蛋白质的SDS-PAGE电泳
(完整版)SDS-PAGE蛋白电泳方法
SDS-PAGE一. 实验原理SDS 是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS 复合物。
在一定条件下，SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。
由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。
SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。
蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样，约为 1.8nm ，而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。
基于上述原因，蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关，也就是蛋白质 Mr 的函数。
二. 试剂器材30%凝胶贮液(100mL)：称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中，向烧杯中加入约60mL双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL，置于棕色瓶内4℃贮存，每过1-2个月应重新配制；注意：丙稀酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套和口罩等。
分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8，100mL)：称取Tris 18.2g 溶于约80mL 双蒸水，用6mol/L的HCl 调整pH值至8.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；堆积胶缓冲液(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8，100mL)：称取Tris 6.0g溶于约80mL双蒸水，用1mol/L的HCl 调整pH值至6.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；电泳缓冲液(1L)：称取试剂Tris 3.03g和甘氨酸 14.4g置于500mL烧杯中，向烧杯中加入约400mL双蒸水充分溶解，再加入10%SDS溶液1.0mL，以双蒸水定容至1L (自然pH值为8.3，无需再调)，4℃ 贮存，可重复使用5-6次；2×加样缓冲液(10mL)：取下列试剂置于10mL塑料离心管中0.5mol/L Tris-HCl缓冲液(pH6.8) 2.0mL10%SDS溶液 4.0mL甘油 2.0mL巯基乙醇 2.0mL溴酚蓝 0.02g，混匀后1mL分装，-70℃可贮存6个月；10%AP：称取(NH4)2S2O3 1.0 g，溶于10.0mL双蒸水中，分装成每份1mL，-20℃贮存；TEMED：分装成每份1mL，4℃避光贮存；水饱和正丁醇(100mL)：在玻璃瓶中加入50mL双蒸水和50mL正丁醇，振摇。
简述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和应用
简述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和应用1. 原理SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，简称SDS-PAGE）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
它基于蛋白质的分子量和电荷差异，通过电场作用将蛋白质分离成不同的带。
SDS-PAGE的原理基于以下几个方面：1.SDS的作用：SDS是一种阴离子表面活性剂，可以使蛋白质分子迅速与其结合，并赋予蛋白质大量的负电荷，使得蛋白质在电场中按照大小和形状进行分离。
2.聚丙烯酰胺凝胶：聚丙烯酰胺凝胶是一种聚合物，可以形成一种网状结构，这种结构具有孔隙，可以通过孔隙大小筛选不同大小和形状的蛋白质分子。
3.电场作用：在电泳槽中施加电场后，带负电荷的蛋白质会向阳极迁移，迁移速度取决于蛋白质分子的质量和形状。
通过以上原理，可以将蛋白质样品加载在聚丙烯酰胺凝胶的孔隙中，然后施加电场，蛋白质按照其分子量的大小和形状进行分离，最终形成不同的蛋白质带。
2. 应用SDS-PAGE广泛应用于生物医学和生命科学的各个领域，以下是SDS-PAGE的几个主要应用：2.1 蛋白质分离与纯化SDS-PAGE是一种常用的蛋白质分离和纯化技术。
通过SDS-PAGE，可以将混合蛋白质样品根据其分子量进行分离，得到纯化的蛋白质。
这对于研究蛋白质的结构、功能以及相互作用具有重要意义。
2.2 亚细胞结构研究通过SDS-PAGE，可以将细胞或亚细胞结构中的蛋白质分离出来，进一步研究其在细胞内的定位、功能以及与其他分子的相互作用。
这有助于揭示细胞和亚细胞结构的功能机制。
2.3 蛋白质质量测定通过SDS-PAGE，可以通过与已知分子量的蛋白质标准品进行比较，估计未知蛋白质的分子量。
这对于研究蛋白质的结构、功能以及其在生物过程中的变化具有重要意义。
2.4 蛋白质组学研究SDS-PAGE结合质谱技术可以进行蛋白质组学研究。
sds-page
聚丙烯酰胺凝胶电泳（英语：polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质和寡核苷酸。
作用原理：聚丙烯酰胺凝胶是具有分子筛作用的网络结构。
它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）和变性聚丙烯酰胺凝胶。
在蛋白质的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白质可以保持完整的状态，并根据蛋白质的分子量，蛋白质的形状和附着的电荷量逐渐彼此分离。
在DNA的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，DNA以双链状态游动，其迁移率受碱基组成和序列的影响。
在变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，变性剂通常为SDS（SDS-PAGE），变性剂通常为尿素和甲酰胺。
蛋白质的SDS-PAGE技术由Shapiro于1967年首次建立。
他们发现，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基的分子量（电荷因子可忽略不计），加入离子去污剂和强还原剂（SDS，十二烷基样品介质和丙烯酰胺凝胶。
SDS是一种阴离子洗涤剂。
作为变性剂和增溶剂，SDS可以破坏分子之间的氢键，展开分子并破坏蛋白质分子的二级和三级结构。
诸如巯基乙醇和二硫苏糖醇之类的强还原剂可以破坏半胱氨酸残基之间的二硫键。
将还原剂和SDS加入样品和凝胶后，分子解聚成多肽链。
解聚的氨基酸侧链与SDS结合形成蛋白质SDS胶束。
聚合物的负电荷远高于蛋白质的原始电荷，因此消除了不同分子之间的电荷和结构差异。
通常，不连续缓冲系统用于SDS-PAGE，其分辨率高于连续缓冲系统。
浓缩胶的作用是积聚，凝胶小，孔径大，将较薄的样品加入到增稠胶中，通过大孔胶的迁移作用将其浓缩到狭窄区域。
当选择Tris / HCl缓冲溶液作为样品溶液和浓缩凝胶时，选择Tris /甘氨酸作为电极溶液。
电泳开始时，HCl分解为氯离子，甘氨酸分解为甘氨酸离子。
蛋白质带负电荷，因此它们一起移动到正电极。
氯离子最快，甘氨酸离子最慢，蛋白质在中间。
sds-page分离蛋白的原理
sds-page分离蛋白的原理SDS-PAGE（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种在实验室中常用的生物化学技术。
SDS-PAGE可以用来分离蛋白质，使研究者能够研究它们的结构和功能。
SDS-PAGE的基本原理是利用电泳现象将复杂的混合物分离成单一的组分。
电泳是一种根据物质的电荷、大小和形状利用电场作用通过凝胶进行分离的方法。
SDS-PAGE是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离蛋白质的一种方法。
蛋白质分子因其分子量和分子结构不同，在SDS-PAGE中将被分离为单独的、清晰的带状带。
这些带状带每个代表一个不同的蛋白质。
通过观察这些蛋白质带状带，可以获得蛋白质分子的相关信息，如分子量（MW）和含量。
在SDS-PAGE中，聚丙烯酰胺凝胶被用作固定相。
凝胶是通过将聚丙烯酰胺单体和交联剂混合后形成的。
这种凝胶可以形成微孔和孔径，使凝胶能够分离不同大小的蛋白质分子。
在准备样品时，蛋白质分子通常会在缓冲液中添加SDS (十二烷基硫酸钠）。
SDS是一种表面活性剂，可以使蛋白质分子带有负电荷并具有等电点（pI）价值。
当SDS蛋白质混合物被加入聚丙烯酰胺凝胶电泳电场中时，它们会在电泳作用下向负极移动。
这是因为凝胶的孔径大小使得分子量大的蛋白质分子移动缓慢，分子量小的蛋白质分子移动较快。
SDS-PAGE还需要在样品上和凝胶中加入还原剂和染色剂。
还原剂可以断裂蛋白质分子的二硫键，并使氨基酸带上负电，而染色剂则通过与蛋白质分子中的某些氨基酸或特定结构相互作用来着色。
这些特殊的化学试剂可以使蛋白质更容易在凝胶上定位，并且可以观察到蛋白质分子的相对含量。
总的来说，SDS-PAGE是一种有效的蛋白质分离技术，可以帮助生物学家了解蛋白质分子的研究方向。
任何要研究或描绘蛋白质质量、酸碱平衡、多肽结构或寻找抗原、肽链或酶活性的科学家都需要使用这种技术。
蛋白SDS-PAGE蛋白范围
百泰派克生物科技
蛋白SDS-PAGE蛋白范围
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE），也称之为变性聚丙烯酰胺凝胶
电泳，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种含有十二烷基硫酸钠（SDS，变性剂）的常用电泳技术，常用于检测蛋白质分子量大小和样品中的蛋白纯度。
SDS-PAGE有效分离蛋白的范围取决于聚丙烯酰胺的浓度和交联度，其分子筛孔径
随着双丙烯酰胺与丙烯酰胺比率的增加而减小。
因此，SDS-PAGE蛋白范围主要取
决于丙烯酰胺的浓度（%）。
通常情况下，丙烯酰胺的浓度为15%、12.5%、10%、
7.5%、5.0%时，SDS-PAGE蛋白范围分别为15-43.5kDa、15-60kDa、18-75kDa、30-120kDa、60-212kDa。
因此，在进行蛋白SDS-PAGE检测之前，需要预估目标蛋白的分子量大小，然后通过SDS-PAGE实验进行验证。
若无法预知目标蛋白分子量大小，则可优先选择蛋白分子量检测范围大的丙烯酰胺浓度开展SDS-PAGE实验，然后将
电泳后的凝胶蛋白条带采用凝胶呈像系统软件计算蛋白分子量和纯度。
百泰派克生物科技提供基于SDS-PAGE的蛋白分离服务，经过SDS-PAGE电泳将获取蛋白质样品的电泳图谱，结合其它基于质谱的蛋白质鉴定服务对样品进行分析或纯化，用于复杂生物样品的蛋白质谱分析。
您只需将实验目的告知并将样品寄出，我们将负责项目后续所有事宜，包括样品净化（去除DNA和RNA，减少s-s键，蛋白质）、消除样品中高丰度蛋白质以及蛋白质提取、纯化、浓缩和水解消化等处理。
SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告
SDS－PAGE测定蛋白质相对分子质量一、前言聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳，简称PAGE，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。
聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。
催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。
化学聚合以过硫酸铵(APS)为催化剂，以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。
在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。
PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。
不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。
不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。
浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HCl。
分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HCl。
电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。
SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。
而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。
在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。
实验十聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白质
实验⼗聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋⽩质实验⼗聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋⽩质【实验⽬的】1. 了解和掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的技术和原理；2. 掌握⽤此法分离蛋⽩质组分的操作⽅法。
【实验原理】在⽣物化学、分⼦⽣物学和基因（遗传）⼯程实验中，常常要进⾏蛋⽩质和核酸的分离⼯作。
聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis, PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作为⽀持介质进⾏蛋⽩质或核酸分离的⼀种电泳⽅法。
聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体（acrylamide，简称ACR）和交联剂N，N-甲叉双丙烯酰胺（N,N-methylene bisacrylsmide 简称BIS）在催化剂的作⽤下聚合交联⽽成的三维⽹状结构的凝胶。
通过改变单体浓度与交联剂的⽐例，可以得到不同孔径的凝胶，⽤于分离分⼦量⼤⼩不同的物质。
聚丙烯酰胺凝胶聚合的催化体系有两种：（1）化学聚合：催化剂采⽤过硫酸铵，加速剂为N,N,N,N－四甲基⼄⼆胺（简称TEMED）。
通常控制这⼆种溶液的⽤量，使聚合在1⼩时内完成。
（2）光聚合：通常⽤核黄素为催化剂，通过控制光照时间、强度控制聚合时间，也可加⼊TEMED 加速反应。
聚丙烯酰胺凝电泳常分为⼆⼤类：第⼀类为连续的凝胶（仅有分离胶）电泳；第⼆类为不连续的凝胶（浓缩胶和分离胶）电泳。
⼀般地，不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳有三种效应：①电荷效应（电泳物所带电荷的差异性）；②凝胶的分⼦筛效应（凝胶的⽹状结构及电泳物的⼤⼩形状不同所致）。
③浓缩效应（浓缩胶与分离胶中聚丙烯酰胺的浓度及pH的不同，即不连续性所致）。
因此，样品分离效果好，分辨率⾼。
SDS即⼗⼆烷基硫酸钠（Sodium Dodecyl Sulfate，简称SDS）是阴离⼦表⾯活性剂，它能以⼀定⽐例和蛋⽩质结合，形成⼀种SDS-蛋⽩质复合物。
这时，蛋⽩质即带有⼤量的负电荷，并远远超过了其原来的电荷，从⽽使天然蛋⽩质分⼦间的电荷差别降低仍⾄消除。
SDS-PAGE实验报告
生化实验总结报告实验名称：SDS - PAGE法测定蛋白质的相对分子量作者：田景辉（201306230114）专业：生物工程指导教师：许培雅日期：2015.12.30组员：杨瑞徐巧妹尹彪程健刘嘉南目录一、实验介绍 (3)二、实验原理 (3)三、实验材料、试剂、器皿 (4)四、操作步骤 (5)五、注意事项 (7)六、实验数据记录与处理 (7)七、总结与建议 (8)八、术语表 (9)九、参考文献 (9)十、附录 (9)一、实验介绍1.实验目的掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法和测定蛋白质分子量的技术。
2.实验背景在实验一中，用100g新鲜酵母用甲苯自溶法、研磨法、SDS（十二烷基苯磺酸钠）法进行了蔗糖酶的提取以及粗提取，得到初提取液A、热提取液B、乙醇提取液C。
最终得到9.0ml蔗糖酶初提取液。
实验二采用QAE-葡聚糖凝胶离子交换柱层析法进行蔗糖酶的纯化，得到经线性阶梯洗脱的分离液D1和经阶梯梯度洗脱的分离液D2。
实验三采用苯基琼脂糖凝胶柱层析法进行进一步纯化，得到经2mol/L(NH4)2SO4的0.05mol/L Tris-HCl ph7.3 缓冲液洗脱的分离液E1和经2mol/L NaCl的0.05mol/L Tris-HCl ph7.3 缓冲液洗脱的分离液E2。
二、实验原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）， SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
sds page原理
sds page原理
SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
它的原理基于蛋白质的电荷和分子质量差异。
SDS-PAGE的原理如下：
1. 蛋白质样品：将待分析的蛋白质样品在含有SDS（十二烷基硫酸钠）的缓冲液中加热处理，使蛋白质变性为线性形式，并与SDS以1:1的比例结合。
SDS 能够给蛋白质提供一个负电荷，使蛋白质呈均一的负电荷比例。
2. 准备Gel：制备一个由聚丙烯酰胺和交联剂组成的Gel胶。
在聚丙烯酰胺中添加过氧化物，使其发生聚合反应。
这样形成了一系列大小孔隙的网状结构。
3. Gel电泳：将含有SDS的蛋白质样品通过吸附在Gel上的孔隙中。
加上直流电压，在电场作用下，蛋白质会随着电泳迁移。
负电荷较多的蛋白质迁移较快，负电荷较少的蛋白质迁移较慢，从而实现了蛋白质的分离。
4. 染色和可视化：经过电泳分离后，使用染色剂（如Coomassie蓝）对蛋白质进行染色，目的是使蛋白质能够在胶上可视化。
通过比较样品和标记的分子量标准品的黑色条带，可以测量和估算待测蛋白质的分子量。
总结：SDS-PAGE通过对蛋白质样品中的蛋白质进行处理和分离，使其呈现出
电荷和分子质量的差异性。
这一方法在蛋白质的分子量分析、鉴定和纯化过程中被广泛应用。
sds-page蛋白凝胶电泳原理
在进行SDS-PAGE蛋白凝胶电泳原理的讨论之前，我们首先需要了解蛋白质和电泳技术的基本概念。
蛋白质是生物体内功能最丰富的大分子化合物，它们参与了生命的方方面面，包括结构、酶活性、信号传导等。
而电泳技术则是一种基于电场作用将带电粒子分离的方法，它在生命科学研究中有着广泛的应用。
SDS-PAGE蛋白凝胶电泳原理是一种常用于分离和鉴定蛋白质的技术，其原理基于蛋白质在电场中的迁移速度与其分子质量成反比的关系。
现在让我们深入探讨SDS-PAGE蛋白凝胶电泳的原理和相关细节。
1. SDS-PAGE蛋白凝胶电泳的基本步骤在进行SDS-PAGE蛋白凝胶电泳实验时，首先需要将待测样品中的蛋白质在含有SDS（十二烷基硫酸钠）的缓冲液中进行变性处理，使得蛋白质呈线性结构并且带有负电荷。
之后，将处理过的蛋白样品加载到聚丙烯酰胺凝胶中，并施加电场使得蛋白质开始迁移。
根据蛋白质的分子质量，它们将在凝胶中以不同的速率迁移，最终实现分离。
2. SDS的作用原理SDS是一种带有负电荷的表面活性剂，它的主要作用是使得蛋白质呈线性构象，并且使得蛋白质的带电量与其分子质量成正比。
这样一来，不同分子质量的蛋白质在电场中受到的阻力相对应也会不同，从而实现蛋白质的分离。
3. 凝胶电泳的原理凝胶电泳是利用凝胶作为分离介质的电泳方法。
凝胶可以是聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶或者琼脂糖琼脂糖凝胶。
在SDS-PAGE蛋白凝胶电泳中，聚丙烯酰胺凝胶是最常用的分离介质。
它的基本原理是利用凝胶的孔隙大小来实现对蛋白质的分离，分子质量较大的蛋白质会受到较大的阻力从而迁移较慢，分子质量较小的蛋白质则会迁移得更快。
4. 电泳条件的影响在进行SDS-PAGE蛋白凝胶电泳实验时，电泳条件的设定对分离结果有着重要影响。
电场强度的大小、电泳时间的长短、凝胶浓度等都会影响蛋白质的迁移速度和分离效果。
总结而言，SDS-PAGE蛋白凝胶电泳原理基于蛋白质在电场中的迁移速度与其分子质量成反比的关系，通过SDS的作用使得蛋白质呈现线性构象并且带有负电荷，再利用凝胶电泳对不同分子质量的蛋白质进行分离。