雷帕霉素对肺癌细胞mTOR信号通路相关蛋白表达的作用
长时间雷帕霉素治疗可抑制mTORC2组装和AktPKB
长时间雷帕霉素治疗可抑制mTORC2组装和AktPKBProlonged rapamycin treatment inhibits mTORC2 assembly and Akt/PKB.药物雷帕霉素在肿瘤学、心脏病学和移植医学中有重要用途，但其临床相关的分子效应尚不清楚。
当与FKBP12结合时，雷帕霉素与mTOR、mLST8和Raptor组成的多蛋白复合体(MTORC1)相互作用并抑制其激酶活性。
MTOR、mLST8和Rictor的独特复合体(MTORC2)不与FKBP12-雷帕霉素相互作用，被认为对雷帕霉素不敏感。
MTORC2磷酸化并激活Akt/PKB，Akt/PKB是细胞存活的关键调节因子。
在这里，我们发现雷帕霉素抑制mTORC2的组装，在许多细胞类型中，长时间的雷帕霉素处理使mTORC2的水平降低到维持Akt/PKB 信号所需的水平以下。
在表达对雷帕霉素耐药的Akt/PKB突变体的细胞中，雷帕霉素的促凋亡和抗肿瘤作用被抑制。
我们的工作描述了雷帕霉素的一种不可预见的作用机制，这表明它可以用来抑制某些细胞类型中的Akt/PKB。
雷帕霉素介导的 Akt/PKB 的抑制有助于雷帕霉素的抗肿瘤作用(a)用雷帕霉素或载体处理载体单细胞PC3细胞异种移植瘤小鼠2天，并进行肿瘤切片分析,以免疫组织化学测定Akt/PKB、phospho-S473 Akt/PKB 及 phospho-T308 Akt/PKB 的水平。
(b)用载体控制的PC3细胞或稳定表达野生型或S473D Akt1/PK B1的 PC3细胞制备的异种移植瘤小鼠进行治疗用雷帕霉素或载体治疗2天，并用TUNEL 染色(图像)分析肿瘤切片是否存在凋亡细胞。
标准偏差 n = 4显示了百分比的凋亡细胞在每个肿瘤类型。
(c)用所述PC3细胞系制备的肿瘤异种移植物，用雷帕霉素或载体处理小鼠2天。
然后处死小鼠，并在肿瘤采集时测量肿瘤体积。
图表显示，肿瘤体积的6个标准偏差作为百分比的车辆治疗结束2天的治疗(n = 6每个条件)。
雷帕霉素靶蛋白信号通路的组成及对树突状细胞功能的调节
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《2024年mTOR信号通路在细胞生长调控中的作用与机制研究》范文
《mTOR信号通路在细胞生长调控中的作用与机制研究》篇一一、引言在细胞生物学领域，mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）信号通路是调控细胞生长、增殖和代谢的重要机制之一。
它不仅参与了细胞的能量代谢和生长因子信号的传导，还在肿瘤发生、发展及治疗中发挥着重要作用。
本文将详细探讨mTOR信号通路在细胞生长调控中的作用与机制。
二、mTOR信号通路的概述mTOR是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，属于磷脂酰肌醇激酶相关蛋白激酶家族。
mTOR信号通路是一个复杂的网络系统，包括mTORC1和mTORC2两种复合物，其中mTORC1在细胞生长调控中起到关键作用。
该通路通过整合多种生长因子、能量状态和营养信号，调节细胞的生长、增殖、自噬和代谢等过程。
三、mTOR信号通路在细胞生长调控中的作用1. 促进细胞生长：mTOR信号通路通过激活S6K1和4E-BP1等下游效应分子，促进蛋白质合成和核糖体生物合成，从而促进细胞生长。
2. 抑制细胞自噬：mTOR信号通路的激活可以抑制细胞自噬，为细胞提供稳定的营养和能量供应，有利于细胞的生长。
3. 调节能量代谢：mTOR信号通路可以感知细胞的能量状态，调节葡萄糖代谢和脂质代谢，为细胞生长提供必要的能量和物质基础。
四、mTOR信号通路的机制研究mTOR信号通路的机制涉及多个层面，主要包括以下几个方面：1. 生长因子信号的传导：生长因子与受体结合后，通过一系列的信号传导过程激活mTOR信号通路。
2. 营养和能量信号的感知：mTOR信号通路可以感知细胞的营养和能量状态，根据内外环境的变化调整细胞的代谢和生长。
3. 下游效应分子的激活：mTOR信号通路的激活会引发一系列的下游效应分子如S6K1、4E-BP1等的激活，从而促进细胞的生长和代谢。
五、mTOR信号通路与疾病的关系mTOR信号通路在许多疾病的发生、发展中起着重要作用，尤其是肿瘤。
在肿瘤细胞中，mTOR信号通路的异常激活可以促进肿瘤细胞的生长、增殖和代谢，为肿瘤的发生和发展提供有利条件。
mTOR抑制剂雷帕霉素的抗肿瘤作用
mTOR抑制剂雷帕霉素的抗肿瘤作用李亮亮【摘要】哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是参与生命活动的多条信号通路的下游因子,其中就包括PI3K/Akt/mTOR信号通路,在细胞生长、分化、转移和存活中地位显著,已成为癌症治疗的一个重要靶标.第一代mTOR抑制剂雷帕霉素(RAPA)最初作为一种新型的免疫抑制药物在器官移植领域应用广泛.随着对该药物及mTOR信号通路的深入研究,人们慢慢地认识到RAPA 除免疫抑制外还具有诱导肿瘤细胞凋亡、阻断细胞周期、抑制信号传导、影响基因转录水平及其对表观遗传学的调控作用.本文主要综述了近年来雷帕霉素在抗肿瘤方面的研究进展,同时讨论了雷帕霉素抗肿瘤的局限性.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2019(030)002【总页数】4页(P241-244)【关键词】雷帕霉素靶蛋白;雷帕霉素;肿瘤发生;mTOR信号通路;抗肿瘤【作者】李亮亮【作者单位】海南医学院生物学教研室,海南海口 571199【正文语种】中文【中图分类】R979.1雷帕霉素(RAPA)是由智利复活节岛上的土壤链霉菌分泌的产物，属于三烯大环内酯类的化合物。
最初作为低毒强效的抗真菌药物和免疫抑制剂被研发出来，广泛用于抗炎和维持移植器官免疫能力。
随着科学家们对RAPA药理性质及分子机制的深入研究，人们开始认识到RAPA还具有除抗炎、免疫抑制外的多种其他药理作用，如对肿瘤细胞增殖产生抑制、提高机体免疫力、延缓衰老等作用。
近几十年来，研究发现RAPA可以影响多系统肿瘤性疾病，如消化系统、生殖系统、呼吸系统、女性生殖系统等[1-8]。
RAPA的肿瘤抑制作用受到科学家们关注，为此他们做了许多有关的研究并获得了一些成功，2007年FDA批准RAPA治疗肾癌，RAPA衍生物用于治疗肾癌、脑肿瘤、胰腺癌和乳腺癌等。
2015年FDA获批成为淋巴管肌瘤(LAM)和结节性硬化症(TAC)的治疗药物[9]。
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路与肿瘤的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路与肿瘤的研究进展
李金鸽;杨志宏
【期刊名称】《医学综述》
【年(卷),期】2007(013)023
【摘要】哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTDR)是调节细胞生长和增殖的重要信号转导分子,也是一种蛋白激酶.它主要通过激活核糖体40s小亚基S6K蛋白激酶和抑制真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1来发挥重要作用.mTOR可受到营养(氨基酸)、生长因子和总能量等影响,mTOR信号通路的异常激活与肿瘤的发生、发展及转移密切相关.雷帕霉素及其衍生物是mTOR信号特异性抑制剂.这些新发现对了解细胞的生长调控和肿瘤的靶向治疗具有重要意义.
【总页数】3页(P1766-1768)
【作者】李金鸽;杨志宏
【作者单位】辽宁医学院附属第一医院妇产科,辽宁,锦州,121001;辽宁医学院附属第一医院妇产科,辽宁,锦州,121001
【正文语种】中文
【中图分类】R730.23;R329.28
【相关文献】
1.磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路在肝胆恶性肿瘤发生发展中的作用 [J], 陈旭晓;陈拥军
2.氨基酸缺乏诱导细胞自噬的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体C1信号通路机制研
究进展 [J], 柏雪;王建萍;丁雪梅;白世平;曾秋凤;张克英
3.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路在骨稳态及相关疾病中作用的研究进展 [J], 杨前昊;朱道宇;陈亦轩;高悠水;张长青
4.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路在心脏发育和重构中作用的研究进展 [J], 刘杰
5.磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路与糖尿病视网膜病变的关系研究进展 [J], 胡婷婷;罗向霞;张钰洁;王瑞
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mTORC1
mTORC1/2双重抑制剂OSI -027抑制高氧诱导的肺成纤维细胞增殖和分化*吴黎虹， 唐坤， 党红星△， 符跃强， 刘成军， 李静， 许峰（重庆医科大学附属儿童医院重症医学科，国家儿童健康与疾病临床医学研究中心，儿童发育疾病研究教育部重点实验室，儿科学重庆市重点实验室，重庆 400014）［摘要］ 目的：分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin ， mTOR ）复合物1/2（mTORcomplex 1/2， mTORC1/2）双重抑制剂OSI -027对高体积分数氧（高氧）所致人胚肺成纤维细胞增殖和分化的抑制作用。
方法：高氧（95% O 2）处理人胚肺成纤维细胞MRC -5建立增殖分化模型，分为对照组、高氧组、高氧+OSI -027组和高氧+雷帕霉素组。
Western blot 检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin ， α-SMA ）、I 型胶原蛋白（collagen type I ， Col I ）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen ， PCNA ）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、RhoA 、Rho 相关含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rho -associated coiled -coil -containing protein kinase 1， ROCK1）、蛋白激酶B （protein kinase B ， PKB/AKT ）、p -AKT 和mTOR 的表达； CCK -8实验检测细胞活力；流式细胞术检测细胞周期。
结果：与对照组相比，PCNA 、cyclin D1、Col I 和α-SMA 表达随高氧处理时间增加而增加（P <0.05）。
与高氧组相比，OSI -027及雷帕霉素干预后，细胞活力下降，细胞周期被抑制在G 1期（P <0.05）。
一种抗真菌药，竟然会有助于癌症的治疗，或许肺癌患者也有希望用上
一种抗真菌药，竟然会有助于癌症的治疗，或许肺癌患者也有
希望用上
雷帕霉素原意是作为一种大环内酯类抗生素，原意是为了治疗真菌感染的，然而发现它的代谢产物能抑制变态免疫反应，比抗真菌更抢眼，因此科学家们就把它作为治疗器官移植的免疫排斥反应的药物。
然后又发现，它居然能协同其他癌症的治疗，发挥抗癌功效！
科学家们经过研究发现，体内存在一种名叫TOR的信号通路，它的活跃可以造成细胞分泌大量的蛋白质、核酸，并给癌细胞的无限增殖提供生物原料，而雷帕霉素则可以抑制这一过程。
美国FDA也早就批准将雷帕霉素用于治疗头颈部鳞状细胞癌、尤文氏肉瘤、骨肉瘤等癌种，和雷帕霉素机制一样的其他mTOR抑制剂也被用于非小细胞肺癌、黑色素瘤等多种癌症中，都取得了不错的成绩。
mTOR抑制剂在癌症治疗中的研究和应用
mTOR抑制剂在癌症治疗中的研究和应用标题：mTOR抑制剂在癌症治疗中的研究与应用：定量分析与模型构建摘要：癌症一直是全球卫生领域的主要挑战之一。
mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）作为一个广泛参与调控细胞增殖、生长和代谢的信号通路，在癌症治疗中表现出潜在的应用价值。
本研究旨在通过定量分析和模型构建，评估mTOR抑制剂在癌症治疗中的研究进展，并探讨其在临床应用中的潜在效果。
1. 研究主题：mTOR作为一个关键信号通路，在细胞增殖、生长和代谢调节中发挥重要作用。
近年来，mTOR抑制剂作为一类新型的抗肿瘤药物受到了广泛关注。
本研究的主题是探索mTOR抑制剂在癌症治疗中的研究和应用，旨在评估其在癌症治疗中的潜在效果。
2. 研究方法：2.1 文献回顾：通过数据库检索和筛选等方法，回顾与mTOR抑制剂在癌症治疗中相关的研究文献。
2.2 数据整合与分析：对所选文献进行定性和定量分析，总结mTOR抑制剂在不同癌种中的应用研究进展，并构建评估模型。
3. 数据分析与结果呈现：3.1 研究进展：通过文献回顾，发现mTOR抑制剂在乳腺癌、肾细胞癌、胃肠道肿瘤等多种癌症治疗中显示出良好的效果。
定性分析表明mTOR抑制剂能够抑制肿瘤细胞增殖、促进细胞凋亡，并调节肿瘤微环境。
定量分析结果则显示mTOR抑制剂在不同癌种中的疗效存在差异性，具体表现为治疗有效率和生存率的提高。
通过比较mTOR抑制剂与传统化疗药物的联合应用，发现其能够提高化疗的疗效，并减少毒副作用。
3.2 模型构建：基于以上定量分析结果，我们构建了一种评估模型，利用mTOR抑制剂的用药剂量、治疗周期等参数，对不同癌种的治疗效果进行预测和比较。
该模型可帮助医生和研究者更好地了解mTOR抑制剂在癌症治疗中的潜在效果，为临床决策提供依据。
4. 结论：本研究通过定量分析和模型构建的方法，评估了mTOR抑制剂在癌症治疗中的研究进展。
结果显示mTOR抑制剂在不同癌种中具有抗肿瘤效果，并且与传统化疗药物的联合应用具有协同作用。
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ＤＯＩ：１０．３９７１／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－８５７８．２０１１．１０．００３收稿日期：２０１０－０９－２８；修回日期：２０１１－０３－２２基金项目：广州市教育局科技基金资助项目（穗教科［２００６］６１０３５）；广东省医学科研基金资助项目（Ａ２０１０２４８）作者单位：１．５１０２６０广州，广州医学院第二附属医院肿瘤科；２．中山大学肿瘤防治中心作者简介：曾波航（１９６３－），男，博士，教授，主要从事肿瘤靶向治疗研究雷帕霉素对肺癌细胞ｍＴＯＲ信号通路相关蛋白表达的作用曾波航１，庄 莹１，陈静琦１，江素华１，曾木圣２Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｏｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍＴＯＲ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｐａｔｈｗａｙ Ｒｅｌａｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ＬｕｎｇＣａｎｃｅｒ ＣｅｌｌＺＥＮＧ Ｂｏ－ｈａｎｇ１，ＺＨＵＡＮＧ Ｙｉｎｇ１，ＣＨＥＮ Ｊｉｎｇ－ｑｉ １，ＪＩＡＮＧ Ｓｕ－ｈｕａ１，ＺＥＮＧ Ｍｕ－ｓｈｅｎｇ２１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０２６０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｕｎ Ｔａｔ－ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｔｕｍｏｒ ＣｅｎｃｅｒＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｍＴＯＲ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄｒａｐａｍｙｃｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｍＴＯＲ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ４ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｌｉｎｅｓ（ＨＬＡＭＰ，Ｈ１２９９，Ａ５４９ ａｎｄ ＰＡａ）ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ．ＭＴＴ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒ－ｍｉｎｅ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ．Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏｒａｐａｍｙｃｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｎｏｎ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ．Ｅｎ Ｖｉｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ １００ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ２０ ｌｕｎｇ ｎｏｎｍａｌｉｇｎａｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｎｏｒｍａｌ ｌｕｎｇ ｔｉｓ－ｓｕｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔ ＡＫＴ，Ｓ６Ｋ１，４Ｅ－ＢＰ１，ｅＩＦ４Ｅ ｗｅｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｐ－Ｓ６Ｋ１ ｗａｓｈｉｇｈ－ｌｅｖｅｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ，ｎｏ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ，ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ａｒａｐａｍｙｃｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｐ－Ｓ６Ｋ１ ｐｏｓｉｔｉｖｅ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ １５％（３／２０）ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ，ａｎｄ ６２％（６２／１００）ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｐ－Ｓ６Ｋ１ ｐｏｓｉｔｉｖｅ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｎ ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ（８１％，１７／２１）ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ（５９％，４５／７９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｐ－Ｓ６Ｋ１ｉｎ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｍａｙ ｒｅｆｌｅｃｔ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｔｏ ａ ｅｘｔｅｎｔ．Ｂｕｔ ｏｔｈｅｒｍＴＯＲ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＫＴ，Ｓ６Ｋ１，ｅＩＦ４Ｅ，４Ｅ－ＢＰ１）ｃａｎ ｎｏｔ ｒｅｆｌｅｃｔ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ．Ｐ－Ｓ６Ｋ１ ｉｓａｒａｐａｍｙｃｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｐ－Ｓ６Ｋ１ ｉｎ ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ ｉｓ ｍｕｃｈ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｎｏｎ－ｓａｍｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈｅ ｂｅｔｔｅｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｏｆ ｍＴＯＲ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｉｎ ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ；Ｒａｐａｍｙｃｉｎ；ｍＴＯＲ摘 要：目的 探讨ｍＴＯＲ信号通路的功能状态与肺癌对雷帕霉素敏感度的关系。
方法 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｍＴＯＲ信号通路中ＡＫＴ、Ｓ６Ｋ１、ｅＩＦ４Ｅ、４Ｅ－ＢＰ１、Ｐ－Ｓ６Ｋ１蛋白在４种人肺癌细胞株的表达；ＭＴＴ法检测雷帕霉素对肺癌细胞增殖的抑制情况，将肺癌细胞分为雷帕霉素敏感组和不敏感组，找出与敏感度相关的差异蛋白，用Ｅｎ Ｖｉｓｉｏｎ法检测患者肺癌组织中差异蛋白的表达。
结果 ＡＫＴ、Ｓ６Ｋ１、ｅＩＦ４Ｅ、４Ｅ－ＢＰ１蛋白在４种肺癌细胞株中均有表达。
而Ｐ－Ｓ６Ｋ１在不敏感株中未检测到，在敏感株中呈高表达，为雷帕霉素差异蛋白。
Ｐ－Ｓ６Ｋ１在正常肺组织中的阳性表达率为１５％（３／２０例），在肺癌组织中的阳性表达率为６２％（６２／１００例），其中在小细胞肺癌组织中的阳性表达率（８１．０％，１７／２１例）高于非小细胞肺癌组织（５９％，４５／７９例）。
结论 在ｍＴＯＲ信号通路相关蛋白中，仅Ｐ－Ｓ６Ｋ１在一定程度上可预测肺癌细胞株对雷帕霉素的敏感度，为一种ｍＴＯＲ靶向抑制剂———雷帕霉素治疗肺癌的差异蛋白。
Ｐ－Ｓ６Ｋ１在小细胞肺癌中表达较非小细胞肺癌高，提示在Ｐ－Ｓ６Ｋ１表达率高的小细胞未分化肺癌中应用ｍＴＯＲ靶向抑制剂———雷帕霉素的疗效可能更佳。
关键词：肺癌；雷帕霉素；ｍＴＯＲ中图分类号：Ｒ７３４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００－８５７８（２０１１）１０－１１０５－０４０ 引言哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ，ｍＴＯＲ）可以整合氨基酸、能量、生长因子所激发的信号通路，参与基因转录、蛋白质翻译、核糖体生物合成和细胞凋亡等多项细胞功·５０１１·肿瘤防治研究２０１１年第３８卷第１０期能。
现已发现，许多肿瘤伴有ｍＴＯＲ信号通路调节异常［１－４］。
生长因子通过跨膜信号转导激活ＰＩ３Ｋ，产生ＰｔｄＩｎ（１－４）Ｐ２，ＰｔｄＩｎ（３，４，５）Ｐ３，它们以ＰＨ域与ＰＤＫ和ＡＫＴ结合并激活ＰＤＫ－１，活化的ＰＤＫ－１磷酸化ＡＫＴ并使之活化，ＡＫＴ再直接磷酸化ｍＴＯＲ，活化的ｍＴＯＲ作用于下游的底物。
激活的ｍＴＯＲ至少可调节两种不同的下游底物：Ｓ６Ｋ１和４Ｅ－ＢＰ１，它们是蛋白翻译的关键调节因子。
雷帕霉素（Ｒａｐａｍｙｃｉｎ）能特异性靶向抑制ｍＴＯＲ，阻止Ｓ６Ｋ１和４Ｅ－ＢＰ１磷酸化。
美国国立癌症研究所分析雷帕霉素对６０种肿瘤细胞株的杀伤作用后，发现雷帕霉素能抑制部分肿瘤株细胞，其中对乳腺癌、卵巢癌、白血病、肺癌、肾癌等肿瘤细胞株的生长抑制明显［５－６］。
有关肺癌细胞株对雷帕霉素的敏感度、ｍＴＯＲ信号转导通路蛋白与肺癌细胞对雷帕霉素敏感度之间的关系研究甚少［７］，雷帕霉素差异蛋白在人肺癌组织中的表达则未见报道。
研究雷帕霉素差异蛋白的表达与ｍＴＯＲ抑制剂－雷帕霉素对肺癌细胞敏感度关系，将为ｍＴＯＲ抑制剂的临床应用奠定基础。
１ 材料和方法１．１ 材料 １．１．１ 试剂 ＲＰＭＩ－１６４０细胞培养液、胎牛血清购自美国Ｇｉｂｃｏ公司。
雷帕霉素、ＭＴＴ购自美国Ｓｉｇｍａ公司。
抗Ｓ６Ｋ１抗体、抗Ｐ－Ｓ６Ｋ１抗体（Ｔｈｒ３８９）、抗ＡＫＴ抗体、抗ｅＩＦ４Ｅ抗体、抗４Ｅ－ＢＰ１抗体、ＥＣＬ化学发光试剂盒、鼠抗人Ｐ－Ｓ６Ｋ１单抗隆抗体（Ｔｈｒ３８９）购自美国Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司。
抗ＴＵＢＬＩＮ抗体、ＰＶＤＦ膜购自美国Ｒｏｃｈｅ公司。
辣根过氧化酶标记羊抗兔ＩｇＧ、辣根过氧化酶标记羊抗鼠ＩｇＧ购自美国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ－ｎｏｌｏｇｙ公司。
二步法免疫组织化学试剂、ＤＡＢ显色液购自美国ＤＡＫＯ公司。
１．１．２ 细胞 Ａ５４９、Ｈ１２９９、ＰＡａ和ＨＬＡＭＰ等４种人肺癌细胞株由广州医学院实验医学中心惠赠。
１．１．３ 组织 肺癌组织１００例，其中非小细胞肺癌７９例（含腺癌３８例、鳞癌４１例），小细胞肺癌２１例。
２０例肺良性病变患者正常肺组织作为对照。
１．２ 实验方法１．２．１ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｍＴＯＲ信号通路相关蛋白的表达 将生长状态良好的ＨＬＡＭＰ、Ｈ１２９９、Ａ５４９和ＰＡａ细胞，按每５×１０７个细胞加入４００μｌ蛋白样品裂解缓冲液裂解细胞。
收集细胞蛋白，蛋白质浓度经分光光度计定量。
细胞蛋白经β－巯基乙醇９８℃、１０ ｍｉｎ变性。
取２０μｇ蛋白经１０．５％ＳＤＳＰＡＧＥ电泳后，１２０ Ｖ３ ｈ电转移至ＰＶＤＦ膜上，再以５％脱脂奶（溶于ＴＢＳＴ中）封闭过夜。
分别用抗ＡＫＴ一抗、抗ｅＩＦ４Ｅ一抗、抗４Ｅ－ＢＰ１一抗、抗Ｓ６Ｋ１一抗、抗Ｐ－Ｓ６Ｋ１一抗和抗ＴＵＢＬＩＮ一抗４℃孵育过夜。
相应二抗室温孵育１ ｈ，ＴＢＳＴ洗膜１０ ｍｉｎ×３次。
配置新鲜发光液，将膜孵育３ ｍｉｎ，暗室Ｘ线片曝光０．５～５ ｍｉｎ，显影３０ ｓ，定影３０ ｓ成像。
１．２．２ ＭＴＴ法测定雷帕霉素对肺癌细胞的抑制作用根据实验结果将肺癌细胞分为雷帕霉素敏感组和不敏感组。
１．２．３ 筛选出差异蛋白并探讨其与肺癌细胞对雷帕霉素敏感度的关系 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测人肺癌细胞株ｍＴＯＲ信号通路相关蛋白（ＡＫＴ、ｅＩＦ４Ｅ、４Ｅ－ＢＰ１、Ｓ６Ｋ１、Ｐ－Ｓ６Ｋ１等）的表达，筛选出雷帕霉素差异蛋白。
用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测雷帕霉素差异蛋白在用药前后的变化并探讨其与肺癌细胞对雷帕霉素敏感度的关系。
１．２．４ 收集临床肺癌患者的组织标本及完整的临床病历资料，免疫组织化学Ｅｎ Ｖｉｓｉｏｎ法检测肺癌组织和肺部良性疾病正常肺组织差异蛋白的表达，分析差异蛋白的表达与肺癌临床病理特征间的关系及其意义。