细胞冻存步骤

细胞冻存步骤

一、复苏

1。把冻存管从液氮中取出来,立即投入４2℃水浴锅中，轻微摇动.液体都融化后(大概1-2分钟）。

2.把上述细胞悬液吸到恶评EP管或离心管中，1200转离心５分钟。

3．把上清液倒掉,加1mｌ培养基把细胞完全悬浮。吸到装有培养基的10ｃm培养皿或培养瓶中前后左右轻轻摇动，使细胞均匀分布。...文档交流仅供参考...

4.标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

5．2或3天换一次培养基.

二、传代

1.培养皿中的细胞生长率达到８0％－90％时要传代。2．把原来的培养基吸掉，加PBＳ冲洗1到2次,弃掉PB Ｓ。

3.加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1－３分钟。

4。待细胞都变圆后加如入含血清的培养基终止消化。５。用移液枪吹打细胞,把细胞完全都悬浮起来。

6．把细胞吸到EP管或离心管中，120０转离心5分钟。7。倒掉上清液,加1－2mｌ培养基,把细胞完全都吹起来.

８。根据细胞种类把细胞传到几个培养皿或培养瓶中。

三、冻存

细胞处理同二步骤中的前6步。第七步用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到冻存管中，写明细胞种类，冻存日期。4℃10mｉn,－２０℃30mｉn,—80℃过夜，然后放到液氮灌中保存. 或直接放冻存盒中，再放到-８0冰箱。...文档交流仅供参考...

冻存液的配制:FBS:完全培养基：DMSO=5:4:1