TNF-α-308位点基因多态性与环境因素在肝癌发生中的交互作用
广西扶绥县壮族肝癌家系人群Itgb1基因多态性与肝癌遗传易感性的研究
广西扶绥县壮族肝癌家系人群Itgb1基因多态性与肝癌遗传易感性的研究毛赛兰;何承诚;赵瑞强;闫雷;黄正;谢裕安【摘要】目的研究广西扶绥县壮族肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC,以下简称肝癌)高发家系人群Itgb1基因rs2298141位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)和肝癌遗传易感性的关系.方法采用病例-对照研究方法,选择扶绥县20个肝癌高发家系共79例(肝癌高发家系组)和10个正常对照家系共40名(正常对照家系组)为研究对象,应用时间飞行质谱技术(MALDI-TOF MS)检测两组Itgb1基因rs2298141位点的基因型及等位基因频率,并应用非条件logistic回归分析该位点基因多态性与肝癌遗传易感性的关系.结果正常对照家系组人群携带AA、AG、GG基因型频率分别为40.00％、47.50％、12.50％.肝癌高发家系组人群携带AA、AG、GG基因型频率分别为50.00％、40.00％、10.00％;两组Itgb1基因rs2298141位点各基因型频率与期望值吻合度较好(P＞0.05),符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.正常对照家系组人群中AG、GG基因型个体罹患肝癌的风险分别是AA基因型个体的0.67倍(95％CI:0.22～2.1,P=0.50)和1.05倍(95％CI:0.17～6.6,P=0.96);肝癌高发家系组人群中未患肝癌者AG、GG基因型个体罹患肝癌的风险分别是AA基因型个体的0.91倍(95％CI:0.31～2.71,P=0.86)和2.2倍(95％CI:0.40～11.96,P=0.37),但差异无统计学意义(P＞0.05).结论广西扶绥县壮族人群中Itgb1基因rs2298141位点的SNP与罹患肝癌无明显相关性.【期刊名称】《中国癌症防治杂志》【年(卷),期】2016(008)002【总页数】5页(P78-82)【关键词】肝肿瘤;Itgb1基因;家系;单核苷酸多态性;遗传易感性【作者】毛赛兰;何承诚;赵瑞强;闫雷;黄正;谢裕安【作者单位】530021南宁广西肿瘤防治研究所广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生学院;530021南宁广西肿瘤防治研究所广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生学院;530021南宁广西肿瘤防治研究所广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生学院;530021南宁广西肿瘤防治研究所广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生学院;530021南宁广西肿瘤防治研究所广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生学院;530021南宁广西肿瘤防治研究所广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部【正文语种】中文【中图分类】R735.7;R730.2原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，而肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC，以下简称肝癌）占原发性肝癌的90%。
PNPLA3基因rs738409多态位点与肝细胞癌的相关性研究
PNPLA3基因rs738409多态位点与肝细胞癌的相关性研究发布时间：2022-10-27T05:19:56.458Z 来源：《世界复合医学》2022年7期作者：金喜，秦思远，李成浩[导读] 目的探讨patatin 样磷脂酶域 3 （PNPLA3）rs738409多态位点在不同人种中与肝细胞癌易感性的关联。
方法通过计算机检索Pubmed、Embase、MEDLINE、中国知网、]]等人对亚洲人群的病例对照研究和Mate分析表明，PNPLA3rs738409可能会增加健康人群发生HCC的风险。
两者结论存在矛盾，故本文为了进一步探讨不同种族间PNPLA3rs738409多态性与肝细胞癌的相关性纳入了更多样本量。
1资料与方法1.1检索策略由两位研究者通过计算机独立检索Pubmed、Embase、MEDLINE、中国知网、万方医学等电子数据库，使用中英文以“PNPLA3、rs738409、肝癌、肝”为主要检索词进行检索2021年10月9日前公开发表的文献。
1.2纳入排出标准1.2.1纳入标准：（1）与PNPLA3基因rs738409位点与肝癌相关的病例-对照研究（2）肝癌的诊断需经影像学及病理学确诊，发病原因需能够排除其他原因影响（3）语言限定为中文和英文（4）研究中能够提取完整的基因频数。
1.2.2排出标准：（1）非病例-对照研究、综述、会议报告。
（2）动物及细胞研究。
（3）来自同一作者或项目组的重复发表文献，包括中英文重复发表。
（4）相关数据缺乏，且无法联系原作者的研究。
1.3筛选评价及数据提取由两位研究者独立对纳入文献进行筛选评价，完成后进行交叉核对，如有差异则讨论解决。
记录第一作者姓名、发表年份、国家/地区、种族、病例组和对照组基因分布频数。
采用针对观察性研究质量评价的NOS评分标准（Newcastle-Ottawa scale）对纳入文献进行质量评价，若NOS评分≥5分则认为具备纳入评价体系的可靠性。
肝癌相关基因的探讨
肝癌相关基因的探讨肝癌是一种恶性肿瘤，危害极大，其发病率和死亡率在全球范围内均呈逐年上升趋势。
肝癌的发生与多种因素有关，其中基因因素是最重要的一个方面。
随着生物技术的不断发展，人们对肝癌相关基因的研究也得到了不断深入，本文就肝癌相关基因的探讨进行阐述。
一、TNF-α基因TNF-α是一种细胞因子，是由单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞等产生的多功能细胞因子。
TNF-α具有促炎症、抗病毒、抗肿瘤等作用。
肝癌患者中TNF-α的表达显著高于正常人群，与肝癌的恶化和转移密切相关。
此外，TNF-α基因多态性与肝癌发生的风险也有关系。
研究表明，TNF-α-308GA基因突变与肝癌发生的风险增加相关。
因此，TNF-α基因可作为肝癌的一个重要标志物和治疗靶点。
二、IL-6基因IL-6是一种细胞因子，能够促进T淋巴细胞的生长和增殖，同时也可以激活肝细胞和肿瘤细胞的增殖和分化。
肝癌患者中IL-6水平明显升高，与肝癌的转移和预后有很大的关系。
研究表明，IL-6基因-174GG型与肝癌发生的风险增加密切相关。
IL-6基因在肝癌的预防和治疗中具有重要的意义。
三、TP53基因TP53基因是一个重要的抑癌基因，其编码的蛋白质可以抑制癌细胞的增殖和分化、促进细胞凋亡。
然而，TP53基因变异和缺陷与多种肿瘤的发生和发展密切相关。
肝癌患者中TP53基因的突变和缺陷比例很高，是肝癌的一个重要基因标志物。
此外，TP53基因杂合性突变可以作为判断肝癌的恶性程度和预后的一个重要指标。
四、VEGF基因VEGF是一种血管内皮细胞生长因子，能够刺激血管内皮细胞的生长和分化，促进新血管的形成，从而为肿瘤提供氧和营养物质。
VEGF基因在肝癌的发生和发展中发挥着重要作用。
研究表明，VEGF基因在肝癌的高度表达与肿瘤的侵袭性和预后密切相关。
因此，VEGF基因可以作为肝癌的一个重要标志物和治疗靶点。
结论综上所述，肝癌相关基因的研究对于肝癌的预防、治疗和预后评估有着重要的意义。
单核苷酸多态性_环境因素与肝细胞肝癌遗传易感性的关系_纪龙
文章编号:100028020(2009)022*******・综述・单核苷酸多态性、环境因素与肝细胞肝癌遗传易感性的关系纪龙综述 余红平审校广西医科大学公共卫生学院,南宁 530021摘要:肝细胞肝癌(HCC )的发生和演进是一个多基因、多因素的复杂过程,是遗传与环境因素相互作用的结果。
单核苷酸多态性(S NP )作为第三代遗传标记,充分反映了个体间的遗传差异,决定了个体对疾病的易感性,正成为肝癌遗传易感性研究的重要工具。
关键词:单核苷酸多态性 环境因素 肝细胞肝癌 遗传易感性 肝肿瘤中图分类号:R73517R73011 文献标识码:AR elationship of single nucleotide polymorphism ,environmental factors and the hereditary susceptibility of hepatocellular carcinomaJI Long ,YU H ongpingSchool of Public Health ,G uangxi Medical University ,Nanning 530021,ChinaAbstract :Resulting by the interaction between the hereditary factor and the environmental factor ,the occurrence anddevelopment of hepatocellular carcinoma (HCC )is a com plicated course with multi 2genes and multi 2factors.As the third genetic marker ,the single nucleotide polym orphism reflects the hereditary difference am ong individuals ,decides the susceptibility to disease and becomes an im portant tool to study the hereditary susceptibility of HCC.K ey w ords :single nucleotide polym orphism ,environmental factor ,hereditary susceptibility ,hepatocellular carcinoma基金项目:国家自然科学基金资助项目(N o.30660162);广西自然科学基金资助项目(N o.桂科攻0592007221);广西研究生教育创新计划资助项目(N o.2008105981004M189);广西大型仪器协作网测试补助(N o.529220072108)作者简介:纪龙,男,硕士研究生,助教,研究方向:慢性病流行病学,E 2mail :tsmcjl @ 肝细胞肝癌(HCC )是我国最常见的恶性肿瘤之一,死亡率为2014Π10万,严重威胁人们的生命健康。
TNF-β基因多态性与类风湿性关节炎相关性分析
TNF-β基因多态性与类风湿性关节炎相关性分析黄惠;庄俊华【期刊名称】《国际医药卫生导报》【年(卷),期】2007(13)16【摘要】目的研究广州地区汉族类风湿性关节炎患者TNF-β基因第一内含子+252等位基因的单核苷酸替代(G→A)产生的基因多态性,是否与类风湿性关节炎发病的易感性相关.方法用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应(polymerase chain reaction with restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术鉴定120例类风湿性关节炎患者和120例健康对照的基因及基因型,计算其频率,用卡方检验统计显著性.结果 TNF-β+252A等位基因在RA患者组出现的频率明显高于对照组(x2=57.7,P＜0.01,OR=4.476,95%CI:3.009～6.658);RA患者组的TNF-β+252G/TNF-β+252A基因型和TNF-β+252A/TNF-β+252A基因型的频率比对照组显著增高(x2=52.97,P＜0.01).结论 TNF-β+252A等位基因与广东地区汉族人群RA发病强相关,可能是RA的易感基因.具有TNF-β+252G等位基因人群的RA发病率低,该基因可能与RA的耐受性有关.【总页数】5页(P7-11)【作者】黄惠;庄俊华【作者单位】广州中医药大学第二临床医院检验科,广东广州,510120;广州中医药大学第二临床医院检验科,广东广州,510120【正文语种】中文【中图分类】R593.22【相关文献】1.急性胰腺炎患者TNF-α基因多态性与病情严重程度及临床预后的相关性分析 [J], 公丕平;孙杰;牛春茂;刘昊刚;任凤玲;解现慈2.代谢综合征合并哮喘患者TNF-α mRNA表达基因多态性的相关性分析 [J], 巩雪俐;马琦;孙湛3.TNF-α-308位点基因多态性与阻塞性睡眠呼吸暂停综合征的相关性分析 [J], 朱琳琳;麦静愔4.TNF-α、IL-6分子基因多态性与种植体周围炎相关性分析 [J], 李丛丛;于玢玢;范春;宋建忠;张春阳5.TNF-α和TGF-β1基因多态性与关节假体无菌性松动、假体周围骨溶解的相关性分析 [J], 吴国忠;王文怀;黄隆;方凯彬;施劲楠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
STAT3_的多态性在HPV16_所致宫颈癌发生中的作用
到DT-3可抑制胃癌细胞AGS增殖的现象,细胞划痕愈合实验证实DT-3还具有抑制胃癌细胞AGS迁移的能力㊂用Western blotting实验和相关分析,可得出PKGIα在胃癌细胞中表达增高,PKGIα和NF-κB p-p65密切相关的结果,推测DT-3可能通过抑制PKGIα的蛋白表达降低NF-κB p65Ser536位点的磷酸化从而抑制胃癌细胞AGS的增殖和迁移㊂此外,我们课题组前期也发现某些信号通路的关键信号分子的磷酸化同样影响胃癌细胞的增殖和迁移[11];如前文所述[5],一项肾细胞癌研究表明可通过调节NF-κB p65 Ser536位点的磷酸化来激活NF-κB通路而在肿瘤发生发展中发挥关键作用,这与本实验在胃癌中的研究意义一致㊂本研究发现,DT-3是有效的抑制剂,通过抑制PKGIα信号通路,可以有效抑制胃癌细胞增殖㊁迁移㊂然而,本研究只在细胞层面进行了体外试验,从基础应用成果到投入临床转化这个过程,应在未来的临床前研究中仔细验证㊂ʌ参考文献ɔ[1]㊀郑荣寿,张思维,孙可欣,等.2016年中国恶性肿瘤流行情况分析[J].中华肿瘤杂志,2023,45(3):212-220. [2]㊀Pang J,Li G,Qian H,et al.Secretory typeⅡcGMP-de-pendent protein kinase blocks activation of PDGFRβviaSer254in gastric cancer cells[J].Cell Biol Int,2022,46(5):747-754.[3]㊀Soltek S,Karakhanova S,Golovastova M,et al.Anti-tumorproperties of the cGMP/protein kinase G inhibitor DT3inpancreatic adenocarcinoma[J].Naunyn Schmiedebergs ArchPharmacol,2015,388(11):1121-1128.[4]㊀Motolani A,Martin M,Sun M,et al.Phosphorylation of theregulators,a complex facet of NF-κB signaling in cancer[J].Biomolecules,2020,11(1):15.[5]㊀Wang Y,Su J,Wang Y,et al.The interaction of YBX1withG3BP1promotes renal cell carcinoma cell metastasis via YBX1/G3BP1-SPP1-NF-κB signaling axis[J].Exp Clin Cancer Res,2019,38(1):386.[6]㊀Hutter C,Zenklusen JC.The cancer genome atlas:creatinglasting value beyond its data[J].Cell,2018,173(2):283-285.[7]㊀Lanczky A,Gyorffy B.Web-based survival analysis tool tai-lored for medical research(KMplot):development and im-plementation[J].Med Internet Res,2021,23(7):e27633.[8]㊀Li C,Tang Z,Zhang W,et al.GEPIA2021:integrating multi-ple deconvolution-based analysis into GEPIA[J].Nucleic Acids Res,2021,49(W1):242-246.[9]㊀Hu K,Zheng QM,Wang YP,et al.Clinical and prognosticfeatures of E-cadherin in adenocarcinoma of the esopha-gogastric junction patients[J].Eur Cancer Prev,2023,32(2):119-125.[10]㊀谭林,王骞,屈伟明,等.胃癌组织中幽门螺杆菌感染和p-p65㊁EMT相关蛋白的表达及临床意义[J].现代消化及介入诊疗,2019,24(11):1245-1251.[11]㊀朱亚清,李春辉,何涛,等.ANP对胃癌MGC-803细胞增殖迁移的影响及机制的研究[J].河北医学,2020,26(12):1943-1947.ʌ文章编号ɔ1006-6233(2024)04-0560-05STAT3的多态性在HPV16所致宫颈癌发生中的作用张荷敏,㊀余㊀燕,㊀刘艳筠(联勤保障部队第九〇〇医院仓山院区妇科,㊀福建㊀福州㊀350000)ʌ摘㊀要ɔ目的:研究人乳头状瘤病毒16(HPV16)所致宫颈癌发生过程中转录活化子3(STAT3)多态性的作用㊂方法:回顾性选取2019年至2023年入院的34例宫颈癌患者为观察对象,将其设为A组,选取同一时期入院的54例宫颈上皮内瘤变患者将其设为B组,同时选取同一时期入院的80例慢性宫颈炎患者将其设为C组㊂HPV16E6蛋白测定方式主要为免疫组化㊁聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交法,STAT3测定方式主要为PCR法,STAT3基因C1697G多态性测定方式主要为PCR-制片段长度多态性(RFLP),比较并分析三组患者E6蛋白㊁STAT3蛋白阳性表达率与STAT3基因多态性表达情况㊂结果:与B㊁C组相比,A组患者E6㊁STAT3蛋白阳性表达率明显更高,差异有统计学意义(P<0.0167);相比C组患者,B组患者E6蛋白㊁STAT3蛋白阳性表达率明显更高,差异有统计学意义(P<0.0167)㊂相比C组患者,A㊁B组患者G/G型构成比明显更低,C/C型构成比明显更高,差异有统计学意义(P<0. 0167);相比B组患者,A组患者G/G型构成比明显更低,C/C型构成比明显更高,差异有统计学意义㊃065㊃ʌ基金项目ɔ福建省卫生健康行业科研项目,(编号:21A200189)(P<0.0167);三组患者G/C型构成比差异无统计学意义(P>0.0167)㊂结论:HPV16所致宫颈癌发生及发展过程中STAT3及其多态性可能有重要作用㊂ʌ关键词ɔ㊀宫颈癌;㊀基因多态性;㊀转录活化子3;㊀人乳头状瘤病毒16ʌ文献标识码ɔ㊀A㊀㊀㊀㊀㊀ʌdoiɔ10.3969/j.issn.1006-6233.2024.04.06The Role of STAT3Polymorphism in the Developmentof Cervical Cancer Caused by HPV16ZHANG Hemin,YU Yan,LIU Yanyun (Cangshan Branch of the900th Hospital of the Joint Logistic Support Force,Fujian Fuzhou350000,China)ʌAbstractɔObjective:To investigate the role of signal transducer and activator of transcription3 (STAT3)polymorphism in the development of cervical cancer caused by human papillomavirus16(HPV16). Methods:A retrospective study was conducted on34patients with cervical cancer who were admitted to the hospital from2019to2023.They were assigned to Group A.Another54patients with cervical intraepithelial neoplasia and80patients with chronic cervicitis admitted to the hospital during the same period were assigned to Groups B and C,respectively.The expression of HPV16E6protein was detected by immunohistochemistry and polymerase chain reaction(PCR)-reverse dot blot hybridization.The expression of STAT3protein was detected by PCR,and the polymorphism of STAT3gene C1697G was detected by PCR-restriction fragment length polymorphism(RFLP).The expression rates of E6and STAT3proteins and the genotypes of STAT3 gene polymorphism in the three groups were compared and analyzed.Results:The positive expression rates of E6and STAT3proteins in Group A were significantly higher than those in Groups B and C(P<0.0167).The positive expression rates of E6and STAT3proteins in Group B were significantly higher than those in Group C (P<0.0167).The frequency of the G/G genotype in Groups A and B was significantly lower than that in Group C,and the frequency of the C/C genotype was significantly higher than that in Group C(P<0.0167). The frequency of the G/G genotype in Group A was significantly lower than that in Group B,and the frequen-cy of the C/C genotype was significantly higher than that in Group B(P<0.0167).There was no significant difference in the frequency of the G/C genotype among the three groups(P>0.0167).Conclusion:STAT3 and its polymorphism may play an important role in the development and progression of cervical cancer caused by HPV16.ʌKey wordsɔ㊀Cervical cancer;㊀Gene polymorphism;㊀Signal transducer and activator of transcription 3;㊀Human papillomavirus16㊀㊀宫颈癌作为肿瘤病症,对患者身心健康有严重影响,甚至危及生命㊂宫颈癌患者早期症状存在隐匿性,大部分患者临床确诊时已为中晚期阶段,预后质量均较低,且已经丧失最佳治疗时机[1]㊂现阶段,宫颈癌发生机理尚未完全明确,临床检查缺乏特异性㊁敏感性的诊断方式,所以对其发生的相关分子机制予以分析,明确新型分泌标志物对提升宫颈癌诊断准确性十分重要[2]㊂相关报道提出,宫颈癌诱发因素主要为人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染[3]㊂细胞分化㊁增殖㊁凋亡及血管形成等一系列环节中转录活化子(signal transducer and activator of transcription, STAT)均有参与,且与肿瘤发生有着密切联系[4]㊂本研究以34例宫颈癌患者㊁80例慢性宫颈炎患者㊁54例宫颈上皮内瘤变患者为观察对象,分析HPV16所致宫颈癌发生过程中STAT3多态性的作用㊂1㊀资料与方法1.1㊀一般资料:观察对象为2019年至2023年入联勤保障部队第九〇〇医院的34例宫颈癌患者为观察对象,将其设为A组,选取同一时期入院的54例宫颈上皮内瘤变患者将其设为B组,同时选取同一时期收治的80例慢性宫颈炎患者将其设为C组㊂纳入标准:①与‘妇产科学“[5]中宫颈癌㊁宫颈上皮内瘤变㊁慢性宫颈炎诊断标准相符;②依从性好,可配合相关检查;③资料完整㊂排除标准:①合并有其它恶性肿瘤㊁感染性疾病等可影响研究开展病症者;②中途转院者;③伴精神病症者㊂A组患者年龄28~63(46.08ʃ6.34)岁;病㊃165㊃程1个月至2年(7.75ʃ1.48)个月㊂B组患者年龄28 ~64(46.19ʃ6.47)岁;病程1~23月(7.68ʃ1.51)月㊂C组患者年龄28~65(46.25ʃ6.56)岁;病程1~25月(7.72ʃ1.56)月㊂三组患者年龄㊁病程等资料差异无显著性(P>0.05),有可比性㊂本研究经联勤保障部队第九〇〇医院医学伦理委员会批准(20221004)㊂1.2㊀方㊀法1.2.1㊀HPV16E6蛋白检测:首先,将术后切除保存的新鲜组织样本制备为石蜡组织,然后进行切片并HE染色,上述操作完成之后对HPV亚型予以分型测定,检测方式为聚合酶链反应(Polymerase Chain Reac-tion,PCR)-反向点杂交法;其次,标本内HPV16E6蛋白表达水平测定方式为免疫组化Supervision TM二步法,予以切片处理并染色,染色完成之后双盲阅片,阳性细胞染色表现以显示棕黄色颗粒为判断标准,表达部位以细胞核为主,镜下染色完成之后,对阳性细胞及其染色情况予以半定量评分评价,细胞着色深浅程度划分为不同类型,第1个类型为无色(0分)㊁第2个类型为浅黄色(1分)㊁第3个类型为棕黄色(2分)㊁第4个类型为棕褐色(3分),>2分代表阳性,0~1分代表阴性㊂1.2.2㊀STAT3基因检测:对病理组织标本予以制作及备用,采集病理组织5cmˑ5cm,选取10%甲醛对病理组织予以固定处理,固定完成之后进行石蜡包埋处理,最后予以切片处理,切片厚度3μm,予以HE染色, STAT3基因型经PCR检测,对STAT3引物予以构建,上游㊁下游引物分别为5'-GAACTCCCTGAAAAGCTA-AAGC-3'㊁5'-GTTGGGCTCAAATACGGTGG-3',参照基因为β球蛋白基因(350bp),使用1.5mmoL/L氯化镁㊁50mmoL/L氯化钾㊁2μL上游引物㊁2μL下游引物㊁25U DNA聚合物及相应缓冲液,反应条件:预变性处理于94ħ环境下进行,时间控制在5min左右,同时将变形时间控制在30s左右,于63ħ环境下予以退火处理,时间控制在30s左右,然后于72ħ环境下延伸,时间控制在30s左右,循环35次之后于72ħ环境下延伸,时间控制在5min左右,分析PCR扩增产物的基因型,分析方式选取1.5%琼脂糖凝胶电泳技术;除此之外,经PCR-制片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)对STAT3基因C1697G的多态性予以分析㊂1.3㊀统计学方法:采用SPSS20.0软件,计量资料用均数ʃ标准差( xʃs)表示,同组内治疗前后比较,采用配对t检验;两组间比较采用独立样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义;计数资料以n(%)表示,采用χ2检验,若组间总体差异有统计学意义时(P<0.05),需要进一步两两比较时,对检验水准进行Bonferroni校正,即P'<0.0167时认为差异有统计学意义㊂2㊀结㊀果2.1㊀三组患者STAT3㊁E6蛋白表达情况比较:三组患者的STAT3㊁E6蛋白的阳性表达率差异有统计学意义(χ2STAT3=68.665,P STAT3=0.000;χ2E6=69.202, P E6=0.000)㊂与B㊁C组相比,A组患者E6㊁STAT3蛋白阳性表达率明显更高,差异有统计学意义(P<0. 0167);相比C组患者,B组患者STAT3蛋白㊁E6蛋白阳性表达率明显更高,差异有统计学意义(P<0. 0167)㊂见表1㊂表1㊀三组患者STAT3E6蛋白阳性表达情况比较n(%)组别n STAT3E6A组3428(82.35)26(76.47)B组5424(44.44)①26(48.15)①C组804(5.00)②③2(2.50)②③㊀㊀注:A㊁B组比较,①P<0.0167;A㊁C组比较,②P<0.0167;B㊁C组比较,③P<0.01672.2㊀三组患者STAT3基因多态性构成比比较:三组患者STAT3基因多态性构成比差异有统计学意义(χ2 =89.737,P=0.000)㊂相比C组患者,A㊁B组患者G/G型的构成比明显更低,C/C型的构成比明显更高,构成比的差异有统计学意义(P<0.0167);相比B组患者,A组患者G/G型构成比明显更低,C/C型构成比明显更高,构成比的差异有统计学意义(P<0.0167);三组患者G/C型构成比的差异无统计学意义(P>0.0167)㊂见表2㊂㊃265㊃表2㊀三组患者STAT3基因多态性构成比比较n (%)组别n G /G 型C /C 型G /C 型A 组342(5.88)28(82.35)4(11.77)B 组5432(59.26)①14(25.93)①8(14.81)C 组8074(92.50)②③2(2.50)②③4(5.00)㊀㊀注:A ㊁B 组比较,①P<0.0167;A ㊁C 组比较,②P<0.0167;B ㊁C 组比较,③P<0.01673㊀讨㊀论宫颈癌作为一种妇科恶性肿瘤,患病人数呈逐年增加趋势,已经成为妇科中高发肿瘤,发病率仅次于乳腺癌,且发病人群越来越年轻㊂相关报道提出,宫颈上皮增生不典型患者与宫颈癌患者HPV 感染几率相对较高,且绝大多数宫颈癌存在HPV -DNA ,HPV 感染与宫颈上皮内瘤变㊁宫颈癌的发生联系紧密,且是宫颈癌病变重要因素[6]㊂现阶段,感染HPV 的人数呈逐年增多趋势,宫颈癌患病人数也随之上升,但除了HPV 感染之外,卫生习惯㊁饮食习惯等一系列外界因素在宫颈癌发病中也发挥着重要作用,提示宫颈癌的发生是一系列致癌因素共同所致[7]㊂STAT 作为一种转录因子,对细胞信号转导具有介导作用,其作为JAK -STAT 信号转导途径中一个不可或缺的环节,初始转导位置主要为细胞表面受体,与特异性DNA 相结合之后,可对子序列启动产生促进作用,且信号能够朝着细胞核转导与调控基因表达,不仅参与了细胞分化㊁增殖及凋亡,还参与了血管形成,致使肿瘤加速形成[8]㊂11号染色体为STAT3的重要来源,其具备的功能相对而言较为复杂,且STAT3信号转导途径在机体免疫调节㊁器官形成㊁胚胎发育中具有重要作用;同时,致癌蛋白感染一旦发生,可对STAT3产生激活作用,并对凋亡抑制基因Mcl -1㊁Bcl -XL 产生上调作用,在此基础上对细胞凋亡产生抑制的同时,激活启动因子,最终对肿瘤血管生成产生促进作用;除此之外,STAT3组成性活化可在很大程度上阻断凋亡细胞的持续性恶化,进一步增大肿瘤细胞增殖量,加快血管形成,对STAT3表达予以阻断可在很大程度上提升肿瘤治疗效果[9-10]㊂本研究中,A 组患者STAT3蛋白㊁E6蛋白阳性表达率明显高于B ㊁C 组,差异有显著性(P<0.0167)㊂相关研究显示,STAT3组成性活化可在很大程度上抑制细胞凋亡,进一步增大细胞增殖量并加快细胞恶性转化与血管形成,因此对其予以有效抑制可能是治疗宫颈癌㊁子宫内膜癌患者的重要靶点[11]㊂针对STAT3的致癌作用,本研究对HPV16E6蛋白与STAT3在不同程度宫颈病变组织内的表达情况进行了综合分析,结果显示由慢性宫颈炎患者随疾病进展发展为宫颈上皮内瘤变,最终进展至宫颈癌过程中E6及STAT3蛋白阳性表达率明显升高㊂同时,相关报道提出,HPV16E6与STAT3于宫颈癌内的表达明显相关,所以恶性肿瘤转化过程中两者之间存在一定联系[2]㊂基因多态性作为医学研究热点之一,一个基因多态性出现变化之后可能造成其他基因型出现变化,在此基础上诱发相关病症,病症诊断中可将基因多态性作为参考依据,并可辅助用于判断预后状况㊂STAT3基因多态性主要分为3个类型,第1个类型为G /G 型,第2个类型为C /C 型,第3个类型为G /C 型;本研究中,相比C 组患者,A ㊁B 组患者G /G 型构成比明显更低,C /C 型构成比明显更高,构成比的差异有统计学意义(P <0.0167);相比B 组患者,A 组患者G /G 型构成比明显更低,C /C 型构成比明显更高,构成比的差异有统计学意义(P <0.0167),提示宫颈癌发生风险随HPV 感染风险升高而升高,疾病程度越重C /C 基因构成比越高,且宫颈癌发病率也随之增加㊂高和平等[12]在相关研究中显示,宫颈癌患者STAT3基因C /C 型构成比随着宫颈病变程度加重而随之增加,G /G 型占比随着G /G 型构成比而随之下降,提示STAT3与宫颈癌之间可能联系紧密,而C /C 基因型与HPV 感染发生的风险可能处于正相关关系㊂STAT3基因一旦发生突变状况,不仅会导致宫颈癌发病率升高,还会在很大程度上增大HPV 感染风险,且HPV 感染一旦出现,不仅会进一步激活STAT3信号通路,还会促使E6㊁E7致癌蛋白通路出现介导功效,是诱发宫颈癌的主要原因,致癌蛋白通过一系列途径可对细胞恶化㊁增殖与血管形成产生促进作用,提示STAT3可能参与了宫颈癌发生及发展,可将其作为宫颈癌诊断的参考指标㊂HPV16所致宫颈癌发生及发展过程中STAT3及其多态性有重要作用,临床检查工作中可作为辅助诊断指标,并为治疗方案的制定提供参考依据㊂但是,受病例数少㊁选择主观性强等因素影响,结果有待验证㊂㊃365㊃ʌ参考文献ɔ[1]㊀雷声云,吕海利,郑春艳.STAT3基因多态性与女性人乳头瘤病毒感染及宫颈病变的关系[J].中国微生态学杂志,2021,33(11):1313-1316,1325.[2]㊀范怡冰.宫颈分泌物中Stat3和Survivin的测定在宫颈病变筛查中的价值[J].中国妇幼健康研究,2018,29(9): 1123-1128.[3]㊀刘琳,沈攀,张力忆,等.宫颈病变内高危型HPV感染与Th细胞分化㊁细胞异常增殖的相关性[J].海南医学院学报,2018,24(3):315-318.[4]㊀莫小亮,覃桂荣,蒋晓莉,等.STAT3及其多态性在HPV16所致宫颈癌发生过程中的作用研究[J].中国当代医药, 2021,28(1):16-19,26.[5]㊀谢幸,孔北华,段涛.妇产科学[M].第9版.北京:人民卫生出版社,2018.278-279.[6]㊀张梦,马冬,袁腾,等.miR-135a-5p㊁GATA3和STAT3在宫颈癌中的表达及其相关性[J].肿瘤防治研究,2019,46(4):338-344.[7]㊀Gauri S,Gaurav V,Yogesh S,et al.Deregulation of microR-NAs Let-7a and miR-21mediate aberrant STAT3signalingduring human papillomavirus-induced cervical carcinogene-sis:role of E6oncoprotein[J].BMC Cancer,2019,14(6): 635-642.[8]㊀张英,邓丽娜,徐传彬.STAT3基因多态性与HPV感染及宫颈病变的关系[J].检验医学与临床,2017,14(21): 3211-3213.[9]㊀Lin W,Bowen S,Junpeng L,et al.STAT3exerts pro-tumorand anti-autophagy roles in cervical cancer[J].DiagnosticPathology,2022,17(1):258-264.[10]㊀Adrian K,Antons M,Lugo N S,et al.STAT3is a potentialtherapeutic target in cervical cancer(257)[J].GynecologicOncology,2022,166(11):259-265.[11]㊀张慧蓉,申东翔,罗敏,等.STAT3对宫颈癌HeLa细胞的增殖㊁凋亡及自噬的影响[J].实用医学杂志,2018,34(16):2653-2658.[12]㊀高和平,朱姗姗,徐福霞,等.STAT3在HPV16/18相关宫颈癌中的致病机制研究[J].中国优生与遗传杂志,2021,29(8):1083-1087.ʌ文章编号ɔ1006-6233(2024)04-0564-06慢性阻塞性肺疾病合并睡眠呼吸暂停综合征老年患者肺部感染气道炎性损伤及血清SAA CRP水平变化意义付晓培1,㊀时靖峰1,㊀腾小宝1,㊀韩明锋1,㊀曹冠亚1,㊀解明然2(1.安徽省阜阳市第二人民医院,㊀安徽㊀阜阳㊀2360152.安徽省立医院/中国科学技术大学附属第一医院胸外科,㊀安徽㊀合肥㊀230001)ʌ摘㊀要ɔ目的:探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)老年患者肺部感染㊁气道炎性损伤及血清淀粉样蛋白A(SAA)㊁C-反应蛋白(CRP)水平变化的意义㊂方法:选择2021年1月至2023年6月我院收治的120例老年COPD合并OSAS患者纳入COPD合并OSAS组,另选取本院同期收治的120例老年COPD患者纳入单纯COPD组㊂比较COPD合并OSAS组和单纯COPD组肺部感染检出率㊁血清IL-6㊁IL-10㊁IL-1β㊁COX-2和CRP㊁SAA水平;比较肺部感染和未感染患者血清指标水平;ROC分析血清CRP㊁SAA水平对COPD合并OSAS患者肺部感染的评估效能㊂结果:COPD 合并OSAS组肺部感染检出率为28.33%,高于单纯COPD组的17.50%(P<0.05);COPD合并OSAS组血清IL-6㊁IL-10㊁IL-1β㊁COX-2和血清CRP㊁SAA水平均高于单纯COPD组(P<0.05);肺部感染COPD合并OSAS患者血清CRP㊁SAA水平均显著高于未感染患者(P<0.05);ROC分析显示,血清CRP㊁SAA评估老年COPD合并OSAS患者肺部感染的AUC分别为0.834㊁0.894,联合检测评估肺部感染的AUC为0.929(P<0.05)㊂结论:老年COPD合并OSAS患者血清CRP㊁SAA和气道炎性损伤指标水平呈现异常升高趋势,血清CRP㊁SAA联合检测对老年COPD合并OSAS患者肺部感染具有最佳评估效能㊂ʌ关键词ɔ㊀慢性阻塞性肺疾病;㊀老㊀年;㊀睡眠呼吸暂停综合征;㊀肺部感染;㊀气道炎性损伤;㊀淀粉样蛋白Aʌ文献标识码ɔ㊀A㊀㊀㊀㊀㊀ʌdoiɔ10.3969/j.issn.1006-6233.2024.04.07㊃465㊃ʌ基金项目ɔ安徽省重点研究与开发计划项目,(编号:202004j07020017)。
基因环境交互作用分析方法在流行病学研究中的应用
垦堕垦堂童生皇堕塑查垫!!竺!旦第42卷第1期Int J Med Parasit Dis，January 2015，V01．42，No．1 ·49··综述·基因一环境交互作用分析方法在流行病学研究中的应用何健杨坤+【摘要】基因一环境交互作用(gene．environment interac ti on)分析方法适合探讨流行病学中遗传和环境多种因素对于疾病发生或传播的作用，并逐渐成为流行病学研究的重要研究手段。
该文从基因．环境交互作用方法的研究设计和统计学方法两方面，综述此方法的最新国内外研究进展．期望拓展在寄生虫病等研究领域的应用。
【关键词1基因．环境交互作用；流行病学；统计学分析Applic ation of ge ne·en vi ro nm en t in t er a c ti o n an a l ys i s in epide miol ogica l st udie s He Ji an，Ya ngKun*．Jiangsu Institute of Parasitic Di s e a s e s，K e y L a b o r a t o r y of Parasitic D i se a s e Control a nd Prevention，Min蠡try of Heal th，J ia rt gsu Provincial Key Laboratory ofParasite Molecular Biolog y,Wu xi 214064,C h i na+Corresponding author：Yang Kun,Em ail：ji pdy k@163．comSu pp on ed b y N a t i o n a l N a t u r a l S c i en c e F o u n d a t i o n of China(81101275)【Abstract】Gen e．en vironm ent interaction anal ysi s，as me tho d of m uh i．fa ct or s tu dv，c an explore the roleof genetic and envi ronment al factors in the prevalenc e an d transmission of di s e a se s，a n d it has be c o meveryi m p or t a n t m eans of ep i d e m i o l o g i c al s t u d y．R e s e a r c h d e s i g n a n d statistical met hods of g e n e—e n v i ro n m e nt inter-action metho d were revie we d in this paper,aiming at pro vi di n g re f er en c e in the flied of parasitic d i s e a se ss tu d y．【Key words】Gene-environment inte ra ct io n；E pi dem io lo gy；St at is tic al a na ly si s随着人们对于疾病发生认识的改观，发现诸互作用分析方法的进展，以期为流行病学病因研如癌症[I之]、慢性病[3-4]、精神疾病[5-6]、媒介传播究提供参考。
肿瘤坏死因子-α-308G／A位点基因多态性与慢性肝病的关系
ＡＳ Ｓ ｏＣＩ ＡＴＩ ｏ ＮＢＥＴＷ ＥＥＮ ＴＨ Ｅ Ｐｏ ＬＹＭ ｏ ＲＰＨ Ｉ Ｓ Ｍ ｏＦ ＴＵＭ ＯＲ ＮＥＣＲＯ Ｓ ｉ Ｓ ＦＡＣＴｏ Ｒ ＡＬＰＨ Ａ
南 宁 ５ ３ ０ ０ ２ １ ）
（ 广 西 医 科 大 学 第 一 附 属 医 院感 染 性 疾 病 科
摘 要 目 的 ： 探讨肿瘤坏死 因子（ ＴＮ Ｆ ） 一 ａ 基 因启 动 子 一 ３ ０ ８位 点 基 因 多态 性 与 慢 性 乙型 病 毒 性 肝 炎 、 乙型肝炎肝硬化 、 慢 性 重 型 乙 型 病 毒 性 肝 炎 之 间 的 关 系 。方 法 ： 以１ ３ ２例 ＨＢ Ｖ慢性 感染者（ 慢 性乙型病 毒性肝炎 ８ ４例 ， 乙型肝炎肝硬 化 ２ ８例 和 慢 性 重 型 乙型 肝 炎 ２ Ｏ例 ） 作 为病例组 ， 以５ Ｏ例 正 常人 作 为 健 康 对 照 组 ， 采 用 聚 合 酶 联 反 应 一 限 制 性 片 断 长 度 多 态 性 技 术 进 行 ＴＮ Ｆ 一
ｎ ｉ ｎ ｇ ５ ３ ０ ０ ２ １ ，Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ：Ｔｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｗｈ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｓ ｍ ｏ ｆ ｔ ｕ ｍｏ ｒ ｎ ｅ ｃ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｄ（ ＴＮＦ — ）ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ — ｅ ｒ ｒ ｅ ｇ ｉ ｏ ｎ一３பைடு நூலகம்０ ８ Ｇ／ Ａ ｉ ｓ ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｏ ｕ ｔ ｃ ｏ ｍｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｈ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｔ ｉ ｓ Ｂ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ（ ＨＢ Ｖ）ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ．Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ：
TNF—α通过内质网应激信号通路诱导肝癌细胞自噬并促进增殖的研究
TNF—α通过内质网应激信号通路诱导肝癌细胞自噬并促进增殖的研究目的研究腫瘤坏死因子α（TNFα）通过内质网应激信号通路对肝癌细胞自噬和增殖的作用。
方法利用免疫组织化学检测原发性肝细胞癌患者癌灶组织、配对的癌旁组织，以及肝血管瘤患者瘤旁正常肝组织中TNFα、BECN1、LC3B、PCNA的表达水平。
用人源TNFα重组因子刺激肝癌细胞株HepG2后，通过蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白BECN1、LC3B以及细胞增殖标志物PCNA表达水平，并利用自噬抑制剂3MA抑制HepG2细胞自噬后，检测TNFα刺激后的细胞活性及PCNA蛋白水平的改变情况。
通过蛋白免疫印迹法检测TNFα刺激HepG2细胞后内质网应激通路相关蛋白eIF2α、peIF2α的表达水平。
结果肝细胞癌患者癌灶和癌旁组织中TNFα、BECN1、LC3B、PCNA蛋白表达量均较正常人肝组织升高。
TNFα刺激HepG2细胞后，细胞内BECN1、LC3B、PCNA蛋白表达水平升高，细胞活性增强，使用3MA 抑制HepG2细胞自噬后，细胞PCNA 蛋白表达水平以及细胞活性下降，TNFα刺激HepG2细胞后内质网应激活性标志物eIF2α磷酸化水平明显增加。
结论T NFα通过内质网应激信号通路诱导肝癌细胞自噬，从而促进肝癌细胞的增殖。
【Abstract】ObjectiveTo investigate the effect of tumor necrosis factorα （TNFα）upon the autophagy and proliferation of liver cancer cells through endoplasmic reticulum stress signaling pathway MethodsThe expression levels of TNFα，BECN1，LC3B and PCNA in the cancerous and paracancerous tissues of patients with primary hepatocellular carcinoma，and the normal tissues adjacent to tumors of patients with hepatic hemangioma were determined by immunohistochemistry After the He pG2 was treated with recombinant human TNFα cytokine，the expression of autophagyrelated proteins of BECN1 and LC3B，and the cell proliferation marker of PCNA were quantitatively measured by Western blot After the treatment with autophagy inhibitor 3MA，the changes in the HepG2 cell viability and PCNA expression were observed following TNFα stimulation After the HepG2 cells were treated with TNFα，the expression levels of eIF2a and peIF2a related to the ER stress signaling pathway were detected by Western blot ResultsThe expression levels of TNFα，BECN1，LC3B and PCNA proteins in the cancerous and paracancerous tissues of hepatocellular carcinoma patients were significantly upregulated compared with those in the normal liver tissue Following the HepG2 cells were treated with TNFα，the expression levels of BECN1，LC3B and PCNA proteins were upregulated，and the cell viability was increased After the treatment with autophagy inhibitor 3MA，the expression of PCNA protein and cell viability were downregulated Aft er the treatment with TNFα，the phosphorylated level of eIF2a was significantly enhanced ConclusionTNFα can induce the autophagy of liver cancer cells via the endoplasmic reticulum stress signaling pathway，thereby promoting the proliferation of liver cancer cells【Key words】Hepatocellular carcinoma；Tumor necrosis factorα；Autophagy；Endoplasmic reticulum stress原发性肝细胞癌是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一，尽管近年来该病的基础研究和临床研究均取得了巨大进展，但其防治效果仍不尽如人意，肝细胞癌相关分子机制仍未清楚是重要的原因之一。
肿瘤坏死因子α基因G-308A多态性与高血压相关性
肿瘤坏死因子α基因G-308A多态性与高血压相关性吴旭斌;周胜华【期刊名称】《高血压杂志》【年(卷),期】2004(12)5【摘要】目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)基因G 30 8A多态性与高血压的相关性。
方法放免法检测 114例高血压患者和 114健康对照者血浆TNFα水平 ,应用聚合酶联反应 -限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)方法检测TNFα基因G 30 8A 多态性。
结果与健康对照者相比较 ,高血压患者血浆TNFα水平增高 (P <0 0 1) ;而TNFα基因G 30 8A基因型和等位基因的分布 ,高血压患者和健康对照者相比较无显著意义 (P >0 0 5 ) ;高血压患者基因型间血浆TNFα水平、血压值比较无统计学差异 (P >0 0 5 )。
结论TNFα基因G 30 8A多态性与高血压无关。
【总页数】4页(P415-418)【关键词】肿瘤坏死因子a;基因;G-308A;多态性;高血压;相关性【作者】吴旭斌;周胜华【作者单位】中南大学湘雅二院心血管内科【正文语种】中文【中图分类】R544.1【相关文献】1.肥胖2型糖尿病患者TNF-αG-308A基因多态性与肾病相关性研究 [J], 王颖;伍楚贤;唐俊业;陈重娥2.TNF-α基因G-308A多态性与中国人原发性高血压相关性的Meta分析 [J], 张晓冬;孙竹;曾宪涛;田国祥;周强;边巍;于倩3.肿瘤坏死因子-α基因G-308A位点多态性变化与儿童肥胖易感性的关系 [J], 颜伟健;吴静;莫娟;雷闽湘;彭烈武4.迟发性阿尔茨海默病的肿瘤坏死因子-α G-308A基因多态性研究 [J], 张许来;张晓莉;陶领知;孔晓明;张丽;李泽爱;张胜权5.肿瘤坏死因子-α基因G-308A多态性与心肌梗死相关性的Meta分析 [J], 华先平;王贤明;操传斌;钱进;谢建;彭俊秋;张振建因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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第２期宋韶芳，等．ＴＮＦ—ｃｔ－３０８位点基因多态性与环境因素在肝癌发生中的交互作用
１９７
肝癌的发生受多种因素的影响，依其来源、性质与作用方式的差异，可分为外源性因素与内源性因
素。
在发达国家，丙肝病毒（ＨＣＶ）和酗酒是肝癌的主要病因；而在发展中国家，乙肝病毒（ＨＢＶ）是肝
癌的主要病因，黄曲霉毒素、饮水污染等也起重要作用…。
暴露于相同环境下的人群仅部分患肝癌，这表明遗传、免疫等内源性因素不同的个体患肝癌的
几率不同。
沈福民在１９９１年报告了对肝癌家系资
料的分析结果，认为肝癌是一种具有主基因效应的
因子遗传病旧Ｊ。
肝癌患者多数有慢性炎症病史，当炎症慢性迁
延，肝癌发生率明显增加，而用抗炎药物能延长晚期肝癌病人生存期。
因此，慢性炎症是肝癌发生和发展的重要因素旧ｊ，然而炎症与肝癌发生发展的分子
机制仍然不清楚，国内外关于炎症因子之一肿瘤坏
死因子Ｏｔ（ｔｕｍｏｒ
ｎｅｃｒｏｓｉｓ
ｆａｃｔｏｒ．仅，ＴＮＦ－Ｏｔ）基因多态
性和原发性肝癌关系的报道较少，并且结论不一致。
因此，本研究以我国肝癌高发区之一的广东顺德作为研究现场，采用１：１配对的病例对照研究方法，探讨ＴＮＦ—ａ－３０８基冈多态性与环境因素在肝癌发生中的作用及交互作用。
１对象与方法ＮｃｏＩ限制性内切酶、琼脂糖均为大连宝生物工程公司产品。
蛋白酶Ｋ、ＥＢ购自上海生工生物工程公
司。
１．３．２．２
ＴＮＦ．仅的ＰＣＲ扩增及酶切高盐沉淀法
提取基因组ＤＮＡｃ４Ｊ。
２０ｗＬ
ＰＣＲ反应体系含有：基
因组ＤＮＡ
２“Ｌ，４
ｉｘｍｏｌ／Ｌ上下游引物各ｌ斗Ｌ（上游
５＇－ＡＧＧＣＡＡＴＡＧＧ１ＴｒＴＴＧＡＧＧＧＣＣＡＴ一．３，下游
５’一ＴＣＣＴＣＣＣＴＧＣＴＣＣＧＡＴＹＣＣＧ－３７），１０×Ｂｕｆｆｅｒ
２仙Ｌ，２５
ｍｍｏｌ／Ｌ的ＭｇＣｌ２
１．２斗Ｌ，２．５
ｍｍｏＬ／Ｌ的
ｄＮＴＰ１．６
ｗＬ，ＴａｑＤＮＡ聚合酶（５Ｕ／Ｌ）１．２５斗Ｌ，
ＤＭＳＯ（３％）０．６ｗＬ，灭菌双蒸水１１．７ｗＬ。
扩增条件为９４℃预变性２ｍｉｎ，然后９４℃变性４５Ｓ，６０℃退火４５
ｓ，７２
ｏＣ延伸４５Ｓ，３３个循环，最后于７２℃总
延伸５ｍｉｎ。
酶切：取ＰＣＲ产物１０
ｗＬ，ＮｃｏＩ１斗Ｌ，１０
×缓冲液２灿，灭菌水５止置３７℃水浴７ｈ。
１．３．２．３基因分型取１０汕酶切产物加缓冲液１止，在３％琼脂糖凝胶９０Ｖ条件下泳动８０ｍｉｎ，于
紫外灯下观察ＴＮＦ—Ｏｔ三种基因型。
基因型为
ＴＮＦＩ／１纯合子时扩增的片段含ＮｃｏＩ酶切位点，可被完全酶切为８７
ｂｐ、２０
ｂｐ两条带；ＴＮＦｌ／２杂合子
时，产生不完全酶切出现１０７
ｂｐ、８７ｂｐ、２０
ｂｐ三条
带；ＴＮＦ２／２纯合子时，其ＰＣＲ产物经ＮｃｏＩ消化，不产生酶切，电泳后只出现１０７ｂｐ一条带。
见图１。
１．１研究对象
病例来源于广东顺德区各医院２００４—２００７年
确诊并在该区居住＞１０年的顺德籍原发性肝癌存活病人，共８１例。
对照按照１：１配对方法收集未患肝癌８１人，要求其在顺德居住＞１０年，与病例同村、同性别，年龄与病例诊断年龄±３岁，无血缘关系。
面访调查对象并填写调查表，取静脉血６～１０
ｍＬ，一２０
ｏＣ低温保存。
１．２问卷调查内容
年龄、性别等基本情况；吸烟、饮酒、食物摄人情况Ｍ：Ｄ１２００ＤＮＡ分子量标记物；１，５：ＴＮＦＩ／Ｉ基因型；等生活习惯；肝病史、肝癌史等健康状况。
主要变量的
２，４：ＴＮＦｌ／２基因型；３：ＴＮＦ２／２基因型
定义：肝病史：曾患脂肪肝、肝硬化、肝吸虫等肝脏疾病
图１
ＴＮＦ’ａ－３０８位点基因型电泳结果
其中之一者。
吸烟：每天吸烟１支以上，时间超过６个ｎｇｕｒｅ
ｌ
Ｅ１ｅｃｔｒｏｐｈｏ佗８ｉ８Ｐ１ｍｏｆＴＮＦ－ａ。
３０８
ｇｅｎｏｔｙｐｅ
月。
饮酒：每周饮酒１次以上。
时间超过６个月。
１．４数据统计与分析
１．３实验室检测
利用ＥｐｉＤａｔａ建立数据库，使用ＳＰＳＳｌ２．０进行１．３．１
血清学检测用酶联免疫吸附试验
统计分析。
（ＥＬＩＳＡ）（上海科华生物工程股份有限公司试剂盒）１．４．１
计算ＴＮＦ２等位基因频率，按Ｈａｒｄｙ－
检测ＨＢＶ感染５项指标、丙肝抗体、甲胎蛋白、肝吸Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡原理确认样本的群体代表性。
虫抗体。
１．４．２将单因素分析中有统计学意义的变量引入１．３．２
ＴＮＦ．ｃｔ－３０８位点基因型的检测
多因素条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归模型，通过向前逐步回归方
１．３．２．１
主要试剂ＴａｑＤＮＡ聚合酶、ｄＮＴＰｓ、
法，以０．０５作为选人变量和以０．１０作为剔除变量。