东吴大学理学院微生物学系

東吳大學微生物學系實驗室安全守則一、微生物學實驗室安全基本原則一般而言，在使用微生物實驗室時，應共同注意及必須遵守的基本原則如下：1.在實驗抬上不可放置任何非實驗必須的物件或私人用品。

2.每次工作開始及終止時，必須清理並用殺菌液擦拭實驗抬面（殺菌液的種類及濃度可參考表一中所列，最常用的為70%酒精水溶液）。

表一. 常用殺菌藥品名稱及其溶液的濃度名稱濃度有機碘複合物100 ~ 150 mg/L四級胺化合物700 ~ 800 mg/L酚0.5 ~ 1 %酒精70%（w/v，溶於水）甲醛水溶液8 %（w/v，溶於水）甲醛酒精水溶液8%（w/v，溶於70%酒精水溶液）3.在操作過程中絕不可抽煙、吃東西或使用化妝品(例如：用口紅補妝等)。

4.在操作過程中必須穿上清潔的實驗衣，若蓄長髮須將長髮束好，在實驗中任何時候皆應有整齊的裝束。

5.實驗室內的各種培養基、儀器，尤其是各種實驗的樣品及微生物培養，皆不可任意移至實驗室外。

6.實驗室內任何一種微生物樣品，在處理時均須遵守下列事項：(1)絕不可用口吸取任何一種微生物樣品。

(2)如果微生物樣品打翻，必須以吸滿殺菌液之衛生紙加以覆蓋15分鐘後，衛生紙才可移除，並依照一般微生物實驗室的廢棄物加以處理。

(3)任何微生物樣品在室內搬移時都必須加蓋。

7.在任何操作過程的開始前及終止後，雙手都必須以清潔劑清洗(例如70%酒精水溶液)。

8.微生物實驗內，任何微生物的樣品、廢棄物(對具感染性的廢棄物應特別注意)都必須高溫高壓滅菌後，才能以一般垃圾處理。

由上述各項可看出，在一微生物實驗室中，不論是任何操作過程或樣品廢棄物的處理，都應以無菌操作技術為最基本的工作原則，因為只有當所有的操作步驟及處理方法均合於無菌操作技術的要求時，才能使工作者及其工作環境可能受到的污染程度降至最低，相對地便能使其工作的安全性提至最高。

二、實驗環境的管理定期清理實驗室地板、桌面、架子及窗戶，並用殺菌液處理，是非常重要的要求，尤其桌面在使用前後都必須用殺菌液處理過，其基本原則是：微生物實驗室應永遠保持整齊、清潔。

1.實驗桌如果實驗操作時樣品翻落於桌面，必須立刻加以殺菌、清理，並須注意桌面有無接縫處或細孔，以免樣品掉入而不易清理。

2.實驗室環境灰塵往往是污染的來源，所以實驗室除通氣良好之外，也要定期清理及擦拭，而整理時除了水平表面(例如：地板、桌面)，垂直表面(例如：牆壁、儀器)也不要忽略。

另外，若是任何環境、器具表面沾染到生物性或化學性的污染試劑，都必須立刻消毒滅菌，再用清潔劑處理。

3.儀器設備儀器表面經常會有許多縫隙及細孔(例如：鍵盤等)非常容易積灰塵或因樣品、化學藥品落入而污染，所以更應以清潔劑、消毒劑等仔細地清理。

4.人員(1) 大學部一年級新生普化實驗課程開始前，皆於課堂觀看三小時之實驗室安全錄影帶，建立學生對實驗室安全之認知。

(2) 各實驗室人員必須參加本校每學年舉辦之工安衛教育訓練。

(3) 操作人員本身應具有危機意識，隨時避免所有粗心、散漫、危險的舉動，例如：在實驗進行中嘻笑、打鬧、禁食等及容易疏忽而造成危險的行為；使用酒精燈等火源時，應維持器具平穩狀態、勿放置於檯面邊緣而造成傾倒。

(4) 小心謹慎的態度才能愉快的完成實驗，享受研究的樂趣。

三、一般性的預防及意外的處理1. 突出物的防護(1) 預防突出物的傷害在實驗進行中或清洗操作設備時，應預防因取用因未放置整齊的突出物(例如：針頭、手術刀片等實驗器材)而遭受刺傷等傷害。

於選擇實驗器材時，應盡量避免容易使實驗者受傷得器具。

(2) 突出物的放置與使用盡量維持危險物放置整齊，實驗操作中亦須隨時注意尖銳物品的擺放，例如：再轉換使用針頭時，勿以徒手操作，應以針頭套裝上或拆卸針頭，取下針頭後應立刻彎曲或銷毀，保存或丟棄時皆須以阻隔物包起來，且尚未滅菌之前不可任意丟棄。

而手術刀、解剖刀及其他尖銳物品，必須有刀套等防止刺傷的裝置。

這些設備亦須盡量放置於工作區域內，使用完畢，必須以阻擋物區隔及標示，以避免工作者或其他人員受傷。

2. 例行的防護每次實驗皆應使用阻隔物保護實驗者本身的安全，以避免黏膜或皮膚遭受血液、體液、微生物的污染或接觸實驗樣品及化學藥品，阻隔物的種類則視不同的實驗處理及步驟而不同；實驗室中並有洗眼器等基本急救設備，主要是為了便於送醫前能做一些簡單、緊急的處理。

(1) 手套如果實驗過程中有可能受到體液、血液、危險菌種或其他有毒藥劑感染時，應戴手套進行操作，以降低接觸的機率。

但是要注意不可以戴手套接觸任何非實驗用的物品或離開實驗室，以免將實驗中的養品或化學藥品污染至其他物品上，而使不知情的人遭受傷害。

(2) 身體、衣物的保護於實驗過程中應至少穿著實驗衣，並視狀況另佩戴口罩等防護面具，以預防接觸實驗樣品或化學藥品，而遭受污染或受傷。

除了穿著實驗衣及佩帶防護器具之外，暴露的皮膚、眼睛等若已接觸到感染原或化學藥品，應該立刻以大量清水沖洗。

(3) 洗手實驗操作結束後(包括除去手套後)或離開實驗室之前，均應立刻以殺菌劑、清潔劑或至少以肥皂洗手。

(4) 隨時注意皮膚的狀況實驗過程中隨時都有被感染的機會，如果操作者本身有傷口，要做好防護措施(例如：以繃帶包紮傷口)，避免接觸樣品或藥品。

(5) 警告標示可能遭受污染或已受污染的器具應用特別的警告標示註明，實驗進行中的樣品、器材皆應標明時眼者的姓名、日期、實驗項目，所有化學藥品(尤其是毒性較強、較易導致受傷的藥品)則應備有警告標示。

3. 實驗室意外處理黏膜、皮膚或身體表面的緊急處理多為以大量清水沖洗，若有出血狀況，可先用乾淨的肥皂清洗，再以清水沖洗，蓋上乾淨紗布，迅速送醫治療，但是不能任意使用消毒劑、殺菌劑等作為緊急處理，以免造成更重的傷害；而意外事件發生時務必立刻通知負責老師及助教，以便及時給予協助。

四、清洗及滅菌1. 清洗實驗室中各種器皿用具在使用前後皆應確保其潔淨程度(有時雜質也可能影響某些精密實驗的可信度)，而其清洗步驟至少應包括三個程序：(1)用適當的清潔劑徹底清潔器皿，(2)用熱水除去器皿上微量殘留之清潔劑，(3)用蒸餾水沖洗器皿。

2. 滅菌在微生物實驗中，經常需要無菌的器材設備，此時便須注意清洗完畢後的各種器皿用具，要依其對熱的耐受性而選擇是當的滅菌方法，例如對可用高溫滅菌的塑膠製品而言，以殺菌釜121℃，15分鐘即可滅菌，但一般的塑膠製品絕不可以用滅菌釜滅菌；對玻璃用具、器皿的滅菌則可用高壓滅菌釜或乾熱滅菌，唯若用滅菌釜滅菌，除了滅菌釜可以確保滅菌後器皿是乾燥的之外，均應在滅完菌後放入60 ~ 80℃的烘箱中烘乾；但若使用滅菌方法為乾熱滅菌時，則滅菌的溫度應為170℃，滅菌時間不可少於60分鐘。

如果玻璃器皿在金屬的容器中，則其滅菌溫度必須到達170℃，滅菌時間不可少於2小時。

對不同的實驗，有時玻璃器皿的滅菌溫度必須高至250℃(例如：RNA的製備實驗)，所以最好在滅菌前應確定各種玻璃器皿的用途，而施以適當的滅菌過程。

另外，實驗完畢更要確定所有器材滅菌之後才可丟棄或清洗，通常是以高溫高壓(121℃，15磅)滅菌15分鐘加以處理。

滅菌過程中除了要依實驗目的及待滅菌器皿的性質決定滅菌方法及其適用的溫度之外，並應注意在高壓高溫殺菌的過程中，具螺旋蓋的器具(不論是玻璃或塑膠)滅菌時，應將螺旋蓋稍微放鬆，以防內外壓力不同造成玻璃器皿破裂或塑膠器皿變形，而滅菌後若瓶子或內裝的內容物尚未冷卻至室溫時，不可轉緊螺旋蓋，以防止造成內外壓差而使瓶蓋不易打開，但若發生上述的情況，可稍微加溫內容物，即可打開瓶蓋。

五、操作過程中的注意事項熟悉實驗步驟是非常重要的，如此才可避免一切因急忙、慌張而造成危險的可能性，了解各項實驗器具的功能及使用方法，也能幫助操作者迅速且安全地完成實驗。

1. 離心離心的過程中必須有相當安全的器具及準備程序，所有離心機的蓋子皆有安全鎖裝置，rotor未完全停止之前不能打開蓋子。

以離心管盛裝樣品之前應先檢查有無裂縫，以免造成離心過程中離心管破裂；樣品置於離心管中不能完全裝滿，否則離心過程中會溢出，離心管的螺旋蓋亦必須蓋好，放在離心機的安全容器中開始離心。

如果離心過程中發生試管破裂或蓋子未蓋好而導致樣品溢出、噴灑的情形，應迅速將rotor停止，待所有樣品的氣沫、水滴沉降下來，以消毒劑徹底清潔離心機及所有可能受到污染的器具。

2. 沉澱及過濾進行沉澱及過濾等步驟時所有設備應固定，不可傾斜或盛裝太滿而導致樣品溢出；如果使用抽氣過濾方式，必須注意水源不可直接與樣品連接，中間應有安全瓶，所有器材使用完畢後必須仔細處理乾淨。

3. 透析進行透析實驗時需避免徒手操作，以免接觸到樣品，使用後的器具必須仔細處理乾淨。

而透析設備可用來濃縮具感染性的生物試劑，使用後的器具更應視為污染器具，必須滅菌處理後才能清洗歸位或丟棄。

4. 轉移及運輸實驗操作過程中，工作人員除了本身應有實驗衣、手套等防護之外，並應避免實驗器材及樣品打翻、掉落等一切粗心大意的動作，以防污染四周的環境及實驗者受到傷害。

尤其在分裝或移動樣品時更應小心，例如：以自動分裝器或吸量用具迅速、仔細地取用樣品；需要在無菌操作鄉及通風櫃中操作的步驟必須嚴格遵守；必須移動位置的操作過程也要小心取放實驗用品。

5. 儲存及保留食物絕對不可與化學藥品或菌種一起存放，所有實驗用品應該分類置放整齊，並應標示清楚，置於安全場所；而裝有實驗樣品的試管或容器除了必須貼有清楚的標記(包括實驗者姓名、所屬單位、日期、實驗項目、內含物名稱)之外，放置的位置也要考慮安全性(例如：不要放在櫃子邊緣或冰箱門邊等容易掉落之處)。

實驗結束後則要迅速清理所有物品，例如培養箱中的試管、培養皿等必須立刻滅菌、清洗或丟棄，隨時保持實驗區域的整齊清潔。

(1) 室溫儲存於室溫條件的環境下儲存實驗用品應該遠離人員進出頻繁的地方(例如：門口)，以免因碰撞而掉落。

(2) 冷凍儲存樣品放於冰箱或兵櫃中必須標示清楚，分門別類置放整齊；容器材質也須注意是否耐凍，為了防止容器破裂，可以先在冷藏室置放一段時間，再移入冷凍庫。

所有冰箱及冰櫃必須定期清理，以免堆放過多物品而造成掉落、傾倒。

(3) 液態氮儲存以液態氮儲存菌種、細胞樣品時，必須注意容器的材質是否能夠耐受極大的溫度變化，以免容器破裂，樣品掉出而造成污染；自液態氮中取出樣品時，必須戴上隔熱手套，以防凍傷。

六、實驗廢棄物的處理1. 微生物培養所有微生物實驗使用的器皿用具必須確實已高溫高壓滅菌釜處理(具感染性的微生物尤其要特別注意)之後，才能視同一般廢棄物丟棄，而滅菌之後的培養基應以大量清水配合沖洗，以免將排水管堵塞。

若有使用針頭，必須先以化學殺菌劑浸泡一段時間，確保滅菌之後，再以針頭銷毀機處理，放入護套後丟棄。

2. 化學藥劑有機溶劑或含重金屬的化學藥劑必須分類存放整齊，各別置於耐受性強的容器中並標示清楚，定期交由環保署認可之環保公司統一處理。