ０ １ ５ 年５ 月第ｌ ７ 卷第５ 期
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基 础 研 究
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ｌ ｌ ｉ ｎ 在胆管细胞癌中的表达特点及 Ｉ 缶 床意义
许远 王 兆． 洪 吴志 豪 张伟★
【 摘要 】 目的 探讨连环蛋白 （ ｂ ｅ ｔ ａ ． ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ ） 在胆管细胞癌中的 表达特点 及其临 床意义。方法 检测７ ０ ＂ Ｎ 胆管细胞癌组织标本中ｂ ｅ ｔ ａ —
CCN1在肝细胞癌中的表达及作用机制初步研究的开题报告
Cyr61/CCN1在肝细胞癌中的表达及作用机制初步研究的开题报告1. 研究背景和意义肝细胞癌（HCC）是全球范围内一种常见的肝脏恶性肿瘤，其发病率持续上升，已成为严重的公共健康问题。
针对HCC的治疗方法主要包括外科手术、放疗、化疗和靶向治疗等，但效果并不理想。
因此，探究HCC的分子机制及发病机理，寻找可靶向治疗的分子靶点具有重要的临床应用价值。
Cyr61/CCN1是一个与肿瘤发展密切相关的分子，被广泛认为是肿瘤侵袭性、迁移性及转移性的重要调节因子。
Cyr61/CCN1在多种肿瘤中表达升高，与癌细胞的增殖、生存、转移等诸多重要生物学过程密切相关。
然而，其在HCC中的作用机制尚未得到充分的研究。
因此，本研究旨在探究Cyr61/CCN1在HCC中的表达特征以及其在HCC发生发展中所扮演的作用机制，为HCC的诊断和治疗提供新的思路和理论基础。
2. 研究内容和方法本研究将通过以下步骤进行：（1）通过RT-qPCR和Western blotting方法检测HCC组织和对照组织中Cyr61/CCN1的表达水平，并进行统计学分析。
（2）利用细胞学实验验证Cyr61/CCN1基因的促进在HCC细胞增殖、生存、迁移和转移中的作用，包括细胞增殖分析、细胞周期分析、转移实验等。
（3）通过Western blotting分析Cyr61/CCN1对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响，并验证信号通路在Cyr61/CCN1调节HCC细胞生物学过程中的作用。
3. 预期结果和意义预计本研究将获得以下结果：（1）Cyr61/CCN1在HCC中的表达水平显著升高。
（2）Cyr61/CCN1能够促进HCC细胞的增殖、生存、迁移和转移，并影响PI3K/AKT/mTOR信号通路。
（3）该研究结果可为开发HCC的新型治疗药物提供依据，尤其是基于Cyr61/CCN1或PI3K/AKT/mTOR信号通路的靶向治疗方法。
肝门部胆管癌中 CD133的表达及 RNA 干扰抑制对胆管癌细胞增殖的影响
肝门部胆管癌中 CD133的表达及 RNA 干扰抑制对胆管癌细胞增殖的影响张升涛;刘斌;常琦;姬乐;王加中【摘要】目的： CD133是肿瘤干细胞特征性的表面标记分子。
文中探讨CD133在肝门部胆管癌组织中的表达以及抑制CD133表达对胆管癌细胞QBC939细胞增殖的影响。
方法免疫组化法检测32例肝门部胆管癌组织、癌旁胆管组织中CD133的表达，分析CD133的表达水平与临床病理特征的关系。
将CD133 siRNA转染至QBC939细胞内，通过Real-time PCR检测细胞转染后CD133 mRNA的表达，CCK-8法分别检测24、48、72 h后细胞转染情况。
将实验细胞分为转染组（ CD133 siR-NA基因序列转染QBC939细胞组）、阴性对照组（阴性对照引物转染QBC939细胞组）以及空白对照组（无任何引物转染QBC939细胞组），每组实验重复3次。
结果胆管癌组织中CD133阳性表达率62．5％（20／32），高于癌旁胆管组织中CD133阳性表达率28．1％（9／32），差异有统计学意义（P＝0．0082）。
CD133阳性表达可影响肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移（P＜0．05）。
CD133 siRNA转染后，CD133 mRNA相对表达量低于空白对照组（0．437±0．014 vs 0．826±0．022，P＜0．05）。
转染24、48和72 h后，细胞的增殖活性受到明显抑制，与阴性对照组、空白对照组的差异均有统计学意义（ P＜0．05）。
结论CD133在胆管癌组织中呈高表达，且影响肿瘤的分化、TNM分期、淋巴结转移。
抑制CD133在胆管癌细胞QBC939的表达可抑制细胞增殖的活性。
%Objective CD133 is a surface marker of tumor stem cells .The aim of this study was to investigate the expression ofCD133 in hilar cholangiocarcinoma and its effect on the proliferation of cholangiocarcinoma QBC 939 cells. Methods The expres-sion of CD133was detected by immunohistochemistry in hilar cholangiocarcinoma and adjacent bile duct tissue in 32 patients, followed by analysis of the relationship between the expression level of CD 133 and clinical pathological characteristics of the malignancy .CD133 siRNA was transfected into the QBC 939 cells, the expression of CD133 mRNA in the cells determined by real-time PCR, and the status of transfection assessed after 24, 48, and 72 hours by CCK-8. The cells were divided into a transfection group ( CD133 siRNA gene transfected into QBC 939 cells ) , a negative control group ( negative control primers transfected into QBC 939 cells ) , and a blank control group (no primer transfected into QBC939 cells), and the experiment was repeated 3 times in each group. Results The positive ex-pression of CD133 was significantly higher in cholangiocarcinoma than in the adjacent tissue (62.5%[20/32] vs28.1%[9/32], P=0.008 2) and it was closely related to the degree of tumor differentiation , TNM stage and lymph node metastasis ( P<0.05) .The rela-tive expression of CD133 mRNA was markedly lower in the transfection than in the blank control group (0.437±0.014 vs 0.826±0.022, P<0.05).At 24, 48 and 72 hours after transfection, the proliferation activity of the cells was significantly inhibited as compared with that in the negative control or blank control group ( P<0.05) . Conclusion CD133 is highly expressed in cholangiocarcinoma and as-sociated with tumor differentiation , TNM stage, and lymph node metastasis .The proliferation of cholangiocarcinoma QBC 939 cells can be inhibited by suppressing the expression of CD 133 in them.【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2016(029)011【总页数】5页(P1206-1210)【关键词】胆管癌;CD133;RNA干扰;细胞增殖【作者】张升涛;刘斌;常琦;姬乐;王加中【作者单位】716000 延安，延安大学附属医院普通外科;716000 延安，延安大学附属医院普通外科;716000 延安，延安大学附属医院普通外科;716000 延安，延安大学附属医院普通外科;710003 西安，西安交通大学第二附属医院普外科【正文语种】中文【中图分类】R657.4胆管癌是肝胆系统常见的恶性肿瘤，可分为肝门部胆管癌或上段胆管癌、中段胆管癌和下段胆管癌3个类型。
Lamininγ2在肝外胆管癌侵袭转移中作用的初步研究的开题报告
Lamininγ2在肝外胆管癌侵袭转移中作用的初步研
究的开题报告
题目：Lamininγ2在肝外胆管癌侵袭转移中作用的初步研究
背景和意义：
肝外胆管癌是一种常见的恶性肿瘤，具有高度恶性、易转移和复发性强等特点。
其中，胆管癌的浸润与转移是影响生存率和预后的关键因素。
因此，研究肝外胆管癌浸润和转移的分子机制，对该疾病的防治具有重要意义。
Lamininγ2作为一种细胞外基质分子，在癌细胞的侵袭转移过程中发挥着重要作用。
该分子已被证实在多种癌症中高表达，但其与肝外胆管癌侵袭转移的关系仍不清楚。
因此，本研究旨在初步探讨Lamininγ2在肝外胆管癌浸润和转移中的作用及其机制。
研究内容和方法：
本研究将采用人胆管癌细胞系进行体外实验，通过干扰Lamininγ2基因和加入外源Lamininγ2蛋白，观察其影响胆管癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，并测定相关信号通路分子的表达变化。
同时，采用小鼠肝外胆管癌模型进行体内实验，观察Lamininγ2对癌细胞在体内侵袭转移的影响，并分析相关分子表达变化。
预期结果：
通过本研究，可以初步探讨Lamininγ2在肝外胆管癌侵袭转移中的作用及其机制，为深入研究肝外胆管癌侵袭转移提供参考，并为该疾病的防治提供新思路和新靶点。
ANRIL在肝细胞癌中的表达及与预后的关系要点
按说明书要求将各组细胞加入Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室
（美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司），２４ ｈ后清洗、固定、染色、 计数。 六、分组
二、ＡＮＲＩＬ表达与肝癌预后的关系 通过Ｋａｐｌａｎ—Ｍｅｉｅｒ法及ｌｏｇ－ｒａｎｋ检验分析
ＡＮＲＩＬ与肝癌预后的关系：ＡＮＲＩＬ高表达组患者术 后平均生存时间为１８．２个月（９５％Ｃ／：１４．９～ ２１．５个月），ＡＮＲＩＬ低表达组患者术后平均生存时
Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ ｉｎ ｔｈｅ ＩＮＫ４
非编码ＲＮＡ（ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ，ｎｃＲＮＡ）是一大
非编码ＲＮＡ（１０ｎｇ
ｎｏｎ—ｃｏｄｉｎｇ
ＲＮＡ．１ｎｃＲＮＡ）是指长
类不具有蛋白编码能力的ＲＮＡ转录本，其中，长链
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－６３１Ｘ．２０１６．１０．０１６
ｔｏ
ｌｏｃｕｓ（ＡＮＲＩＬ）ｉｎ ｈｅｐａｔｏｅｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ
ｅｖａｌｕａｔｅ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｃｌｉｎｉｅｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｅａｌ
ｆｅａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＨＣＣ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ｑＲＴ—ＰＣＲ） ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＮＲＩＬ ｉｎ ＨＣＣ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ａｄｉａｅｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ（ｎ＝９０）ａｎｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｄａｔａ．Ｋａｐｌａｎ—Ｍｅｉｅｒ ｃｕｒｖｅｓ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ Ｃｏｘ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅ．Ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｉｌｅｎｃｅ ＡＮＲＩＬ ａｎｄ ｔｏ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅ：ｃｔｓ ｏｆ ｒｅｄｕｃｅｄ ＡＮＲＩＬ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
Axin与β-catenin在肝细胞肝癌组织中的表达及临床意义的开题报告
Axin与β-catenin在肝细胞肝癌组织中的表达及临床意义的开题报告一、研究背景和意义肝癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率一直居高不下。
虽然近年来针对肝癌的治疗手段不断提高和完善，但其预后仍然较差。
因此，研究肝癌的发病机制和相关生物学指标，对于预防和治疗肝癌具有重要的临床意义。
Axin和β-catenin是重要的细胞信号传递分子，在多种肿瘤中都有明显的表达异常。
研究表明，在肝细胞肝癌组织中，Axin和β-catenin的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、预后等指标有明显的关联。
因此，尽可能准确地确定肝癌患者的Axin和β-catenin表达情况，对于评估肝癌病情、制定治疗方案、预测预后具有重要的临床意义。
二、研究内容和方法本研究旨在探究Axin和β-catenin在肝细胞肝癌组织中的表达情况及其临床意义。
通过对一定数量的肝细胞肝癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁组织进行免疫组织化学分析，比较Axin和β-catenin的表达情况，进一步探讨其在肝癌病情评估和预后预测中的临床意义。
具体研究步骤和方法如下：1. 收集一定数量的肝细胞肝癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁组织。
2. 制备肿瘤组织和癌旁组织的石蜡切片，进行免疫组织化学染色，检测Axin和β-catenin的表达情况。
3. 分析Axin和β-catenin的表达情况与肝癌病情评估和预后预测之间的关系。
4. 对研究结果进行统计学分析，得出Axin和β-catenin在肝细胞肝癌组织中的表达情况和临床意义。
三、预期结果本研究预期能够发现肝细胞肝癌患者的Axin和β-catenin表达情况与其肿瘤的分化程度、浸润深度、预后等指标之间的关联，并为肝癌病情评估和预后预测提供新的思路和依据。
同时，本研究还可以为临床上制定更为个性化、有效的治疗方案提供参考。
四、研究意义本研究将有助于深入探究Axin和β-catenin在肝癌发生和发展中的作用机制，为肝癌的预防和治疗提供新的突破口。
AnnexinⅡ和Ki-67在胆管癌中的表达及意义
AnnexinⅡ和Ki-67在胆管癌中的表达及意义黄波;赵国忠【期刊名称】《临床肝胆病杂志》【年(卷),期】2011(027)002【摘要】目的分析胆管癌组织中膜粘连蛋白Ⅱ(Annexin Ⅱ)和细胞核增殖抗原(Ki-67)的表达,并探讨其与胆管癌临床病理特征之间的关系. 方法运用免疫组织化学染色法检测AnnexinA2和Ki-67蛋白在58例胆管癌组织和癌旁胆管组织及15例非肿瘤胆管组织中的表达,结合临床病理学资料进行统计分析. 结果 Annexin Ⅱ在三种组织中阳性表达率分别为74.1%(43/58)、31.0%(18/58)、13.3%(2/15),差异有统计学意义.Ki-67在三种组织中阳性表达率分别为81.0%(47/58)、37.9%(22/58)、6.7%(1/15),其阳性表达在三种组织之间均有统计学意义.Annexin Ⅱ和Ki-67蛋白阳性表达与胆管癌的组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关.胆管癌中Annexin Ⅱ和Ki-67蛋白表达呈正相关. 结论Annexin Ⅱ、Ki-67与胆管癌的发生、发展和淋巴结转移有关,可作为胆管癌诊断的辅助指标,综合应用二项指标对评价胆管癌的恶性程度及预后可能有一定的参考价值.【总页数】4页(P178-180,193)【作者】黄波;赵国忠【作者单位】宁夏医科大学研究生学院,银川,750004;宁夏医科大学附属医院肝胆外科,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R735.8【相关文献】1.Annexin-A1和Annexin-A2在外阴硬化性苔藓及外阴鳞癌中的表达及意义 [J], 沈晓宇;姜英;武昕2.增殖细胞核抗原、Ki-67在肝内胆管癌及肝内胆管结石胆管中的表达及意义 [J], 张文华;唐瑞峰;白建国;孙超;尚军峰;于国栋;姚红亮3.肝外胆管癌组织中Ki-67抗原的表达及临床意义 [J], 蔡圣强;陈玉泉;毛勤生;周新泽4.宫颈癌组织中Annexin A2、NF-κBp65、Ki-67的表达及意义 [J], 樊素珍;苑中甫5.Ki-67抗原与TGFβ1在肝胆管癌中表达及意义 [J], 蔡欣然;黄长玉;杨发端因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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TPX2 相关，经 Western blot 和 RT⁃PCR 得到验证。结论：ANLN 可能通过 TPX2 调节肝内胆管癌细胞的增殖能力，促进肝内胆管
癌的发展，这可为肝内胆管癌的治疗提供新靶点。
［关键词］ 肝内胆管癌；ANLN；TPX2；增殖
［中图分类号］ R735.8
［文献标志码］ A
［文章编号］ 1007⁃4368（2019）01⁃026⁃06
［Acta Univ Med Nanjing，2019，39（01）：026⁃031］
第 39 卷第 1 期 2019 年 1 月
李仁宝，余书勇，钱晓峰. ANLN 在肝内胆管癌中的表达及对胆管癌细胞增殖的影响［J］.
南京医科大学学报（自然科学版），2019，39（01）：026-031
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肝 内 胆 管 癌（intrahepatic cholangiocarcinoma， ICC）是一种起源于左右肝管汇合部以上胆管上皮 细胞的恶性肿瘤，发病率约占胆管癌（cholangiocar⁃ cinoma，CCA）的 8%，是仅次于肝细胞癌（hepatocel⁃ lular carcinoma，HCC）的原发性肝脏恶性肿瘤 。 ［1-2］ 基于 ICC 的发病机制和生物学特性与肝外胆管癌和 肝细胞癌不同，美国癌症联合委员会（AJCC）在 2010 年发布的第 7 版 TNM 分期系统中将 ICC 作为独立的 胆道肿瘤进行分期和讨论［3］。目前手术切除是公认 的首选治疗手段，然而即便行根治性切除，ICC 患者 的 5 年无瘤生存率与 5 年总体生存率分别仅 2%~ 39%和 5%~56%［4- 。 5］ 由于 ICC 起病相对隐匿，无明 显临床表现，约 2/3 的患者在就诊时已处于晚期，失 去了根治性手术的机会，据报道这部分缺乏有效治 疗手段的患者生存期仅 3 个月［6］。因此，对于 ICC 恶 性进展密切相关的基因功能以及调控机制的深入 研究有助于为 ICC 的个性化治疗和靶向药物使用提 供帮助。
材于 2009—2016 年收治于南京医科大学第一附属 医院行 ICC 根治术且术后病理诊断明确的患者。所 有患者术前均未进行放化疗，术后病理根据美国癌 症联合委员会的标准由 2 名病理科专家独立诊断。 所有组织标本离体后立即保存于液氮中，进入肿瘤
组织库。所有受试者及家属已被告知并签署知情
同意书，且该研究获得南京医科大学第一附属医院
无 RNA 酶 的 ddH2O，与 cDNA 溶 液 1 μL 配 制 成
10 μL 体 系 。 经 第 一 阶 段 95 ℃ 5 min；第 二 阶 段
95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，持续 40 个循环；第
三阶段 72 ℃ 7 min 的反应后，检测荧光。β⁃actin 为
doi：10.7655/NYDXBNS20190105
Expression of ANLN in intrahepatic cholangiocarcinoma and its effect on proliferation of cholangiocarcinoma cells
Li Renbao1，2，Yu Shuyong2，Qian Xiaofeng1 1Department of Hepatobiliary Surgery，the First Affiliate Hospital of NMU，Nanjing 210029；2Department of Hepatobiliary Surgery，Hainan Cancer Hospital，Hankou 570100，China
因此，本课题组综合使用肿瘤基因组图谱（TC⁃ GA）分析 ANLN 的表达情况、String 等预测 ANLN 的 相关蛋白，结合本中心现有ICC 组织标本，明确ANLN 与 ICC 的临床相关性。通过体外功能实验以及通路 验证明确 ANLN 在 ICC 中的作用机制。
1 对象和方法
1.1 对象 本研究使用的 40 对 ICC 标本及癌旁组织均取
伦理委员会批准。术心随访人员负责，随访重点为患者
术后结局（存活、复发、死亡）。
1.2 方法
1.2.1 生物信息学分析
通 过 在 线 软 件 FireBrowse（http：//firebrowse.
org/）分析 ANLN 在 TCGA 数据库中各肿瘤组织的表
达情况，通过在线软件 String10.0（https：//string⁃db.
1南京医科大学第一附属医院肝胆外科，江苏 南京 210029；2海南省肿瘤医院肝胆外科，海南 海口 570100
［摘 要］ 目的：探讨 ANLN 基因在肝内胆管癌组织中的表达情况以及在胆管癌细胞增殖中的作用及机制。方法：收集手术
切除的 40 例肝内胆管癌患者癌组织及癌旁组织，采用 RT⁃PCR、Western blot 以及免疫组化的方法检测组织中 ANLN mRNA 和
蛋白表达水平，比较 ANLN 在肝内胆管癌组织与癌旁组织中的表达差异，分析其与肿瘤分期及肿瘤大小的关系。使用小干扰
RNA 建立 ANLN 低表达 HUCCT1 细胞系，行 CCK8、平板克隆以及流式细胞检测观察 ANLN 对胆管癌细胞体外增殖能力的影
响。行 String 软件预测与 ANLN 相关的蛋白，行 RT⁃PCR、Western blot 方法检测两者间的相关性以及周期蛋白 CyclinD1 表达差
内参，以
2 （C -ΔΔCT T
代表循环阈值）表示
ANLN
基因在
胆管癌组织中的相对表达量。引物序列见表 1，实
验重复 3 次。
org/cgi/input.pl）预测分析 ANLN 可能的相关蛋白。
1.2.2 实时定量 PCR