简述紫外可见分光光度法用于含量测定时的几种常用方法的适用类型和注意事项
紫外分光光度法测定蛋白质含量
紫外分光光度法测定蛋白质含量化学2班李永亮41007061【实验目的】（1）学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；（2）掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术；（3）掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。
【实验原理】本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。
蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。
在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。
该测定法具有简单、灵敏、快速高、选择性，且稳定性好，干扰易消除，不消耗样品，低浓度的盐类不干扰测定等优点。
利用紫外吸收法测定蛋白质含量准确度较差，其主要原因有两个：其一对于测定那些与标准蛋白质中赖氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；其二若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。
【实验仪器与试剂】仪器：TU-1901紫外-可见分光光度计，比色管，吸量管，胶头滴管试剂：标准蛋白质溶液（3.00mg/mL）,0.9% NaCl溶液，待测蛋白质溶液【实验步骤】一、准备工作1、启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。
2、在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测量，设置测量条件（测量波长等）。
3、将空白放入测量池中，点击开始扫描空白，点击基线校零。
4、标准曲线的绘制二、测量工作1、吸收曲线的绘制用吸量管吸取2mL3.00mg/mL 标准蛋白质溶液于10mL 比色管中，用0.9% NaCl 溶液稀释至刻度，摇匀。
用1cm 石英比色皿，以0.9% NaCl 溶液为参比，在190 nm ～400nm 区间，每隔2nm 测量一次吸光度，记录数据。
2、标准曲线的制作用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL 3.00 mg/mL 标准蛋白质溶液于5只10 mL 比色管中，用0.9% NaCl 溶液稀释至刻度，摇匀。
紫外可见分光光度计的使用
光吸收遵循朗伯-比尔定律：
A lg T lg I 0 bc
I
I0 入射光辐射强度 I 透射光辐射强度 T 透射比 a 吸光系数 ε 摩尔吸光系数
溶液对光吸收过程
仪器组成单光束分光光度计
0.575
光源
单色器
检测器
显示
吸收池
双光束分光光度计
光源 单色 器
比
光束分裂器
值
吸收池
检测器
显
示
组成：光源、单色器、样品池、检测器
2 运行UV Solution软件。软件将自动配置计算机的 串行口（RS 232 Port）见图
仪器在初始化过程中进行如下自检工作：
• ROM检测 • RAM检测 • 波长步进电机运转检测 • 氘灯点亮检测 • 钨灯点亮检测 • 仪器波长校正
3 仪器主机开始初始化。见图
4 仪器主机初始化完毕，进入工作状态。
1．光源： ①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区 内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用 寿命长，价格低。 钨灯——可见光区 320～2500nm 氢灯或氘灯——紫外光区 195－375nm
U3010（碘钨灯、氘灯）波长范围190-900nm
2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源
感谢下 载
选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量 • 使用按钮方式 ：按按钮 开始测量 • 如果要终止扫描按按钮 。
二 分光光度计的使用-光度法
开始
方法设定
样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池
进行用户基线校正 将样品放入样品池 开始测量
1.紫外可见分光光度法
1．紫外可见分光光度法1.1 概述物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律。
即物质在一定波长的吸光度与它的吸收介质的厚度和吸光物质的浓度呈正比。
当分子中含有一个或更多的生色基团（即具有不饱和键的原子基团），辐射就会引起分子中电子能量的改变。
常见的生色团有：如果两个生色团之间只隔一个碳原子，则形成共轭基团，会使吸收带移向较长的波长处（即红移），且吸收带的强度显著增加。
当分子中含有助色基团（有未共用电子对的基团）时，也会产生红移效应。
常见的助色基团有：-OH, -NH2, -SH, -Cl, -Br, -I。
紫外可见分光光度法从问世以来，在应用方面有了很大的发展，尤其是在相关学科发展的基础上，促使分光光度计仪器的不断创新，功能更加齐全，使得光度法的应用更拓宽了范围。
目前，分光光度法已为工农业各个部门和科学研究的各个领域所广泛采用，成为人们从事生产和科研的有力测试手段。
我国在分析化学领域有着坚实的基础，在分光光度分析方法和仪器的制造方面在国际上都已达到一定的水平。
1.2 特点分光光度法对于分析人员来说，可以说是最有用的工具之一。
几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计。
分光光度法的主要特点为：（1）应用广泛由于各种各样的无机物和有机物在紫外可见区都有吸收，因此均可借此法加以测定。
到目前为止，几乎化学元素周期表上的所有元素（除少数放射性元素和惰性元素之外）均可采用此法。
紫外-可见分光光度法测定
紫外-可见分光光度法测定1. 引言1.1 引言紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学方法，通常用于测定物质的浓度或测定物质的吸光度。
该方法利用紫外-可见光谱仪测量样品对紫外和可见光的吸收情况，从而推断样品中所含物质的浓度或结构。
在化学分析实验中，紫外-可见分光光度法具有灵敏度高、准确性高和简便易行的优点，因此被广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。
本实验旨在通过该方法测定样品中目标物质的浓度，并探讨影响测定结果的因素。
通过对仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素的详细讨论，我们将深入了解紫外-可见分光光度法的原理和应用，并为今后在相关领域的研究提供参考和借鉴。
希望本实验能够为我们提供更多关于分光光度法的实际操作经验，提升我们的实验技能和分析能力。
1.2 背景介绍紫外-可见分光光度法是一种广泛应用于化学分析领域的分析方法，通过测定物质在紫外-可见光区域的吸收特性，从而确定物质的浓度或者进行定性分析。
紫外-可见分光光度法具有操作简单、灵敏度高、选择性强的特点，被广泛应用于环境监测、食品安全检测、药品质量控制等领域。
随着科学技术的不断发展，紫外-可见分光光度法在实验室分析中扮演着越来越重要的角色。
通过测定物质在特定波长范围内的光吸收情况，我们可以获得关于物质性质的重要信息，如浓度、溶解度、稳定性等。
掌握紫外-可见分光光度法的原理和操作方法，对于提高实验准确性和效率具有重要意义。
在本文中，我们将介绍紫外-可见分光光度法的仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素，希望能够为读者提供一份系统全面的紫外-可见分光光度法测定指南。
通过总结和展望，我们也希望能够进一步探讨该方法在化学分析领域的应用前景。
1.3 研究目的紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学技术，可以用于测定物质的吸光度，从而推断物质的浓度。
本实验的研究目的主要分为以下几点：1. 研究紫外-可见分光光度法在测定物质浓度方面的应用。
实验一-紫外分光光度法测定维生素C片中的VC含量
紫外分光光度法测定维生素一、实验目的1、了解紫外分光光度计的主要结构及工作原理。
C片中的VC含量2、掌握紫外分光光度计的操作方法及紫外定性定量分析方法3．掌握紫外分光光度法测定水中维生素C含量的原理与分析条件的选择。
二、实验原理维生素C是人体重要的维生素之一，它影响胶元蛋白的形成，参与人体多种氧化-还原反应,并且有解毒作用。
人体不能自身制造Vc，所以人体必须不断地从食物中摄入Vc，通常还需储藏能维持一个月左右的Vc。
缺乏时会产生坏血病，故又称抗坏血酸。
维生素C属水溶性维生素，分子式C6H8O6。
分子结构中具有二烯醇结构，其结构如下：它易溶于水，微溶于乙醇，不溶于氯仿或乙醚。
分子中的二烯醇基具极强的还原性，性质活泼，易被氧化为二酮基而成为脱氢抗坏血酸。
维生素C分子结构中有共轭双键，固在紫外光区有较强的吸收。
根据维生素C在稀盐酸溶液中，Vc吸收曲线比较稳定，在最大吸收波长处，其吸收值A的大小与维生素C的浓度c的大小成正比，符合郎伯—比尔定律：A=εbc其中A为吸收度；c为试样中维生素C的浓度，mol·L-1；b为吸收池厚度，cm；ε为摩尔吸收系数，L·mol-1·cm-1。
若在最大吸收波长下，首先绘制出维生素C在最大吸收波长下的标准曲线，然后在相同条件下测定出吸光度A，由测得的吸光度A在标准曲线上查得浓度,换算为药品中含量(mg/片)。
三、实验仪器与试剂1．仪器TU1810型紫外分光光度计。
电子天平1台，研钵1个，50mL容量瓶7只和500mL容量瓶1只,10mL移液管2支，100mL、1000mL烧杯2只。
2．试剂维生素C标准品(抗坏血酸)，市售维生素C含片（100mg/片），冰醋酸，蒸馏水。
四、实验步骤1.配制维生素C标准贮备液500mL(浓度约为1.5×10-4mol/L):称取约0.0132g维生素C标准品于100mL的烧杯中，用超声波助溶后定容于500mL容量瓶中，摇匀，配成贮备液。
紫外可见分光光度计操作流程及注意事项
紫外可见分光光度计操作流程及注意事项下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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紫外分光光度法测定苹果醋中的VC含量
紫外分光光度法测定苹果醋中的V C含量【实验目的】（1）掌握紫外分光光度计的工作原理及使用方法。
（2）掌握水果（或蔬菜）中V C含量的测定方法。
【实验原理】在紫外分光光度分析中，常用波长为200～400nm的近紫外光。
当有机物分子受到紫外光辐射时，分子中的价电子或外层电子能吸收紫外光而发生能级间的跃迁，其吸收峰的位置与有机物分子的结构有关，其吸收强度遵循Beer定律，与有机物的浓度有关。
通过测定分子对紫外光的吸收，可以对大量的无机物和有机物进行定性和定量分析。
其主要应用范围是：对具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，进行定性和定量分析。
维生素C(V C)是为类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸(ascorbicacid)。
分子式为C6H8O6，结构式如下：Vc是所有具有抗坏血酸生物活性的化合物的统称。
它对物质代谢的调节具有重要的作用。
近年来，发现它有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌的阻断作用。
它在人体内不能合成，必须依靠膳食供给。
Vc不仅具有广泛的生理功能，能防止坏血病，关节肿，促进外伤愈合，使机体增强抵抗能力。
而且在食品工业上常用作抗氧化剂、酸味剂及强化剂。
因此，测定食品中Vc的含量以评价食品品质及食品加工过程中Vc的变化情况具有重要的意义。
Vc纯品为白色无臭结晶，熔点在190—192℃，易溶于水，微溶于丙酮，在乙醇中溶解度更低，不溶于油剂。
结晶抗坏血酸在空气中稳定，但它在水溶液中易被空气和其他氧化剂氧化，生成脱氢抗坏血酸;在碱性条件下易分解，见光加速分解;在弱酸条件中较稳定。
Vc含量的测定方法很多。
一般方法有2.6-二氯靛酚滴定法;2.4-二硝基苯肼比色法;荧光分光光度法;电化学法和高效液相色谱法。
Vc广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜中含量较多。
水果、蔬菜Vc含量的测定依国标GB/T6195-1986是采用2.6-二氯靛酚滴定法[1]。
根据Vc的氧化还原性质，从样品溶液由蓝色转变为粉红色来辨别其终点的到达。
紫外可见分光光度法
420 nm
0.8
0.6
A
0.4
0.2
0.0
460 nm
530nm
200
300
400
500
600
700
wavelength
500nm
A
700 nm
1.2
610 nm
1.0
0.8
420 nm
0.6
0.4
0.2
0.0
200
300
400
500
600
700
wavelength
460 nm
530nm
500nm
2. 直接比较法： 已知试样溶液基本组成，配制相同基体、相近浓
度的标准溶液，分别测定吸光度A标、A样
（二）多组分定量 吸光度具有加合性的特点。
吸收光谱三种相互重叠的情况：
1.第一种情况：
分别在1 及 2 处测定 a 及 b 组分的 c
2. 第二种情况：
先在 1 处测得 ca，再在2处测得混合组分的 吸光度 Aa+b ，根据吸收定律加和性：
Entrance Slit
Array Detector
Measure a large range of wavelengths simultaneously. Parallel detection scheme.
电表指针 荧光屏显示
数字显示 电脑
1.单波长、单光束分光光度计（721、722、752 型 等） 一个单色器；一种波长的单色光；一束单色 光。
迁最大吸收波长的经验规则。
共轭二烯、多烯烃: p39
共轭烯酮类化合物: p40
2、Scott规则 类似于Woodward-Fieser规则，用于计算芳香 族羰基衍生物的跃迁最大吸收波长的经验规则。
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简述紫外可见分光光度法用于含量测定时的几种常用方法
的适用类型和注意事项
紫外-可见分光光度法是一种常用的分析方法，用于测定物质的含量。
以下是几种常用的方法及其适用类型和注意事项：
1. 标准曲线法：适用于单一物质的测定。
需要制备一系列不同浓度的标准溶液，测定它们的吸光度，并绘制标准曲线。
通过测定待测样品的吸光度，可以根据标准曲线计算出其浓度。
注意事项包括：标准曲线的制备应该严格按照实验要求进行，避免误差；待测样品的吸光度应该在标准曲线的线性范围内。
2. 内标法：适用于复杂样品的测定。
在样品中加入已知浓度的内标物质，测定其吸光度，并根据内标物质的吸光度和浓度计算出待测样品中的物质含量。
注意事项包括：内标物质应该与待测物质具有相似的光学性质，避免干扰；内标物质的加入量应该适当，过多会影响测定结果，过少则会降低精度。
3. 差减法：适用于样品中存在多种物质的测定。
先测定样品的吸光度，然后加入一种化学试剂，使其中一种物质发生反应，再测定反应后的吸光度。
通过两次测定的差值计算出待测物质的含量。
注意事项包括：化学试剂的选择应该与待测物质有关，避免干扰；反应条件应该控制好，避免影响测定结果。
总之，使用紫外-可见分光光度法进行含量测定时，需要根据样品的特点选择合适的方法，并注意实验操作的精确性和准确性，以获得可靠的结果。