病理学研究进展与实验技术共85页
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病理学研究新的技术方法
通过质谱分析等技术对蛋白质进行鉴定和定量，能够研究 蛋白质在疾病中的表达谱和修饰谱的变化，为疾病的诊断 和治疗提供分子标志物。
代谢组学技术
代谢物检测技术
利用质谱、核磁共振等技术对生 物体液和组织中的代谢物进行定 性和定量分析，能够研究代谢物 在疾病发生发展过程中的变化和 机制。
代谢通路分析技术
通过对代谢物进行通路分析，能 够揭示代谢通路在疾病中的变化 和异常，为疾病的诊断和治疗提 供新的靶点和思路。
02
单细胞测序技术
通过对单个细胞进行基因组测序，能够揭示细胞间的基因表达差异和疾
病发生发展过程中的基因变异，为精准医学和细胞治疗提供有力支持。
03
基因编辑技术
利用CRISPR-Cas9等基因编辑技术对基因进行定点编辑，能够研究基因
功能与疾病的关系，同时为基因治疗和遗传性疾病的预防提供新的手段
。
蛋白质组学技术
细胞培养与模拟技术
原代细胞培养
细胞系培养
直接从患者或实验动物组织中分离出细胞 进行培养，保持细胞原有的生物学特性， 用于研究疾病发生发展机制。
利用已建立的细胞系进行培养，具有无限 增殖能力，适用于大规模药物筛选和疾病 模拟研究。
三维细胞培养
细胞模拟技术
模拟体内细胞生长环境，构建三维细胞培 养体系，更真实地反映细胞间的相互作用 和信号传导。
蛋白质分离与鉴定技术
双向凝胶电泳技术
通过等电点和分子量两个维度的分离，实现复杂蛋白质样品的高分 辨率分离。
质谱技术
利用质谱仪对蛋白质进行精确的分子量和序列测定，包括MALDITOF、ESI等。
蛋白质芯片技术
将大量蛋白质固定在芯片上，通过特异性相互作用进行蛋白质的分离 和检测。
代谢组学技术
代谢物检测技术
利用质谱、核磁共振等技术对生 物体液和组织中的代谢物进行定 性和定量分析，能够研究代谢物 在疾病发生发展过程中的变化和 机制。
代谢通路分析技术
通过对代谢物进行通路分析，能 够揭示代谢通路在疾病中的变化 和异常，为疾病的诊断和治疗提 供新的靶点和思路。
02
单细胞测序技术
通过对单个细胞进行基因组测序，能够揭示细胞间的基因表达差异和疾
病发生发展过程中的基因变异，为精准医学和细胞治疗提供有力支持。
03
基因编辑技术
利用CRISPR-Cas9等基因编辑技术对基因进行定点编辑，能够研究基因
功能与疾病的关系，同时为基因治疗和遗传性疾病的预防提供新的手段
。
蛋白质组学技术
细胞培养与模拟技术
原代细胞培养
细胞系培养
直接从患者或实验动物组织中分离出细胞 进行培养，保持细胞原有的生物学特性， 用于研究疾病发生发展机制。
利用已建立的细胞系进行培养，具有无限 增殖能力，适用于大规模药物筛选和疾病 模拟研究。
三维细胞培养
细胞模拟技术
模拟体内细胞生长环境，构建三维细胞培 养体系，更真实地反映细胞间的相互作用 和信号传导。
蛋白质分离与鉴定技术
双向凝胶电泳技术
通过等电点和分子量两个维度的分离，实现复杂蛋白质样品的高分 辨率分离。
质谱技术
利用质谱仪对蛋白质进行精确的分子量和序列测定，包括MALDITOF、ESI等。
蛋白质芯片技术
将大量蛋白质固定在芯片上，通过特异性相互作用进行蛋白质的分离 和检测。
病理学新技术 ppt课件
基因水平逐步深入，正如病理学前辈们所说：技
术是病理学之母。
ppt课件 2
• 病理学技术包括传统病理学技术和现代新技术。有人 体病理学技术和实验病理学技术，二者相互渗透，互 为促进，传统的福尔马林固定、石蜡切片、HE染色是 病理学的基本技术，已广泛应用于基础和临床病理学
工作。根据科研的发展，临床病理学的需要，又不断
3．纯化抗体； 4．抗体标记组织切片； 5．染色反应； 6．观察结果。
ppt课件 10
（二）常用标记物
1．酶 为最常用的标记物。作为标记的酶应具有以下条件：① 底物是特异性的，且易于显示；②酶反应产物稳定，不易 扩散；③容易获得纯酶分子且较稳定；④酶标记抗体后， 不影响两者的活性；⑤被检组织中不应存在内源性相同的 酶或其底物。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（ HRP ）、 硷性磷酸酶（AKP）、葡萄糖氧化酶（GOD）等。 2．荧光素 指在高能量光波的激发下能产生荧光的物质。常用 的有异硫氰酸荧光素（ FITC ）、四甲基异硫氰酸罗达明 （TRITC）。 3．生物素 其与卵白素的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。 4．金属标记物 如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。
1．孚尔根反应法（Feulgen reaction）显示DNA呈现紫红色。 2．甲绿-派郎宁法（Methyl Green-Pyronin method）显示核酸（ 甲绿染DNA呈现绿色，派郎宁染RNA呈现红色） 3．苏丹Ⅲ冰冻切片染色显示中性脂肪呈现橘红色。
4．普鲁士蓝反应显示组织中含铁血黄素。
5．过碘酸雪夫反应（Periodic acid schiffreaction, PAS）显示糖 原和其它多糖物质为紫红色。
ppt课件 11
三．常用免疫组织化学染色方法
（一）直接法 • 将荧光素(免疫荧光法)或酶直接标记在第 一抗体上，以检查相应的抗原。直接法 具有特异性强的优点，但敏感性差，耗 费抗体多。
病理学实践与技术
免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中价值
确定肿瘤来源和分化程度
通过检测特定抗原的表达情况，可以推断出肿瘤的来源和 分化程度，如CK7和CK20的表达情况可用于区分肺腺癌和 结直肠癌。
辅助肿瘤分型
免疫组化染色可以将形态学上具有相同特征的肿瘤进一步 区分为不同的亚型，如淋巴瘤的T细胞型和B细胞型等。
指导临床治疗方案制定
标志物和药物靶点。
代谢组学技术
代谢组学技术可以揭示病理状态 下细胞代谢的变化，为病理诊断 提供代谢相关的生物标志物和治
疗策略。
单细胞测序技术
单细胞测序技术可以揭示单个细 胞的基因表达和变异情况，为病 理诊断提供更精细的分子信息。
06
病理学实践与技术挑战与展望
Chapter
当前面临主要挑战和问题
1 2 3
冰冻切片技术
将新鲜组织快速冷冻后切 片，适用于需要保持组织 原有形态和抗原性的研究 。
超薄切片技术
利用超薄切片机将组织切 成纳米级别的薄片，用于 电子显微镜观察。
染色技术
常规染色技术
01
如苏木精-伊红染色（HE染色），用于显示组织结构和细胞形态
。
特殊染色技术
02
如网状纤维染色、胶原纤维染色等，用于显示特定组织成分。
提高病理学实践与技术水平建议
01
加强标准化和质量控制
建立统一的病理诊断标准和质量控制体系，提高诊断准确性和一致性。
02
推广新技术应用
加大新技术在病理学实践中的推广力度，提高普及率和应用水平。
03
加强人才培养和队伍建设
建立完善的人才培养体系，加强病理医生的培训和队伍建设，提高整体
素质和水平。同时，鼓励跨学科合作与交流，拓宽病理医生的视野和思
组织学和病理学的研究进展
组织学和病理学的研究进展组织学和病理学是医学领域中非常重要的学科，它们主要研究人体的组织结构和功能，并探究不同疾病对组织和器官的影响。
在过去几十年中，这两个学科的研究进展十分显著，为人类的健康事业做出了重要贡献。
一、组织学研究进展组织学是研究人体和动物体内各种组织的形态结构和功能特点的学科。
随着科技的进步和医学技术的不断发展，组织学研究不断取得进展。
目前，组织学研究主要分为以下几个方面：1. 细胞形态学与功能研究细胞是人体最基本的单位，其形态和功能的正常与否对于人体的正常运转有着至关重要的影响。
在细胞形态学方面，如今的研究方法主要包括显微镜技术、光学技术和蛋白质组学等方法。
在细胞功能方面，目前主要研究细胞周期、细胞分化、凋亡和信号转导等课题。
2. 生物材料与组织工程生物材料与组织工程是近年来发展非常迅速的研究领域，其主要研究方向是如何使用合适的材料和技术来修复和重建受损组织。
这种方法已成为一种新的治疗手段，比如利用3D打印技术制作骨骼组织或器官、利用基因工程技术修复受损的细胞组织等。
3. 组织学与生物信息学整合组织学与生物信息学整合的发展，使得科学家们能够通过更加高效的手段来分析和解读组织结构和功能相关的数据。
特别是近年来，越来越多的机器学习技术得到应用，这使得对大规模数据分析的需求得到更好的满足，让研究者可以更高效地进行细胞图像分析、生物信息学分析等。
二、病理学研究进展病理学研究的重点是了解不同疾病对人体健康的影响，为各种疾病的治疗和预防提供技术支持和理论指导。
而在过去几十年中，病理学的研究取得了极大的进展，其中的一些重要方面包括：1. 病理学诊断技术的提高随着现代医学技术的不断发展，人们对于病理学诊断技术的要求也越来越高。
目前，病理学诊断技术已经进入数字化时代，利用数字病理学技术可以直观和准确地显示组织和细胞的结构和功能，为临床医生提供更为准确和有效的诊断信息和治疗决策。
2. 分子病理学的发展分子生物学和生物技术的快速发展，也推动了分子病理学的研究和应用。
免疫病理-研究进展课件
免疫穩定 清除體內衰老、損 自身免疫病(過度) 傷、變性的細胞
免疫監視 識別、清除體內突 發生腫瘤(不足) 變的細胞
Immune Response免疫應答
Innate immune response 天然
natural immune response non-specific immune response
• 致敏階段：抗原進入機體後，誘發B細胞產 生IgE，之後以其Fc段與肥大細胞表面的高 特異性Fc受體結合，使機體呈致敏狀態。
• 發敏階段：再次進入機體的同一抗原與 已經結合在肥大細胞上的IgE發生特異性 反應，使肥大細胞發生脫顆粒，將細胞 中的組胺、白三烯等物質釋放，誘發組 織反應，使平滑肌收縮、毛細血管擴張、 血管通透性增加，出現一系列過敏反應 症狀的過程。
IgE 介 導 超 敏 反 應 的 機 制
致敏階段 產生變應原
效應階段
環境
花粉
寄生蟲
次 Th2驅動的
IgE應答
級
體表 屏障
初次接觸變應原
再次接觸變應原
淋
巴
DC
Th Th2
IL-4/IL-13 B
器
IgE
APC Th2
巨噬細 胞
肥大細胞 脫顆粒
官
局 部 組 織
漿細胞
IgE結合FceRI 陽性的肥大細胞
Natural killer (NK) cell Complement and acute phase proteins
固有應答特點
PRR識別PAMP 無clone性擴增 迅速產生效應 無免疫耐受、無免疫記憶
單核-巨噬細胞系統
Dendritic cells (DC)
Dendritic cells were first described by Paul Langerhans (Langerhans cells) in the late nineteenth century. It wasn't until 1973, however, that the term "dendritic cells" was coined by Ralph M. Steinman and Zanvil A. Cohn. In 2007 Steinman was awarded the Albert Lasker Award for Basic Medical Research for his discovery.
病理学研究进展与实验技术
6
放射自显影术
在生物学研究中，常用的放射性同位素 主要是能量低、射程短、电离作用强的射线 如3H，14C，32P，35S，125I等或其它化合物 。例如将125I注入体内可观察碘在甲状腺内 的碘化部位及过程;又如把3H标记的胸腺嘧 啶苷或氨基酸注入体内，可以研究细胞内 DNA合成及蛋白质合成及其代谢过程。还 可对标本中银颗粒数目进行定量分析；也可 用液体闪烁计数器对细胞或匀浆的放射强度 进行定量研究。
12
原位杂交
为显示特定的核酸序列必须具备3个重要 条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能 与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与 探针结合的标记物。
13
原位杂交
原位杂交的实践应用： 原位杂交技术可在原位研究和检测细胞 合成某种多肽或蛋白质的基因表达，进一步从 分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。 随着相继建立的生物素和地高辛等非放射性标 记技术，并结合应用免疫组织化学的显示技术， 使原位杂交技术迅速推广应用于基础理论研究 和临床诊断。如在肝炎病毒，出血热病毒，人 乳头瘤病毒，结核菌等检测中该法被迅速推广 应用。由于其存在的不足，国外用微波加热技 术进行改良，在节省杂交时间和蛋白酶K方面 取得了良好的效果。 14
10
原位杂交
原位杂交的发展简史: 1969年美国耶鲁大学的Gall等首先用爪蟾 核糖体基因探针与其卵母细胞杂交，将该基因 进行定位； 1970年Buongiorno Nardelli和Amaldi等相 继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织 的基因定位，从而创造了原位杂交技术。 此后，由于分子生物学技术的迅猛发展， 特别是20世纪70年代末到80年代初，分子克隆 、质粒和噬菌体DNA的构建成功，为原位杂 交技术的发展奠定了深厚的技术基础。
放射自显影术
在生物学研究中，常用的放射性同位素 主要是能量低、射程短、电离作用强的射线 如3H，14C，32P，35S，125I等或其它化合物 。例如将125I注入体内可观察碘在甲状腺内 的碘化部位及过程;又如把3H标记的胸腺嘧 啶苷或氨基酸注入体内，可以研究细胞内 DNA合成及蛋白质合成及其代谢过程。还 可对标本中银颗粒数目进行定量分析；也可 用液体闪烁计数器对细胞或匀浆的放射强度 进行定量研究。
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原位杂交
为显示特定的核酸序列必须具备3个重要 条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能 与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与 探针结合的标记物。
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原位杂交
原位杂交的实践应用： 原位杂交技术可在原位研究和检测细胞 合成某种多肽或蛋白质的基因表达，进一步从 分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。 随着相继建立的生物素和地高辛等非放射性标 记技术，并结合应用免疫组织化学的显示技术， 使原位杂交技术迅速推广应用于基础理论研究 和临床诊断。如在肝炎病毒，出血热病毒，人 乳头瘤病毒，结核菌等检测中该法被迅速推广 应用。由于其存在的不足，国外用微波加热技 术进行改良，在节省杂交时间和蛋白酶K方面 取得了良好的效果。 14
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原位杂交
原位杂交的发展简史: 1969年美国耶鲁大学的Gall等首先用爪蟾 核糖体基因探针与其卵母细胞杂交，将该基因 进行定位； 1970年Buongiorno Nardelli和Amaldi等相 继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织 的基因定位，从而创造了原位杂交技术。 此后，由于分子生物学技术的迅猛发展， 特别是20世纪70年代末到80年代初，分子克隆 、质粒和噬菌体DNA的构建成功，为原位杂 交技术的发展奠定了深厚的技术基础。
病理学的历史与进展
临床医学对病理学的需求与挑战
精准诊断的需求
个体化治疗的需求
针对不同患者的个体差异，临床医生需要病理学提 供个体化的治疗建议，以实现最佳的治疗效果。
随着医学的发展，临床医生对疾病的诊断要 求越来越精准，需要病理学提供更精细、更 准确的病理诊断和鉴别诊断。
新技术、新方法的挑战
随着医学科技的进步，新的诊断技术和治疗 方法不断涌现，对病理学的技术水平和创新 能力提出了更高的要求。
作用
为临床医生提供疾病诊断的依据，指导临床治疗及预后评估；同时，通过病理 学研究，可以深入了解疾病的本质和发生发展规律，为医学科学的发展提供重 要支撑。
XX
PART 02
病理学的历史发医学理论
古代病理学思想起源于古希腊、古罗马、古印度和古中国等文明，形成了各自独 特的医学理论，如希波克拉底的四体液说、中医的阴阳五行理论等。
病理学对临床医学的指导意义
疾病本质的认识
病理学通过研究疾病的病因、发 病机制、病理变化等方面，揭示 疾病的本质，为临床医学提供诊
断和治疗的理论依据。
预测疾病的发展
通过对病理过程的研究，可以预测 疾病的可能发展趋势和转归，为临 床医生制定治疗方案提供参考。
指导临床实践
病理学知识可以帮助临床医生正确 解读病理检查结果，准确判断病情 ，制定合理的诊疗方案。
病理学研究方法
介绍病理学的研究手段和技术，包括尸体剖检、组织学和细胞学观 察、实验动物模型等。
疾病的原因和发病机理
探讨疾病的起因，如生物因素、理化因素、遗传因素等，以及疾病 发生发展的机制。
各论部分
呼吸系统疾病
探讨呼吸系统疾病的病理生理 ，如肺炎、肺癌、慢性阻塞性 肺疾病等。
泌尿系统疾病
医学临床病理学实验技术
个性化医疗：实验技术将更加注重个性化医疗，为患者提供更精准的治疗方案。 跨界融合：实验技术将与其他学科进行跨界融合，如人工智能、大数据等，推动医学临床病理 学的发展。 环保和可持续发展：实验技术将更加注重环保和可持续发展，减少对环境的影响。
基因编辑技术：CRISPRCas9等
单细胞测序技术：单细胞 RNA测序等
观察与分析：在显微镜下 观察染色后的切片，分析 细胞形态、结构和功能等 方面的变化
结果记录与报告：将观察 和分析结果记录下来，撰 写实验报告，以便于交流 和参考
实验前准备： 确保实验器材、 试剂和样本齐 全，并检查其
质量
实验操作：严 格按照实验步 骤进行，避免
操作失误
实验记录：详 细记录实验过 程和结果，便 于后续分析和
组织病理学技术： 包括切片、染色、 显微镜观察等
分子病理学技术： 包括基因测序、 PCR、免疫组化 等
细胞病理学技术： 包括细胞培养、 细胞分离、细胞 功能检测等
生化病理学技术： 包括酶活性测定、 激素测定、代谢 产物测定等
早期：主要依赖肉眼观察和经验判断 19世纪：显微镜的发明和应用，使病理学实验技术有了质的飞跃 20世纪初：组织化学技术的发展，为病理学实验技术提供了新的手段 20世纪中叶：免疫组织化学技术的出现，使病理学实验技术更加精准和高效 21世纪：分子生物学技术的发展，为病理学实验技术带来了革命性的变革
实验成本较高，包括设备、试剂、 人力等
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
实验结果可能受到多种因素影响， 如样本质量、实验条件等
实验结果可能存在误差，需要多次 重复实验以验证结果
样本量有限：实验中可 能无法获得足够的样本
进行验证
基因编辑技术：CRISPRCas9等
单细胞测序技术：单细胞 RNA测序等
观察与分析：在显微镜下 观察染色后的切片，分析 细胞形态、结构和功能等 方面的变化
结果记录与报告：将观察 和分析结果记录下来，撰 写实验报告，以便于交流 和参考
实验前准备： 确保实验器材、 试剂和样本齐 全，并检查其
质量
实验操作：严 格按照实验步 骤进行，避免
操作失误
实验记录：详 细记录实验过 程和结果，便 于后续分析和
组织病理学技术： 包括切片、染色、 显微镜观察等
分子病理学技术： 包括基因测序、 PCR、免疫组化 等
细胞病理学技术： 包括细胞培养、 细胞分离、细胞 功能检测等
生化病理学技术： 包括酶活性测定、 激素测定、代谢 产物测定等
早期：主要依赖肉眼观察和经验判断 19世纪：显微镜的发明和应用，使病理学实验技术有了质的飞跃 20世纪初：组织化学技术的发展，为病理学实验技术提供了新的手段 20世纪中叶：免疫组织化学技术的出现，使病理学实验技术更加精准和高效 21世纪：分子生物学技术的发展，为病理学实验技术带来了革命性的变革
实验成本较高，包括设备、试剂、 人力等
添加标题
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实验结果可能受到多种因素影响， 如样本质量、实验条件等
实验结果可能存在误差，需要多次 重复实验以验证结果
样本量有限：实验中可 能无法获得足够的样本
进行验证