生物工程技术公司注射用重组人干扰素支工艺验证方案
干扰素生产工艺(共45张PPT)
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3.4．菌体收集
连续流离心机：冷却的发酵液，16000 r/min离心收集。菌体保存：－20℃冰柜，不超过12个月。检测：干扰素含量、菌体蛋白含量、菌体枯燥失重、质粒结构一致性、质粒稳定性。
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4 干扰素的别离纯化工艺过程
4.1、干扰素别离工艺过程 4.2、干扰素的纯化工艺过程
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免疫调节活性机制
对巨噬细胞的作用：IFNγ可使巨噬细胞外表MHCⅡ类分子的表达增加，增强其抗原递呈能力；此外还能增强巨噬细胞外表表达Fc受体，促进巨噬细胞吞噬免疫复合物、抗体包被的病原体和肿瘤细胞。对淋巴细胞的作用：干扰素对淋巴细胞的作用较为复杂，可受剂量和时间等因素的影响而产生不同的效应。在抗原致敏之前使用大剂量干扰素或将干扰素与抗原同时投入会产生明显的免疫抑制作用；而低剂量干扰素或在抗原致敏之后参加干扰素那么能产生免疫增强的效果。在适宜的条件下，IFNγ对B细胞和CD8+T细胞的分化有促进作用，但不能促进其增殖。IFNγ能增强TH1细胞的活性，增强细胞免疫功能；但对TH2细胞的增殖有抑制作用，因此抑制体液免疫功能。IFNγ不仅抑制TH2细胞产生IL-4，而且抑制IL-4对B细胞的作用，特别是抑制B细胞生成IgE。
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〔4〕初级别离
盐析: 4M硫酸铵，2℃～10℃，搅匀,静置过夜。离心：连续流离心机，16000 r/min保存：收集沉淀，粗干扰素，4℃保存。
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4.2、干扰素纯化工艺过程
溶解粗干扰素沉淀与疏水层析阴离子交换层析与浓缩阳离子交换层析与浓缩凝胶过滤层析无菌过滤分装
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1.5.干扰素生产工艺路线〔1〕
注射液工艺验证方案
注射液工艺验证方案1.引言注射液是一种常见的给药方式，广泛应用于医院、诊所和家庭等场合。
为了确保注射液的质量和安全性，需要进行工艺验证。
本文档旨在提供一个注射液工艺验证方案，以确保生产过程中的一致性、可控性和有效性。
2.目的注射液工艺验证的主要目的是验证注射液的工艺参数和相关设备的性能是否符合规定的要求，以保证注射液的质量稳定和可控。
3.验证范围本工艺验证方案适用于所有注射液的生产过程，包括原料采购、生产操作、设备操作、质量控制和记录保存等环节。
4.验证计划4.1.验证目标本次注射液工艺验证的目标是验证生产过程中的关键工艺参数和设备性能，确保注射液的质量稳定和可控。
4.2.验证方法本次注射液工艺验证采用以下方法：•实验验证：通过实验验证关键工艺参数的合理性和可行性，例如温度、压力、pH值等。
•设备验证：通过设备的性能验证，包括设备的稳定性、准确性、可靠性等。
•质量控制验证：通过检查生产过程中的质量控制记录和相关文件，确保质量控制措施的有效性。
4.3.验证计划本次注射液工艺验证按照以下计划进行：1.准备工作：明确验证的目标、范围和方法，编制验证计划。
2.实验验证：准备相关样品和设备，进行实验验证关键工艺参数的合理性和可行性。
3.设备验证：对相关设备进行性能验证，包括稳定性、准确性和可靠性等。
4.质量控制验证：检查生产过程中的质量控制记录和相关文件，确保质量控制措施的有效性。
5.结果分析：对验证结果进行分析和总结，评估工艺参数和设备是否符合要求。
6.结论和建议：根据验证结果，给出相应的结论和建议，包括改进工艺参数、设备调整和质量控制改进等。
5.验证执行5.1.验证实验验证实验应按照验证计划进行，确保实验过程的准确性和可重复性。
实验过程中应注意以下要点：•实验条件控制：确保实验条件符合要求，例如温度、湿度、洁净度等。
•样品选择：选择代表性样品进行验证实验，确保实验结果的可靠性和代表性。
•数据收集：准确记录实验数据，包括工艺参数、设备性能和质量控制数据等。
【完整版】重组干扰素-α 生物制药工艺学PPT文档
重组干扰素-α
演讲：谢思思 PPT制作：朱宇婷、张芳芳 资料查找：陈雪梅、方琦璐、钱媛 媛、夏烽、董敏健、袁海剑
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IFNα-2b简介
IFNα-2b是苏黎世大学Charles Weissmann实验室最新发现的抗病毒 药物，由Biogen公司发展的，最终由Schering-Plough公司出品，商品名 为Intron-A。它应用于多种适应症，包括病毒性感染和肿瘤。它被批准用 于乙、丙型肝炎、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、滤泡性淋巴瘤、良性 肿瘤和恶性黑色素瘤的治疗等的治疗。
干扰素（IFN)简介
• 干扰素是由多种细胞产生的一组蛋白质类细胞因子，具有广泛的 抗病毒，抗肿瘤免疫调节活性，是人体防御系统的重要组成部分。 根据其来源、分子结构和抗原性的差异分为α,β,γ,ω四个类型。α 型干扰素又依其结构的不同再分为α-1b, α-2a, α-2b等亚型，其具 体表现在个别氨基酸的差异上。我们要具体讲讲rhIFN α-2b的生产 工艺设计。
来源于维基百科 理化性质：
分子量：19247 结构特点：四个Cys残基，形成两个二硫键
无糖基化位点 PI:5-6 在的溶液中稳定，对热也稳定 对各种蛋白酶敏感，比活为2X10^8 IU/mg
制备工艺路线：
制备工艺过程
• 基因的制备 • 构建重组质粒 • 酵母转化 • 发酵及表达产物的SDS-PAGE分析 • 样品的纯化
干扰素制备的工艺流程
❖５）加500μl含13％（w/v)聚乙二醇（PEG 8000）的 1.6mol/L NaCl,充分混合，用微量离心机于４℃以 12000g离心５分钟，以回收质粒ＤＮＡ。 ６）吸出上清，用400μl TE(pH8.0)溶解质粒DNA沉淀。 用酚、酚：氯仿、氯仿各抽１次。 ７）将水相转到另一微量离心管中，加100μl 10mol/L 乙醇铵，充分混匀，加２倍体积（约1ml）乙醇，于室温 放置10分钟，于4℃以12 000g离心5分钟，以回收沉淀的 质粒ＤＮＡ。 ８）吸去上清，加200μl处于4℃以12 000g离心2分钟。 ９）吸去上清，敞开管口，将管置于实验桌上直到最后 可见的痕量乙醇蒸发殆尽。 10）用500μl TE（pH8.0）溶解沉淀1:100稀释[用TE （pH8.0)] 后测量OD 260，计算质粒DNA的浓度（1OD260 ＝50μg质粒DNA/ml）， 然后将DNA贮于－20℃。
从受体菌中获取目的基因
表达载体
重组质粒
导入大肠杆菌
受体菌的筛选，表达性、稳定性等检测
→工程菌
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一、目的基因的分离与获得
❖ 1. 设计合成干扰素基因的两端引物（完全的），每条引物内 或5‘-端最好有内切酶酶切位点。
❖ 2. 有药物诱导细胞，如佛波酯，使细胞表达干扰素升高。 ❖ 3. 破碎细胞，提取细胞总mRNA. ❖ 4. 用逆转录试剂盒逆转录，把总mRNA逆转录成cDNA ❖ 5. 以cDNA为模板、干扰素引物为引物，PCR，得到完全的干扰素基
❖ 2．种子罐培养 将已活化的菌种接入装有30L培养基的种子罐 中，接种量10%，培养温度30℃，pH7.0，级联调节通气量和搅拌转速， 控制溶解氧为30%，培养3～4小时，转入发酵罐中，同时取样发酵液
干扰素的制备及检定
干扰素的制备及检定干扰素的制备及检定(一) 原理干抗素是干扰素诱生剂作用于有关生物细胞所产生的一类高活性、多功能蛋白质。
它从细胞产生和释放出来以后，又作用于相应的其它同种细胞，使其获得抗病毒及抗肿瘤等多方面的免疫力。
所谓干扰素诱生剂，是指能诱导有关生物细胞产生干扰素的一类物质。
能诱导有关生物细胞产生α和β干扰素者称甲类干扰素诱生剂，如各种动物病毒、细胞内寄生的微生物等；可诱导T细胞产生γ干扰素的称为乙类干扰素诱生剂，如脂多糖、链球菌毒素、肠毒素A等。
在实际工作中，制备干扰素多采用两种方法。
一是用干扰素诱生剂诱导某些生物细胞产生干扰素，经提取纯化并检定合格后即可使用。
该法所用的细胞多为外周血白细胞。
二是采用基因工程法进行生产，即将干扰素基因导入大肠杆菌内，通过培养大肠杆菌来生产干扰素。
目前，大规模生产干扰素主要采用基因工程法。
下面仅以用干扰素诱生剂制备人白细胞干扰素为例介绍干扰素的制备方法。
(二) 材料和方法1 材料细胞培养设备(如培养瓶、多孔培养板、温箱、显微镜、旋转培养器等)、水浴箱等。
2 方法(1) 制备诱生剂：采用NDVF系弱毒株，以鸡胚尿囊液形式保存于－20℃，其血凝滴度稳定在1∶640～1∶1 280之间。
大量繁殖时，用05%水解乳蛋白稀释100～1 000倍，接种于9日龄鸡胚尿囊腔，置37℃培养72h后，收获尿囊液，效价测定应大于1∶640，无菌检查应合格。
(2) 制备诱生细胞：无菌采取人外周血(多用人脐带血，或血库贮藏血)，置于含肝素（抗凝血）的无菌瓶内，于4℃保存不超过24h，诱生细胞(白细胞)不单独提取，以全血代替。
(3) 制备粗制干扰素：①加诱生剂，按1ml抗凝全血加0.2ml诱生剂(即NDVF系尿囊液，其血凝滴度不低于1∶640)；②加温吸附，将加有诱生剂的抗凝全血置37℃水浴中1h，每隔15min晃动一次，使NDVF吸附于白细胞上。
然后以1000r/min离心20min，弃上清，留沉淀物；③加营养液孵育诱生，按抗凝全血的1～2倍量加Eagle营养液于上述沉淀物中，混匀，置35～36℃温箱内旋转培养18～20h；④离心及酸处理，将上述培养物以2000r/min离心30min，取上清，以6mol/L 盐酸将其pH值调至20，置4℃冰箱5天灭活NDV；⑤中性化，经5天酸化后，再用6mol/L氢氧化钠将pH值调至72～74，即为粗制干扰素。
验证主计划
验证主计划验证主计划第一部分总则1、企业介绍: xxxx 股份有限公司正式成立于 1993 年。
厂区占地面积为30000 平方米，生产建筑及设施严格按照 GMP 管理要求设计施工，年生产能力达到1000 万支以上。
目前，公司生产注射用重组人干扰素α2a 及重组人干扰素α2a 注射液商品名: 因特芬、注射用重组人白介素—2商品名:英路因、重组人促红素注射液商品名:益比奥及重组人促血小板生成素注射液商品名:特比澳，5 个品种，共 16 个规格。
生产厂主厂房面积约为 2500 平方米，洁净区域1600 平方米，分为三个车间，细胞工程制药车间、细菌工程制药车间、制剂包装车间及附属部分(人流、物流通道，洗刷室、器具储存室和二级库等)。
细胞工程车间生产重组人促红素rhEPO 原液生产细菌工程车间分为发酵、干扰素纯化、白介素纯化三个区域制剂车间负责所有品种的调剂、灌装及包装。
洁净车间的设计完全按照中国GMP 的标准进行设计和规划，并参照欧盟 GMP 运行管理，完全满、足生产工艺和空气洁净级别的要求，洁净区洁净级别分为D 级(10 万级)C级(1 万级) 、B级(100 级)及 A 级(100 级)净化区，满足不同生产工艺的要求。
洁净区、人员净化、物料净化和其它辅助用房分区布置。
同时考虑生产操作、工艺设备安装和维修、管线布置、气流流型以及净化空调系统各种技术设施的综合协调。
生产车间平面图及人流/物流图见附图. 2、验证定义:中国GMP(98 年修订)定义是:证明任何程序、生产过程、设备、物料、活动或系统确实能达到预期结果的有文件证明的一系列活动WHO/EU GMP 中对验证的定义:能证明任何程序、工艺、设备、物料、活动、或系统确实能导致预期结果的文件证明的行为。
3、验证总计划目的及作用:目的:验证总计划是验证活动实施内容、计划及其组织机构的概述。
其核心是验证项目及计划方案。
验证总计划作用使三生制药厂各部门明确所需验证项目、验证项目应实施的时间、验证所涉及人员及验证程序等，同时了解验证项目的必要性;使验证小组成员知道自己的任务和责任。
注射剂车间工艺验证方案
注射剂车间工艺验证方案1. 引言在制药行业，注射剂是一类非常重要的药品剂型，因为其特殊性质和高风险性，需要进行严格的工艺验证。
工艺验证是确保注射剂的生产过程和质量符合标准的重要环节，旨在验证生产工艺的正确性、稳定性和可行性，以确保注射剂的质量、安全和有效性。
本文档旨在制定注射剂车间工艺验证方案，以确保注射剂的质量和安全性。
2. 目的本方案的主要目的是验证注射剂车间的生产工艺是否符合相关标准和规定。
具体目的包括： - 验证注射剂的制备工艺是否能够得到目标药物的稳定性和一致性。
- 确保注射剂的生产工艺符合药典中的要求。
- 确保注射剂的生产工艺过程的可行性和有效性。
- 确保注射剂的生产工艺能够稳定地生产出符合质量标准的产品。
3. 流程3.1 规划阶段在规划阶段，需要明确验证的范围、目标和方法。
具体步骤如下：1.确定验证的注射剂种类和型号。
2.确定验证的工艺参数和质量指标。
3.制定验证方案和计划。
4.确定验证的方法和评价指标。
5.完成验证方案的文档编写和审核。
3.2 准备阶段在准备阶段，需要准备验证所需的设备、材料和人员。
具体步骤如下：1.检查所需的设备是否满足验证要求，并进行校准和验证。
2.确保所需的材料符合相关标准和规定，并进行检验和验证。
3.培训相关人员，确保其熟悉验证的过程和要求。
3.3 执行阶段在执行阶段，按照验证方案和计划进行验证活动。
具体步骤如下：1.准备注射剂的制备所需的原材料和设备，并进行检查。
2.按照验证方案中的工艺参数进行注射剂的制备过程。
3.对制备好的注射剂进行质量控制和分析，确保其符合质量标准。
4.记录验证过程中的关键数据和结果。
3.4 数据分析阶段在数据分析阶段，对验证过程中的数据进行统计和分析，以评估工艺的稳定性和合格率。
具体步骤如下：1.对验证过程中的关键数据进行统计分析。
2.根据统计分析结果评估工艺的稳定性和合格率。
3.分析数据中存在的异常情况，并进行原因分析和改进措施的制定。
注射剂车间工艺验证方案
确认注射剂车间工艺参数、设备性能 和操作规程的准确性。
为注册申报和GMP认证提供必要的 工艺验证数据和资料。
验证范围
注射剂车间生产线上 的所有工艺步骤和设 备。
验证范围应包括工艺 参数、设备性能、操 作规程等方面的内容 。
工艺验证应涵盖原料 、中间体、成品的质 量控制。
验证对象
01
注射剂车间的原料、中 间体、成品的质量标准 和控制方法。
设备校准
对关键设备进行校准，确 保其测量准确性和可靠性 。
设备保养
进行设备日常保养，确保 设备正常运行。
03
验证方法与步骤
工艺流程图审查
总结词：全面审查
详细描述：对注射剂车间的工艺流程图进行全面审查，确保流程图与实际生产流 程一致，无遗漏或错误。
设备运行测试
总结词
设备性能评估
详细描述
对注射剂车间内的设备进行运行测试，评估设备的性能、精度和可靠性，确保 设备满足生产工艺要求。
。
培训方式
03
理论授课、实操演练、模拟操作等。
文件准备
验证计划
明确验证目的、范围、方法、 时间安排等。
操作规程
详细描述各岗位操作步骤、注 意事项等。
质量标准
制定各项工果 的表格。
设备检查
01
02
03
设备清单
核对设备清单，确保所需 设备完备且状态良好。
02
注射剂车间工艺参数， 如温度、压力、流量、 混合时间等。
03
注射剂车间使用的设备 ，如反应釜、过滤器、 灌装机等。
04
注射剂车间的操作规程 、清洁规程和维修保养 规程。
02
验证前的准备
人员培训
培训目的
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
注射用重组人干扰素α2b 100万IU/支工艺验证方案 庆丰源生物工程技术有限责任公司 2015年
文件编号 PVP-02-006-2014 文件版本号： 01 文件种类 验证类 共155页 第1页 制定部门 冻干制剂车间 制定人 制定日期
审查部门 冻干制剂车间 审查人 审查日期 生产管理部 中心化验室 运行保障部 审核部门 质量管理部 审核人 审核日期 批准人职务 质量受权人 批准人 批准日期 执行日期 回顾日期 目 录 1.介绍： ....................................................................................................... 4 2.目的： ....................................................................................................... 4 3.围： .......................................................................................................... 4 4 职责 ......................................................................................................... 4 5. 验证容: .................................................................................................... 5 5.1验证背景材料： .................................................................................. 5 5.2验证条件： ........................................................................................ 7 5.3工艺规程： ........................................................................................ 7 5.4工艺流程图： ..................................................................................... 7 7. 验证项目、评估方法及标准： ...................................................................... 9 7.1人员评估： ........................................................................................ 9 7.2生产设备评估： ................................................................................ 10 7.3相关质量标准、文件、规程及编码： .................................................... 12 7.4生产环境评估：...................................................................................... 15 7.4.1主要操作间温度和相对湿度： .......................................................... 15 7.4.2主要洁净区操作室压差： ................................................................. 16 7.4.3主要操作间悬浮粒子、沉降菌、浮游菌： ........................................... 16 7.4.5操作室、设备、人员表面微生物： .................................................... 22 7.4.6操作室清场清洁： .......................................................................... 23 7.5公用介质： ............................................................................................ 23 7.5.1注射用水： ................................................................................... 24 7.5.2纯蒸汽： ...................................................................................... 25 7.6主要设备清洁、运行： ............................................................................ 25 7.7原辅料、包装材料： ............................................................................... 26 7.7.1质量： .......................................................................................... 27 7.7.2贮存条件： ................................................................................... 27 7.9工艺文件： ............................................................................................ 30 7.10各生产工序工艺验证： .......................................................................... 31 7.10.1理瓶工艺变量： ........................................................................... 31 7.10.3低硼硅玻璃管制注射剂瓶灭菌工艺变量： ......................................... 34 7.10.4注射用冷冻干燥无菌粉末用卤化丁基胶塞清洗灭菌工艺变量： ............. 36 7.10.5B级区洁净服清洗灭菌工艺变量： ................................................... 38 7.10.7配制工艺变量： ........................................................................... 41 7.10.8灌装工艺变量： ........................................................................... 44 7.10.9冷冻干燥工艺变量： ..................................................................... 46 7.10.10抗生素铝塑组合盖清洗灭菌工艺变量： .......................................... 49 7.10.12目检贴签工艺变量： ................................................................... 52 7.10.13喷码工艺变量： ......................................................................... 52 7.10.14包装工艺变量： ......................................................................... 54 7.10.15物料平衡 ................................................................................... 55 8. 成品检验结果对比： ................................................................................ 57 9. 质量保证： ............................................................................................. 53 10. 质量控制： ........................................................................................... 60 11. 偏差分析 .............................................................................................. 61 验证结论 ............................................................................................. 157