2.4霉菌
霉菌和酵母菌计数作业指导书
文件制修订记录1.0目的1.1规定食品中霉菌和酵母菌计数的方法。
2.0适用范围2.1适用于凉茶、浓缩汁、原辅材料中的霉菌和酵母菌的计数。
3.0职责微生物检验员负责按作业指导书进行检验。
4.0术语（无）5.0工作流程图见附录A中A.16.0内容及要求6.1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：6.1.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。
6.1.2 恒温培养箱： 28 ℃±1 ℃。
6.1.3 显微镜：10×～100×。
6.1.4 电子天平：感量0.1 g。
6.1.5 无菌锥形瓶:容量500 mL、250 mL。
6.1.6 无菌广口瓶：500 mL。
6.1.7 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。
6.1.8 无菌平皿：直径90 mm。
6.1.9 无菌试管: 10 mm×75 mm。
6.1.10 无菌灭菌桶。
6.2 培养基和试剂6.2.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：见附录A 中A.2。
6.2.2 孟加拉红培养基：见附录A 中A.3。
6.3 操作步骤6.3.1 样品的稀释6.3.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品至盛有225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。
或放入盛有225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10 的样品匀液。
6.3.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品至盛有225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
6.3.1.3 取1 mL 1:10 稀释液注入含有9 mL 无菌水的试管中, 另换一支1 mL 无菌吸管反复吹吸,此液为1:100 稀释液。
6.3.1.4 按6.3.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管。
联苯双酯胶囊微生物限度检查方法适用性试验
联苯双酯胶囊微生物限度检查方法适用性试验摘要：目的建立联苯双酯胶囊的微生物限度检查方法，并验证该方法。
方法根据《中国药典》 2020年版（四）部通则 1105、1106和 1107的规定，建立需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数及控制菌的检查方法。
结果进行3次独立的平行试验，阴性对照组无菌生长，阳性菌的回收率在 0.5~2.0，符合要求。
需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数采用平皿法；控制菌采用常规法。
结论建立的方法适用于检验联苯双酯胶囊的微生物限度。
关键词：联苯双酯胶囊；微生物限度检查；平皿法；常规法联苯双酯胶囊为硬胶囊剂，用于慢性迁延型肝炎伴有丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高异常者；也可用于化学药物引起的 ALT 升高。
结合《中国药典》2020 年版（四）部通则 1105、1106 和 1107的规定，建立联苯双酯胶囊微生物限度检查方法，并进行方法适用性试验，确认建立的微生物限度检查方法适用于联苯双酯胶囊的检验。
1仪器与材料1.1仪器YXQ-100SII立式蒸汽灭菌锅（上海博迅实业有限医疗设备厂）、YXQ-LS-75SII立式蒸汽灭菌锅（上海博迅实业有限医疗设备厂）、GRX-9203A 热空气消毒箱（苏州江东精密仪器有限1公司）、JJ600电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）、HH-2 恒温水浴锅（江苏金坛市亿通电子有限公司）、DNP-9162电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）、LRH-800-M 培养箱（韶关市泰宏医疗器械有限公司）、303AS-4 培养箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）、303A-4培养箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）、YX-24LM 手提式压力蒸汽灭菌器（江阴滨江医疗设备）。
1.2 培养基及试药：0.9%无菌氯化钠溶液（批号 20200706-18），来源于广州化学试剂厂。
pH7.0无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液（批号 1103145），胰酪大豆胨琼脂培养基（批号 1101961），胰酪大豆胨液体培养基（批号1103511），沙氏葡萄糖琼脂培养基（批号1094051），麦康凯琼脂培养基（批号1090141），麦康凯液体培养基（批号 1091911），均来源于广东环凯微生物科技有限公司。
曲霉菌的应用及原理
曲霉菌的应用及原理1. 引言曲霉菌是一种常见的真菌，广泛存在于自然界中。
曲霉菌具有许多应用价值，不仅可以用于食品加工、饲料发酵等领域，还可以作为生物农药和生物能源的生产菌种。
本文将重点介绍曲霉菌的应用及其原理。
2. 曲霉菌的应用2.1 食品加工•曲霉菌是许多传统食品加工过程中不可或缺的一种微生物。
例如，豆豉的发酵过程中，曲霉菌可以利用豆类中的营养物质进行发酵，产生特有的风味和香气。
•曲霉菌也常用于咸鱼、干酪等食品的发酵过程，可以改善口感和延长保质期。
2.2 饲料发酵•曲霉菌在饲料发酵中具有重要作用。
曲霉菌可以分解饲料中的碳水化合物、蛋白质等营养物质，提高饲料的可利用性和营养价值。
•曲霉菌还可以分泌酶类，一些特定的酶类有助于消化饲料中的纤维素等不易消化的成分，提高饲料的营养效益。
2.3 生物农药•曲霉菌中的一些菌株具有生物防治害虫和病原菌的能力。
这些曲霉菌菌株可以分泌杀虫分子或抑菌分子，对作物害虫和植物病原菌起到防治作用。
•生物农药的应用具有环境友好、对人体无害、不会产生抗药性等优点，被视为可替代化学农药的重要手段。
2.4 生物能源的生产•曲霉菌是主要的真菌发酵生产菌株之一，常用于生物能源的生产中。
•曲霉菌可以分解废弃物、农作物秸秆等难以降解的有机物，产生乙醇、生物柴油等可再生能源。
利用曲霉菌进行生物发酵，不仅可以减少环境污染，还可以替代传统石油能源，具有重要的经济和环境效益。
3. 曲霉菌的原理曲霉菌的应用原理主要包括以下几个方面：3.1 发酵原理曲霉菌具有强大的代谢能力，能够分解多种有机物质。
在食品加工和饲料发酵过程中，曲霉菌分泌酶类可以分解食物中的蛋白质和碳水化合物，产生乳酸、醋酸等有益化合物。
这些化合物不仅能够改善食品口感，还能提高饲料的营养价值。
3.2 杀虫原理一些曲霉菌菌株能够分泌杀虫分子，对作物害虫起到防治作用。
这些杀虫分子可以致死害虫、抑制其生长发育，从而控制害虫数量。
而这些杀虫分子对于人体和环境则相对安全，不会对人体和其他非目标生物造成危害。
Alcalase 2.4 L FG 丝氨酸内切蛋白酶水解内部肽键说明书
产品数据表1 / 2生效日期 2012-03-19 Alcalase®2.4 L FG丝氨酸内切蛋白酶水解内部肽键本产品中的关键酶活性的提供者为产品特性标称酶蛋白酶(Subtilisin)2.4 AU-A/g标称活力褐色颜色液体物理形状1.17密度近似值（g/ml）颜色随批次的不同而不同。
颜色的深浅不代表酶的活力高低。
产品规格Protease unit AU-A 菌落总数大肠菌群大肠杆菌沙门氏菌2.4--未检出未检出5000030/g/g/g/25 g/25 g单位上限下限重金属铅砷镉汞最大值最大值最大值最大值最大值毫克/ 千克毫克/ 千克毫克/ 千克毫克/ 千克毫克/ 千克30530.50.5酶制剂分析方法可以从客户中心或客服代表处获取。
成分甘油, CAS no. 56-81-5水, CAS no. 7732-18-5蛋白酶（枯草菌素）, CAS no. 9014-01-1*50 41 9成分大约％(重量/重量) *被定义为酶浓度(干物质基础)过敏原过敏原过敏原包含的物质¹包含的物质¹牛肉胡萝卜芹菜含麸质谷类²鸡肉可可粉香菜玉米甲壳类动物鸡蛋鱼谷氨酸乳糖豆类羽扇豆牛奶软体动物芥末坚果³花生猪肉芝麻黄豆二氧化硫/亚硫酸盐，大于10 mg/kg 或10 mg/l无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无物质是依据LeDa/ALBA和经修订的欧盟指令2000/13/EC和2007/68/EC而定义的¹例如：小麦、黑麦、大麦、燕麦、斯佩尔特小麦 (spelt)、卡姆小麦(kamut)²³例如：杏仁、榛子、核桃、腰果、山核桃、巴西坚果、开心果、澳洲坚果和昆士兰果（Queensland nut）营养价值本产品具有的主要营养价值约千焦/100克酶产品。
653• 蛋白质• 多羟基化合物• 水分9 克/100克50 克/100克41 克/100克生产菌株Bacillus licheniformis 生产菌种名称产品由微生物发酵生产，酶蛋白已从生产菌株中分离提纯出来。
不同的酸化剂对家禽养殖中常见病原菌抑制及腐蚀性效果的比较
不同的酸化剂对家禽养殖中常见病原菌抑制效果的比较瑞普动物疫病诊断研究服务中心水是机体最重要的营养素：参与机体的生化反应、物质运输、体温调节、维持组织器官形态、形成润滑液；对机体的各项生理机能都会产生至关重要的影响。
因此任何可以改变饮水质量的因素，如：细菌数，PH值，氮的水平，硬度，碱度或矿物质水平的变化，都可以直接影响到动物的饮水量或动物机体利用所摄入水的能力，从而影响为动物的健康水平。
正常情况下，动物的饮水量通常是饲料摄入量的两倍或更多，所以为鸡只提供洁净的、有益健康的饮水非常重要。
然而，现代化养殖场中饮水很容易被微生物污染，从而影响经济动物的生产性能。
瑞普生物新研发的有机+无机酸复合酸化剂—维乐欣，具有酸化饮水，净化水线，提高饲料消化率，适口性好，对水线几乎没有腐蚀性等特点，是解决畜禽养殖中饮水问题的利器。
本实验通过进行酸化剂体外稳定性实验，抑菌、抑霉实验，腐蚀性实验来比较市售三种酸化剂的差异。
一、实验材料：维乐欣（瑞普生物药业有限公司，生产批号：20140124）；叶绿清（烟台绿叶动物保健品有限公司，生产批号：130410；成分：总有机酸含量≥50%，有机螯合铜只写含有没写含量）；赛可欣（甲酸≥310g/kg，乙酸≥83g/kg，甲酸铵≥230g/kg，铜≥3.5g/kg）。
普通自来水，pH测定仪，灭菌蒸馏水，盐酸，孟加拉红培养基；普通固体培养基,120号粒度水砂纸。
大肠杆菌分离株﹑金黄色葡萄球菌分离株﹑沙门氏菌分离株﹑霉菌分离株均来自瑞普诊断中心；二、实验方法：2.1三种酸化剂在不同时间下的稳定性测定：2.1.1将维乐欣、绿叶清和赛可欣分别以相应量加入到自来水中配制成0.3%，0.2%和0.1%比例浓度.2.1.2配好后各种比例浓度在室温下于0h，6h，24h分别测定pH值.2.2测定三种酸化剂对大肠杆菌，沙门氏菌，金黄色葡萄球菌的作用效果2.2.1用过滤器过滤维乐欣，赛可欣，叶绿清原样。
常见产毒霉菌的形态学鉴定
二、各属真菌的形态特征及可能产生的真菌毒素
• 1.3 杂色曲霉 呈辐射形,直径(25~)75~125μm;分生孢梗茎直接生自基质 者(45~)150~300(~500)μm×4~8μm,生自气生菌丝者大都 很短,无色或稍带黄色,壁较厚,光滑;顶囊半球形、稍长形或 稍呈椭圆形,直径9~20μm,约3/4的表面可育,小顶囊仅分生 孢梗茎顶部稍加膨大而不明显;产孢结构双层:梗基一般 5~8μm×2~3μm,瓶梗6~8μm×1.5~2.5μm;分生孢子球形 或近球形,绿色,直径(2~)2.5~3.5(~4)μm,壁粗糙,具小刺;壳 细胞球形或近球形,直径11μm~20μm,大量形成时聚成淡黄 色的团块,见图4。杂色曲霉的某些菌株可产生杂色曲霉素。常见产毒霉菌的ຫໍສະໝຸດ 态学鉴定2017年6月2日
一、常见产毒霉菌的形态学鉴定检验程序 检验程序
图1 常见产毒霉菌的形态学鉴定检验程 序
二、各属真菌的形态特征及可能产生的真菌毒素
1、曲霉属 本属的产毒真菌主要包括黄曲霉、寄生曲霉、杂色曲霉、构 巢曲霉、赭曲霉、黑曲霉、炭黑曲霉和棒曲霉等。这些真菌可 能产生黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马菌素、展青霉素等次生 代谢产物。曲霉属的菌丝体无色透明或呈明亮的颜色 ,但不呈 暗污色 ;可育的分生孢梗茎以大体垂直的方向从特化的厚壁的 足细胞生出 ,光滑或粗糙 ,通常无横隔 ;顶端膨大形成顶囊 ,具不 同形状 ,从其表面形成瓶梗,或先产生梗基 ,再从梗基上形成瓶 梗 ,最后由瓶梗产生分生孢子。分生孢子单胞 ,具不同形状和各 种颜色 ,光滑或具纹饰 ,连接成不分枝的链。由顶囊到分生孢子 链构成不同形状的分生孢子头 ,显现不同颜色。有的种可形成 厚壁的壳细胞 ,形状因种而异 ;有的种则可形成菌核或类菌核结 构 ;还有的种产生有性阶段 ,形成闭囊壳 ,内含子囊和子囊孢子 , 子囊孢子大多透明或具不同颜色、形状和纹饰。
木霉菌施入对生姜生长及土壤环境的影响
木霉菌施入对生姜生长及土壤环境的影响窦维卉，张宁，李丹，谢洋*，武春成*（河北科技师范学院园艺科技学院，河北秦皇岛066004）摘要：为探究木霉菌对生姜土壤环境的影响，研究沟施木霉菌（FT ）、喷施木霉菌（ST ）和不施用木霉菌（CK ）对生姜的生长、土壤化学性质和土壤酶活性的影响。
结果表明，施入木霉菌可以有效促进生姜的生长，木霉菌有利于提高土壤养分含量，可以提高土壤脲酶、蔗糖酶、中性磷酸酶和中性蛋白酶活性，其中沟施木霉菌效果更好，可应用于生产。
关键词：生姜；木霉菌；土壤化学性质；土壤酶活性1材料与方法1.1试验材料供试生姜品种为‘贵州小黄姜’，姜块黄皮黄肉。
供试木霉菌为木霉复合粉剂，由黑龙江八一农垦大学农学院、黑龙江田利保生物科技有限公司和黑龙江牧康牧业生物有限公司提供，有效成分含量≥10亿/g 。
1.2试验地概况本试验于2022年4－10月在河北省秦皇岛市抚宁区任各庄村生姜种植基地进行，供试土壤的基本性质为：有机质26.01g/kg 、碱解氮101.15mg/kg 、速效磷427.80mg/kg 、速效钾314.33mg/kg 、pH 值5.80、EC 值67.90μs/cm 。
1.3试验设计试验共设3个处理，即处理FT ，在生姜覆土前将木霉菌粉剂按2~3kg/667m 2的比例散施于生姜栽培沟内；处理ST ，在生姜覆土前，将木霉菌粉剂用水稀释300~400倍后，用喷雾器喷施于姜种表面；以不施用木霉菌菌剂为对照（CK ）。
采用随机区组设计，每个小区面积42m 2，以30m 长的单个栽培行为一个重复，重复3次，共计9个栽培行。
4月16日播种，10月16日收获，田间管理同常规。
1.4生姜栽培土壤取样方法于10月中旬生姜收获季节，采集0~20cm 的耕层土壤，采用5点混合取样法，共采集土壤样品3份，放置于室内阴凉通风处自然风干，过筛，用于土壤理化性质及酶活性测定。
1.5测定的指标及方法1.5.1生姜生长指标测定。
养殖场常用的防霉菌产品及使用注意事项
Ｎｏ．５，２０２１养殖场常用的防霉菌产品及使用注意事项许国龙（辽宁省凌源市城郊动物卫生监督所，辽宁凌源１２２５００）摘 要：霉菌中毒病是养殖场重点防控的疾病之一，主要通过污染的饲料或饮水引发，肝脏、肾脏、淋巴结、胃、肠道、卵巢、输卵管、子宫等是受侵害的主要靶器官，可造成消化不良，免疫力低下，繁殖障碍，机体衰弱，生产性能下降等症状，严重中毒的畜禽在短时间内会死亡。
目前用于治疗霉菌中毒的产品中，大多以葡萄糖氧化酶、蒙脱石、丙酸钙、微生态、酵母细胞壁提取物、硫酸铜、中草药类抗霉剂等为主要活性成分，不同成分有不同的作用机理，临床可结合自身养殖场的实际情况进行选择。
霉菌病应以预防为主，尤其是加强对饲料和饮水的管理，尽最大可能降低损失。
关键词：养殖；霉菌；产品；使用ｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８－０４１４．２０２１．０５．０１９ 霉菌及其危害霉菌又称“丝状真菌”，是一种广泛分布在自然界的一种真菌微生物，空气、河流、污水沟、食品、动物体表等都有分布，大部分的霉菌对动物没有致病性，有少量种类的霉菌如黄曲霉、赭曲霉、纯绿青霉、寄生曲霉、软毛青霉等毒性较强。
霉菌在体外易培养，对培养基营养的要求不高，环境适宜时不到２４ｈ即可长出肉眼可见的菌丝，菌丝分为营养菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝３部分，营养菌丝主要在底部，可深入培养基内部进行营养的汲取，从而促进菌丝的不断生长。
气生菌丝主要生长在外面，通过不断发育转变为繁殖菌丝，繁殖菌丝能产生孢子，待孢子成熟后就可以脱落菌丝飘在空气中，遇到合适的培养基能重新长成一个霉菌落。
如果饲料中霉菌毒素超标，动物采食后就会对肝脏、肾脏、淋巴结、胃、肠道、卵巢、输卵管、子宫等造成危害，从而引发消化不良，免疫力低下，繁殖障碍，机体衰弱，生产性能下降等症状［２］。
严重中毒的畜禽在短时间内会死亡，阻碍了养殖业的发展［１］。
常用的防霉菌产品２．１ 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶是可以催化葡萄糖分解为单原子氧的一种有机酶，分解产物单原子氧具有很强的氧化性，对霉菌毒素具有较好的降解作用。
微生物（需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数）计数能力验证结果分析
微生物（需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数）计数能力验证结果分析发布时间：2023-01-13T08:36:01.951Z 来源：《中国科技信息》2022年16期第8月作者：杨丽雯陈旭煜* 赖瑞英张卉[导读] 能力验证既是对实验室检测技术能力的考核，也是实验室内部质量控制的评价方式，对提高实验室的检测能力具有重要意义。
杨丽雯陈旭煜* 赖瑞英张卉钦州市检验检测中心广西钦州 535000摘要：能力验证既是对实验室检测技术能力的考核，也是实验室内部质量控制的评价方式，对提高实验室的检测能力具有重要意义。
本文通过对此次能力验证的整个实验过程进行回顾，对“人、机、料、法、环”五个方面进行质量控制分析，通过分析总结实验室的优势及不足，充分发挥优势改正不足，以提高实验室的检测能力和管理水平，增强政府监管部门的公信力。
关键字：需氧菌总数计数霉菌和酵母菌总数计数能力验证结果分析1 前言能力验证是检验检测实验室认可活动中不可缺少的一项重要内容，不仅是针对个别检验项目的考核，同时是对整个机构质量管理体系运行情况的考核[1]，药品检验检测能力验证不仅能考核本实验室的药品检验技术，更能提高本实验室药品检验的技术能力，增强各级监管部门对本实验室能力的信任度[2]。
本实验组人员参加了2022年由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的ACAS-PT1396(2022)非无菌产品微生物限度检查：微生物（需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数）计数能力验证。
本文旨在回顾梳理实验过程，总结本次实验结果，为健全完善微生物检验内部质量控制管理体系提供理论和实践参考[2]。
2 实验试剂耗材、仪器及方法2.1 样品样品来源于中国检验检疫科学研究院测试评价中心，需氧菌总数计数样品编号为22-E290、22-X687；霉菌和酵母总数计数样品编号为22-D950、22-J547，为药品制剂的冷冻干燥物，采用玻璃西林瓶密封包装，瓶身贴有编号标识。
收到样品后立即置于4 ℃冰箱保存，并尽快安排实验。
复方参芪五味咀嚼片微生物限度检查的方法验证
复方参芪五味咀嚼片微生物限度检查的方法验证何进;史国兵;高军;杨晓东【摘要】目的对复方参芪五味咀嚼片微生物限度检查方法进行验证.方法采用平皿计数法,通过5种阳性对照菌回收率试验进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证；采用相同的实验条件,观察大肠埃希菌在试验组、阳性对照组和阴性对照组中的检出情况验证控制菌检查方法.结果细菌、霉菌及酵母菌计数用常规法时,各试验菌回收率在70％以上；控制菌检查中,试验组和阳性对照组检出大肠埃希菌,阴性对照组未检出菌.结论本方法简便可行,结果准确,适合于微生物限度检查.%Objective To validate the determination method of microbacteria limit of compound shenqi wuwei chewable tables. Methods Plate counting method was used. The method of counting bacteria and mould was validated by the recovery rates with 5 control trains. The method of checking control bacteria was validated by observing cultivation of Escherichia coli coliform in the test group, positive control group and negetivu control group under the same environment. Results The recovery rate of every trail bacteria was higher than 70% when common methods were used in the counting bacteria and mould; To the examination of control bacteria, Escherichia coli coliform was detected in the test group and positive control group, and hadn't been detected in the negative control group. Conclusion The method was simple, feasible, reliable and could be used for the examination of microbacteria limit.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2011(029)005【总页数】3页(P369-371)【关键词】复方参芪五味咀嚼片;微生物限度检查;方法验证【作者】何进;史国兵;高军;杨晓东【作者单位】沈阳军区总医院药剂科,辽宁沈阳110840;沈阳军区总医院药剂科,辽宁沈阳110840;沈阳军区总医院药剂科,辽宁沈阳110840;大连医科大学临床药学,辽宁大连116027【正文语种】中文【中图分类】R94复方参芪五味咀嚼片是在原生脉饮的基础上，增加黄芪制成的新型中药复方口服制剂，由黄芪、人参、五味子、麦冬等中药材组成，具有提高机体免疫力，抗疲劳等功效。