胡萝卜素和叶黄素的提取方法
纸层析法
六、注意事项
样品捣碎时加水不能太多，否则不仅提取困难， 还不容易得到均匀样品。 滤纸层析一结束，应立即从层析缸中取出，并尽 快剪下胡萝卜层析带进行洗脱，以免氧化使结果 偏低。 本方法适用于植物性食物和含有植物性食物的混 合食物中胡萝卜素的测定，其最小检出限为 0.11μg。 结果的允许差：同一实验室平行测定或重复测定 结果的相对偏差绝对值≤10%。
点样：准确吸取待检液40μl在滤纸下端基线上A、B两 点之间或C、D两点之间迅速来回进行带状点样一次点 完（见图1）。每个样品点2带作为平行样。
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展开：
待纸上所点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，用定 书机固定两边，置于预先用石油醚饱和的层析缸中（见图 2），进行上行展开。（注意纸纹方向与展开方向一致； 缸内石油醚深度约1cm即可，样斑不能直接接触石油醚。
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七、实验报告应包括以下内容
1．实验目的。 2．实验原理。
3．实验方法。
4．实验操作步骤。 5．结果的计算。 6．实验注意事项。 7．结果的评价和小结。
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四、操作步骤
（5）将石油醚提取液通过盛有10g无水硫酸钠固 体的小漏斗，滤入瓷蒸发皿。用少量石油醚分数 次洗净分液漏斗和无水硫酸钠层内的色素，洗涤 液合并瓷蒸发皿中。 （6）将瓷蒸发皿置于低温电热板上蒸发至约1ml 时，取下，待其自然挥干。冷却后置于冰裕上， 立即用石油醚2ml沿蒸发皿壁将色素洗下，混匀立 即点样。 （7）层析
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四、操作步骤
以下步骤需在避光条件下进行 （1）样品提取： 取适量样品，相当于原样1～5g(含胡 萝卜素约20～80μg)的匀浆，置100ml带塞锥形瓶中，加 入丙酮20ml，石油醚5ml，振摇1min，静置5min。 （2）在150ml分液漏斗中，放入5％硫酸钠溶液30ml。 （3）将锥形瓶内的提取液小心移入上述分液漏斗中，再 于锥形瓶中加入10ml丙酮－石油醚混合液（3：7），振摇 1min，静置5min，将提取液并入分液漏斗中。如此反复提 取2～3次，直至提取液无色为止。 （4）振摇分液漏斗，放置分层后，弃去下层水溶液。再 用5%硫酸钠溶液15ml振摇洗涤，反复进行三次，直至下层 水溶液清亮为止，目的是除尽丙酮，防止乳化。
绿叶中色素的提取和分离实验_教学案例_冯作涛
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A
B
C
图 4 细胞分裂中期示意
A
B
图 5 细胞分裂后期示意
2.3 依据细胞分裂的同步性 许多植物在减数分裂时，在同一个花药中的细胞
具有较好的细胞分裂同步性。动物在减数分裂时，精 原细胞从曲细精管的基膜逐渐向官腔移动，并完成减 数分裂。距离基膜相同距离的细胞，具有细胞分裂同 步性。如果细胞分裂具有同步性，在同一张显微照片 中，细胞往往处于相同的时期，可以综合各个细胞的 特征来判断细胞分裂的时期。
参考文献： 王小利，张改生.植物分子细胞遗传学实验［M］.上海：上海科学 技术出版社，2010.
（1） 实验原理： ① 有机溶剂丙酮（或无水乙醇）提取绿叶中的色 素(因为绿叶中的色素能够溶解在其中，而不能溶解 在无机溶剂如水中)。 ② 层析液使提取的色素在滤纸上进行层析时， 能把原本混杂在一起的光合色素分开(不同的色素在 层析液中的溶解度不同，在滤纸条上的扩散速度不 同，这样，最终不同的光合色素会在扩散过程中被分 离开来)。 （2） 方法步骤(教师做演示实验并适当讲解，此 过程略)。 （3） 演示实验后，学生的疑问总结： ① 提取绿叶中的色素时：加入 SiO2 和 CaCO3 的 目的分别是什么？为什么要用棉塞将试管口塞严？ ② 制备滤纸条时：制备滤纸条时要注意什么？ ③ 画滤液细线时：细线如果画得过粗、过淡或不 直，对实验结果有何影响？ ④ 分离绿叶中的色素时：层析液加入过多，淹没 了滤纸条上的滤液细线，对实验结果有何影响？ 1.2.2 学生进行分组实验操作 学生以小组为单位，根据课前的预习和教师的演 示实验进行上述实验。教师引导学生分析实验现象， 并对实验过程进行指导。 1.2.3 以小组为单位，每一组选出一位代表进行本组 实验小结（略） 教师总结：绿色植物的光合作用是在叶绿体中进 行，叶绿体是由外膜、内膜、基质和基粒几部分组成， 通过刚才叶绿体中色素的提取和分离实验可知，叶绿 体中的色素主要有以下两大类四种：类胡萝卜素（胡 萝卜素和叶黄素）和叶绿素（叶绿素 a 和叶绿素 b） 1.2.4 对学生课前的选题探究实验的设计进行再指导 根据课堂实验操作过程，并结合对本实验的认 识，对课前自己的选题探究实验设计进行再设计。教 师进行适当指导。 1.3 课后探究阶段 学生对所选实验课题的再设计，遵循更科学、更 严谨、更简洁、更节约的原则，进行课外实验探究。 2 实验结果 全班共分为 10 个小组。 （1） 在课堂分组实验时，有 6 个小组能够得到预 期的实验现象； ① 绿叶中光合色素种类：滤纸条上出现了 4 条 比较明显的色素带。 ② 绿叶中光合色素的含量：滤纸条上蓝绿色的 色素带最宽，说明叶绿素 a 的含量最多，其次是叶绿 素 b，再次是胡萝卜素，最少的是叶黄素。 ③ 绿叶中光合色素的扩散速度：由于滤纸条从
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定摘自王尊本主编,综合化学实验(第二版),第226-244页,北京:科学出版社,2007年9月。
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定[1-27]一、叶绿体色素的提取(一) 实验目的1)掌握有机溶剂提取叶绿体色素等天然化合物的原理和实验方法。
2)了解皂化-萃取提取胡萝卜素的原理。
3)了解1,4-二氧六环沉淀法提取叶绿素的原理。
(二) 实验原理植物光合作用是自然界最重要的现象,它是人类所利用能量的主要来源。
在把光能转化为化学能的光合作用过程中,叶绿体色素起着重要的作用。
高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素四种。
它们所呈现的颜色和在叶绿体中含量大约比例见表34.1。
表34.1 高等植物体内叶绿体色素的种类、颜色及含量项目叶绿素类胡萝卜素叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素叶黄素颜色蓝绿色黄绿色橙黄色黄色在叶绿体内各色素含量比例 3 1 2 13 1 叶绿素chlorophylls是叶绿酸的酯,它在植物进行光合作用中吸收可见光,并将光能转变为化学能。
叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂。
在绿色植物中叶绿素主要以叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)两种结构相似的形式存在,其差别仅是叶绿素a中一个甲基被叶绿素b中的甲酰基所取代。
叶绿素的基本结构见图34.1。
在叶绿素分子结构中含有四个吡咯环,它们由四个甲烯基联结成卟啉环,在卟啉环中央有一个镁原子,它以两个共价键和两个配位键与4个吡咯环的氮原子结合成内配盐,形成镁卟啉。
在叶绿素分子中还有两个羧基,其中一个与甲醇酯化成COOCH3,另一个与叶绿醇酯化成COOC20H39长链。
类胡萝卜素carotenoids是一类不饱和的四萜类碳氢化合物(例如胡萝卜素,carotenes,或它们的氧化衍生物(例如叶黄素类,xanthophylls。
绿叶色素的分离实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习绿叶中色素的提取和分离方法。
2. 掌握层析法分离不同色素的原理和操作。
3. 了解不同色素在叶绿体中的分布和特点。
二、实验原理绿叶中的色素主要包括叶绿素、类胡萝卜素和叶黄素等。
这些色素在有机溶剂中具有良好的溶解度，因此可以通过有机溶剂提取绿叶中的色素。
在层析过程中，不同色素在层析液中的溶解度不同，从而在滤纸上形成不同的色素带。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜的绿色叶片、无水乙醇、层析液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合）、二氧化硅、碳酸钙、定性滤纸、研钵、烧杯、漏斗、纱布、剪刀、小试管、培养皿、毛细吸管、量筒等。
2. 实验仪器：分析天平、酒精灯、烘箱、显微镜、电子天平等。
四、实验步骤1. 提取绿叶中的色素：（1）取新鲜的绿色叶片，用剪刀剪成小块，放入研钵中。
（2）加入适量的二氧化硅和碳酸钙，充分研磨。
（3）向研钵中加入10ml无水乙醇，继续研磨，使色素充分溶解。
（4）将研磨好的混合物过滤，收集滤液。
2. 制备滤纸条：（1）取一张定性滤纸，剪去两角，使滤纸条呈三角形。
（2）将滤纸条放入烧杯中，加入少量层析液，使滤纸条充分湿润。
（3）将滤纸条取出，在通风处吹干。
3. 画滤液细线：（1）用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画一条细而直的滤液线。
（2）待滤液线干燥后，重复画2-3次，以增加色素量。
4. 色素分离：（1）将干燥后的滤纸条画线一端朝下放入有少许层析液的层析瓶中。
（2）盖上培养皿，使层析瓶密封。
（3）待层析液上升到滤纸条上端后，取下培养皿，观察色素分离情况。
5. 观察与记录实验结果：（1）观察滤纸条上出现的色素带数目、颜色、位置和宽窄。
（2）记录实验结果，分析不同色素的分布和特点。
五、实验结果与分析1. 滤纸条上出现的色素带从上至下依次为：胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿色）。
2. 胡萝卜素和叶黄素主要吸收蓝紫光，叶绿素a和叶绿素b主要吸收蓝紫光和红光。
绿叶中色素的提取和分离
《绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计学院附中陈建志一、教材分析生物学是以实验为基础的科学，实验教学对提高学生的生物科学素养起着无可替代的重要作用，他是素质教育和创新教育的重要场所和前沿阵地，也是基础教育改革的基础、前提和保证。
《绿叶中色素的提取和分离》是一个探究性实验，通过本实验，可以让学生知道绿叶中色素的种类和颜色对植物叶片颜色的影响，是学习光合作用的基础。
本实验要求层次较高、操作难度较大、考查频率高的一个实验，但是按照教材的实验步骤和方法，多数学生把握不够，操作不当。
分离后的色带或不全或色浅，辨认困难，实验效果皆不理想。
笔者在实验教学中将有关操作作了调整。
1、教材中值得推敲的地方实验选材和研磨教材推荐用菠菜为实验材料。
菠菜生长受季节的限制，有的季节很难采集。
另外菠菜叶片含水量较高，较多的水分子与丙酮分子接触，降低了丙酮对色素分子的萃取率，导致提取液中含色素分子少，进而影响实验结果。
教材中选用5克叶片．相对于仅需的几滴滤液来说，显然太多，也增加了研磨的时间和难度。
相对于5克叶片，5毫升丙酮又显太少。
丙酮极易挥发，实验中常出现叶片未研碎。
丙酮已挥发干的情况。
因为研磨不彻底，提取液中色素含量少。
研磨剂的配制学生只是按课本要求按顺序添加无水、乙醇、CaCO3、SiO2，并不能很深刻的理解添加这些物质的原理和作用。
过滤装置课本要求用放置单层尼龙布的漏斗过滤滤液，但实际操作中这个方法耗时且费力。
画线方法由于学生平时的实验操作中很少用到毛细吸管，所以采用课本要求的方法划线，很难做到滤液细线细、直、均匀的要求。
色素分离装置分离色素是将滤纸条插入到加入层析液的烧杯中，为了防止层析液挥发，还可以给烧杯加盖。
而实际操作很难做到滤纸条在烧杯中保持竖直，也不能有效减少层析液的挥发。
分离色素的方法课本是让色素在长形滤纸条上扩散分离，方法单一，不能很好地激发学生的创新思维。
2实验改进只要是新鲜、浓绿的叶片皆可选，但要对叶片作些处理。
叶绿体色素相关实验
叶绿体色素相关实验陈欣宇2018030034 同组成员：付仁奎一、叶绿体色素的提取与分离1.实验目的提取出绿叶叶绿体中的色素并分离检验其中不同种类的色素。
2.实验原理I.叶绿体色素分绿色素（叶绿素a、b）和黄色素（胡萝卜素、叶黄素）两大类，均不溶于水、易溶于有机溶剂（乙醇、丙酮等）。
II.将一定比例的有机溶剂配成展开剂，不同种类的色素在展开剂中的溶解度存在差异；选取适宜材料做固体吸附剂，吸附剂对不同色素的吸附力存在差异。
两方面作用使色素随展开剂在吸附剂制成的层析装置中扩散时移动速度不同，从而分离得到不同的可识别的色谱带。
3.实验材料和用品1）实验材料：菠菜叶2）仪器、用具：剪刀、研钵、漏斗、滤纸、玻璃棒、三角瓶、试管、薄层色谱硅胶预制板、点样毛细管、层析缸、铅笔、刻度尺3）试剂：95%乙醇，碳酸钙粉、展开剂（体积比石油醚：丙酮：苯=7:5:1）4.实验步骤I.提取：1）剪碎若干片新鲜菠菜叶入研钵中，加入适量碳酸钙粉与95%乙醇，快速研磨至糊状。
2）安装好滤纸、漏斗、三角瓶，将滤纸用95%乙醇润湿，将研钵中的糊状物倒入漏斗中，反复向滤渣中加入95%乙醇，直至滤渣绿色完全褪去，三角瓶中得到叶绿体色素提取液。
II.分离：1）在薄层色谱硅胶预制板的一端靠边缘适当距离上用铅笔画一条直线（距离至少应大于层析缸中展开液的深度）。
用毛细吸管吸取色素提取液延细线点样，点样要尽量细且直。
待点样自然风干后重复5次左右。
2）待点样风干（乙醇挥发尽）后将薄层色谱硅胶预制板迅速插入层析缸中的展开剂中，随后盖上缸盖，观察到色素随展开液在预制板上向上扩散并逐渐分开。
3）待展开剂前沿接近预制板顶端时将其拿出，立即用铅笔描出展开剂前沿和各色素带的位置，测量每条色素带扩散的距离，并计算相对比移值（Rf=色素扩散的距离/展开剂扩散的距离），通过色素带的颜色特征和相对比移值识别各条色素带色素的种类。
（对同一展开剂，每种色素拥有一特定的相对比移值，可作为识别色素的特征值）5.实验结果展开剂前沿 胡萝卜素 去镁叶绿素a叶绿素b 叶绿素a 新黄质 紫黄质 叶黄素 1）在展开剂前沿扩散到接近预制板的顶端时，预制板上各色素已经分离、形成7条可见的色素带，其情况如下图。
绿色植物中色素的提取和分离薄层色谱和柱色谱
仪器：
• 半微量有机合成玻璃 仪器；
• 色谱柱； • 层析缸； • 旋转蒸发仪
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四、实验步骤
1. 菠菜色素的提取： 把新鲜菠菜洗净晾干或用滤纸吸干，称取10g菠
菜叶，剪碎后放入研钵，再加入10mL甲醇。研磨后 抽滤，弃去滤液。
将菜渣和菜叶放回研钵，用10mL石油醚-甲醇(3： 2体积比)混合液萃取次，每次需研磨并且抽滤。把 两次滤液合并，转入分液漏斗中。用5mL水洗涤两次， 弃去水-甲醇层。石油醚层转入干燥的锥瓶中用无水 硫酸钠干燥。干燥后的液体在旋转蒸发仪上蒸除乙 醚至体积约1mL左右。
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柱色谱原理：
洗脱剂 混合物
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吸附剂 常用吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁等。
吸附剂对化合物的吸附能力与分子的极性有 关，极性越强，吸附能力越大，分子中含有 极性较大的基团，其吸附能力也越强。
氧化铝对下列化合物的吸附性： 酸、碱>醇、胺、硫醇>酯、醛、酮>
芳香族化合物>卤代物、醚>烯烃>饱和烃
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各洗脱剂对应的色带
石油醚-丙酮(9:1体积比)混合液 胡萝卜素(橙黄色)
石油醚-丙酮(7:3体积比)混合液 叶黄素(黄色)
丁醇-乙醚-水(3:1:1体积比)混合液 叶绿素a(蓝绿色)和叶绿素b(黄绿色)
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五、注意事项
1. 甲醇有毒，请在通风良好处使用； 2. 柱中不可有空气，必要时用装在玻棒上 的橡皮塞轻轻敲击柱身； 3. 柱中氧化铝表面任何时候都不得露出液 面，以防有空气进入； 4. 待色素全部进入柱体后，方可进行洗脱， 以防有拖尾影响分离效果。
绿叶中色素的提取和分离实验(含动画)
排列在同心的四个色素环最里圈的色素为橙黄色
3、恩格尔曼用水绵进行的光合作用实验证明的是（ B ） A.绿色叶片在光合作用中产生了淀粉 B.氧气是由叶绿体所释放 C.植物可以净化空气 D.光合作用释放的氧全部来自水
4、下列关于叶绿体中色素的提取和分离实验原理的叙述中，正 确的是（ C ）
(2)将临时装片放在黑暗并且没有空气的环境中，排 除了__光__线和__氧__气的影响，从而确保实验正常进行。
(3)选用了_极__细_光__束__照射，并且选用___好__氧__细__菌检测， 从而能够准确判断出水绵细胞中释放__氧___的部位。
(4)进行黑暗(局部光照)和曝光对比实验，从而明 确实验结果完全是____光_引照起的。
③
④.
① 外膜 ② 内膜
③ 基粒
④ 类囊体膜
⑤ 基质
捕获光能的色素分布在类__囊__体_的__薄_膜__上___
恩格尔曼实验
结论：氧是由_叶_绿__体__释放出来的， 叶绿体是光__合__作_用__的 场所。光合作用需要___光__照___。
思考：恩格尔曼实验在设计上有什么巧妙之处?
(1)选材方面，选用___水_绵_为实验材料。水绵不仅具有 细长的带状叶绿体，而且叶绿体螺旋状地分布在细 胞中，便于观察、分析研究。
2.某人做叶绿体中色素分离实验时，使用的 是圆形滤纸，装置如下图。实验结束时在圆形 滤纸上形成四个同心色素圆环，则最内圈所呈 颜色为（ D）
实战演练
1、将提取的绿叶中色素滤液装入试管中，一束白光
穿过该滤液后经三棱镜对光进行色散，哪条光谱的颜
色明显减弱？（C ）
A. 绿光
B. 黄光
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分光光度法
A 装置
A.a 色谱柱
内径12.5mm，长30cm的硬质玻璃管，下端内径2mm，长约10cm的毛细管伸到25ml容量瓶
的颈部。
A.b 真空过滤装置
用于收集洗脱液于容量瓶内。该装置经橡皮塞与色谱柱相连。
B 试剂
B.a 丙酮
无水，不含醇。在约10目锌粒存在下蒸馏得到。
B.b 已烷
市售品。
B.c 提取剂
已烷-丙酮-无水乙醇-甲苯(10+7+6+7)。
B.d 吸附剂Ⅰ
硅胶G和硅藻土按1+1(w/w)于机械混料机中混合1－2h。
B.e 吸附剂Ⅱ
活性氧化镁和硅藻土按1+1(w/w)于机械混料机中混合1－2h。
B.f 氢氧化钾甲醇溶液
40%溶解40g氢氧化钾于甲醇中，冷却后用甲醇稀释至100ml。
B.g 硫酸钠溶液
10%。溶解10g无水硫酸钠于100ml水中。
B.h 洗脱液
B.h.1
胡萝卜素-已烷-丙酮(96+4)溶液。
B.h.2
一羟基色素〔MHP〕-已烷丙酮(90+10)溶液。
B.h.3
二羟基色素〔DHP〕-已烷-丙酮〔80+20)溶液。
B.h.4
总叶黄色〔TX〕-已烷-丙酮-甲醇(80+10+10)溶液。
B.i 1-苯偶氮基-2-萘酚(C.I.溶剂黄14；苏丹I)标准溶液
B.i.1 贮备液
1.0mM。用热无水乙醇重结晶标准品，并在70℃真空干燥箱中干燥至恒重。溶解0.1241g结晶
于500ml丙酮-异丙醇(1+1)中。
B.i.2 工作液
0.04mM。用丙酮-异丙醇(1+1)稀释20ml贮备液至500ml，在暗处保存。
C 样品制备
将样品磨碎，过40目筛。准确称取适量样品〔2g玉米麸质或苜蓿粉；50mg金盏花粉；4g混
合饲料〕于100ml容量瓶中，用移液管加入30ml提取液，密塞，旋转振摇1min。对于湿度较低
的样品，如金盏花，脱水苜蓿或玉米麸质〔未经空气干燥〕，以1ml水/2g样品的比例加水到烧
瓶中，密塞，旋转振摇1min。对于高湿度〔经空气干燥〕样品，可省去加水。
C.a 热皂化
〔用于快速提取和含叶黄素酯的样品〕。用移液管加2ml〔4g混合饲料加4ml〕40%的氢氧化
钾甲醇液至烧瓶中，旋转振摇1min，然后将烧瓶置于56℃水浴上加热20min，接上空气冷凝管
或冷却烧瓶颈部，以防止溶剂损失。冷却样品，于暗处放置1h。吸取30ml已烷至烧瓶中，旋转
振摇1min，用10%Na2SO4溶液稀释至刻度，剧烈振摇1min。色谱分离前于暗处放置1h。上层
液体积为50ml。
C.b 冷却〔过夜〕皂化
〔用于快速提取和含叶黄素酯的样品〕。用移液管加2ml〔4g混合饲料加4ml〕40%的氢氧化
钾甲醇液至烧瓶中，旋转振摇1min，然后将烧瓶置于56℃水浴上加热20min，接上空气冷凝管
或冷却烧瓶颈部，以防止溶剂损失。冷却样品，于暗处放置1h。吸取30ml已烷至烧瓶中，旋转
振摇1min，用10%Na2SO4溶液稀释至刻度，剧烈振摇1min。色谱分离前于暗处放置1h。上层
液体积为50ml。
D 色谱法
将色谱柱置于过滤器上，并于其底部塞入少许脱脂棉或玻璃棉。装入约12cm高的吸附剂Ⅰ，
抽真空，补加吸附剂，使高达7cm，用平头器具如倒置的玻棒上的软木塞轻压吸附剂并平整表面，
然后在吸附剂上面装入2cm高的无水Na2SO4，并将其压紧。
D.a 总胡萝卜素
D.b 叶黄素分离
D.b.1
将25ml容量瓶置于过滤装置中，给色谱柱施以真空，使洗脱液液面接近吸附剂表面，然后立
即加入MHP洗脱液，一羟基色素〔玉米黄质，隐黄质〕和留在色谱柱内的任何单酯或双酯的谱
带应比其它谱带先移至柱下方。当MHP的谱带全部洗脱，取下容量瓶置于暗处，达到室温后，
用MHP洗脱液稀释至刻度，并测定其吸光度A。
D.b.2
将25ml容量瓶置于过滤装置中，给色谱柱施以真空，使洗脱液液面接近吸附剂表面，然后立
即加入MHP洗脱液，一羟基色素〔玉米黄质，隐黄质〕和留在色谱柱内的任何单酯或双酯的谱
带应比其它谱带先移至柱下方。当MHP的谱带全部洗脱，取下容量瓶置于暗处，达到室温后，
用MHP洗脱液稀释至刻度，并测定其吸光度A。
D.c 总叶黄素
如要测定总叶黄素量，则从原提取液的上液层吸取一定量新鲜溶液，加到装有7cm高吸附剂
Ⅱ的色谱柱中，以已烷-丙酮(90+10)洗脱胡萝卜素，以已烷-丙酮-甲醇(80+10+10)洗脱总叶黄素。
E 测定
迅速测定溶液的吸光度A，以使异构化和自氧化带来的损失减少到最小。首先，以标准工作溶
液有469－479nm间每间隔1nm检查校准分光光度计。若最大值不在474nm，应重校准仪器。
当仪器显示吸光度A的最大值是在474nm，而狭缝的宽度为0.03，则工作溶液的读数应是0.561
〔474〕和0.460(436)。仪器的偏离因子可通过下面的方程式进行校正。假如仪器无可控的狭缝，
则假定(1)(2)染料标准工作溶液的吸光度A与胡萝卜素2.35mg/L在436nm及叶黄素2.38mg/L在
474nm下的吸光度A相同。以便估算浓度。$$于436nm下测定胡萝卜素组分的吸光度A，474nm
下测定MHP和DHP组分的吸光度A。应控制洗脱液体积，使所测得的吸光度A在0.25和0.75
之间，以提高测定的准确度。
F 计算
下列方程式适用于校准过的分光光度计在窄狭缝宽度下测得的吸光度A，196和236分别为规
定波长下全反β-胡萝卜素和全反叶黄素的α值；b为比色池长度(cm)，d为稀释系数＝〔样品克
数×加于色谱柱的提取液毫升数〕/〔50ml上液层×最终稀释体积毫升数〕；f为仪器偏离因子＝
0.460/A^^436^^或0.561/A^^474^^。〔A^^436^^和A^^474^^均为观察值。〕$$胡萝卜素组分浓度
(mg/lb)＝〔A^^436^^×454×f〕/(196×b×d)$$MHP组分浓度(mg/lb)，或DHP组分浓度(mg/lb)或总
叶黄素浓度(mg/lb)＝〔A474×454×f〕/〔236×b×d〕