【CN110038524A】一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910210467.1
(22)申请日 2019.03.20
(71)申请人 江西师范大学
地址 330100 江西省南昌市紫阳大道99号
(72)发明人 阳文静　游清徽　蔡险峰　徐贤柱　
王曼莹　
(74)专利代理机构 南昌市平凡知识产权代理事
务所 36122
代理人 马彩凤
(51)Int.Cl.
B01J 20/24(2006.01)
B01J 20/28(2006.01)
B01D 15/38(2006.01)
B01J 20/30(2006.01)
(54)发明名称一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法(57)摘要本发明提供了一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法，包括以下步骤：S1、首先采用琼脂糖凝胶作为基质，经高碘酸钠溶液醛基化反应，制备得到醛基化琼脂糖凝胶；S2、其次将壳寡糖进行纳滤，除去单糖和二糖，制备得到纯化壳寡糖，作为亲和配基，偶联在步骤S1制备得到的醛基化琼脂糖凝胶上；S3、再采用硼氢化钠溶液还原步骤S2制备得到的偶联产物，制备得到稳定的亲和层析介质；S4、最后将步骤S3制备得到的亲和层析介质用蒸馏水洗涤抽干，储存在乙醇溶液中备用。

本发明提供的制备方法，原料容易获得、价格低廉、艺具简单、提纯方法稳定可靠、具有很大的应用前景和良好经济、社会效
益。

权利要求书1页 说明书7页CN 110038524 A 2019.07.23
C N 110038524
A
权　利　要　求　书1/1页CN 110038524 A
1.一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、首先采用琼脂糖凝胶作为基质，经高碘酸钠溶液醛基化反应，制备得到醛基化琼脂糖凝胶；
S2、其次将壳寡糖进行纳滤，除去单糖和二糖，制备得到纯化壳寡糖，作为亲和配基，偶联在步骤S1制备得到的醛基化琼脂糖凝胶上；
S3、再采用硼氢化钠溶液还原步骤S2制备得到的偶联产物，制备得到稳定的亲和层析介质；
S4、最后将步骤S3制备得到的亲和层析介质用蒸馏水洗涤抽干，储存在乙醇溶液中备用。

2.根据权利要求1所述的一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，将壳寡糖进行纳滤，是先将壳寡糖用蒸馏水配置成浓度为0.05-0.15g/mL的壳寡糖溶液，再用纳滤膜进行纯化，除去单糖和二糖，加入3-6倍体积的无水乙醇沉淀、冷冻干燥，制备得到纯化壳寡糖作为亲和配基。

3.根据权利要求2所述的一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述的琼脂糖凝胶选自琼脂糖6FF凝胶、琼脂糖4FF凝胶、琼脂糖CL-6B凝胶、琼脂糖CL-4B凝胶、琼脂糖6B凝胶、琼脂糖4B凝胶中的任意一种或任意几种的组合。

4.根据权利要求2所述的一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述琼脂糖凝胶与所述高碘酸钠的质量比10:1-5。

5.根据权利要求2所述的一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述醛基化琼脂糖凝胶与所述纯化壳寡糖的质量比为100:5-15。

6.根据权利要求1-5中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中，醛基化反应的温度为15-40℃，时间为0.5-3h，转速为100-300rpm。

7.根据权利要求1-5中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，偶联反应的温度为25-40℃，时间为8-24h，转速为100-300rpm。

8.根据权利要求1-5中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中，还原反应的温度为2-6℃，时间为1-5h。

9.根据权利要求1-5中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中，所述亲和层析介质储存的温度为2-6℃，所述乙醇溶液的浓度为10-25%。

10.一种分离纯化壳聚糖酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、先将含壳聚糖酶的发酵液离心除去菌体，得到完全澄清的发酵液；
S2、利用权利要求1-9中任意一种方法制备得到的亲和层析介质孵育步骤1）中得到的样品；
S3、洗脱步骤S2中亲和层析介质吸附的壳聚糖酶。

2。